本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

紫草(Radix Arnebiae)為紫草科植物新疆紫草Arnebia educhroma(Royle)Johnst、紫草Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.或內(nèi)蒙紫草ArnebiaguttataBunge的干燥根。紫草又稱(chēng)紫草茸、山紫草、紫丹、紫草根、紅石根。主產(chǎn)于新疆、西藏、甘肅、黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、廣西等地。紫草性味甘、咸、寒，歸心、肝經(jīng)。功能涼血，活血，解毒透疹。主治血熱毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，瘡瘍，濕疹，水火燙傷等。紫草主要含有紫草素(shikonin)、乙酰紫草素(acetylshikonin)、β-羥基異戊酰紫草素(β-hydro-xyisovalerylshikonin)、β，β’-二甲基丙烯酰紫草素(β，β′-dimethylacrylshikonin)等。

其中，紫草素分子量為288.30，分子式C16H16O5，別名為5，8-二羥基-2-[(1R)-1-羥基-4-甲基戊-3-烯基]萘-1，4-二酮，結(jié)構(gòu)如式1所示，目前國(guó)內(nèi)研究紫草素應(yīng)用主要是腫瘤及自身免疫病的免疫干預(yù)，目前已知的紫草素效應(yīng)有包括抑制人乳腺癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌的細(xì)胞增殖，抗肝炎病毒、流感病毒、乳頭瘤病毒等多種病毒?？鼓[瘤主要是通過(guò)干擾蛋白質(zhì)與DNA間的關(guān)聯(lián)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬、抑制腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)等機(jī)制發(fā)揮作用，在抗病毒方面主要是通過(guò)調(diào)控細(xì)胞因子分泌、抑制病毒基因復(fù)制和蛋白表達(dá)等機(jī)制發(fā)揮作用。但是紫草素單體在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用還未見(jiàn)報(bào)道。

并且目前國(guó)內(nèi)上下呼吸道變應(yīng)性疾病的治療主要是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物、β2受體興奮藥、白三烯阻滯藥等霧化，因這些藥物本身具免疫抑制作用，長(zhǎng)期使用，易使患者出現(xiàn)免疫降低，病情反復(fù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用，以紫草素對(duì)上下呼吸道變應(yīng)性疾病進(jìn)行免疫干預(yù)，從樹(shù)突狀細(xì)胞成熟及表型表達(dá)、TH細(xì)胞的激活和分化、細(xì)胞因子的分泌等方面進(jìn)行調(diào)節(jié)，建立正常免疫秩序，避免造成類(lèi)似激素類(lèi)藥物所致的免疫抑制現(xiàn)象。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1、紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述上下呼吸道變應(yīng)性疾病包括變應(yīng)性鼻炎及變應(yīng)性哮喘。

本發(fā)明的有益效果在于：紫草素可干預(yù)變應(yīng)性鼻炎和變應(yīng)性哮喘患者黏膜及黏膜相關(guān)淋巴組織中樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟和表型表達(dá)，從而糾正變應(yīng)性鼻炎中TH細(xì)胞應(yīng)答的偏移，可干預(yù)上下呼吸道變應(yīng)性疾病患者樹(shù)突狀細(xì)胞及TH2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的分泌，減少炎細(xì)胞局部浸潤(rùn)，減少成熟漿細(xì)胞分泌超敏反應(yīng)相關(guān)IgE類(lèi)抗體，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受，建立正常免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)疾病緩解。

附圖說(shuō)明

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖：

圖1中A、B、C、D分別表示AR建模后模型組鼻黏膜、觀察組鼻黏膜、對(duì)照組鼻黏膜、紫草素干預(yù)后觀察組鼻黏膜的HE染色光鏡下情況；

圖2中A、B分別表示樹(shù)突細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)情況；

圖3中A、B分別表示相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、IL-12表達(dá)情況；

圖4表示紫草素治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的作用機(jī)理。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。本發(fā)明所述紫草素可從紫草根中提取得來(lái)，也可應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)已公開(kāi)的人工合成的方法獲得。本領(lǐng)域人員可知，運(yùn)用從紫草根中提取得來(lái)的紫草素或者應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)已公開(kāi)的人工合成的方法獲得的紫草素同樣具有用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的用途。

實(shí)施例1紫草素對(duì)大鼠變應(yīng)性鼻炎(AR)的防治作用

1.1建模與分組

選8-10周齡健康大鼠40只，大鼠體重性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10只健康大鼠直接脫椎處死取鼻黏膜固定設(shè)為對(duì)照組1。采用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)局部滴鼻法致敏建立大鼠AR模型30只，致敏量為10μgOVA+0.5㎎Al(OH)3+0.1ml生理鹽水每側(cè)鼻孔，兩側(cè)鼻孔各2次/天，持續(xù)刺激10天后根據(jù)癥狀及鼻分泌物涂片判定建模成功。10只為模型組，建模成功即脫椎處死取鼻黏膜迅速固定，20只為觀察組，建模成功后予以100μg/ml紫草素霧化吸入治療(100～200㎎紫草素+5毫升生理鹽水+1㎎糜蛋白酶霧化)，12小時(shí)后處死取鼻黏膜固定。

1.2方法

三組實(shí)驗(yàn)標(biāo)本均采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，用兔抗多克隆抗體CD80、兔抗多克隆抗體CD86及兔抗多克隆抗體IL-10、兔抗多克隆抗體IL-12標(biāo)記后，顯微鏡觀察計(jì)數(shù)結(jié)果，先在低倍鏡選取陽(yáng)性細(xì)胞多的區(qū)域5個(gè)，再配上計(jì)數(shù)格在高倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3試劑及實(shí)驗(yàn)器材

試驗(yàn)用左旋紫草素由重慶三峽醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校天然藥物工程技術(shù)中心自行提取。CD86多克隆兔抗體(貨號(hào)ANT-283)、CD80多克隆兔抗體(貨號(hào)ANT-133)購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物科技有限公司，IL-10多克隆兔抗體(貨號(hào)A-AP52148)、IL-12多克隆兔抗體(貨號(hào)A-AP52181)購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司。輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)為徠卡2015(德國(guó)產(chǎn))，顯微鏡用奧林巴斯顯微鏡CX31-LV320，image Analysis Syste11.0軟件成像系統(tǒng)。

1.4數(shù)據(jù)處理

結(jié)果計(jì)量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，組間數(shù)據(jù)采用方差檢驗(yàn)。SPSS18.0軟件處理數(shù)據(jù)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5大鼠AR造模評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

大鼠AR造模評(píng)定依據(jù)確立為①癥狀：鼻紅，搔抓鼻周或者眼周，頻繁噴嚏，大量清涕，四項(xiàng)癥狀至少滿足三項(xiàng)；②檢查：鼻分泌物涂片顯示嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性。排除鼻紅程度、喘息程度等難以具體計(jì)量的因素，大鼠AR模型紫草素干預(yù)效果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)如下表1。干預(yù)效果評(píng)估采取疊加計(jì)分，＜4分為顯效，4～6分為有效，＞6分為無(wú)效。

表1大鼠AR模型紫草素干預(yù)效果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

1.6結(jié)果及分析

1.6.1大鼠AR模型紫草素干預(yù)情況比較

在OVA滴鼻造模十天左右，30只大鼠先后出現(xiàn)鼻紅，搔抓鼻周或者眼周，頻繁噴嚏，大量清涕癥狀，鼻分泌物涂片顯示嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性。模型組大鼠取得的鼻黏膜蒼白、水腫。光鏡HE染色可見(jiàn)鼻黏膜增厚且厚度不均，基底結(jié)構(gòu)不清，固有層小血管、毛細(xì)血管擴(kuò)張明顯，組織間隙擴(kuò)大，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)紫草素干預(yù)后，觀察組大鼠癥狀明顯緩解，噴嚏、搔抓鼻周、眼周頻率降低，鼻分泌物涂片嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性率減少，鏡下觀察鼻黏膜水腫減輕，炎細(xì)胞數(shù)量也有所減少。光鏡觀察情況如圖1所示，根據(jù)預(yù)設(shè)的干預(yù)效果評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，觀察組共計(jì)有顯效13例，有效7例，無(wú)效0例。根據(jù)癥狀觀察結(jié)果，紫草素對(duì)大鼠AR模型超敏反應(yīng)有治療作用。

1.6.2樹(shù)突狀細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)情況

在實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中，CD80及CD86陽(yáng)性細(xì)胞為棕黃色，主要集中在鼻黏膜上皮及固有層，如圖2所示，觀察組標(biāo)本中CD80值為13.52±3.53、CD86值為24.01±13.12，模型組CD80值為17.19±4.42、CD86值為38.89±9.77，數(shù)據(jù)及檢驗(yàn)情況如下表2。

表2三組AR大鼠模型中樹(shù)突細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)的檢測(cè)情況

1.6.3細(xì)胞因子IL-10、IL-12表達(dá)情況

在實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中，IL-10、IL-12陽(yáng)性細(xì)胞為黃色，主要集中在鼻黏膜上皮層，少數(shù)在鼻黏膜固有層，如圖3所示，觀察組IL-10值為6.69±1.12，IL-12值為44.3±9.7；(模型組IL-10值為3.61±0.23，IL-12值為28.8±8.2)，數(shù)據(jù)及檢驗(yàn)情況如下表3。

表3三組AR大鼠模型相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、IL-12表達(dá)的檢測(cè)情況

由上述結(jié)果可得知，在對(duì)觀察組AR大鼠模型進(jìn)行紫草素干預(yù)后，觀察組大鼠癥狀明顯緩解，噴嚏、搔抓鼻周、眼周頻率降低或不再出現(xiàn)，鼻分泌物涂片嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性率減少，鏡下觀察鼻黏膜水腫減輕，炎細(xì)胞數(shù)量也有所減少。根據(jù)預(yù)設(shè)的干預(yù)效果評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，觀察組共計(jì)有顯效13例，有效7例，無(wú)效0例。證實(shí)紫草素在AR模型中的免疫干預(yù)對(duì)疾病發(fā)展有正面影響。

在實(shí)驗(yàn)標(biāo)本檢測(cè)中，觀察組DCs表面CD80、CD86等協(xié)同刺激分子表達(dá)與健康大鼠檢測(cè)狀態(tài)接近，此外觀察組相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、IL-12檢測(cè)也接近健康狀態(tài)，與模型組DCs表面CD80、CD86的異常表達(dá)相對(duì)比，結(jié)果經(jīng)方差檢驗(yàn)具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因?yàn)樽喜菟馗深A(yù)了DCs表面CD80、CD86的表型表達(dá)，這個(gè)效果可以減少TH2類(lèi)細(xì)胞的過(guò)度活化，糾正AR中TH應(yīng)答的偏移，減少TH細(xì)胞相關(guān)促炎因子的分泌，建立正常的免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)疾病緩解。此外在AR病程中，DCs相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、IL-12分泌減少，而在觀察組中，經(jīng)紫草素干預(yù)，IL-10、IL-12分泌基本正常，這一效果可以抑制多種促炎細(xì)胞因子的合成,抑制肥大細(xì)胞等釋放炎癥介質(zhì)，減少炎細(xì)胞局部浸潤(rùn)，誘導(dǎo)動(dòng)物模型產(chǎn)生免疫耐受，從而起到治療AR的作用。

實(shí)施例2紫草素對(duì)大鼠變應(yīng)性哮喘(AS)的防治作用

上下呼吸道變應(yīng)性疾病AR、AS具有一致性，通過(guò)如實(shí)施例1所述的建模、分組以及實(shí)驗(yàn)方式同時(shí)得出了紫草素對(duì)大鼠變應(yīng)性哮喘(AS)的防治作用的相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，具體如下：

表4四組AS大鼠模型中樹(shù)突細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)的檢測(cè)情況

表5四組AS大鼠模型相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-10、IL-12表達(dá)的檢測(cè)情況

由表4、5可證實(shí)紫草素在AS模型中的免疫干預(yù)對(duì)疾病發(fā)展也有正面影響，紫草素可以起到治療As的作用。

通過(guò)實(shí)施例1及2可論證，紫草素可干預(yù)變應(yīng)性鼻炎和變應(yīng)性哮喘患者黏膜及黏膜相關(guān)淋巴組織中樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟和表型表達(dá)，從而糾正變應(yīng)性鼻炎中TH細(xì)胞應(yīng)答的偏移，可干預(yù)上下呼吸道變應(yīng)性疾病患者樹(shù)突狀細(xì)胞及TH2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的分泌，減少炎細(xì)胞局部浸潤(rùn)，減少成熟漿細(xì)胞分泌超敏反應(yīng)相關(guān)IgE類(lèi)抗體，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受，建立正常免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)疾病緩解，其作用機(jī)理如圖4所示。

最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。