本發(fā)明公開了一種醫(yī)用膠黏劑的制備方法，屬于膠黏劑制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，醫(yī)用膠黏劑在臨床中有著十分重要的作用。在外科手術(shù)中，醫(yī)用膠黏劑用于某些器官和組織的局部粘合和修補；在骨科手術(shù)中骨骼、關(guān)節(jié)的結(jié)合與定位，以及齒科手術(shù)中用于牙齒的修補。從醫(yī)用膠黏劑的使用對象和性能要求可分成齒科用膠黏劑和外殼用膠黏劑。而上述膠黏劑一般應(yīng)滿足安全、無毒、無致癌、致畸、致突變；此外還要具有良好的粘合強度，且常溫常壓下能與組織快速膠接，本身無菌且還具有良好的抑菌性。醫(yī)用膠黏劑的應(yīng)用細(xì)分的話有軟組織膠黏劑、α-氰基丙烯酸酯膠黏劑、血纖蛋白膠黏劑、硬組織膠黏劑、骨科用叫粘結(jié)劑、醫(yī)用壓敏膠等。
現(xiàn)有的醫(yī)用膠黏劑不僅要求膠黏劑具有良好的粘結(jié)性，還要安全無毒。而目前現(xiàn)有的醫(yī)用膠黏劑其生物相容性差，在低溫條件下或有過多水存在時其粘結(jié)性會大幅度下降，影響使用效果的缺陷。
貽貝屬軟體動物門、瓣鰓綱、翼形亞綱、貽貝目、貽貝科，是一種常見的海洋雙殼貝類，可通過其足腺細(xì)胞分泌的足絲與礁石、船體等固體表面形成牢固連接，并可經(jīng)受海浪的反復(fù)沖刷而不脫落。貽貝足絲蛋白是貽貝科所特有一種在水環(huán)境中也能表現(xiàn)出強黏附功能的蛋白，也是目前開發(fā)新型生物黏附劑的主要候選分子。貽貝的足絲黏附蛋白的粘合力及防水性能極強且無毒性，是現(xiàn)有任何粘合劑均無法比擬的，因此在醫(yī)藥、造船、涂料等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對目前現(xiàn)有的醫(yī)用膠粘劑其生物相容性差，在低溫條件下或有過多水存在時其粘結(jié)性會大幅度下降，影響使用效果的缺陷，提供一種醫(yī)用膠黏劑的制備方法，該方法用堿溶酸沉提取貽貝粘蛋白，再用果木熏蒸含無花果果實的豬肉，得到含果糖的油脂并用其對黃原膠在微生物的作用下改性，增加黃原膠中的疏水性酯基基團，將改性后的黃原膠和貽貝粘蛋白共混濃縮后最終制得醫(yī)用膠黏劑，本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑以具有極佳生物相容性的貽貝粘蛋白和多糖類黃原膠為原料，利用蛋白與多糖之間的協(xié)同增效作用，能夠快速粘合肌體骨骼且產(chǎn)生較大的粘附強度，同時疏水改性后的黃原膠在過多水存在的情況下依然可以正常起到膠黏作用，解決了傳統(tǒng)醫(yī)用膠黏劑生物相容性差、在低溫條件下或有過多水存在時其粘結(jié)性降低，影響使用效果的問題，具有極佳的使用效果。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
（1）人工切取2～3kg紫貽貝足部倒入搪瓷鍋中，向鍋中加入去離子水直至將貽貝足部完全浸沒，再向鍋中加入去離子水總質(zhì)量2～4%的氫氧化鈉，攪拌均勻后加熱至80～90℃，煮制3～5min，煮制結(jié)束后過濾去除濾液，得到脫脂貽貝；
（2）將上述脫脂貽貝和去離子水按質(zhì)量比為1:20進(jìn)行混合后放入高壓均質(zhì)機中，在3～5MPa的壓力下以7000～8000r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)處理15～20min，用濃度為0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)均質(zhì)物pH至10～11并靜置反應(yīng)3～5h，再將靜置后的均質(zhì)物用離心機以7000～8000r/min轉(zhuǎn)速離心分離得到上清液；
（3）用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)上述上清液pH至5～6并將其放入冰箱中，在2～4℃下靜置沉淀12～14h ，用布氏漏斗抽濾分離得到濾渣，冷凍干燥后即得紫貽貝粘蛋白，備用；
（4）取一塊5～6kg的豬肉，用打孔器在豬肉上均勻打出10～15個直徑2～3cm的孔洞，將無花果去皮后得到果肉并放入研缽中研磨15～20min得到無花果漿狀物，再將漿狀物注入豬肉孔洞中，壓實后將豬肉懸掛在熏烤爐中，在熏烤爐底部點燃荔枝枝條，用枝條燃燒產(chǎn)生的煙霧對豬肉進(jìn)行熏制，并收集豬肉熏制過程中滴落的油脂；
（5）按質(zhì)量比為1:3將上述油脂和黃原膠混合后裝入發(fā)酵罐中作為發(fā)酵底物，再向發(fā)酵罐中加入底物等質(zhì)量的蒸餾水和底物總質(zhì)量1/2的葡萄皮，將陶瓷罐放在35～40℃的溫室中發(fā)酵反應(yīng)7～9天，反應(yīng)結(jié)束后過濾去除濾渣，得到濾液；
（6）按重量份數(shù)計，稱取50～70份備用的紫貽貝粘蛋白、10～15份上述濾液和60～80份pH為7.2～7.4、濃度為0.01～0.02mol/L的PBS緩沖溶液依次倒入帶有攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加熱升溫至50～70℃保溫攪拌反應(yīng)30～40min，得到混合液，再將混合液移入真空濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力至800～900Pa，減壓濃縮至混合液原體積的1/5，得到濃縮液即為醫(yī)用膠黏劑。
本發(fā)明的應(yīng)用方法是：將本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑涂布在消毒過的創(chuàng)口上，涂布量為5～10mg/cm2，隨后讓創(chuàng)口在常溫下靜置固化5～8s即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明的醫(yī)用膠黏劑生物相容性好，耐低溫性能優(yōu)良，在-25～-30℃環(huán)境下，未出現(xiàn)開裂、脫落現(xiàn)象，仍具有良好的粘結(jié)性，且本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑防水性能優(yōu)異，在水中浸泡4～6h，與基體粘合牢固，未出現(xiàn)邊緣起皮、滲水現(xiàn)象。
本發(fā)明的有益效果是：
（1）本發(fā)明制備的醫(yī)用膠黏劑具有良好的膠黏性和優(yōu)異的防水性能，且制備方法簡便，適合大規(guī)模推廣使用；
（2）本發(fā)明制備的醫(yī)用膠黏劑還具有良好的耐低溫性能，在低溫環(huán)境下仍具有良好的粘結(jié)性。
具體實施方式
首先人工切取2～3kg紫貽貝足部倒入搪瓷鍋中，向鍋中加入去離子水直至將貽貝足部完全浸沒，再向鍋中加入去離子水總質(zhì)量2～4%的氫氧化鈉，攪拌均勻后加熱至80～90℃，煮制3～5min，煮制結(jié)束后過濾去除濾液，得到脫脂貽貝；將上述脫脂貽貝和去離子水按質(zhì)量比為1:20進(jìn)行混合后放入高壓均質(zhì)機中，在3～5MPa的壓力下以7000～8000r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)處理15～20min，用濃度為0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)均質(zhì)物pH至10～11并靜置反應(yīng)3～5h，再將靜置后的均質(zhì)物用離心機以7000～8000r/min轉(zhuǎn)速離心分離得到上清液；隨后用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)上述上清液pH至5～6并將其放入冰箱中，在2～4℃下靜置沉淀12～14h ，用布氏漏斗抽濾分離得到濾渣，冷凍干燥后即得紫貽貝粘蛋白，備用；隨后取一塊5～6kg的豬肉，用打孔器在豬肉上均勻打出10～15個直徑2～3cm的孔洞，將無花果去皮后得到果肉并放入研缽中研磨15～20min得到無花果漿狀物，再將漿狀物注入豬肉孔洞中，壓實后將豬肉懸掛在熏烤爐中，在熏烤爐底部點燃荔枝枝條，用枝條燃燒產(chǎn)生的煙霧對豬肉進(jìn)行熏制，并收集豬肉熏制過程中滴落的油脂；再按質(zhì)量比為1:3將上述油脂和黃原膠混合后裝入發(fā)酵罐中作為發(fā)酵底物，再向發(fā)酵罐中加入底物等質(zhì)量的蒸餾水和底物總質(zhì)量1/2的葡萄皮，將陶瓷罐放在35～40℃的溫室中發(fā)酵反應(yīng)7～9天，反應(yīng)結(jié)束后過濾去除濾渣，得到濾液；最后按重量份數(shù)計，稱取50～70份備用的紫貽貝粘蛋白、10～15份上述濾液和60～80份pH為7.2～7.4、濃度為0.01～0.02mol/L的PBS緩沖溶液依次倒入帶有攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加熱升溫至50～70℃保溫攪拌反應(yīng)30～40min，得到混合液，再將混合液移入真空濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力至800～900Pa，減壓濃縮至混合液原體積的1/5，得到濃縮液即為醫(yī)用膠黏劑。
實例1
首先人工切取2kg紫貽貝足部倒入搪瓷鍋中，向鍋中加入去離子水直至將貽貝足部完全浸沒，再向鍋中加入去離子水總質(zhì)量2%的氫氧化鈉，攪拌均勻后加熱至80℃，煮制3min，煮制結(jié)束后過濾去除濾液，得到脫脂貽貝；將上述脫脂貽貝和去離子水按質(zhì)量比為1:20進(jìn)行混合后放入高壓均質(zhì)機中，在3MPa的壓力下以7000r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)處理15min，用濃度為0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)均質(zhì)物pH至10并靜置反應(yīng)3h，再將靜置后的均質(zhì)物用離心機以7000r/min轉(zhuǎn)速離心分離得到上清液；隨后用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)上述上清液pH至5并將其放入冰箱中，在2℃下靜置沉淀12h ，用布氏漏斗抽濾分離得到濾渣，冷凍干燥后即得紫貽貝粘蛋白，備用；隨后取一塊5kg的豬肉，用打孔器在豬肉上均勻打出10個直徑2cm的孔洞，將無花果去皮后得到果肉并放入研缽中研磨15min得到無花果漿狀物，再將漿狀物注入豬肉孔洞中，壓實后將豬肉懸掛在熏烤爐中，在熏烤爐底部點燃荔枝枝條，用枝條燃燒產(chǎn)生的煙霧對豬肉進(jìn)行熏制，并收集豬肉熏制過程中滴落的油脂；再按質(zhì)量比為1:3將上述油脂和黃原膠混合后裝入發(fā)酵罐中作為發(fā)酵底物，再向發(fā)酵罐中加入底物等質(zhì)量的蒸餾水和底物總質(zhì)量1/2的葡萄皮，將陶瓷罐放在35℃的溫室中發(fā)酵反應(yīng)7天，反應(yīng)結(jié)束后過濾去除濾渣，得到濾液；最后按重量份數(shù)計，稱取50份備用的紫貽貝粘蛋白、10份上述濾液和60份pH為7.2、濃度為0.01mol/L的PBS緩沖溶液依次倒入帶有攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加熱升溫至50℃保溫攪拌反應(yīng)30min，得到混合液，再將混合液移入真空濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力至800Pa，減壓濃縮至混合液原體積的1/5，得到濃縮液即為醫(yī)用膠黏劑。
本實例操作簡便，使用時，將本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑涂布在消毒過的創(chuàng)口上，涂布量為5mg/cm2，隨后讓創(chuàng)口在常溫下靜置固化5s即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明的醫(yī)用膠黏劑生物相容性好，耐低溫性能優(yōu)良，在-25℃環(huán)境下，未出現(xiàn)開裂、脫落現(xiàn)象，仍具有良好的粘結(jié)性，且本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑防水性能優(yōu)異，在水中浸泡4h，與基體粘合牢固，未出現(xiàn)邊緣起皮、滲水現(xiàn)象。
實例2
首先人工切取2.5kg紫貽貝足部倒入搪瓷鍋中，向鍋中加入去離子水直至將貽貝足部完全浸沒，再向鍋中加入去離子水總質(zhì)量3%的氫氧化鈉，攪拌均勻后加熱至85℃，煮制4min，煮制結(jié)束后過濾去除濾液，得到脫脂貽貝；將上述脫脂貽貝和去離子水按質(zhì)量比為1:20進(jìn)行混合后放入高壓均質(zhì)機中，在4MPa的壓力下以7500r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)處理18min，用濃度為0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)均質(zhì)物pH至10.5并靜置反應(yīng)4h，再將靜置后的均質(zhì)物用離心機以7500r/min轉(zhuǎn)速離心分離得到上清液；隨后用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)上述上清液pH至5.5并將其放入冰箱中，在3℃下靜置沉淀13h ，用布氏漏斗抽濾分離得到濾渣，冷凍干燥后即得紫貽貝粘蛋白，備用；隨后取一塊5.5kg的豬肉，用打孔器在豬肉上均勻打出13個直徑2.5cm的孔洞，將無花果去皮后得到果肉并放入研缽中研磨18min得到無花果漿狀物，再將漿狀物注入豬肉孔洞中，壓實后將豬肉懸掛在熏烤爐中，在熏烤爐底部點燃荔枝枝條，用枝條燃燒產(chǎn)生的煙霧對豬肉進(jìn)行熏制，并收集豬肉熏制過程中滴落的油脂；再按質(zhì)量比為1:3將上述油脂和黃原膠混合后裝入發(fā)酵罐中作為發(fā)酵底物，再向發(fā)酵罐中加入底物等質(zhì)量的蒸餾水和底物總質(zhì)量1/2的葡萄皮，將陶瓷罐放在38℃的溫室中發(fā)酵反應(yīng)8天，反應(yīng)結(jié)束后過濾去除濾渣，得到濾液；最后按重量份數(shù)計，稱取60份備用的紫貽貝粘蛋白、13份上述濾液和70份pH為7.3、濃度為0.015mol/L的PBS緩沖溶液依次倒入帶有攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加熱升溫至60℃保溫攪拌反應(yīng)35min，得到混合液，再將混合液移入真空濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力至850Pa，減壓濃縮至混合液原體積的1/5，得到濃縮液即為醫(yī)用膠黏劑。
本實例操作簡便，使用時，將本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑涂布在消毒過的創(chuàng)口上，涂布量為8mg/cm2，隨后讓創(chuàng)口在常溫下靜置固化7s即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明的醫(yī)用膠黏劑生物相容性好，耐低溫性能優(yōu)良，在-28℃環(huán)境下，未出現(xiàn)開裂、脫落現(xiàn)象，仍具有良好的粘結(jié)性，且本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑防水性能優(yōu)異，在水中浸泡5h，與基體粘合牢固，未出現(xiàn)邊緣起皮、滲水現(xiàn)象。
實例3
首先人工切取3kg紫貽貝足部倒入搪瓷鍋中，向鍋中加入去離子水直至將貽貝足部完全浸沒，再向鍋中加入去離子水總質(zhì)量4%的氫氧化鈉，攪拌均勻后加熱至90℃，煮制5min，煮制結(jié)束后過濾去除濾液，得到脫脂貽貝；將上述脫脂貽貝和去離子水按質(zhì)量比為1:20進(jìn)行混合后放入高壓均質(zhì)機中，在5MPa的壓力下以8000r/min轉(zhuǎn)速均質(zhì)處理20min，用濃度為0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)均質(zhì)物pH至11并靜置反應(yīng)5h，再將靜置后的均質(zhì)物用離心機以8000r/min轉(zhuǎn)速離心分離得到上清液；隨后用濃度為0.5mol/L鹽酸調(diào)節(jié)上述上清液pH至6并將其放入冰箱中，在4℃下靜置沉淀14h ，用布氏漏斗抽濾分離得到濾渣，冷凍干燥后即得紫貽貝粘蛋白，備用；隨后取一塊6kg的豬肉，用打孔器在豬肉上均勻打出15個直3cm的孔洞，將無花果去皮后得到果肉并放入研缽中研磨20min得到無花果漿狀物，再將漿狀物注入豬肉孔洞中，壓實后將豬肉懸掛在熏烤爐中，在熏烤爐底部點燃荔枝枝條，用枝條燃燒產(chǎn)生的煙霧對豬肉進(jìn)行熏制，并收集豬肉熏制過程中滴落的油脂；再按質(zhì)量比為1:3將上述油脂和黃原膠混合后裝入發(fā)酵罐中作為發(fā)酵底物，再向發(fā)酵罐中加入底物等質(zhì)量的蒸餾水和底物總質(zhì)量1/2的葡萄皮，將陶瓷罐放在40℃的溫室中發(fā)酵反應(yīng)9天，反應(yīng)結(jié)束后過濾去除濾渣，得到濾液；最后按重量份數(shù)計，稱取70份備用的紫貽貝粘蛋白、15份上述濾液和80份pH為7.4、濃度為0.02mol/L的PBS緩沖溶液依次倒入帶有攪拌器和溫度計的三口燒瓶中，加熱升溫至70℃保溫攪拌反應(yīng)40min，得到混合液，再將混合液移入真空濃縮罐中，降低罐內(nèi)壓力至900Pa，減壓濃縮至混合液原體積的1/5，得到濃縮液即為醫(yī)用膠黏劑。
本實例操作簡便，使用時，將本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑涂布在消毒過的創(chuàng)口上，涂布量為10mg/cm2，隨后讓創(chuàng)口在常溫下靜置固化8s即可。經(jīng)檢測，本發(fā)明的醫(yī)用膠黏劑生物相容性好，耐低溫性能優(yōu)良，在-30℃環(huán)境下，未出現(xiàn)開裂、脫落現(xiàn)象，仍具有良好的粘結(jié)性，且本發(fā)明制得的醫(yī)用膠黏劑防水性能優(yōu)異，在水中浸泡6h，與基體粘合牢固，未出現(xiàn)邊緣起皮、滲水現(xiàn)象。