本發(fā)明涉及蛇床子素聯(lián)用黃芩苷在制備治療肺炎藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

蛇床子素是中藥蛇床的果實(shí)——蛇床子提取物中一種主要的有效成分，是中醫(yī)常用的單味藥。蛇床子素具有溫腎助陽、祛風(fēng)、燥濕、殺蟲等多種生物活性。作為新型的天然功效因子，蛇床子素具有抗腫瘤、抗炎、抗心律失常、抗高血壓、抗骨質(zhì)疏松癥等功效。黃芩苷是黃芩根中提取分離出來的一種黃酮類化合物,具有顯著的生物活性，如抑菌、利尿、抗炎、抗變態(tài)及解痙作用，并且具有較強(qiáng)的抗癌反應(yīng)等生理效能,在臨床醫(yī)學(xué)已占有重要地位。但截至目前國內(nèi)外未見蛇床子素聯(lián)用黃芩苷治療細(xì)菌性肺炎的報(bào)道。

金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、化膿性鏈球菌等均能引起細(xì)菌性肺炎。細(xì)菌耐藥性的不斷增加，造成了許多治療上較為困難的細(xì)菌性肺炎病例的出現(xiàn)，尤其在免疫能力較弱的兒童和老人以及免疫缺陷者中死亡率極高。其中以金葡菌感染所導(dǎo)致的肺炎病情較為嚴(yán)重，常規(guī)情況下人們使用苯唑西林和氯唑西林對(duì)此肺炎進(jìn)行治療，但是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的出現(xiàn)，導(dǎo)致治療失敗和較高的死亡率，給肺炎的治療帶來了更大的壓力。因此，開發(fā)新的安全有效的藥物具有十分重要的意義。蛇床子素是藥用植物蛇床果實(shí)中的主要活性成分，黃芩苷是黃芩根中提取的一種黃酮類化合物，本發(fā)明研究表明了蛇床子素聯(lián)用黃芩苷對(duì)細(xì)菌性肺炎，尤其是金葡菌引起的肺炎具有良好的治療效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

蛇床子素的分子結(jié)構(gòu)見附圖1。

黃芩苷的分子結(jié)構(gòu)見附圖2。

本發(fā)明通過家兔紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷的保護(hù)試驗(yàn)以及小鼠金葡菌肺炎模型證實(shí)蛇床子素聯(lián)用黃芩苷對(duì)金葡菌感染有治療作用。

附圖說明

附圖1蛇床子素分子結(jié)構(gòu)

附圖2黃芩苷分子結(jié)構(gòu)

附圖3蛇床子素聯(lián)用黃芩苷對(duì)金葡菌介導(dǎo)A549細(xì)胞損傷作用的影響

具體實(shí)施方式

溶血試驗(yàn)

金葡菌USA300于不同濃度的蛇床子素及黃芩苷共培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長后期(OD₆₀₀＝2.5)。取1ml共培養(yǎng)物，離心取上清；在1.5ml離心管中加入875μl的PBS緩沖液、100μl菌液上清和25μl脫纖維兔血，輕輕混勻后于37℃孵育15min，后離心取上清，并在543nm測其吸光值(表1)。

表1.蛇床子素及黃芩苷對(duì)金葡菌α-溶血素的抑制作用(％)

人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷的保護(hù)試驗(yàn)

金葡菌USA300與蛇床子素共培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長后期(OD_600nm＝2.5)，取10ml的細(xì)菌培養(yǎng)物，離心取上清，用0.22μm濾器過濾以除菌。A549細(xì)胞用含10％胎牛血清DMEM培養(yǎng),以2×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔鋪于96孔板中，37℃、5％CO₂培養(yǎng)過夜。細(xì)胞貼壁后，離心棄培養(yǎng)基，加入200μl金葡菌上清液，并加入不同濃度的黃芩苷，使得96孔板中分別含不同濃度的蛇床子素、黃芩苷及二者聯(lián)合應(yīng)用的試驗(yàn)組。置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中于37℃、5％CO2共培養(yǎng)5h。離心取上清加入LDH試劑，室溫孵育30min后于酶標(biāo)儀490nm下測定A549細(xì)胞的LDH釋放率，以反映細(xì)胞的保護(hù)率。結(jié)果表明，蛇床子素聯(lián)用黃芩苷能夠保護(hù)金葡菌α-溶血素介導(dǎo)的人肺上皮細(xì)胞(A549)損傷，且二者聯(lián)合應(yīng)用的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用蛇床子素或黃芩苷(附圖3)。

小鼠金葡菌肺炎的實(shí)驗(yàn)治療學(xué)研究

小鼠金葡菌肺炎模型

BALB/C小鼠(雌性，約20g)經(jīng)乙醚麻醉后，經(jīng)鼻給予30μl金葡菌懸液(金葡菌USA300)，小鼠平躺直至蘇醒，建立小鼠金葡菌肺炎的模型。致死試驗(yàn)及組織病理學(xué)考察給予的金葡菌量相同。

保護(hù)率試驗(yàn)

小鼠接種金葡菌后2h分別皮下注射50mg/kg(100μl)的蛇床子素、50mg/kg(100μl)的黃芩苷及蛇床子素和黃芩苷各50mg/kg的混合液100μl，每12h給藥一次。不給藥的陽性對(duì)照組給與100μl的DMSO，每組10只小鼠；另單獨(dú)設(shè)立未感染小鼠10只，給予滅菌的DMSO作為溶劑對(duì)照組。按給藥方案給藥后，分別記錄小鼠感染金葡菌12h,24h，36h,48h，60h和72h后 的死亡率。結(jié)果表明，經(jīng)蛇床子素處理后，顯著降低小鼠金葡菌肺炎的死亡率，且蛇床子素聯(lián)用黃芩苷的保護(hù)效果比二者單獨(dú)應(yīng)用效果更好(表2)。

表2.蛇床子素聯(lián)用黃芩苷對(duì)小鼠金葡菌肺炎死亡率的影響