本發(fā)明涉及一種地榆皂苷I注射劑及其制備方法，屬于藥物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

骨髓抑制是臨床上常見的造血系統(tǒng)疾病,它可發(fā)生于各系統(tǒng)腫瘤性疾病的放射治療及(或)化學(xué)治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物(氯霉素、苯、磺胺、抗癲癰藥、鎮(zhèn)靜劑、抗甲狀腺藥、抗糖尿病藥、抗瘧疾、安眠藥)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微環(huán)境、造血干細(xì)胞、造血細(xì)胞生長因子等的損傷,粒、紅、巨核細(xì)胞系統(tǒng)一系、二系或三系細(xì)胞受抑制。粒細(xì)胞缺乏會引起嚴(yán)重感染；紅細(xì)胞明顯減少會引起嚴(yán)重貧血；血小板明顯下降引起嚴(yán)重出血，甚至導(dǎo)致死亡。目前，臨床上對于骨髓抑制尚缺乏有效的治療手段，亟需開發(fā)出藥效較好的治療藥物。

地榆皂苷Ⅰ，英文名ziyu-glycosideⅠ，CAS號35286-58-9，是從薔薇科地榆屬植物地榆或長葉地榆的根中提取得到的具有藥理活性的化合物。CN101119740A公開了地榆皂苷Ⅰ在制備升高紅細(xì)胞和血紅蛋白的藥物中的用途。然而，實際使用中發(fā)現(xiàn)，地榆皂苷Ⅰ藥效欠佳，單獨使用時往往難以取得較好的升高血細(xì)胞水平、治療骨髓抑制的效果。因此，亟需提高地榆皂苷Ⅰ的藥效，促進該藥物在臨床上的應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種地榆皂苷Ⅰ注射劑及其制備方法。

本發(fā)明提供了一種地榆皂苷I注射劑，它是包含下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷I 0.2份、增溶劑0.001～60份、水950～1050份。

進一步地，所述的增溶劑為吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188中一種或兩種以上的混合物。

進一步地，它還包含pH調(diào)節(jié)劑。

優(yōu)選地，所述的pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉。

優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原輔料制備而成：地榆皂苷I 0.2份、吐溫80 0.001～60份，加水及pH調(diào)節(jié)劑至地榆皂苷I濃度為0.2mg/mL，pH＝5.0～7.0。

本發(fā)明提供了一種所述注射劑的制備方法，包括下述步驟：將地榆皂苷I分散于水中，加入增溶劑和pH調(diào)節(jié)劑，過濾，滅菌，即得。

進一步地，用0.22um微孔濾膜過濾。

本發(fā)明提供了所述注射劑在制備升高血細(xì)胞、血紅蛋白數(shù)量的藥物中的用途。

本發(fā)明提供了所述注射劑在制備治療和/或預(yù)防骨髓抑制的藥物的用途。

本發(fā)明提供了一種地榆皂苷Ⅰ注射劑。發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)，地榆皂苷Ⅰ升高血細(xì)胞水平效果欠佳的原因在于其溶解度低(在水中溶解度僅為0.042mg/ml)、胃腸吸收率小，導(dǎo)致該藥物的生物利用度較低，限制其藥效的發(fā)揮。本發(fā)明選用特定種類的輔料(吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL或泊洛沙姆188)將地榆皂苷I制備成注射劑，極其顯著地提高了原藥的溶解度，注射劑中地榆皂苷I的含量達到0.19mg/ml，且澄明度、熱源檢查均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。藥效實驗中，與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷Ⅰ注射劑能顯著升高外周血WBC、RBC、PLT、NEUT和HGB數(shù)量，且藥效明顯優(yōu)于地榆皂苷Ⅰ原藥，表明本發(fā)明將地榆皂苷Ⅰ制備成注射劑后能夠提高主藥的生物利用度，增強其升高血細(xì)胞數(shù)量、防治骨髓抑制的作用。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過具體實施方式對本發(fā)明作進一步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明作出的各種改變和替換，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。

具體實施方式

本發(fā)明具體實施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購買市售產(chǎn)品獲得。

實施例1本發(fā)明地榆皂苷Ⅰ注射劑的制備

處方：地榆皂苷I 0.1g、吐溫80 0.0001g

制備方法：取地榆皂苷I分散于100mL注射用水中，加入吐溫80、氫氧化鈉，攪拌溶解，再加入注射用水400mL使溶液中地榆皂苷I的濃度為0.2mg/mL，pH＝6.0，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。實施例2本發(fā)明地榆皂苷Ⅰ注射劑的制備

處方：地榆皂苷I 0.1g、聚氧乙烯蓖麻油EL 0.001g

制備方法：取地榆皂苷I分散于100mL注射用水中，加入聚氧乙烯蓖麻油EL、氫氧化鈉，攪拌溶解，再加入注射用水400mL使溶液中地榆皂苷I的濃度為0.2mg/mL，pH＝5.0，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

實施例3本發(fā)明地榆皂苷Ⅰ注射劑的制備

處方：地榆皂苷I 10g、泊洛沙姆188 60g

制備方法：取地榆皂苷I分散于2000mL注射用水中，加入泊洛沙姆188、氫氧化鈉，攪拌溶解，再加入注射用水48000mL使溶液中地榆皂苷I的濃度為0.2mg/mL，pH＝7.0，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

以下通過實驗例證明本發(fā)明的有益效果。

實驗例1采用不同輔料制備地榆皂苷I注射劑的質(zhì)量評價

前期實驗發(fā)現(xiàn)，地榆皂苷Ⅰ原藥在水中的溶解度極低，僅為0.042mg/ml，嚴(yán)重限制了藥效的發(fā)揮。因此，發(fā)明人對地榆皂苷I的理化性質(zhì)、與增溶劑的配伍進行了廣泛研究，最終發(fā)現(xiàn)吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188三種輔料可在最大程度上提高原藥的溶解度，制備的注射劑中地榆皂苷I含量能夠達到0.19mg/ml。

本實驗分別以吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、十二烷基硫酸鈉制備地榆皂苷I注射劑為例，說明本發(fā)明所選輔料的優(yōu)越性。

制備方法：取地榆皂苷I 0.2g分散于100mL注射用水中，分別加入不同的輔料(吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、十二烷基硫酸鈉)5g和氫氧化鈉，攪拌溶解，再加入注射用水900mL使溶液中地榆皂苷I的濃度為0.2mg/mL，pH＝6.0，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得注射劑。檢測熱源、澄明度及藥物含量，結(jié)果見表1。

熱原按《中國藥典》(2010年版)熱原檢查法測定。

澄明度按《中國藥典》(2010年版)可見異物檢查法項下的燈檢法檢查。

地榆皂苷I含量，采用HPLC法測定，色譜條件：Agilent extend-C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)，流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL；以乙腈-水(30:70)為流動相；檢測波長為208nm。

表1采用不同輔料制備的地榆皂苷I注射劑的質(zhì)量評價

由表1可知，本發(fā)明通過使用特定種類的輔料(吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL或泊洛沙姆188)，可將地榆皂苷I制備成澄清的注射劑，熱源檢查合格；而且，其中地榆皂苷I含量達到0.19mg/ml，極其顯著地提高了原藥的溶解度。在采用其它輔料如丙二醇、十二烷基硫酸鈉等的情況下，制備得到的地榆皂苷I注射劑澄明度檢查不合格，地榆皂苷I含量較低，制劑質(zhì)量出現(xiàn)了明顯的下降。

實驗例2輔料用量對地榆皂苷I注射劑質(zhì)量的影響

取地榆皂苷I 0.2g分散于100mL注射用水中，如表2所示，分別加入不同量的增溶劑吐溫80和氫氧化鈉，攪拌溶解，再加入注射用水900mL使溶液中地榆皂苷I的濃度為0.2mg/mL，pH＝6.0，用0.22um微孔濾膜過濾、滅菌，即得注射劑。檢測熱源、澄明度及藥物含量，結(jié)果見表2。

表2地榆皂苷I注射劑的質(zhì)量評價結(jié)果

實驗結(jié)果：增溶劑用量在1.0mg～60g范圍內(nèi)時，制備得到的地榆皂苷I注射劑熱源檢測合格、注射劑澄清，藥物含量達到0.18mg/mL；若增溶劑添加量在上述范圍之外，注射劑則出現(xiàn)乳濁、熱源檢測不合格、藥物含量降低等質(zhì)量下降的情況。綜合考慮生產(chǎn)成本、毒副作用等因素，增溶劑添加1.0mg為最佳。

實驗例3本發(fā)明地榆皂苷I注射劑藥效學(xué)研究

1實驗材料

1.1受試藥物本發(fā)明地榆皂苷I注射劑A組(按照實施例1制備)、B組(按照實施例2制備)、C組(按照實施例3制備)、地榆皂苷I 10％DMSO-生理鹽水組、環(huán)磷酰胺。

1.2實驗動物KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.3實驗儀器：全自動血球分析儀；BS-600L電子天平：規(guī)格：600g/0.1g，上海友聲衡器有限公司。

1.4統(tǒng)計方法

用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進行LSD檢驗，方差不齊者進行Tamhane’s T2檢驗。

2實驗方法

2.1實驗動物分組及模型制備

所有動物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機分為：空白組；模型組；地榆皂苷I注射劑A、B、C組，制成2.5mg·kg-1混懸液，臨用前配制；地榆皂苷I組：地榆皂苷I粉末，用10％DMSO-生理鹽水溶解，配制成2.5mg·kg-1混懸液，臨用前配制。實驗第1天，除空白組外，其余各組小鼠按50mg·kg-1劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液，連續(xù)3天，空白組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水。

2.2給藥

各實驗組自實驗第1天開始按劑量、給藥方式給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)7天。

2.3標(biāo)本采集

實驗第8天，各實驗組小鼠眼眶取血，用裝有EDTA抗凝劑的0.5mlEP管收集待測。

2.4檢測指標(biāo)及方法

外周血象檢測：采用全自動血球計數(shù)儀對各實驗組小鼠外周血白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞(NEUT)紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)進行計數(shù)。

3實驗結(jié)果

表3各實驗組小鼠外周血血細(xì)胞數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與地榆皂苷I組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

結(jié)果顯示，與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷I注射劑A組、地榆皂苷I注射劑B組、地榆皂苷I注射劑C組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆皂苷I組無顯著性差異；與地榆皂苷I組比較，本發(fā)明地榆皂苷I注射劑A組、地榆皂苷I注射劑B組、地榆皂苷I注射劑C組小鼠外周血WBC、RBC、PLT數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

表4各實驗組小鼠外周血血細(xì)胞數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與地榆皂苷I組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

結(jié)果顯示，與模型組比較，本發(fā)明地榆皂苷I注射劑A組、地榆皂苷I注射劑B組、地榆皂苷I注射劑C組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆皂苷I組無顯著性差異；與地榆皂苷I組比較，本發(fā)明地榆皂苷I注射劑A組、地榆皂苷I注射劑B組、地榆皂苷I注射劑C組組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。