背景技術：
：：聾啞病人是指聽覺和語言障礙兼有的病人。全世界聾啞人約2億人。我國有聾啞人2700多萬，每年新增2-3萬人。一旦一個家庭有一位聾啞患兒，就會給這個家庭在經(jīng)濟上、思想上造成嚴重的困難和壓力。感音神經(jīng)性聾是由于外源性或自身衰老導致的耳蝸毛細胞的變性和逐漸消失，血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)、聽神經(jīng)或聽覺中樞的退行性病變引起的聽力減退和聽力喪失。目前這被認為是一種不可逆的病變且尚無特效藥物或保守療法能使感音神經(jīng)性聾病人完全恢復聽力。藥物治療對于改善聽功能有一定療效，但十分有限，有些藥物還有較大的毒副作用。電子耳蝸植入和助聽器的應用均依賴于螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的存活，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的缺失會影響其效果。因此，尋找一種有效且低毒或無毒的治聾藥物仍是一條重要途徑。近年來，中藥治聾的研究也取得了很大發(fā)展。中國專利CN1775254A公開了一種治療耳聾的藥物制劑及其制備方法(龍膽、黃芩、地黃、澤瀉、川木通、梔子、當歸、九節(jié)菖蒲、甘草、羚羊角等中藥原料制成)。但該專利中未公開臨床療效資料及動物實驗資料。中國專利CN101439131A的專利中報道了一種治療感音神經(jīng)性耳聾的中藥組合物及其應用，該中藥組合物的配方和重量比為：熟地黃22-48份，澤瀉8-18份。該專利中的藥物組合物具有滋陰補腎，利水泄熱的功效，對于感音神經(jīng)性耳聾有一定的防治功效。由于中藥的特殊性，其作用于身體不同部位會導致藥效出現(xiàn)較大差異，前人研究的治耳聾藥物對此報道甚少。有鑒于此，提出本發(fā)明。技術實現(xiàn)要素：：本發(fā)明的主要目的是提供一種用于治療耳聾的藥物組合物的使用方法，具體的，本發(fā)明提供一種可以恢復和再生聽神經(jīng)和耳蝸中受損傷或死亡的感音毛細胞的中藥制劑或組合物的使用方法，徹底治愈聾啞病。本發(fā)明的技術方案為：一種用于制備治療耳聾的藥物組合物，其特征在于：該藥物組合物包括組合物1和組合物3，其中，組合物1和組合物3組合使用。所述藥物組合物1由紅花5-40重量份、黃芪10-60重量份、穿山甲5-40重量份、桃仁10-60重量份、川芎4-40重量份、萊菔子5-40重量份、木香5-40重量份、烏藥6-40重量份、熟地15-70重量份，山萸肉15-70重量份、丹皮6-40重量份、云苓6-40重量份、澤瀉5-50重量份、磁石15-80、皂刺5-50重量份、水蛭5-40重量份、知母5-40重量份、黃柏5-40重量份制成；組合物3由銀花15-60重量份、瓜蔞15-60重量份、當歸5-30重量份、元胡15-60重量份、川芎20-90重量份、人參3-30重量份、五靈脂5-40重量份、冰片10-60重量份，麝香(或人工麝香)1-10重量份、磁石15-60重量份、杞果7-60重量份、公英15-60重量份、山萸肉15-60重量份制成。優(yōu)選的，所述組合物1由紅花12重量份、黃芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、萊菔子15重量份、木香10重量份、烏藥15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、澤瀉10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黃柏10重量份制成；所述組合物3由銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份制成。所述組合物1的制備方法為：(1)清洗：將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為15-60ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黃柏這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入100-130℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流10-30min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝。所述組合物3的制備方法為：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為15-60ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入100-130℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，制成湯劑。優(yōu)選的，上述藥材從原產(chǎn)地采購，并在水洗浸泡后，根據(jù)《中國藥典》的標準，對藥材進行篩選，粉碎和切片。優(yōu)選的，所述組合物1、組合物3可以制成湯劑，丸劑，顆粒劑，耳浴劑。優(yōu)選的，將所述組合物1制成湯劑，組合物3制成耳浴劑。優(yōu)選的，組合物中還包括組合物2，所述組合物2由黃芪30-90重量份、當歸5-50重量份、川芎3-20重量份、赤芍7-40重量份、桃仁3-30重量份、紅花3-30重量份、肉桂1-10重量份、蘇木5-50重量份、水蛭3-30重量份、王不留10-60重量份、磁石10-60重量份制成。優(yōu)選的，所述組合物2由黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份制成。所述組合物2的制備方法為：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為20-130×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為15-60ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入100-130℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝。優(yōu)選的，所述組合物2可以制成湯劑，丸劑，顆粒劑，耳浴劑。優(yōu)選的，將所述組合物1和2制成湯劑，組合物3制成耳浴劑。優(yōu)選的，將所述組合物1和2制成丸劑，組合物3制成耳浴劑。優(yōu)選的，將所述組合物1和2制成顆粒劑，組合物3制成耳浴劑。優(yōu)選的，在給藥時并配合使用促神經(jīng)生長素。優(yōu)選的，促神經(jīng)生長素為成纖維生長因子。優(yōu)選的，成纖維生長因子的用量為每日2000IU。優(yōu)選的，將組合物1、組合物2制備成湯劑，組合物3組合制成耳浴劑組合使用，對耳周圍進行按摩、揉耳部，前后左右旋轉耳廓。本發(fā)明的有益效果：1.采用本發(fā)明所提出的藥物，可以對損傷和死亡的感音母細胞和傳導神經(jīng)的再生修復，進而達到聽力提高和恢復，根除病灶，起到治本的效果。附圖說明：圖1是本發(fā)明中對照組致聾90天后毛細胞的電鏡觀察圖(20KV×1000)；圖2是本發(fā)明中對照組致聾90天后毛細胞的電鏡觀察圖(20KV×1500)；圖3是本發(fā)明實施例4組致聾實驗后治療90天毛細胞再生的電鏡觀察圖(20KV×1000)；圖4是本發(fā)明實施例4組致聾實驗后治療90天毛細胞再生的電鏡觀察(20KV×1500)。具體實施方式：制備例1制備組合物1。按照組合物1的組方：紅花12重量份、黃芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、萊菔子15重量份、木香10重量份、烏藥15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、澤瀉10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黃柏10重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗：將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黃柏這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，制成湯劑。制備例2制備組合物1。按照組合物1的組方：紅花12重量份、黃芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、萊菔子15重量份、木香10重量份、烏藥15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、澤瀉10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黃柏10重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗：將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黃柏這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制成丸劑。制備例3制備組合物1。按照組合物1的組方：紅花12重量份、黃芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、萊菔子15重量份、木香10重量份、烏藥15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、澤瀉10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黃柏10重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗：將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黃柏這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制成顆粒劑。制備例4制備組合物1。按照組合物1的組方：紅花12重量份、黃芪20重量份、穿山甲10重量份、桃仁15重量份、川芎10重量份、萊菔子15重量份、木香10重量份、烏藥15重量份、熟地25重量份，山萸肉20重量份、丹皮12重量份、云苓12、澤瀉10重量份、磁石30、皂刺10重量份、水蛭10重量份、知母10重量份、黃柏10重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗：將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的紅花、黃芪、穿山甲、桃仁、川芎、萊菔子、木香、烏藥、熟地，山萸肉、丹皮、云苓、澤瀉、皂刺、知母、黃柏浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，桃仁，木香，熟地，山萸肉，丹皮，黃柏這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，調節(jié)pH為6，加入0.1％的維生素B，制成耳浴劑。制備例5制備組合物2。組合物2的組方：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，制成湯劑。制備例6制備組合物2。組合物2的組方：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制成丸劑。制備例7制備組合物2。組合物2的組方：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制成顆粒劑。制備例8制備組合物2。組合物2的組方：黃芪60重量份、當歸10重量份、川芎6重量份、赤芍15重量份、桃仁6重量份、紅花6重量份、肉桂5重量份、蘇木10重量份、水蛭6重量份、王不留20重量份、磁石20重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的黃芪、當歸、桃仁、川芎、赤芍、紅花、肉桂、蘇木、王不留于40℃的低氘水中浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石、水蛭浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對黃芪，當歸，桃仁，蘇木這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，調節(jié)pH為6，加入0.1％的維生素B，制成耳浴劑。制備例9制備組合物3。組合物3的組方：銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，制成湯劑。制備例10制備組合物3。組合物3的組方：銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制備丸劑。制備例11制備組合物3。組合物3的組方：銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)真空干燥，制備顆粒劑。制備例12制備組合物3。組合物3的組方：銀花30重量份、瓜蔞30重量份、當歸10重量份、元胡30重量份、川芎45重量份、人參6重量份、五靈脂10重量份、冰片20重量份，麝香(或人工麝香)5重量份、磁石30重量份、杞果15重量份、公英30重量份、山萸肉30重量份，共稱取藥材60g。制備方法：(1)清洗，將600ml去離水照常規(guī)方法制備氘豐度為55×104atm％的低氘水，加入少量的微量元素硒，攪拌均勻后，進行增氧處理，至水中氧含量為30ul/L時，停止增氧；將已經(jīng)粉碎或切片的銀花、瓜蔞、當歸、元胡、川芎、人參、五靈脂、冰片，麝香(或人工麝香)、杞果、公英、山萸肉浸泡于40℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；將已經(jīng)粉碎的磁石浸泡于60℃的低氘水中，超聲處理20min，超聲功率280w；(2)炒制：中火對銀花，當歸，元胡，公英，山萸肉這幾味藥材進行炒制20min(本發(fā)明中提到的炒制意為將藥材炒焦，具體操作方法為，將藥材置于鍋內(nèi)，用中火炒制外呈焦黃，內(nèi)呈黃色的狀態(tài))；(3)水煎，將上述步驟獲得的藥材，按照先加入根莖類藥物，后加入葉片類藥物的順序加入120℃的低氘水中，恒溫恒壓下封閉回流20min；回流完畢后，收集煎液，并于相同溫度下低氘水煎2次，合并煎液；(4)加入乙醇：將煎液中加入乙醇，使得乙醇濃度為50％；(5)過濾：靜置12h，過濾沉淀獲得藥液；(6)濃縮包裝，將步驟(5)中所得藥液蒸餾濃縮，直到藥液密度達到1.2g/ml，調節(jié)pH為6，加入0.1％的維生素B，制成耳浴劑。實施例1服用制備例1、同時將制備例12中的耳浴劑外用。實施例2服用制備例1、同時將制備例12中的耳浴劑外用。同時注射成纖維生長因子的用量為每日2000IU。實施例3制備例1、制備例5的藥物共同服用，同時將制備例12中的耳浴劑外用。實施例4制備例1、制備例5的藥物共同服用，同時將制備例12中的耳浴劑外用。同時注射成纖維生長因子的用量為每日2000IU。實施例5制備例1、制備例9的藥物共同服用。實施例6制備例1、制備例5、制備例9的藥物共同服用。對比例1按照CN1775254A中的制備方法，制備治療耳聾藥劑。稱取龍膽125g，黃芩125g，地黃125g，澤瀉125g，川木通125g，梔子125g，當歸125g，九節(jié)菖蒲125g，甘草125g，羚羊角6.25g。當歸、羚羊角分別粉碎成細粉；其余龍膽等八味加乙醇回流提取二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并乙醇提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏狀；藥渣加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.30～1.35(50℃)的清膏，與上述稠膏合并，攪勻，真空干燥，粉碎成細粉，加入當歸、羚羊角細粉，混勻，加入適量淀粉及2％微粉硅膠，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。對比例2按照CN101439131A中的制備方法，制備治療耳聾藥劑。稱取熟地黃24g、澤瀉9g，加入10倍量雙蒸水浸泡2h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取藥液。再次加入8倍量的雙蒸水，浸泡1h，武火煮沸后，文火煎煮0.5h，取藥液。將兩次藥液合并，90℃水浴濃縮。按體積比2∶3加入無水乙醇，充分混勻，4℃靜置24h，1500rpm離心15min，取上清，棄沉淀。90℃水浴揮發(fā)乙醇，三蒸水定容至270ml液體。0.22μm小濾器過濾除菌，制得藥劑。效果例1動物實驗1.造模選用健康青年雜色豚鼠，耳廓反射正常，體重250-300g，雌雄各半。隨機分為慶大霉素致聾組(Gentamyci,GM組)，正常對照組。動物用戊巴比妥鈉80mg/Kg劑量麻醉，進行腦干誘發(fā)電位(ABR)和畸變耳聲發(fā)射(DPOAE)測定。測定后的GM組每天肌注慶大霉素(山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司，批準文號：國藥準字H37021973)按80mg/Kg。連續(xù)肌肉注射14-20天，測定慶大霉素注射動物的ABR閾值在50dBSPL以上，DPOAE幅值明顯下降后，再分為致聾后對照組、致聾后中藥治療組和對比例治療組。注射后的所有動物進行ABR和DPOAE測定。2聽功能測定方法美國InteligentHearingSmart聽覺誘發(fā)電位-耳聲發(fā)射儀(腦干誘發(fā)電位、耳蝸電圖、多頻穩(wěn)態(tài))。動物麻醉后，用針電極插入顱頂為記錄電極，同側為參考電極，對側接地。刺激率19.1/ms,高通300，低通3000，平均疊加256-512次。DPOAE記錄是將大小合適的探頭塞入外耳道，使外耳道密封，當刺激信號平穩(wěn)后進行測試，重復兩次。每個受試者均接受兩個初始音強度分別為為L1＝70dBSPL，L2＝70dBSPL的純音信號刺激，初始音的頻率比為f1/f2＝1.22，f1、f2的幾何均數(shù)的范圍位于0.5～8.0kHz。分別選擇f2為0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，16，32kHz各點進行測試，測量不同刺激強度時DPOAE的幅值，以引出反應幅值高出本底噪聲3dB時的最小刺激強度作為DPOAE有無的指標，確定檢出率。上述測試均疊加100次。3治療方法及藥物用量3.1將GM致聾豚鼠隨機分組各20只。按陳奇主編的《中藥藥理研究方法學》方法，按成人量(mg/kg)換算成動物劑量的倍數(shù)簡表，換算豚鼠為4.5倍的劑量(mg/kg)，計算出豚鼠的口服用藥劑量為9ml。如本發(fā)明表1所述，致聾后對照組、致聾后中藥治療組和對比例治療組的小鼠每天服用中藥組合物1、3，組合物1、2、3的組合物，對比例的中藥組合物，連續(xù)治療3個月。慶大霉素致聾后對照組同樣為20只，給予口服同劑量的生理鹽水，時間同治療組。3.2統(tǒng)計學處理：采用MicrosoftOfficeExcel錄入數(shù)據(jù)，計算平均值，制作數(shù)據(jù)表格。分析數(shù)據(jù)均以平均值±標準差(mean±SD)表示。所有數(shù)據(jù)用SPSS10.0forWindow軟件進行顯著性檢驗。3.3DPOAE實驗結果：根據(jù)實驗數(shù)據(jù)可知(見表2-4)，在高頻區(qū)(2844Hz-8040Hz)，當組合物1、3聯(lián)合使用時，如實施例1、2、5，復聰作用較為明顯(P＜0.05)，其中又以實施例2的效果最佳。進一步的，當聯(lián)用組合物1、2、3時，如實施例3、4、6，尤其是采用如實施例4的聯(lián)用方法，藥效最佳(見表3)(P＜0.01)。此外，如表4所示，本發(fā)明實施例1-6的治療效果都要好于對比例，可使實驗動物聽力的高頻區(qū)基本恢復到正常水平。3.4ABR實驗結果：根據(jù)表5、表6可知，正常豚鼠的ABR平均閾值應當在20-30dBSPL，GM致聾后ABR閾值上升到44-58dBSPL，與正常豚鼠相比，數(shù)據(jù)有顯著性差異(P＜0.01)。組合物治療90天后，ABR的平均閾值均有不同程度的下降，其中，采用如實施例1-6的治療方案，ABR閾值基本恢復到正常程度，與正常組相比沒有顯著性差異(P＞0.05)，其中，實施例2的效果優(yōu)于實施例1，實施例1的效果優(yōu)于實施例5，實施例4的效果優(yōu)于實施例3，實施例3的效果優(yōu)于實施例6。同時又以實施例4的治療效果最佳。通過上述實驗可知，將組合物3制備成耳浴劑，如制備例12，再與組合物1或組合物1、2聯(lián)合使用，能發(fā)揮藥物的最大活性。表1：對大慶素致聾豚鼠給藥分組和給藥情況表2：致聾實驗0日時正常組與慶大霉素致聾組致聾后DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表3：致聾實驗90日后正常組與慶大霉素致聾普通組DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表4：致聾實驗90日后對比例組DPOAE各頻率幅值(dBSPL,x±s)表5：致聾實驗0日時各組ABR反應域(dBSPL,x±s)組別耳數(shù)ABR反應域14025.31±4.6324051.46±6.61表6：致聾實驗90日后各組ABR反應域(dBSPL,x±s)組別耳數(shù)ABR反應域14023.25±4.8224050.21±7.5734030.04±4.2244029.46±4.4754025.29±5.1764024.20±5.1174032.20±4.3984030.11±5.0294043.44±7.80104037.29±6.93效果例2掃描電鏡觀察方法。對實驗中，對照組和實施例4組進行掃描電鏡的觀察。步驟如下。將取材的左側耳蝸樣品用緩沖液把組織表面洗凈，在解剖顯微鏡下(OLYMPUS，TOKYO，297261)，用纖細鋼針在耳蝸頂部打一小孔，一定要挑破前庭膜，再挑破圓窗膜和卵圓窗膜，并去除鐙骨及足板，用細滴管將2.5％戊二醛固定液從蝸尖小孔和圓窗卵圓窗反復滴灌3-5次，明顯看到液體從兩窗流出。將樣品浸泡在固定液中，置于4℃冰箱中4小時。置于0.1MPB緩沖液中，在解剖顯微鏡下在耳蝸各回骨壁鉆孔，使耳蝸各回與固定液相通，再浸泡于固定液中4小時。用0.1MPB漂洗三次后，用1％OsO4后固定2小時。用0.1MPB漂洗20-30分鐘。用乙醇梯度脫水，乙醇的濃度依次為30％-50％-70％-90％-100％(3次)，乙醇與乙酸異戊酯1:1的混合液10-20分鐘；純乙酸異戊酯10-20分鐘。臨界點干燥：裝樣：將樣品從乙酸異戊酯中放入濾紙6中，移入臨界點干燥儀的樣品杯(高壓容器)內(nèi)，蓋上蓋并擰緊以防漏氣。注入液態(tài)二氧化碳，依次打開二氧化碳鋼瓶的排氣閥和儀器的進氣閥在0-10℃下，向樣品杯注入液態(tài)二氧化碳。當液態(tài)二氧化碳充至樣品杯容積的50％時，關閉儀器進氣閥，靜置15-20分鐘，讓乙酸異戊酯向液態(tài)二氧化碳中充分擴散，然后打開儀器打開儀器排氣閥門和進氣閥門，讓其邊排氣邊充氣10分鐘，再關閉排氣閥，繼續(xù)沖入液態(tài)二氧化碳至樣品杯的80％左右關閉進氣閥。加溫置換：將溫度調節(jié)設定在20℃處經(jīng)15-20分鐘后，由于溫度升高，樣品杯內(nèi)液態(tài)二氧化碳逐漸氣化，因此，壓力也隨之上升至7000Pa左右，樣品中的乙酸異戊酯將二氧化碳充分置換。氣化：將溫度旋鈕調至臨界溫度以上(35-40℃)，此時隨著溫度升高，樣品杯內(nèi)的壓力也逐漸增加達到二氧化碳的臨界點，界面也隨之消失。當壓力達到7134Pa時經(jīng)5分鐘后，即可排氣。排氣：在保持溫度不變的情況下(即不關電源)打開流量計的排氣閥門，以1.0L/分鐘的速度排氣，經(jīng)2小時左右排氣完畢，樣品杯的壓力下降到零將溫度調節(jié)至室溫約5分鐘后，即可取出樣品。離子濺射鍍膜：將樣品用雙面膠帶樣品臺上(注意樣品觀察的方向性)。將樣品放入離子濺射儀的真空罩內(nèi)，當真空罩內(nèi)的真空度抽到10-1Pa時在陰極與陽極中間加上1000-3000V的直流電壓，兩極之間產(chǎn)生弧光放電的電場。在電場的作用下罩內(nèi)殘余的氣體分子被電離為正離子和電子，正離子被陰極吸引轟擊金屬靶，激發(fā)出金屬離子和電子，并被陽極吸引附著在樣品表面而形成金屬導電膜。掃描電鏡觀察在S-2700ScanningElectionMicroscopeHITACHI下進行。實驗結果如圖1-4所示。圖1，圖2為慶大霉素致聾90天后的毛細胞形態(tài)，可見毛細胞表面的纖毛破損嚴重。圖3，圖4為致聾后，采用實施例4方法進行治療90天后的情況，由圖可見，纖毛數(shù)量有了顯著的提升，排列也較為均勻，規(guī)則。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3