本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：

外感發(fā)熱是小兒最常見的臨床癥狀之一，以發(fā)熱、鼻塞、流涕、噴嚏、咽部刺激為主要臨床表現(xiàn)。是由于小兒遭受風(fēng)熱、風(fēng)寒之邪而致發(fā)燒，并伴有鼻塞，流鼻涕，延后不適，乏力，頭疼，關(guān)節(jié)疼和咳嗽等。中醫(yī)理論認為，小兒為稚陰稚陽之體，肌膚柔嫩，肺衛(wèi)外功能不固，免疫力低下，極易受風(fēng)邪侵襲而致??；易寒易熱，轉(zhuǎn)變迅速為其特點，外感表征是發(fā)熱的主要原因。風(fēng)熱風(fēng)寒之邪，外各肌表，內(nèi)犯于肺衛(wèi)之癥。具有熱證多、寒證少、年齡越小兼證越多的特點。

小兒熱速清顆粒是針對外感高熱而研制的中藥制劑。具有清熱、解毒、利咽之功效。其由柴胡、黃芩、板藍根、葛根、金銀花、水牛角、連翹、大黃組成，具有清熱、解毒、利咽的功效。方中柴胡和解表里，黃芩傾瀉上焦熱，二者相配，具有和解退熱的功效；板藍根清熱解毒，消腫利咽；金銀花、連翹、葛根解表清熱；水牛角清熱解毒；大黃清熱瀉火。蕩滌實熱。諸藥共用，共奏清熱、解毒、瀉火、利咽之功效。臨床報道，應(yīng)用小兒熱速清顆粒治療小兒外感發(fā)熱有較好療效。

CN200510200720小兒熱速清泡騰片，公開一種小兒熱速清泡騰片及其制備方法，其用柴胡625g、黃芩312.5g、板藍根625g、葛根312.5g、金銀花346.75g、水牛角156.25g、連翹375g、大黃156.25g和乳糖125g、碳酸氫鈉660g、枸櫞酸540g、阿司八坦100g、聚乙二醇6000 100g、硬脂酸鎂4g制成的；此專利工藝中，首先，由于忽略了板藍根中揮發(fā)油的清熱解毒、瀉火利咽的藥理作用，未對揮發(fā)油進行提取，影響了產(chǎn)品的療效。其次，其盡管對柴胡、金銀花、連翹三味藥進行了揮發(fā)油提取，但在應(yīng)用中，由于揮發(fā)油易于揮發(fā)，有效成分損失大，降低了產(chǎn)品療效。再次，原生產(chǎn)工藝中對水牛角使用水提方式提取，由于水牛角的角蛋白較難溶于水，傳統(tǒng)水煎煮法并未使水牛角的氨基酸成分充分溶出，降低了產(chǎn)品療效。

由于制備方法的缺陷使藥物有效成分損失較多，在一定程度上影響了產(chǎn)品的療效。同時也限制了產(chǎn)品質(zhì)量標準的提升，現(xiàn)有技術(shù)僅對黃芩苷、葛根素含量有低限要求，未對綠原酸、連翹苷、大黃素等成分的含量及范圍進行限定，產(chǎn)品質(zhì)量可控性有待提高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的生產(chǎn)工藝不合理、產(chǎn)品質(zhì)量可控性較差以及療效有進一步提升的需要等問題。本發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，板藍根中的揮發(fā)油的清熱解毒、瀉火利咽的藥理作用，對療效影響顯著，為此對板藍根揮發(fā)油進行了提取。本生產(chǎn)工藝對揮發(fā)油進行了包合。另外，發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)水牛角的角蛋白較難溶于水，本生產(chǎn)工藝采用酶水解與酸水解以及超濾方式得到的氨基酸量分別是傳統(tǒng)水提取方式的幾十倍。

具體地，

本發(fā)明方案如下：

本發(fā)明提供一種中藥組合物，該藥物組合物含有黃芩苷、葛根素、綠原酸、大黃素。

優(yōu)選地，還含有連翹苷、總揮發(fā)油和總氨基酸。

優(yōu)選地，其中，黃芩苷:葛根素:綠原酸:大黃素:連翹苷:總揮發(fā)油:總氨基酸的重量比為100-300:30-100:10-30:1-5:2-10:25-100:200-600。

進一步優(yōu)選地，所述黃芩苷:葛根素:綠原酸:大黃素:連翹苷:總揮發(fā)油:總氨基酸的重量比為100-200:50-80:10-20:1-3:2-6:25-50:200-300。

本發(fā)明還提供熱速清中藥組合物的制備方法，包括如下步驟：

將A、B和C三組物質(zhì)混合，即得到本發(fā)明的組合物：

A、水牛角提取物；B、板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油；C、黃芩、葛根、大黃、水牛角藥渣、板藍根藥渣、柴胡藥渣、金銀花藥渣和連翹藥渣的水提醇沉物；

1）所述A按照包括如下步驟的方法制備得到：

在按重量比加5-12倍量溶液中超聲波輔助水解水牛角，水解時間為0.5h-6h，得到的提取液經(jīng)30-50KD分子量超濾裝置超濾并干燥得水牛角提取物即物質(zhì)A；

2）所述B按照包括如下步驟的方法制備得到：

將板藍根、柴胡、金銀花、連翹浸泡在6-12倍量水中，浸泡的時間為10-60min；90℃-100℃蒸餾提取1h-5h，蒸餾提取1-3次，得到餾出液，收集餾出液，即得到B的揮發(fā)油，藥渣備用，板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油與環(huán)糊精進行包合，干燥即物質(zhì)B；

3）所述C按照包括如下步驟的方法制備得到：將黃芩、葛根、大黃和步驟2）的藥渣及水牛角藥渣加水混合，進行煎煮，煎煮的溫度為90℃-100℃，煎煮的時間為1h-3h，煎煮次數(shù)2-3次，過濾，收集濾液，加入乙醇，使濾液中乙醇的體積百分含量為70-95%，靜置、收集上清液，即得到黃芩、葛根、大黃、水牛角藥渣、板藍根藥渣、柴胡藥渣、金銀花藥渣和連翹藥渣的水提醇沉物并干燥即物質(zhì)C；

其中所述的原料按重量份計為:柴胡160-320、黃芩80-160、葛根80-160、水牛角40-80、金銀花120-240、板藍根160-320、連翹96-192和大黃40-80。

優(yōu)選地，所述的藥效原料按重量份計為：柴胡250、黃芩125，葛根125、水牛角62.5、金銀花187.5、板藍根250、連翹150和大黃62.5。

所述步驟1）所述溶液為濃度200-6000U/g的蛋白酶溶液，或0.2-5mol/L的酸溶液。

優(yōu)選地，所述揮發(fā)油與環(huán)糊精比例為1:5-20進行包合，包合溫度為30-60℃，攪拌時間1h-8h，然后干燥即得。

本發(fā)明還提供一種熱速清制劑，其由上述組合物與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑組成，所述制劑為糖漿劑、口服液、片劑、顆粒劑或膠囊劑。

本發(fā)明還提供上述組合物在用于制備解熱、治療和/或預(yù)防炎癥的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)存在以下優(yōu)勢：

（1）組合物含有重量比在一定范圍內(nèi)的黃芩苷、葛根素、綠原酸、大黃素和連翹苷，確保了療效，實現(xiàn)了質(zhì)量可控性強和藥效提高的目標。

（2）針對水牛角傳統(tǒng)提取工藝有效成分溶出差的問題，水牛角由與其他藥材混合提取改為單獨提取后，再與其他藥材混合提取。本發(fā)明應(yīng)用酶水解和酸水解方法，得到的十七種氨基酸量是傳統(tǒng)水提取方式的幾十倍。

（3）超聲波輔助水解水牛角未見報道，得到的提取液經(jīng)30-50KD分子量超濾裝置超濾得到小分子提取物，有效提高了鎮(zhèn)靜及退熱作用。

（4）板藍根揮發(fā)油具有清熱解毒、瀉火利咽的藥理作用，在原工藝提取柴胡、金銀花、連翹揮發(fā)油的基礎(chǔ)上增加了板藍根揮發(fā)油的提取。

（5）對揮發(fā)油進行了包合，減少了揮發(fā)油的揮發(fā)，提高了療效。

本發(fā)明提高了產(chǎn)品質(zhì)量標準，增強了質(zhì)量可控性，同時提高了產(chǎn)品中有效物質(zhì)含量，改善了產(chǎn)品療效。

具體實施方式

實施例1

處方

柴胡250g、黃芩125g，葛根125g、水牛角62.5g、金銀花187.5g、板藍根250g、連翹150g和大黃62.5g

制備方法

1）在5倍量濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液中超聲波輔助水解水牛角，水解時間為6h，得到的提取液經(jīng)30KD分子量超濾裝置超濾得到濾液并干燥得水牛角提取物即物質(zhì)A。

2）將板藍根、柴胡、金銀花、連翹按重量比加6倍量水浸泡在水中10min，蒸餾提取揮發(fā)油6h，蒸餾提取3次，蒸餾溫度為90℃，得到餾出液，收集餾出液，即得到板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油，藥渣備用；板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油與環(huán)糊精比例為1:5進行包合，包合溫度為30℃，攪拌時間8h，干燥即物質(zhì)B。

3）步驟1）所得的水牛角藥渣、步驟2所得的板藍根、柴胡、金銀花、連翹蒸餾后的藥渣與黃芩、葛根、大黃3味藥，按重量比加6倍量水煎煮2次，煎煮的溫度為90℃，每次3h，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度為1.12(60℃測)，加乙醇使含醇量達70％，靜置24，取上清液回收乙醇，濃縮至無醇味并干燥即物質(zhì)C。

將A、B和C三組物質(zhì)混合，即得到組合物。

檢測結(jié)果：根據(jù)實施例5檢驗方法測得實施例1組合物中，每克組合物含：黃芩苷30mg、葛根素24mg、綠原酸3mg、大黃素0.9mg、連翹苷0.6mg、總氨基酸90mg、總揮發(fā)油7.5mg。

實施例2

處方

柴胡250g、黃芩125g，葛根125g、水牛角62.5g、金銀花187.5g、板藍根250g、連翹150g和大黃62.5g

制備方法

1）在8倍量濃度為200U/g的蛋白酶溶液中超聲波輔助水解水牛角，水解時間為6h，得到的提取液經(jīng)40KD分子量超濾裝置超濾得到濾液并干燥得水牛角提取物即物質(zhì)A。

2）將板藍根、柴胡、金銀花、連翹按重量比加8倍量水浸泡在水中30min，蒸餾提取揮發(fā)油3h，蒸餾提取2次，蒸餾溫度為100℃，得到餾出液，收集餾出液，即得到板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油，藥渣備用；板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油與環(huán)糊精比例為1:10進行包合，包合溫度為40℃，攪拌時間1h，干燥即物質(zhì)B。

3）步驟1）所得的水牛角藥渣、步驟2所得的板藍根、柴胡、金銀花、連翹蒸餾后的藥渣與黃芩、葛根、大黃3味藥，按重量比加10倍量水煎煮2次，煎煮的溫度為100℃，每次1h，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度為1.17(60℃測)，加乙醇使含醇量達95％，靜置48h，取上清液回收乙醇，濃縮至無醇味并干燥即物質(zhì)C。

將A、B和C三組物質(zhì)混合，即得到組合物。

檢測結(jié)果：根據(jù)實施例5檢驗方法測得實施例2組合物中，每克組合物含：黃芩苷60mg、葛根素15mg、綠原酸6mg、大黃素0.3mg、連翹苷1.8mg、總氨基酸60mg、總揮發(fā)油15mg。

實施例3

處方

柴胡160g、黃芩160g、葛根160g、水牛角40g、金銀花240g、板藍根160g、連翹96g和大黃80g。

制備方法

在10倍量濃度為6000U/g的蛋白酶溶液中超聲波輔助水解水牛角，水解3次，每次所述水解時間為0.5h，得到的提取液經(jīng)50KD分子量超濾裝置超濾得到濾液并干燥得水牛角提取物即物質(zhì)A。

將板藍根、柴胡、金銀花、連翹按重量比加10倍量水浸泡在水中60min，蒸餾提取揮發(fā)油1次，每次5h，蒸餾溫度為100℃，得到餾出液，收集餾出液，即得到板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油，藥渣備用；板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油與環(huán)糊精比例為1:20進行包合，包合溫度為60℃，攪拌時間2h，然后干燥即物質(zhì)B。

水牛角藥渣、蒸餾后的藥渣與黃芩、葛根、大黃3味藥，按重量比加10倍量水煎煮2次，煎煮的溫度為100℃，每次1h，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度為1.17（60℃測），加乙醇使含醇量達75％，靜置48h，取上清液回收乙醇，濃縮至無醇味并干燥即物質(zhì)C。

將A、B和C三組物質(zhì)混合，即得到組合物。

檢測結(jié)果：根據(jù)實施例5檢驗方法測得實施例3組合物中，每克組合物含：黃芩苷84mg、葛根素33.6mg、綠原酸8.4mg、大黃素1.26mg、連翹苷0.42mg、總氨基酸42mg、總揮發(fā)油5.25mg。

實施例4

處方

柴胡320g、黃芩80g、葛根80g、水牛角80g、金銀花120g、板藍根320g、連翹192g和大黃40g。

將以下A、B和C三組物質(zhì)混合，即得到組合物：

A、水牛角提取物；B、板藍根、柴胡、金銀花、連翹的揮發(fā)油；C、黃芩、葛根、大黃、水牛角藥渣、板藍根藥渣、柴胡藥渣、金銀花藥渣和連翹藥渣的水提醇沉物；

1）所述A按照包括如下步驟的方法制備得到：

在按重量比加12倍量5mol/L的鹽溶液中超聲波輔助水解水牛角，水解時間為0.5h，得到的提取液經(jīng)50KD分子量超濾裝置超濾并干燥得水牛角提取物即物質(zhì)A；

2）所述B按照包括如下步驟的方法制備得到：

將板藍根、柴胡、金銀花、連翹浸泡在12倍量水中，浸泡的時間為20min；100℃蒸餾提取2h，得到餾出液，收集餾出液，即得到揮發(fā)油物質(zhì)B，藥渣備用；

3）所述C按照包括如下步驟的方法制備得到：將黃芩、葛根、大黃、所述B的藥渣加水混合，進行煎煮，煎煮的溫度為100℃，煎煮的時間為3h，煎煮次數(shù)3次，過濾，收集濾液，加入乙醇，使濾液中乙醇的體積百分含量為85%，靜置、收集上清液，得到黃芩、葛根、大黃、水牛角藥渣、板藍根藥渣、柴胡藥渣、金銀花藥渣和連翹藥渣的水提醇沉物并干燥即物質(zhì)C；

檢測結(jié)果：根據(jù)實施例5檢驗方法測得實施例4組合物中，每克組合物含：黃芩苷21mg、葛根素6.3mg、綠原酸2.1mg、大黃素0.21mg、連翹苷2.52mg、總氨基酸126mg、總揮發(fā)油21mg。

實施例5本發(fā)明組合物種含量測定方法

黃芩苷、葛根素的含量測定：照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫：葛根素檢測波長250nm，黃芩苷檢測波長274nm。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于6000。

對照品溶液的制備 取葛根素對照品、黃芩苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇分別制成每lml含葛根素20μg、黃芩苷60μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 精密稱取組合物100mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇90ml，超聲處理（功率250W，頻率25kHz）30分鐘，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

綠原酸的含量測定：照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15:85:1:0.3）為流動相；檢測波長為324nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于6000。

對照品溶液的制備取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 精密稱取組合物100mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇90ml，超聲處理（功率250W，頻率25kHz）30分鐘，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

大黃素的含量測定：照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15）為流動相;檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000。

對照品溶液的制備 取大黃素對照品，精密稱定，加甲醇制成每lml含15μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 精密稱取組合物100mg，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理（功率250W，頻率25kHz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。連翹苷的含量測定：照高效液相色譜法(中國藥典2015年版通則0512)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B,按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為229nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計算應(yīng)不低于3000。

對照品溶液的制備 取連翹苷對照品，精密稱定，加甲醇制成每lml含15μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 精密稱取組合物100mg，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理（功率250W，頻率25kHz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

總氨基酸的含量測定：

精密稱取組合物100mg，置蒸發(fā)皿中，用0.02mol/L鹽酸溶液分次洗滌，合并洗滌液，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用0.02mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，用氨基酸分析儀測定。

本發(fā)明提高了產(chǎn)品質(zhì)量標準，增強了質(zhì)量可控性，同時提高了產(chǎn)品中有效物質(zhì)含量。

實施例6解熱作用和抗炎作用

1、解熱作用

Wistar雄性大鼠100只，體質(zhì)量220-240g，常溫下喂養(yǎng)3d，體溫計測量體溫2-3次/d，間隔1h，使其適應(yīng)測肛溫操作，減少實驗過程中溫度對結(jié)果的影響。實驗當(dāng)日需固定好大鼠，使數(shù)字溫度計探頭涂以石蠟插入大鼠直腸4cm，每小時測體溫1次，連續(xù)測量3次，選取體溫在37.0℃-38.0℃之間，體溫變化不超過0.3℃的70只大鼠供實驗用，取測量的3次體溫的平均值作為基礎(chǔ)體溫。將實驗動物隨機分成7組，每組10只，標記后稱重。正常對照組背部皮下注射無菌生理鹽水10mL/kg;模型對照組、專利組合物實施例1-4組、原工藝提取物組均背部皮下注射15%干酵母混懸液10mL/kg。致熱后4h測量大鼠體溫，同時灌胃給藥。正常對照組:生理鹽水10mL/kg;模型對照組:生理鹽水10mL/kg;專利組合物實施例1-4組:0.35g/kg;原工藝提取物組:0.35g/kg。首次給藥后1h測量體溫，同時再次給藥，劑量同前。首次給藥后2h、3h、4h各測量體溫1次，計算與致熱4h后體溫之差。結(jié)果見表1。

表1解熱作用結(jié)果

實驗結(jié)果顯示，與正常對照組比較，模型對照組升溫極顯著(P<0.01)，說明造模成功;與模型對照組比較，本發(fā)明組合物實施例1-4組解熱作用明顯優(yōu)于原工藝提取物組。

2、抗炎作用

取體重20±2g的雄性昆明小鼠60只，隨機分為6組：空白對照組，原工藝提取物組、本發(fā)明組合物實施例1-4組，每組10只。各組小鼠每天經(jīng)口灌胃1次，空白對照組按照0.01ml/g(體重)的劑量給予小鼠生理鹽水，原工藝提取物組、本發(fā)明組合物組均分別按照0.5g/kg(體重)的劑量給予原工藝提取物和本發(fā)明組合物，連續(xù)給藥4天。末次給藥后1小時，在乙醚麻醉下，將二甲苯0.02mL涂在小鼠左耳前后兩面致炎，致炎后30分鐘處死小鼠，用7mm直徑打孔器在小鼠左右耳相同部位打下耳片，稱重并記錄左右耳片重量，計算腫脹率，按t檢驗法進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表2。

表2對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

二甲苯所致小鼠耳腫脹是經(jīng)典的急性炎癥模型，原工藝提取物組、本發(fā)明組合物實施例1-4組均可以降低二甲苯所致小鼠耳腫脹的腫脹率，與空白對照組比較均有極顯著差異（P<0.01），本發(fā)明組合物組抗炎作用優(yōu)于原工藝提取物組。

通過對解熱動物模型和消炎動物模型的作用效果進行對比發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明實施例1-4組明顯優(yōu)于原工藝組。本發(fā)明提高了產(chǎn)品質(zhì)量，增強了質(zhì)量可控性，改善了產(chǎn)品療效。

上述詳細說明是針對本發(fā)明其中可行實施例的具體說明，說明書中實施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的修改或改進，均應(yīng)包含在本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。