本發(fā)明涉及保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種加強調(diào)節(jié)腸道菌群功能的保健食品及其制備方法。
背景技術(shù)：
生活在現(xiàn)今的都市，我們每個人的健康都容易受到許多威脅，包括空氣污染、食水污染、環(huán)境污染、工作壓力、經(jīng)濟壓力、細菌病毒、飲食不當(dāng)、令人寢食不安，所有這些不利健康的因素，都會導(dǎo)致免疫力低下。隨著社會節(jié)奏的加快，免疫力低下是一普遍現(xiàn)象，嚴(yán)重地影響著人類的日常生活、工作和學(xué)習(xí)的機體障礙，同時可產(chǎn)一系列的亞健康臨床癥狀，如記憶力減退、食欲不振、精神不振、嗜睡、多夢、乏力、易感冒、腸胃功能紊亂等。
人體對于疾病具有自愈能力，而腸道在這方面扮演著重要角色。因為，腸道是人體最大的免疫器官，腸道黏膜免疫系統(tǒng)包括腸道相關(guān)淋巴組織和有關(guān)細胞、分子成分，它可抵御細菌、病毒和毒素從消化道入侵，擔(dān)負著重要的免疫功能，成為防止外界致病因子入侵體內(nèi)的一道堅固屏障。而由于環(huán)境的污染、生產(chǎn)制造食物所加入的各種外源性添加劑，濫用抗生素對腸道正常菌群的破壞，導(dǎo)致人們的免疫力低下，腸道菌群失衡。一些看似不起眼的小病正使人們從健康狀態(tài)步入亞健康狀態(tài)，進而感染疾病。
益生菌是對機體健康有益的一類低致病性或無致病性微生物。作為促進機體健康的有益茵，益生菌具有多方面的功能：不僅可以促進營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，減輕機體的應(yīng)激反應(yīng)，降低血膽固醇，還可以調(diào)節(jié)免疫功能。研究表明，益生菌一般能夠在腸道內(nèi)定植，維持腸道菌群平衡，刺激胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官的發(fā)育，增強巨噬細胞的吞噬活性，活化腸道相關(guān)淋巴組織，促進免疫球蛋白A的生成，從而調(diào)節(jié)機體的免疫功能。
人自出生起便有細菌定植于胃腸道中，在胃腸道中共寄生有300-500種微生物，總數(shù)約1×1014個左右。這些細菌由專性厭氧菌、兼性厭氧菌和需氧菌組成，其中專性厭氧菌占97％-99％。由于胃內(nèi)獨特的環(huán)境，絕大部分經(jīng)口進入的細菌均被胃酸殺死而無法在胃黏膜定植，但有些細菌，如幽門螺桿菌可利用其分泌的尿素酶分解胃內(nèi)尿素，使細菌周圍pH值升高，從而可在充滿胃酸的環(huán)境中生存。由于食入的細菌在胃內(nèi)大部分被殺死，再加上小腸蠕動較快，因而小腸內(nèi)細菌含量較少。結(jié)直腸由于與外界直接相通，又無特殊的保護機制，因此結(jié)直腸含有人體內(nèi)絕大部分的細菌。糞便的有形物質(zhì)一半為細菌菌體，主要為厭氧茵。益生菌能通過自身代謝維持腸道菌群平衡，抑制有害細菌生長。
人體補充益生菌非常必要。人體在生病的時候，通常使用一些抗生素藥品進行感染癥治療，不僅殺死了致病菌，同時也將一些原本對人體非常有益的益生菌一起給殺滅了，從而導(dǎo)致人體的抵抗力減弱，病越治越多。國家醫(yī)藥衛(wèi)生管理部門對此己引起高度重視，并出臺了一些相關(guān)規(guī)定，要求購買抗生素必須憑醫(yī)師處方等，一方面防止患者濫用抗生素，同時也在警示大家：抗生素在治療疾病的同時，也會給身體帶來不可小視的副作用。在大量抗生素的作用下，非常有必要及時補充益生菌，以維護人體的動態(tài)平衡，恢復(fù)人體應(yīng)有的抵抗力。另一方面，人體因逐步走向衰老，益生菌的數(shù)量也會不斷減少，補充益生菌可以進一步提高“機體防御能力”，而對預(yù)防疾病有益處。
乳桿菌和雙歧桿菌一直被認(rèn)為是最具代表性的益生菌。最新發(fā)表的數(shù)據(jù)表明，乳桿菌和雙歧桿菌相關(guān)產(chǎn)品正日益成為極具市場前景的產(chǎn)業(yè)。其中，乳酸菌飲料、雙歧桿菌發(fā)酵酸乳以獨特的口感和健康理念為消費者及生產(chǎn)者所關(guān)注，發(fā)展迅速。
全球產(chǎn)業(yè)分析公司(GIA)在前不久發(fā)表的《益生菌：全球戰(zhàn)略經(jīng)營報告》中指出，預(yù)計到2010年，全球益生菌市場的銷售規(guī)模將達到200億美元。消費者意識的提高、醫(yī)療保健費用的居高不下、益生菌有利于身體的特殊好處以及消費者對預(yù)防性醫(yī)療保健越來越感興趣，正成為推動該市場發(fā)展的重要因素。不過，雖然益生菌市場在近年來取得了長足的發(fā)展，但整個市場仍然處于初級發(fā)展階段。
益生菌被視為21世紀(jì)重要的醫(yī)療保健概念。正如GIA公司指出的，隨著人們對健康的認(rèn)識日益提高，以益生菌產(chǎn)品為形式的預(yù)防性藥物逐漸受寵。在亞洲和歐洲，益生菌早已得到了普遍的認(rèn)可，亞洲人和歐洲人在廣泛使用這種產(chǎn)品，這種流行趨勢同時也在向全球各地蔓延。在全球益生菌市場上，歐洲市場規(guī)模最大、增長最快，預(yù)計該市場2007年的銷售收入達到了57億美元。美國是全球第二大益生菌市場，預(yù)計到2010年，這一市場的銷售收入將達到46億美元。在歐洲，市場規(guī)模最大的是德國，增長速度最快的則是英國，年均復(fù)合增長率(CAGR)在14％左右。隨著國際市場上益生菌類產(chǎn)品的迅猛發(fā)展，勢必會帶動我國的益生菌類產(chǎn)品市場，所以該類產(chǎn)品前景看好。
目前，市場上批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品較少，而市場上以雙歧桿菌、乳酸桿菌、低聚糖等為主要原料，具有改善腸道菌群、增強免疫力功能的保健產(chǎn)品同類品種主要有：昂立一號(上海交大昂立生物制品有限公司)、合生元(廣州市合生元生物制品有限公司)、生命衛(wèi)士養(yǎng)生液(諸城市信得保健有限責(zé)任公司)、美康樂雙歧桿菌活茵膠囊(廣東健力寶有限公司)等，隨著消費者對益生菌的逐步認(rèn)識，益生菌類的保健產(chǎn)品還有很大的發(fā)展空間，目前的益生茵類產(chǎn)品還不能滿足人們的需要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有增強免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群的藥物(保健食品)不足，提供一種具有增強免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群效果較好的又可長期使用副作用小的保健食品及其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物中各組分的用量是發(fā)明人經(jīng)過大量實踐總結(jié)得出的，由下述重量份的原料藥制成：
優(yōu)選地，它是由下列原料按重量份計制成：
優(yōu)選的，本發(fā)明在配方中可以添加輔料400-600份，所述輔料為麥芽糊精200-300份、蘋果果粉200-300份。
進一步優(yōu)選的，所述輔料為麥芽糊精250份、蘋果果粉250份。
本發(fā)明所述藥物組合物的劑型可以是膠囊劑、片劑、沖劑等醫(yī)學(xué)上可接受的劑型，它們的制備方法、輔料用量按現(xiàn)有常規(guī)工藝進行。
本發(fā)明所述藥物組合物優(yōu)選按照以下方法制備：取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、麥芽糊精和蘋果果粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在120-150r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在120-150r/min，至色澤一致，無色差，分裝，即得。
組方依據(jù)及保健功能篩選：
免疫是人或動物在歷史進化過程中，形成的一種保護自己、排除異己的重要生理功能。一般微生物進入人體內(nèi)，由于免疫作用而產(chǎn)生抗體，人體就可以排斥這些微生物。但是人體對正常的生理菌像乳酸菌類，通常不會引起產(chǎn)生排斥它的抗體，相反，這些生理菌具有促進人體的免疫功能。這些細菌進入腸道以后會刺激腸道的免疫系統(tǒng)，淋巴組織，從而產(chǎn)生分泌性抗體——免疫球蛋白A(lgA)，而lgA對疾病及致病菌的入侵有抵抗作用，不僅如此，更重要的有益菌能激活T細胞的非特異性免疫功能，引起中性粒細胞、巨噬細胞增殖及促進PK細胞(自然殺傷細胞)，并能誘發(fā)產(chǎn)生多種細胞因子如干擾素、白介素、腫瘤壞死因子(TNF)等，增強了抗感染、抗細胞突變、抗腫瘤，抗衰老能力。
腸道是人體最大的免疫器官。如何增強腸道免疫功能。如果想讓腸道發(fā)揮出最大免疫功能，除了避免“菌從口入”外，還得采取一些積極的措施來幫助腸道建立起一個健康的免疫環(huán)境。第一，營造腸道內(nèi)有益菌的生長環(huán)境。補充益生菌的同時添加益生元—低聚果糖。其通過促進雙歧桿菌增殖來調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，誘導(dǎo)腸粘膜淋巴系統(tǒng)的免疫活性，以及激活細胞免疫和體液免疫等多種方式，從局部或整體增強機體免疫功能。第二，不斷地補充腸道內(nèi)有益菌群的數(shù)量。當(dāng)大病初愈，或大量使用抗生素后，有益細菌的存活量就會過低，這時為了讓腸道迅速恢復(fù)健康，應(yīng)該服用含有活的益生菌的食品或保健品，從而起到恢復(fù)腸道免疫力的作用。
因此，本發(fā)明組方以益生菌嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉為主要原料，并結(jié)合益生元低聚果糖使本品達到更好的增強免疫力和調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，具體文獻依據(jù)如下：
一、益生菌
乳酸菌為一群可代謝碳水化合物而產(chǎn)生大量乳酸的一類細菌的總稱。乳酸菌通常為革蘭氏陽性，營養(yǎng)要求復(fù)雜，不運動，無芽孢，接觸酶陰性，細胞色素陽性，厭氧或兼性厭氧。乳酸菌群作為腸道正常菌群，許多臨床與動物試驗結(jié)果證實，具有刺激腸道粘膜組成，影響粘膜免疫系統(tǒng)，而具有調(diào)節(jié)免疫作用，包括細胞色素的分泌，調(diào)節(jié)Th1與Th2免疫反應(yīng)的平衡，促進NK細胞和巨噬細胞活性，以及抗體的產(chǎn)生和作用。許多疾病可通過免疫調(diào)節(jié)作用而達到預(yù)防和治療的目的，如消化道疾病，過敏性疾病，癌癥，泌尿系統(tǒng)疾病等。
目前應(yīng)用于功能性食品的常見益生菌主要指兩大類乳酸菌群：一類為雙歧桿菌，該類乳酸菌為全球公認(rèn)的益生菌，尚未見不利于人體的報道。常見的有嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春雙歧桿菌等；另一類為乳桿菌，如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、植物桿菌和羅伊氏乳桿菌等，其中較新型的2個菌種為植物乳桿菌和羅伊氏乳桿菌。
1、雙歧桿菌
雙歧桿菌(Bifidobacterium，BFB)是由法國巴斯德研究院學(xué)者Tissier于1899年用厭氧培養(yǎng)法首次從健康母乳嬰幼兒的糞便中分離出來的一種專性厭氧菌，它是健康人腸道內(nèi)定植數(shù)量占優(yōu)勢的一種益生菌，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗菌消炎、抗衰老、降血脂等一系列保健功能，與人類的許多病理、生理現(xiàn)象密切相關(guān)?，F(xiàn)己確認(rèn)BFB是人體健康的重要指標(biāo)之一。
雙歧桿菌是任何動物腸道的優(yōu)勢菌群，是維持宿主健康最重要的細菌。作為益生菌定植于宿主胃腸道產(chǎn)生的有益作用包括：(1)維持健康的正常菌群；(2)通過產(chǎn)生細菌素和降低PH抑制病原菌生長；(3)改善乳糖耐受；(4)產(chǎn)生維生素；(5)刺激免疫系統(tǒng)等。
雙歧桿菌可以作為非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，通過細菌本身或細胞壁成分刺激并激活宿主免疫細胞，使其產(chǎn)生促分裂因子，促進吞噬細胞活力或作為佐劑發(fā)揮作用。其免疫調(diào)節(jié)途徑有兩種，即全身性免疫調(diào)節(jié)作用和腸道免疫調(diào)節(jié)作用。已有的研究表明，雙歧桿菌免疫功能的某些環(huán)節(jié)，這些影響涉及到免疫應(yīng)答的3個方面，即體液免疫、細胞免疫和非特異性免疫。雙歧桿菌作為免疫原可誘導(dǎo)各種免疫功能，使淋巴細胞增殖，NK細胞活性增強，單核巨嗜系統(tǒng)的吞噬作用增強，抗體產(chǎn)生細胞活化，各種細胞因子增多，提高局部和全身的免疫功能。雙歧桿菌還有可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群來提高機體腸道非特異性免疫防御功能，進而對整個機體的免疫功能產(chǎn)生影響。
研究表明：小鼠經(jīng)口給予雙歧桿菌能改變腸道菌群的組成和數(shù)量，腸道內(nèi)的雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加，而腸桿菌的數(shù)量下降。說明雙歧桿菌具有一定的調(diào)節(jié)腸道菌群、增殖雙歧桿菌和乳桿菌、抑制腐敗菌的作用。正常機體和腹瀉患者服用雙歧桿菌后可增強雙歧桿菌和乳酸桿菌在腸道菌群中的優(yōu)勢，限制類桿菌、腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌生長，調(diào)解菌群紊亂。
本發(fā)明中添加的雙歧桿菌為長雙歧桿菌和兩歧雙歧桿菌。長雙歧桿菌是革蘭氏陽性菌，不抗酸、不形成芽孢，不運動。長雙歧桿菌的細胞呈纖細桿狀，也有長而彎曲狀的或呈各種分支或分叉形、棍棒狀或匙形。單個或鏈狀，V形、柵欄狀排列，或聚集成星狀。細胞直徑為1.5至6微米。最適生長溫度37℃。長雙歧桿菌為人體腸道中的數(shù)量最多的5種雙歧桿菌之一。兩歧雙歧桿菌是人和哺乳動物回腸末端及大腸內(nèi)最主要的生理性菌群，與人體健康息息相關(guān)。
2、乳桿菌
乳桿菌是能定植于脊椎動物消化道內(nèi)最有價值的益生菌種之一。乳桿菌通過粘附素(細胞壁中的脂磷壁酸(LTA)、細胞表面S層蛋白及具有甘露糖特異性的細菌表面分子)與宿主細胞的細胞膜或黏膜上的粘附素受體(糖脂或硫苷脂類分子)粘附，然后定為定植，通過粘附和粘附拮抗效應(yīng)競爭排斥病原菌的粘附和定植，促使致病菌離開感染的腸道，保護宿主免受侵害，起到定植拮抗的作用；同時通過產(chǎn)生細菌素、類細胞素拮抗物質(zhì)和其他具有抑菌作用的代謝物(如過氧化氫和某些有機酸等)，抑制腸道有害菌，使有益菌占優(yōu)勢，調(diào)節(jié)腸菌群平衡。
乳桿菌不僅可以直接抑制病原微生物的生長，而且還是良好的免疫激活劑，可通過刺激宿主特異性及非特異性免疫功能增強宿主的抗病能力。乳桿菌對非特異性免疫的調(diào)節(jié)主要包括加強吞噬細胞的吞噬能力、刺激細胞產(chǎn)生各種細胞因子來控制炎癥反應(yīng)的強度等。研究表明，乳桿菌能夠激活巨噬細胞、B淋巴細胞和NK細胞，增加IL-1、IL-2、IL-6、IL-5、TNF-a等細胞因子的產(chǎn)生量，其中IL-6和TNF-a是被激活的巨噬細胞分泌的兩種重要的細胞因子，IL-6可以促進淋巴細胞的增殖并參與與T淋巴細胞、CTL、NK細胞和lak細胞的活化。乳桿菌可使Th的分化向Thl偏移，使Thl細胞因子減少并進而影響IgGI、IgE的生成。SIgA是黏膜免疫的重要抗體，在局部抗感染過程中起著關(guān)鍵的作用。乳桿菌的代謝物和整個細胞等抗原物質(zhì)能通過M細胞進入回腸派伊爾結(jié)，激活Th2細胞，產(chǎn)生大量的IL-5，而IL-5是有效的IgA產(chǎn)生因子，能激活PP生發(fā)中心的B細胞，使其轉(zhuǎn)化為漿細胞，在生產(chǎn)Ig的過程中向IgA轉(zhuǎn)化，從而使SIgA水平上升，當(dāng)SIgA抗體分泌增強時，提高免疫識別力，并誘導(dǎo)T、B淋巴細胞和巨噬細胞等產(chǎn)生細胞因子，通過淋巴再循環(huán)而活化全身免疫系統(tǒng)，從而增強機體的免疫功能。
本發(fā)明中添加的乳桿菌為嗜酸乳桿菌。嗜酸乳桿菌屬乳桿菌科中的乳桿菌屬，為革蘭氏陽性菌。廣泛存在于人及一些動物的腸道中，是有益微生物茵群，可以通過生物屏障與化學(xué)屏障來阻止和抑制各種致病菌與條件致病菌在腸道的定植、入侵和生長繁殖，起到調(diào)整腸道微生態(tài)失衡及生物拮抗作用，對維持胃腸道的生理功能有重要作用。
二、益生元
本發(fā)明中采用的益生元為低聚果糖。
低聚果糖，低聚果糖(FOS)是以蔗糖為原料通過果糖轉(zhuǎn)移酶的作用在蔗糖殘基上結(jié)合1-3個分子果糖而獲得的低聚的混合物。是雙歧桿菌的活化增殖因子，可刺激雙歧桿菌生長，從而調(diào)整腸內(nèi)菌群狀態(tài)。低聚果糖能通過改變腸道微生態(tài)環(huán)境而促進腸粘膜的淋巴細胞亞群分泌IgA和白細胞介素IL-5、IL-6，并抑制Th2控制的免疫應(yīng)答。FOS可增加PP淋巴細胞的分泌，不僅在大腸而且在小腸部位均能激活或誘導(dǎo)粘膜免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)的作用。FOS通過促進雙歧桿菌增殖來調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，誘導(dǎo)腸粘膜淋巴系統(tǒng)的免疫活性，以及激活細胞免疫和體液免疫等多種方式，從局部或整體增強機體免疫功能。
FOS促進雙歧桿菌增殖的同時，產(chǎn)生的短鏈脂肪酸能使腸內(nèi)的PH值降低，刺激腸道粘液分泌并促進粘液層的流動，有效地阻止細菌對腸粘膜的附著，抑制外源性病菌和腸內(nèi)固有腐敗細菌的生長增殖，減少腸內(nèi)腐敗有毒物質(zhì)氨、胺、硫化氫、吲哚的生成，維護腸道健康。因而具有良好的調(diào)節(jié)腸道菌群、增殖雙歧桿菌的作用。此外，低聚果糖還具有調(diào)節(jié)人體免疫力，降低血脂等多種重要生理功能。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：
1、本發(fā)明在益生菌的基礎(chǔ)上添加了益生元低聚果糖，低聚果糖是雙歧桿菌的活化增殖因子，通過促進雙歧桿菌增殖來調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，誘導(dǎo)腸粘膜淋巴系統(tǒng)的免疫活性，以及激活細胞免疫和體液免疫等多種方式，從局部或整體增強機體免疫功能。故本品具有保健功能明確的特點，且具有食品的感官，口感良好，作為粉劑質(zhì)量穩(wěn)定，服用量小、易于攜帶服用和貯存。
2、現(xiàn)有的混合機，如果容積在0.025-0.5m3，一般適合實驗室使用，轉(zhuǎn)速在60-110r/min之間，大生產(chǎn)用的混合機容積一般在1-15m3，轉(zhuǎn)速在15-55r/min之間。本發(fā)明在原料混合的步驟，將混合機轉(zhuǎn)速控制在120-150r/min，因為配方中各原料的差異比較大，如果轉(zhuǎn)速低于120r/min，則混合不均勻，影響混合性；如果轉(zhuǎn)速高于150r/min，則物料容易發(fā)熱，產(chǎn)生結(jié)塊，影響混合性。本發(fā)明通過對生產(chǎn)上混合機轉(zhuǎn)速的控制，使得物料的混合性最優(yōu)。
具體實施方式
下面以具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
實施例1
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、淀粉和滑石粉加入混合機中混合10分鐘，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘至色澤一致，無色差，裝入成膠囊，即得。
實施例2
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、淀粉和滑石粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在100r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在50r/min，至色澤一致，無色差，壓片，即得。
實施例3
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在150r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在120r/min，至色澤一致，無色差，分裝，即得。
實施例4
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、麥芽糊精和蘋果果粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在150r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在120r/min，至色澤一致，無色差，分裝，即得。
實施例5
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、麥芽糊精和蘋果果粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在130r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在140r/min，至色澤一致，無色差，分裝，即得。
實施例6
取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、低聚果糖分別過60目篩，備用；按配方量稱取嗜酸乳桿菌菌粉、兩歧雙歧桿菌菌粉、長雙歧桿菌菌粉、麥芽糊精和蘋果果粉加入混合機中混合10分鐘，轉(zhuǎn)速控制在150r/min，再與低聚果糖置總混機中混合約30分鐘，轉(zhuǎn)速控制在120r/min，至色澤一致，無色差，分裝，即得。
實驗例：本發(fā)明實施例3對增強免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群功能人體試食試驗：
試驗資料：共觀察受試者116例，北京聯(lián)合大學(xué)應(yīng)用文理學(xué)院保健食品功能檢測中心衛(wèi)生部北京醫(yī)院進行。
1.對象和方法：
1.1受試物：本組方例3的沖劑，為淡橙黃色粉末，由廣西泰和制藥有限公司提供。2g/袋，批號：301F11040801，陰涼、干燥處保存，保存期18個月。人體推薦服用量為4g/日。
1.2受試對象：健康成年志愿者
1.2.1納入者標(biāo)準(zhǔn)：
1.2.1.1一個月內(nèi)未患過胃腸疾病者。
1.2.1.2一個月內(nèi)未服用過抗生素者。
1.2.2排除者標(biāo)準(zhǔn)：
1.2.2.1年齡在18歲以下或65歲以上者，妊娠或哺乳期婦女，對本保健品過敏者。
1.2.2.2合并有心血管、腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病及內(nèi)分泌疾病，精神病患者。
1.2.2.3停服受試物或中途加服其它藥物，短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。
1.3實驗設(shè)計與分組：采用自身前后對照和組間對照兩種形式。受試者隨機分為試食組和對照組，試食組服用受試物，對照組為空白對照。
1.4服用劑量及時間：每次1袋，每日2次，服用量為4g/日，連續(xù)14天，受試者在試食期間停止服用與受試功能有關(guān)的物品，并且不改變平時的飲食習(xí)慣。
1.5儀器與試劑
1.5.1儀器：CA-500型血球計數(shù)儀(日本)，BM-200尿十項分析儀(美國)，AUTOLAB全自動生化分析儀(意大利)。顯微鏡NIKOM(日本)，ES-500電子天平，潔凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、高壓滅菌鍋、混合器等。
1.5.2試劑：伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、改良GAM瓊脂、結(jié)晶紫、草酸銨、碘、碘化鉀、蛋白胨、乳糖、溴甲酚紫、蕃紅、多價胨、酵母浸膏、氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、疊氮化鈉、七葉苷、檸檬酸鐵銨、瓊脂、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、吐溫80、乙酸鈉、檸檬酸銨、硫酸鎂、硫酸錳、瓊脂、過氧化氫、可溶性淀粉、L-半胱氨酸、西紅柿浸出液、吐溫80、肝提取液、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、無水亞硫酸鈉、D-環(huán)絲氨酸、氯化血紅素、萬古霉素、卡那霉素、新霉素、維生素K1等。主要試劑購于北京化工廠、北京化學(xué)試劑公司、北京奧博星生物技術(shù)有限公司。生化試劑盒全部由北京中生生物工程高技術(shù)公司提供。
2.觀察指標(biāo)：
2.1功效性觀察：
以下觀察指標(biāo)實驗前后各檢查一次。
2.2一般情況：
詳細詢問病史，了解受試者飲食情況，觀察睡眠、大小便、血壓、精神狀況等主要臨床癥狀。觀察受試物對受試者是否有不良影響。
2.2.1功效性指標(biāo)：雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿茵、擬桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。
2.2安全性觀察：
2.2.1血、尿及便常規(guī)檢查：(實驗前后各檢查一次)
紅細胞計數(shù)，血紅蛋白，白細胞計數(shù)，尿十項檢測，大便鏡檢等。
2.2.2生化指標(biāo)測定：
血清白蛋白ALB，總蛋白TP，肝腎功能(總膽紅素TBIL，谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT，谷草轉(zhuǎn)氨酶AST，尿素氮BUN，肌苷CRE)，血糖GLU、血脂(總膽固醇TC，甘油三脂TG)。(僅在試驗開始前進行)
2.2.3腹部B超，心電圖，X線胸部透視。(僅在試驗開始前進行)
3.實驗方法和觀察指標(biāo)
2.1試驗步驟
試食組人群試食受試物前，無菌采取受試者糞便，檢驗?zāi)c桿菌、腸球菌、擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、雙歧桿菌、乳桿菌等指標(biāo)。受試者每日服用受試物，連續(xù)14天。于服受試物最后一次24h后，無菌采取受試者糞便，再次檢驗上述指標(biāo)。對照組人群試驗前后糞便無菌采集和檢驗指標(biāo)均同試食組。
3.2腸道菌群檢驗方法
收集受試者新鮮糞便于便盒中，立即送檢。定量稱取標(biāo)本，10倍遞增稀釋混勻后，選擇合適的稀釋度，分別接種至各選擇性培養(yǎng)基。
3.3試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理
用SPSS 11.0軟件對各試驗原始數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。凡自身對照資料可采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗；但變異系數(shù)太大(如CV﹥50％)的資料應(yīng)用秩和檢驗。
3.4結(jié)果判定
符合以下任一項，且試食組試食前后自身比較及試食后試食組與對照組比較，差異均有顯著性，可以判定該受試樣品具有調(diào)節(jié)腸道菌群功能的作用。
3.4.1糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸球菌、腸桿菌和擬桿菌無明顯變化。
3.4.2糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭茵減少或不增加，腸桿菌和/或腸球菌和擬桿菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌/乳桿菌增加的幅度。
4.實驗結(jié)果：
4.1受試人群安全性指標(biāo)
試食組有效試食者54例，對照組有效試食者53例。試食組男性14例，女性40例，年齡38-65歲，平均年齡(54.6士6.9)歲；對照組男性12例，女性41例，年齡21-64歲，平均年齡(53.3+9.9)歲。受試人群血、尿、便常規(guī)、血壓和血生化安全性指標(biāo)見表1和表2。
表1受試人群血、尿和便常規(guī)及血壓
表2受試人群試食前血生化指標(biāo)
由表1和表2可見，受試人群試食前上述安全性指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)。
受試人群試食前精神、睡眠、飲食、大小便及血壓情況良好；心電圖、B超及胸透檢查均正常。試食期間，未觀察到對健康的不良反應(yīng)。試食后血、尿和便常規(guī)指標(biāo)及血壓無異常改變。
對人體腸道菌群的影響
表3人體試食前后的腸道菌群變化(logcfu/g，)
***試食組試食前后自身比較P<O.001，*試食組試食前后自身比較<0.05；
##試食組與對照組比較P<0.01，#試食組與對照組比較P<0.05；
試食前后自身比較P>0.05、試食組與對照組比較P>0.05。
由表3可知，在試食前后自身相比中，對照組各指標(biāo)菌變化均無顯著性差異(P>0.05)。試食組雙歧桿菌的數(shù)量增加有顯著性差異(P<0.05)；乳桿菌的數(shù)量增加有顯著性差異(P<0.001)；產(chǎn)氣莢膜梭茵、腸桿菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量變化差異無顯著性(P>0.05)。服用受試物14天后，與對照組相比，試食組雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量增加，均有顯著性差異(P<0.05和P<O.01)；腸桿菌、腸球菌、擬桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量變化差異均無顯著性(P>0.05)。
4.2試食人群脫失率：
116例入選者中，試食組試食結(jié)束時有4例未在規(guī)定時間按時復(fù)查，符合受試者排除標(biāo)準(zhǔn)，有效試食人群54例，試食人群脫失率為6.9％；對照組有5例未在規(guī)定時間按時復(fù)查，符合受試者排除標(biāo)準(zhǔn)，有效試食人群53例，試食人群脫失率為8.6％；總脫失率為7.8％。
5.結(jié)論：
5.1采用自身與組間兩種對照設(shè)計，納入試食人群116例，隨機分為試食組和對照組。有效試食人群107例，試食組54例、對照組53例。試食組人群服用實施例3益生菌沖劑。14天后，試食組人群自身比較，糞便中乳桿菌數(shù)量增加有顯著性差異(P<0.001)；雙歧桿菌數(shù)量增加有顯著性差異(P<0.05)；腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、腸球菌和擬桿菌數(shù)量變化差異均無顯著性(P>0.05)。與對照組人群相比，試食組人群糞便中雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量增加均有顯著性差異(P<0.05和P<0.01)；腸桿菌、腸球菌、擬桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量變化差異均無顯著性(P>0.05)。
5.2實施例3益生菌沖劑試食前后，血常規(guī)、尿常規(guī)、便常規(guī)、血壓及血生化指標(biāo)均在正常范圍，試驗期間未觀察到對健康有不良反應(yīng)。
5.3根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》-2003版中調(diào)節(jié)腸道菌群功能-人體試食試驗結(jié)果判定：實施例3益生菌沖劑具有調(diào)節(jié)人體腸道菌群的作用，未觀察到受試物對受試人群的健康有不良反應(yīng)。
實驗例：混合性考察
判斷生產(chǎn)工藝中的混合粉是否混合均勻，一般從兩個方面來進行判定：1產(chǎn)品的色澤均勻度；2混合粉各部分的成分含量是否一致。為了更好的判斷總混粉的混合情況，我們在混合工藝完成后，從不同的位置，各抽取50g混合粉對標(biāo)志性成分之--低聚果糖進行測定。
檢測結(jié)果如下：
標(biāo)志性成分檢測 低聚果糖，g/100g
從檢測結(jié)果可以看出，各部分的混合粉色澤均勻一致，各部分的成分含量也分布均勻，因此，根據(jù)以上兩個判斷標(biāo)準(zhǔn)，可以判定本品總混粉混合均勻一致，色澤一致，實施例3結(jié)果(RSD％)明顯好于實施例2。
在混合粉混勻后，進行混合粉的休止角試驗，以考察混合粉的流動性，保證裝量的準(zhǔn)確性。試驗內(nèi)容如下：
取本品總混粉3份，分別經(jīng)口徑7cm的長頸漏斗流下，并呈圓錐形狀，測其休止角，結(jié)果如下：
本品總混粉休止角較小，說明總混粉的流動性較好，實施例3結(jié)果明顯好于實施例2，從而更利于產(chǎn)品的裝量控制。