本發(fā)明涉及一種羧甲基殼聚糖的新用途，具體涉及羧甲基殼聚糖在制備或篩選用于治療皮膚瘙癢的產(chǎn)品中的用途。
背景技術(shù)：
：羧甲基殼聚糖是一種水溶性殼聚糖衍生物，有許多特性，如抗菌性強(qiáng)，具有保鮮作用，是一種兩性聚電解質(zhì)等。在化妝品、保鮮、醫(yī)藥等方面有多種應(yīng)用，也是近年來(lái)研究得較多的殼聚糖衍生物之一。羧甲基甲殼素的羧甲基是在糖殘基的C6-OH上發(fā)生取代，有少量羧甲基在C3-OH上發(fā)生取代，生成的是O-羧甲基甲殼素。殼聚糖中，羧甲基既會(huì)在-OH上發(fā)生取代，也會(huì)在-NH上發(fā)生取代，生成O-羧甲基和N-羧甲基殼聚糖，實(shí)際上的取代情況有：C6-O-羧甲基、C2-N-羧甲基、C3-O-羧甲基、C6-O、C2-N-羧甲基等。由于C3上的位阻效應(yīng)以及C2和C3之間的分子內(nèi)氫鍵，使C3位上的羧甲基化比較難發(fā)生，所以羥基上的羧甲基取代，C3-O羧甲基較少一些，而以C6-O羧甲基為主。對(duì)于C6-OH與C2-NH來(lái)說(shuō)，在堿性條件下羧甲基在羥基上的取代活性要高于氨基，因此，當(dāng)取代度小于1時(shí)，羧甲基的取代主要是在羥基上而不是氨基上，只有取代度接近1和高于1時(shí)，才會(huì)同時(shí)在氨基上發(fā)生羧甲基取代，形成O,N-羧甲基殼聚糖。羧甲基殼聚糖的水溶性，除了因?yàn)樗且环N羧酸鈉鹽而溶于水外，還有一個(gè)原因是羧甲基的導(dǎo)入，破壞了殼聚糖分子的二次結(jié)構(gòu)，使其結(jié)晶度大大降低，幾乎成為無(wú)定形?，F(xiàn)有技術(shù)中公開了羧甲基殼聚糖具有吸濕、保濕、抑菌的用途，但并沒(méi)有公開其具有治療皮膚瘙癢的用途。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種羧甲基殼聚糖的新用途。為了實(shí)現(xiàn)上述目的或者其他目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明首先公開了羧甲基殼聚糖在制備或篩選用于治療皮膚瘙癢的產(chǎn)品中的用途。優(yōu)選地，羧甲基殼聚糖在制備或篩選用于治療由組胺引起的皮膚瘙癢的產(chǎn)品中的用途。優(yōu)選地，所述羧甲基殼聚糖作為唯一有效成分或有效成分之一在制備或篩選用于治療由組胺引起的皮膚瘙癢的產(chǎn)品中的用途。具體地，所述羧甲基殼聚糖為O-羧甲基脫乙酰殼多糖。所述O-羧甲基脫乙酰殼多糖為羧甲基甲殼素脫乙?；蠡驓ぞ厶堑?-羥基氫被羧甲基取代后的部分羧甲基化的脫乙酰殼多糖。更為具體地，所述O-羧甲基脫乙酰殼多糖的結(jié)構(gòu)式如下所示：其中R1為CH2COONa；R2為CH2COONa或H；R3為CH2COONa或H或COCH3?，F(xiàn)有技術(shù)中羧甲基殼聚糖的種類很多，但是并不是所有的羧甲基殼聚糖具有治療皮膚瘙癢的效果。具體地，所述羧甲基殼聚糖的數(shù)均分子量為1000～20000。所述數(shù)均分子量是按照《中華人民共和國(guó)藥典(四部)》(2015年版)通則0401“紫外-可見(jiàn)分光光度法”方法測(cè)定A525。其原理為：乙酰丙酮試劑與標(biāo)準(zhǔn)氨基葡萄糖、羧甲基脫乙酰殼多糖或其水解液的還原性端基反應(yīng)產(chǎn)生色原；一定條件下，吸光度A525與相應(yīng)糖的摩爾濃度具有線性關(guān)系。水解后比水解前增加的還原性端基的倍數(shù)就是該羧甲基脫乙酰殼多糖的平均聚合度n，結(jié)合分子中糖單元平均分子質(zhì)量可以計(jì)算出該糖的數(shù)均分子質(zhì)量。優(yōu)選地，所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括將數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料通過(guò)雙氧水降解。更為優(yōu)選地，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料中羧甲基殼聚糖的數(shù)均分子量30～70萬(wàn)。更為優(yōu)選地，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料中羧甲基取代度為0.8～1.3。更為優(yōu)選地，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料中羧甲基O位取代度為0.7～1.0，N位取代度不超過(guò)0.3。所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料為由國(guó)內(nèi)申請(qǐng)?zhí)枮?013105362023的發(fā)明專利公開的方法制備獲得，其公開了一種制備羧甲基殼聚糖的方法，所述的方法是以甲殼素為原料，先將甲殼素堿化，使用冷熱交替法進(jìn)行脫乙?；磻?yīng)，生產(chǎn)殼聚糖鈉鹽，再在堿性條件下進(jìn)行羧化反應(yīng)，獲得數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖產(chǎn)品。本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單且易于控制，避免了殼聚糖分子鏈脫乙酰化反應(yīng)時(shí)因長(zhǎng)期高溫反應(yīng)出現(xiàn)的斷鏈現(xiàn)象，從而獲得了一種高粘度、高取代度和水溶性更好的羧甲基殼聚糖，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。所述分子量較高的羧甲基殼聚糖溶解的pH范圍為4.5～14.0。所述的數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖可以溶解在pH為4.5～6.5的酸性溶液中。與傳統(tǒng)工藝獲得的羧甲基殼聚糖溶解的pH范圍為7.0～14.0相比，上述專利方法獲得的數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖溶解的pH范圍更寬，拓寬了其應(yīng)用領(lǐng)域。優(yōu)選地，雙氧水降解的工藝為：將雙氧水在攪拌條件下加入數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖中進(jìn)行降解反應(yīng)，降解反應(yīng)過(guò)程中加堿使得反應(yīng)體系的pH為8.0～8.5，直至反應(yīng)體系的粘度為80～120cp時(shí)加入亞硫酸鈉停止反應(yīng)。更優(yōu)選地，降解反應(yīng)中，反應(yīng)溫度為25～45℃。由上述降解反應(yīng)即獲得降解后的羧甲基殼聚糖。更優(yōu)選地，所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括對(duì)雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖進(jìn)行酸析洗滌。所述酸析洗滌是指用酸調(diào)整雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖料體至pH為6～7，加入乙醇至淡黃色晶體析出，再用酒精反復(fù)洗滌，甩干，干燥獲得羧甲基殼聚糖。相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果表明，上述所述羧甲基殼聚糖具有治療皮膚瘙癢的功效，并且其親膚性和生物相容性好，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。具體實(shí)施方式以下通過(guò)特定的具體實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過(guò)另外不同的具體實(shí)施方式加以實(shí)施或應(yīng)用，本說(shuō)明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒(méi)有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。在進(jìn)一步描述本發(fā)明具體實(shí)施方式之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于下述特定的具體實(shí)施方案；還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明實(shí)施例中使用的術(shù)語(yǔ)是為了描述特定的具體實(shí)施方案，而不是為了限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或者按照各制造商所建議的條件。當(dāng)實(shí)施例給出數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解，除非本發(fā)明另有說(shuō)明，每個(gè)數(shù)值范圍的兩個(gè)端點(diǎn)以及兩個(gè)端點(diǎn)之間任何一個(gè)數(shù)值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員通常理解的意義相同。除實(shí)施例中使用的具體方法、設(shè)備、材料外，根據(jù)本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實(shí)施例中所述的方法、設(shè)備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術(shù)的任何方法、設(shè)備和材料來(lái)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。實(shí)施例1本實(shí)施例中為制備數(shù)均分子量為2000的羧甲基殼聚糖。采用數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料用雙氧水降解，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料的數(shù)均分子量為30W、羧甲基取代度為0.8～1.3，其中，O為羧甲基取代度為0.7～1.0，N位取代度不超過(guò)0.3。雙氧水降解的工藝為：將雙氧水在攪拌條件下加入數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖中進(jìn)行降解反應(yīng)，降解反應(yīng)過(guò)程中加堿使得反應(yīng)體系的pH為8.0，直至反應(yīng)體系的粘度為80～120cp時(shí)加入亞硫酸鈉停止反應(yīng)，本實(shí)施例中當(dāng)粘度達(dá)到88cp時(shí)停止反應(yīng)。降解反應(yīng)中，反應(yīng)溫度為室溫。所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括對(duì)雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖進(jìn)行酸析洗滌。所述酸析洗滌是指用酸調(diào)整雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖料體至pH為6.5，加入乙醇至淡黃色晶體析出，再用酒精反復(fù)洗滌，甩干，干燥獲得羧甲基殼聚糖。實(shí)施例2本實(shí)施例中采用數(shù)均分子量為8000的羧甲基殼聚糖。采用數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料用雙氧水降解，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料的數(shù)均分子量為40W、羧甲基取代度為0.8～1.3，其中，O為羧甲基取代度為0.7～1.0，N位取代度不超過(guò)0.3。雙氧水降解的工藝為：將雙氧水在攪拌條件下加入數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖中進(jìn)行降解反應(yīng)，降解反應(yīng)過(guò)程中加堿使得反應(yīng)體系的pH為8.5，直至反應(yīng)體系的粘度為100cp時(shí)加入亞硫酸鈉停止反應(yīng)。降解反應(yīng)中，反應(yīng)溫度為室溫。所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括對(duì)雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖進(jìn)行酸析洗滌。所述酸析洗滌是指用酸調(diào)整雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖料體至pH為6，加入乙醇至淡黃色晶體析出，再用酒精反復(fù)洗滌，甩干，干燥獲得羧甲基殼聚糖。實(shí)施例3本實(shí)施例中采用數(shù)均分子量為15000的羧甲基殼聚糖。采用數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料用雙氧水降解，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料的數(shù)均分子量為55W、羧甲基取代度為0.8～1.3，其中，O為羧甲基取代度為0.7～1.0，N位取代度不超過(guò)0.3。雙氧水降解的工藝為：將雙氧水在攪拌條件下加入數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖中進(jìn)行降解反應(yīng)，降解反應(yīng)過(guò)程中加堿使得反應(yīng)體系的pH為8.5，直至反應(yīng)體系的粘度為90cp時(shí)加入亞硫酸鈉停止反應(yīng)。降解反應(yīng)中，反應(yīng)溫度為室溫。所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括對(duì)雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖進(jìn)行酸析洗滌。所述酸析洗滌是指用酸調(diào)整雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖料體至pH為7，加入乙醇至淡黃色晶體析出，再用酒精反復(fù)洗滌，甩干，干燥獲得羧甲基殼聚糖。實(shí)施例4本實(shí)施例中采用數(shù)均分子量為20000的羧甲基殼聚糖。采用數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料用雙氧水降解，所述數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖原料的數(shù)均分子量為70W、羧甲基取代度為0.8～1.3，其中，O為羧甲基取代度為0.7～1.0，N位取代度不超過(guò)0.3。雙氧水降解的工藝為：將雙氧水在攪拌條件下加入數(shù)均分子量較高的羧甲基殼聚糖中進(jìn)行降解反應(yīng)，降解反應(yīng)過(guò)程中加堿使得反應(yīng)體系的pH為8.2，直至反應(yīng)體系的粘度為120cp時(shí)加入亞硫酸鈉停止反應(yīng)。降解反應(yīng)中，反應(yīng)溫度為室溫。所述羧甲基殼聚糖的制備方法包括對(duì)雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖進(jìn)行酸析洗滌。所述酸析洗滌是指用酸調(diào)整雙氧水降解后的羧甲基殼聚糖料體至pH為7，加入乙醇至淡黃色晶體析出，再用酒精反復(fù)洗滌，甩干，干燥獲得羧甲基殼聚糖。將實(shí)施例1～4中制備的羧甲基殼聚糖作為試驗(yàn)樣品，進(jìn)行皮膚抗變態(tài)動(dòng)物試驗(yàn)。即動(dòng)物經(jīng)2，4一二硝基氯苯(DNCB)皮膚誘導(dǎo)接觸后，觀察試驗(yàn)樣品對(duì)皮膚抗變態(tài)作用。具體地為：通過(guò)豚鼠皮膚經(jīng)DNCB皮膚誘導(dǎo)接觸后，產(chǎn)生變態(tài)(過(guò)敏)狀態(tài)，同時(shí)涂抹試驗(yàn)樣品，經(jīng)激發(fā)接觸，觀察試驗(yàn)低分子量羧甲基殼聚糖-90對(duì)豚鼠皮膚的抗變態(tài)作用。1.試驗(yàn)材料：試驗(yàn)樣品：1.實(shí)施例1～4中低分子量羧甲基殼聚糖2.2、4一二硝基氯苯(陽(yáng)性對(duì)照)：2、4一二硝基氯苯(DNCB)用醫(yī)用凡士林配成1％DNCB凡士林油膏供誘導(dǎo)接觸使用，配成0.5％DNCB凡士林油膏供激發(fā)接觸使用。3.復(fù)方醋酸地塞米松乳膏：(樣品對(duì)照)華潤(rùn)三九醫(yī)藥1504042H試驗(yàn)動(dòng)物：白色豚鼠30只，雌雄各半體重：250g-300g本院動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(滬)2014-0018上海甲干生物科技有限公司生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滬)2010-00282.試驗(yàn)條件：試驗(yàn)濕溫度20℃±2℃，相對(duì)濕度60～70％3.試驗(yàn)方法：選取健康白色豚鼠30只，剃去脊柱二側(cè)8cm×4cm范圍的試驗(yàn)皮膚被毛備用，將動(dòng)物分為試驗(yàn)樣品組，陽(yáng)性對(duì)照組及空白對(duì)照組共3個(gè)組，每組10只動(dòng)物。(1)誘導(dǎo)接觸：將1％DNCB凡士林油膏0.2g左右，涂在試驗(yàn)樣品組和陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物的左側(cè)，再在第7d和第14d以同樣方法重復(fù)一次。(2)涂抹試驗(yàn)品：在誘導(dǎo)接觸涂抹同時(shí)，用同樣方法，將試驗(yàn)樣品涂抹在樣品組動(dòng)物的右側(cè)，每天一次，連續(xù)涂抹28天。(3)激發(fā)接觸：末次誘導(dǎo)后14d，將約0.2g的0.5％DNCB凡士林油膏，涂于各組的動(dòng)物的右側(cè)試驗(yàn)區(qū)，觀察接觸24h后試驗(yàn)區(qū)皮膚的反應(yīng)。4.評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)試驗(yàn)組動(dòng)物出現(xiàn)皮膚紅斑反應(yīng)值為≥1時(shí)，判為該動(dòng)物出現(xiàn)皮膚變態(tài)陽(yáng)性反應(yīng)。5.試驗(yàn)結(jié)果：羧甲基脫乙酰殼聚糖皮膚激發(fā)接觸24h后皮膚變態(tài)反應(yīng)值(0)無(wú)紅斑(1)輕微紅斑(2)明顯紅斑(3)中—重度紅斑(1)為陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)濃度：1.0％，是指采用1.0wt％的羧甲基殼聚糖水溶液。6.試驗(yàn)結(jié)果評(píng)判：實(shí)施例1～4中的羧甲基殼糖均對(duì)白色豚鼠皮膚有緩解抗變態(tài)作用。將實(shí)施例1～4中制備的羧甲基殼聚糖作為試驗(yàn)樣品，進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)，具體為皮膚針刺實(shí)驗(yàn)，方案為如下所述。測(cè)定參數(shù)：1皮膚紅腫度：視覺(jué)評(píng)分(從5到1；由嚴(yán)重變?yōu)椴粐?yán)重)2癢感：受試者主觀感覺(jué)(從5到1；由嚴(yán)重變?yōu)椴粐?yán)重)3水皰面積的減?。簻y(cè)面積法。用特定的試驗(yàn)刀片在皮膚試驗(yàn)部位滴加10mg/ml鹽酸組胺；5分鐘后，皮膚會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的水皰以及癢感；應(yīng)用本發(fā)明實(shí)施例1～4中低分子量的羧甲基殼聚糖的水溶液2ml，所述低分子量的羧甲基殼聚糖的水溶液的濃度為0.2wt％。采用實(shí)施例1中低分子量的羧甲基殼聚糖溶于水中形成0.2wt％的羧甲基殼聚糖水溶液，取2ml進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)，在應(yīng)用后的0，3，30,60,，90，120，150分鐘后測(cè)定試驗(yàn)部位的癢感，紅腫度和水皰面積見(jiàn)表1所示：表1采用實(shí)施例2中低分子量的羧甲基殼聚糖溶于水中形成0.2wt％的羧甲基殼聚糖水溶液，取2ml進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)，在應(yīng)用后的0，3，30，60，90，120，150分鐘后測(cè)定試驗(yàn)部位的癢感，紅腫度和水皰面積見(jiàn)表2所示：表2時(shí)間(min)03306090120150紅腫(陽(yáng)性)4.03.83.72.92.51.91.3紅腫(樣品)3.82.92.71.40.90.50.2癢感(陽(yáng)性)3.83.73.52.71.10.80.3癢感(樣品)3.91.81.60.70.100水皰面積(陽(yáng)性對(duì)照)100877769672820水皰面積(樣品)10067514032178采用實(shí)施例3中低分子量的羧甲基殼聚糖溶于水中形成0.2wt％的羧甲基殼聚糖水溶液，取2ml進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)，在應(yīng)用后的0，3，30，60，90，120，150分鐘后測(cè)定試驗(yàn)部位的癢感，紅腫度和水皰面積見(jiàn)表3所示：表3采用實(shí)施例4中低分子量的羧甲基殼聚糖溶于水中形成0.2wt％的羧甲基殼聚糖水溶液，取2ml進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)，在應(yīng)用后的0，3，30，60，90，120，150分鐘后測(cè)定試驗(yàn)部位的癢感，紅腫度和水皰面積見(jiàn)表4所示：表4時(shí)間(min)03306090120150紅腫(陽(yáng)性)3.83.53.32.91.51.00.5紅腫(樣品)3.53.02.21.30.80.40.1癢感(陽(yáng)性)3.83.83.62.71.310.4癢感(樣品)3.92.01.70.80.100水皰面積(陽(yáng)性對(duì)照)100897265613317水皰面積(樣品)10060524028174現(xiàn)有技術(shù)中治療皮膚瘙癢主要就是組胺機(jī)理，根據(jù)上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以均表明所述低分子量羧甲基殼聚糖具有良好的抗治療皮膚瘙癢效果，體現(xiàn)在治療皮膚瘙癢快，治療皮膚瘙癢效果明顯。以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明任何形式上和實(shí)質(zhì)上的限制，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還將可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，當(dāng)可利用以上所揭示的技術(shù)內(nèi)容而做出的些許更動(dòng)、修飾與演變的等同變化，均為本發(fā)明的等效實(shí)施例；同時(shí)，凡依據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)對(duì)上述實(shí)施例所作的任何等同變化的更動(dòng)、修飾與演變，均仍屬于本發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3