本發(fā)明涉及化妝品原料領域，具體地涉及一種具皮膚美白功效的甘草萃取液的制備方法。
背景技術：
甘草(學名：Glycyrrhiza uralensis Fisch)別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。
1.用于心氣虛，心悸怔忡，脈結代，以及脾胃氣虛，倦怠乏力等。前者，常與桂枝配伍，如桂枝甘草湯、炙甘草湯。后者，常與黨參、白術等同用，如四君子湯、理中丸等。
2.用于癰疽瘡瘍、咽喉腫痛等?？蓡斡茫瑑确蛲夥?，或配伍應用。癰疽瘡瘍，常與金銀花、連翹等同用，共奏清熱解毒之功，如仙方活命飲。咽喉腫痛，常與桔梗同用，如桔梗湯。若農(nóng)藥、食物中毒，常配綠豆或與防風水煎服。
3.用于氣喘咳嗽?？蓡斡?，亦可配伍其他藥物應用。如治濕痰咳嗽的二陳湯；治寒痰咳喘的苓甘五味姜辛湯；治燥痰咳嗽的桑杏湯；治熱毒而致肺癰咳唾腥臭膿痰的桔梗湯；治咳唾涎沫的甘草干姜湯等。另風熱咳嗽、風寒咳嗽、熱痰咳嗽亦常配伍應用。
4.用于胃痛、腹痛及腓腸肌攣急疼痛等，常與芍藥同用，能顯著增強治攣急疼痛的療效，如芍藥甘草湯。
5.用于調和某些藥物的烈性。如調味承氣湯用本品緩和大黃、芒硝的瀉下作用及其對胃腸道的刺激。另外，在許多處方中也常用本品調和諸藥。
7甘草有類似腎上腺皮質激素樣作用。對組胺引起的胃酸分泌過多有抑制作用；并有抗酸和緩解胃腸平滑肌痙攣作用。
8.甘草黃酮、甘草浸膏及甘草次酸均有明顯的鎮(zhèn)咳作用；祛痰作用也較顯著，其作用強度為甘草酸>甘草黃酮>甘草浸膏。
9.甘草還有抗炎，抗過敏作用，能保護發(fā)炎的咽喉和氣管粘膜。甘草浸膏和甘草酸對某些毒物有類似葡萄糖醛酸的解毒作用。
10.甘草常用來治療隨更年期而來的癥狀.因為甘草里含有甘草素，是一種類似激素的化合物，它有助于平衡女性體內的激素含量。
11.甘草所含的次酸能阻斷致癌物誘發(fā)腫瘤生長的作用。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種具皮膚美白功效的甘草萃取液的制備方法。
本發(fā)明提供的技術方案如下：
將甘草研磨成粉末，以乙醇：水＝7:3的比例進行超聲波萃取，使用功率為400W，超聲1分鐘后取出，靜置20分再超聲波1min，再靜置20分后，再超聲波1min，后以80-120網(wǎng)目濾布過濾，濾液置于0-5℃冷藏24小時，再以200-300目濾布過濾；
將所獲得的甘草萃取液進行減壓濃縮去除溶劑，當萃取液中固形物含量達0.35g/mL以上時，此萃取液即是產(chǎn)品。
在本發(fā)明中，超聲波萃取所使用的儀器為：Panasonic、型號：NN-ST557，使用功率為400W。
本發(fā)明萃取物可以添加在食品或護膚品中，不易產(chǎn)生變色、變味、雜質沉淀的現(xiàn)象，并且以液態(tài)萃取物添加于產(chǎn)品中，使產(chǎn)品的調制更容易與便利。本發(fā)明萃取方法能快速獲取甘草美白成分萃取物，與其它的萃取方式相比，本發(fā)明的萃取物能產(chǎn)生最佳美白能力。
具體實施方式
初步萃取程序：將甘草研磨成粉末，以乙醇：水＝7:3的比例進行超聲波萃取(使用功率為400W，超聲波時間1分鐘后取出，靜置20分再超聲波1min，再靜置20分后再超聲波1min)，后以80-120網(wǎng)目濾布過濾，濾液置于0-5℃冷藏24小時，再以200-300目濾布過濾。
萃取物質量指針程序：取1ml萃取液分別置于三個已稱重的干鍋中，置入75℃烘箱烘干，評估萃取物的殘留固形物量于萃取液中的百分比。
后續(xù)萃取程序：依萃取物質量指針程序的標準，將初步萃取程序所獲得的甘草萃取液進行減壓濃縮去除溶劑，當減少溶劑能達到萃取液中固形物含量達0.35g/mL以上時，此萃取液即是產(chǎn)品。
甘草萃取物評估的萃取方法：
1、超聲波萃?。喝》勰┘尤胍掖迹核?:3溶劑進行超聲波1min(廠牌：Panasonic、型號：NN-ST557，使用功率為400W)后取出，靜置20分左右再超聲波1min，重復前述超聲波步驟三次，冷卻后抽氣過濾、真空濃縮后，冷凍干燥。
2、加熱回流萃取:秤取粉末加入乙醇或純水加熱2hr，冷卻后抽氣過濾、真空濃縮后，冷凍干燥。
3、冷浸萃?。喝》勰┘尤?50mL的乙醇或純水浸泡2天(以純水冷浸時需置于5℃冷藏室浸泡，避免長霉)，抽氣過濾、真空濃縮后，冷凍干燥。
4、超音波萃?。喝》勰┘尤胍掖蓟蚣兯猿舨ㄕ鹗帣C(廠牌：DELTA、型號：D150、容量：45L、工作頻率：40KHz、功耗：150W)震蕩30min，抽氣過濾、真空濃縮后，冷凍干燥。
萃取率：
可見，超聲波萃取的萃取率最高。
細胞毒性評估
檢測的細胞為Hs68cells(Human skin fibroblast、人類皮膚纖維母細胞)，在24小時的作用下，于濃度100μg/ml下均無顯示出明顯之細胞毒性。
DPPH自由基清除率評估之測定
方法：取99μL DPPH乙醇溶液(100μL)混合1μL之萃取物后避光反應30分鐘，最后于波長517nm下測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。與對照組維他命C比較。
可見，超聲波萃取組的抑制率最高。
總抗氧化能力活性測試(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity)試驗
利用ABTS試驗評估萃取物是否具有清除ABTS陽離子型自由基之能力。制備ABTS陽離子型自由基溶液，將7mM之ABTS和2.45mM K2S2O8混合均勻，避光反應1小時后，于734nm下調整溶液吸光值至0.7±0.02。接著取95.3μL ABTS自由基溶液混合1μL萃取物后避光反應20分鐘，最后于波長734nm下測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。維生素C為正向對照組。
可見，超聲波萃取組的抑制率最高。
抑制酪胺酸酶活性評估
將B16細胞，以1×105/mL之密度接種于96孔板中培養(yǎng)24小時后，將萃取物及對照組維生素C混合于含有100nMα-MSH之無酚紅(phenol red free)培養(yǎng)液，反應72小時后。移除上清液，用PBS清洗后，加入100mL 1％Triton X-100，以反復冷凍-解凍之方式打破細胞(-80℃30分鐘、25℃25分鐘、37℃5分鐘)，之后加入100μL之10mM L-DOPA，于37℃下反應2個小時，以475nm測量吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。
可見，超聲波萃取組的抑制率最高
抑制黑色素細胞生成黑色素之活性評估
將B16細胞，以1×105/mL之密度接種于96孔板中培養(yǎng)24小時后，將萃取物及對照組維生素C混合于含有100nMα-MSH之無酚紅(phenol red free)培養(yǎng)液，反應72小時后，取上清液100μL于96孔板中，于405nm波長測定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。計算萃取物和維生素C本身之吸光值，換算萃取物及維生素C作用于細胞后抑制黑色素生成量能力。
可見，超聲波萃取組有最佳黑色素抑制率。