本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明還涉及一種去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法。
背景技術(shù)：
目前，疫苗、注射液、大輸液、放射性藥品、化學(xué)藥品、抗生素藥品、生物制品(血液制品、疫苗)、中草藥注射劑、透析液等生物醫(yī)藥制劑中都含有內(nèi)毒素；而如何有效去除醫(yī)藥制劑中的內(nèi)毒素以及研究適用于大批量醫(yī)藥制劑生產(chǎn)過程的內(nèi)毒素去除材料和方法是今后生物醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。
內(nèi)毒素是產(chǎn)生于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞外壁層的脂多糖類物質(zhì)，亦即細(xì)菌尸體的碎片。內(nèi)毒素一般以聚體形式存在，其磷酸基團(tuán)與二價(jià)金屬離子螯合可進(jìn)一步穩(wěn)定內(nèi)毒素分子間的聚合，促成更大的內(nèi)毒素復(fù)合體，這類復(fù)合體的分子量可由幾千至數(shù)千萬不等。內(nèi)毒素具有體積小、熱穩(wěn)定性強(qiáng)、化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)等特性，使其在被去除方面有一定難度。
人體對(duì)內(nèi)毒素極為敏感。如有微量?jī)?nèi)毒素混入藥劑中注入人體血液系統(tǒng)，會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重發(fā)熱，甚至引起死亡。如極微量(1～5ng/kg體重)內(nèi)毒素就能引起體溫上升，發(fā)熱反應(yīng)持續(xù)約4小時(shí)后逐漸消退。自然感染時(shí)，因革蘭氏陰性菌不斷生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)伴有陸續(xù)死亡、釋出內(nèi)毒素，故發(fā)熱反應(yīng)將持續(xù)至體內(nèi)病原菌完全消滅為止。當(dāng)受感病人(或動(dòng)物)的血液或病灶中的細(xì)菌向血液中釋放了很多內(nèi)毒素，或者相當(dāng)大量的被內(nèi)毒素污染的液體輸入了病人(或動(dòng)物)體內(nèi)時(shí)，易患上內(nèi)毒素血癥。因此，盡可能降低制劑中內(nèi)毒素的含量是十分必要的，特別當(dāng)注射液(如大輸液)用量較大時(shí)，對(duì)內(nèi)毒素的含量要求應(yīng)更為嚴(yán)格，國(guó)家藥典中規(guī)定注射品中內(nèi)毒素應(yīng)小于1EU/mL。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一種去除生 物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法，包括如下步驟：
S1、預(yù)處理：將生物醫(yī)藥制劑原料液放置在醫(yī)療金屬杯內(nèi)，質(zhì)量為5-8克，醫(yī)療金屬杯提前要進(jìn)行殺菌消毒，然后將裝有生物醫(yī)藥制劑原料液的醫(yī)療金屬杯放入高壓蒸汽滅菌箱內(nèi)處理，溫度110-130攝氏度，時(shí)間40-50分鐘；
S2、內(nèi)毒素檢測(cè)：采用凝膠法檢測(cè)內(nèi)毒素，向高壓蒸汽處理后的醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(水面完全覆蓋生物醫(yī)藥制劑原料液)，然后向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入鱟試劑0.2-0.4毫升，充分?jǐn)嚢韬螽a(chǎn)生凝膠；
S3、原料液過濾：將S2處理后的生物醫(yī)藥制劑原料液清洗、過濾干凈，使原料液中沒有混合凝膠；
S4、樣品處理：向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入再生緩沖液4-6毫升，加入速度緩慢，每分鐘8滴，加入完成后攪拌均勻，靜置5分鐘，繼續(xù)加入4-6毫升再生緩沖液，方法同上；
S5、平衡處理：向醫(yī)療金屬杯內(nèi)逐滴加入6-8毫升平衡緩沖液，滴加速度為每分鐘8滴，再按此操作重復(fù)兩次；
S6、內(nèi)毒素去除：另配0.2-0.5M的NaCl溶液、0.1M的氫氧化鈉溶液和0.1M鹽酸溶液以備使用，向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入0.2-0.5M的NaCl溶液10-12毫升，再向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入加入0.1M的氫氧化鈉溶液，逐滴滴加，調(diào)節(jié)溶液PH值至7-8，0.1M鹽酸溶液用于微調(diào)PH值；
S7、內(nèi)毒素再檢測(cè)：取出S6中處理后的生物醫(yī)藥制劑原料液1-2克，實(shí)用緩沖液平衡該生物醫(yī)藥制劑原料液的PH值，然后向原料液中加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，然后向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入鱟試劑0.1-0.2毫升，觀察是否產(chǎn)生凝膠，若產(chǎn)生凝膠則將剩余原料液重復(fù)S6；
S8、原料液保存：將檢測(cè)合格的生物醫(yī)藥制劑原料液存儲(chǔ)在消毒殺菌后的褐色玻璃瓶?jī)?nèi)，保存溫度10-28攝氏度且放置在無陽光直射位置。
優(yōu)選的，S6中0.1M的氫氧化鈉溶液采用滴加的方法加入醫(yī)療金屬杯內(nèi)，滴加速度為0.3ml/min。
優(yōu)選的，所述S6中試劑添加完成后，可對(duì)醫(yī)療金屬杯進(jìn)行加熱處理，使溶液溫度處于80-100攝氏度，提高去除內(nèi)毒素效率，加熱過程對(duì)溶液進(jìn)行攪拌，使溶液PH均勻，若溶液PH值低于7，向溶液中加入0.1M鹽酸溶液，維持溶液PH值處于7-8。
本發(fā)明的技術(shù)效果和優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的一種去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法，預(yù)處理可初步去除外接微生物、病毒，內(nèi)毒素檢測(cè)可以初步判定內(nèi)毒素的含量，通過調(diào)節(jié)PH值，可以去除內(nèi)毒素，非常方便，去除內(nèi)毒素過程中加熱，提高內(nèi)毒素去除速率。
具體實(shí)施方式
下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1
一種去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法，該去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法，包括如下步驟：
S1、預(yù)處理：將生物醫(yī)藥制劑原料液放置在醫(yī)療金屬杯內(nèi)，質(zhì)量為5-8克，醫(yī)療金屬杯提前要進(jìn)行殺菌消毒，然后將裝有生物醫(yī)藥制劑原料液的醫(yī)療金屬杯放入高壓蒸汽滅菌箱內(nèi)處理，溫度110-130攝氏度，時(shí)間40-50分鐘；
S2、內(nèi)毒素檢測(cè)：采用凝膠法檢測(cè)內(nèi)毒素，向高壓蒸汽處理后的醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(水面完全覆蓋生物醫(yī)藥制劑原料液)，然后向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入鱟試劑0.2-0.4毫升，充分?jǐn)嚢韬螽a(chǎn)生凝膠；
S3、原料液過濾：將S2處理后的生物醫(yī)藥制劑原料液清洗、過濾干凈，使原料液中沒有混合凝膠；
S4、樣品處理：向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入再生緩沖液4-6毫升，加入速度緩慢，每分鐘8滴，加入完成后攪拌均勻，靜置5分鐘，繼續(xù)加入4-6毫升再生緩沖液，方法同上；
S5、平衡處理：向醫(yī)療金屬杯內(nèi)逐滴加入6-8毫升平衡緩沖液，滴加速度為每分鐘8滴，再按此操作重復(fù)兩次；
S6、內(nèi)毒素去除：另配0.2-0.5M的NaCl溶液、0.1M的氫氧化鈉溶液和0.1M鹽酸溶液以備使用，向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入0.2-0.5M的NaCl溶液10-12毫升，再向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入加入0.1M的氫氧化鈉溶液，逐滴滴加，調(diào)節(jié)溶液PH值至7-8，0.1M鹽酸溶液用于微調(diào)PH值；
S7、內(nèi)毒素再檢測(cè)：取出S6中處理后的生物醫(yī)藥制劑原料液1-2克，實(shí)用緩沖液平衡該生物醫(yī)藥制劑原料液的PH值，然后向原料液中加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，然后向醫(yī)療金屬杯內(nèi)加入鱟試劑0.1-0.2毫升，觀察是否產(chǎn)生凝膠，若產(chǎn)生凝膠則將剩余原料液重復(fù)S6；
S8、原料液保存：將檢測(cè)合格的生物醫(yī)藥制劑原料液存儲(chǔ)在消毒殺菌后的褐色玻璃瓶?jī)?nèi)，保存溫度10-28攝氏度且放置在無陽光直射位置。
S6中0.1M的氫氧化鈉溶液采用滴加的方法加入醫(yī)療金屬杯內(nèi)，滴加速度為0.3ml/min。
所述S6中試劑添加完成后，可對(duì)醫(yī)療金屬杯進(jìn)行加熱處理，使溶液溫度處于80-100攝氏度，提高去除內(nèi)毒素效率，加熱過程對(duì)溶液進(jìn)行攪拌，使溶液PH均勻，若溶液PH值低于7，向溶液中加入0.1M鹽酸溶液，維持溶液PH 值處于7-8。
綜上所述：本發(fā)明提供的一種去除生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素的方法，預(yù)處理可初步去除外接微生物、病毒，內(nèi)毒素檢測(cè)可以初步判定內(nèi)毒素的含量，通過調(diào)節(jié)PH值，可以去除內(nèi)毒素，非常方便，去除內(nèi)毒素過程中加熱，提高內(nèi)毒素去除速率。
最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。