背景技術(shù)：
：

傳統(tǒng)的機(jī)械粉碎，是應(yīng)用最廣的中藥加工基本技術(shù)，相比中藥飲片，能夠提高有效組分的溶出率，增加中藥材生物利用度，降低藥材用量，提高藥材利用率，但是很多藥材含有芳香性、揮發(fā)性組分，往往這些組份是藥材的有效成分，利用傳統(tǒng)的粉碎技術(shù)粉碎時間長，產(chǎn)生過熱現(xiàn)象，會造成不同程度的揮發(fā)損失，尤其是當(dāng)這些組分含量較少，甚至微量的時候，損失尤多，這就造成許多含揮發(fā)性組分的藥材難于開發(fā)利用。

超微粉碎技術(shù)是近20年迅速發(fā)展起來的一項高新技術(shù)，是傳統(tǒng)粉碎技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，以其自身的優(yōu)點，在中藥粉碎中具有獨特的優(yōu)勢。該技術(shù)能使植物細(xì)胞破比率達(dá)到95%以上，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)粉碎工藝的缺陷，使粉末的質(zhì)感均勻性得到了改善，提高藥物的生物利用度，加快對藥物的吸收，增強(qiáng)藥效，減少了中藥用量，提高傳統(tǒng)中藥的臨床應(yīng)用能力，使中藥資源得到充分利用。

黃連，既是應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)中藥材，也是國家重點保護(hù)的藥用植物。由于需求量的日益增加，同時人為環(huán)境破壞與無節(jié)制的亂采亂伐，導(dǎo)致黃連資源日漸稀少，在開展人工仿野生種植的同時，提高已采藥材的利用率顯得十分必要。關(guān)于黃連超微粉碎方面，經(jīng)文獻(xiàn)查考，“超微粉碎對黃連解毒散中成分吸收的影響試驗”表明超微粉碎后可以增加黃連解毒散中梔子苷的吸收利用度，而對小檗堿的影響不明顯；“黃連不同的炮制方法和制劑工藝體外抑菌作用的比較研究”，結(jié)果表明黃連超微粉水煎液的抑菌作用優(yōu)于黃連水煎液；“黃連解毒散超微粉有效成分梔子苷在家兔體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究”，結(jié)果表明超微粉碎技術(shù)可顯著提高黃連解毒散有效成分梔子苷的生物利用度。

“降低血糖的中藥組合物及其應(yīng)用”（發(fā)明專利公開號：103598590B）中，應(yīng)用了超微粉碎的方法，將多穗石柯葉、玄參、黃芪、葛根和黃精進(jìn)行超微粉碎至200目得細(xì)粉，主要目的是增加溶解性、分散性、吸附性、化學(xué)反應(yīng)性，與本發(fā)明相比，其未采用低溫法且粉碎粒度不夠（普通粉碎機(jī)即可達(dá)到），無法保證維持藥材原有質(zhì)量的同時顯著提升有效成分提取率。

“一種中藥細(xì)粉的制備方法”（發(fā)明專利公開號：103393599A）中，對雞內(nèi)金、金錢白花蛇、海馬等83種中藥材進(jìn)行了相應(yīng)的細(xì)粉制備，得到顆粒粒徑小于等于0.1—0.8μm，含量超過98%的中藥細(xì)粉，過程中添加干冰與液體分散介質(zhì)，中藥材：干冰：液體分散介質(zhì)=1：1.1—1.5：0.01—0.05，溫度在—10℃～—20℃，時間在20～40分鐘，設(shè)備為重壓研磨式超微粉碎機(jī)。操作程序復(fù)雜，安全性差，能耗高，成本高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是提供一種成本低、操作步驟簡單，安全，節(jié)省能源，不需輔料，提取黃連中有效成分效果顯著，可明顯節(jié)約原藥材，提高利用率的超微粉碎法制備黃連微粉的工藝。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

1、超微粉碎法制備黃連微粉的工藝，該方法采用低溫干法超微粉碎法制備，具體包括下列步驟：

（1）原料處理：將檢驗合格的黃連藥材分級，洗滌后曬干，將曬干后的黃連原料投入切片機(jī)中進(jìn)行切片，厚度1mm—2mm；

（2）粉碎：在D級潔凈區(qū)將經(jīng)過步驟（1）處理后的黃連薄片在普通多功能粉碎機(jī)中粉碎，過二號篩，得到粗粉，

（3）篩分：將粗粉用藥典篩進(jìn)行篩分，過五號篩，得到細(xì)粉，顆粒直徑為0.18mm—0.13mm，

（4）超微粉碎：將得到的黃連細(xì)粉置于SQW型翻轉(zhuǎn)式超微粉碎機(jī)中，黃連細(xì)粉占料盒的2/3，設(shè)置溫度達(dá)到—5℃后，開始粉碎，時間為12min，平均粒徑在20μm—25μm，即得黃連微粉。

通過對黃連飲片、粗粉和微粉的浸出物及含量分析試驗證明，超微粉碎法制備的黃連微粉浸出物和鹽酸小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿含量明顯高于普通黃連飲片及粗粉。

本發(fā)明對黃連超微粉碎法進(jìn)行多因素多水平考察，確定其最佳工藝參數(shù)。

一、超微粉碎工藝的考察

通過前期研究摸索，同時考慮節(jié)省能耗，固定超微粉碎機(jī)工作溫度為—5℃，對投樣量、樣品粒徑、粉碎時間三者進(jìn)行因素考察，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化篩選工藝，通過分析軟件，對單組因素高、中、低水平進(jìn)行設(shè)置，系統(tǒng)自動生成，設(shè)置投樣量300g、350g、400g，粉碎時間6min、9min、12min，樣品粒徑（符合《中國藥典》2015年版規(guī)定）粗粉（用數(shù)字“2”代替）、中粉（用數(shù)字“4”代替）、細(xì)粉（用數(shù)字“6”代替），組合顯示15組條件，響應(yīng)值為超微粉碎粒徑，經(jīng)中科院成都分析檢測中心檢測15組送樣黃連微粉，得到相應(yīng)粒徑檢測報告，粒度分析報告軟件自動采用50%以下的粒徑值即d（0.5）和90%以下的粒徑值即d（0.9）作為響應(yīng)值。分組條件及響應(yīng)值結(jié)果如表1。

結(jié)果表明，d（0.5）響應(yīng)值最小的是24.966μm，d（0.9）響應(yīng)值最小的是71.791μm，不管是以d（0.5）還是d（0.9）響應(yīng)值進(jìn)行評價，編號12的處理方式均為最佳，即黃連超微粉碎最佳工藝為：選擇黃連細(xì)粉350g置于超微粉碎機(jī)中粉碎12min使得黃連微粉平均粒徑在20μm—25μm，工作溫度為—5℃。黃連超微粉碎—響應(yīng)面分析曲面結(jié)果附后。

二、黃連微粉浸出物及含量測定

選擇上述第12號黃連微粉和過篩的黃連細(xì)粉及粗粉與普通飲片進(jìn)行浸出物與含量測定，詳細(xì)如下：

2.1浸出物測定

照《中國藥典》2015年版醇溶性浸出物測定法（通則2201）項下的熱浸法測定，用稀乙醇作溶劑。另外，由于實際生產(chǎn)中提取黃連黃連素多采用熱水，因此按照《中國藥典》2015年版水溶性浸出物測定法（通則2201）項下的熱浸法測定，用水作溶劑進(jìn)行了浸出物測定。結(jié)果見表2。

試驗結(jié)果表明，隨著物料的粉碎粒度變小，超微粉碎后的黃連，其水溶性和醇溶性浸出物含量均明顯高于飲片、粗粉和細(xì)粉，提示超微粉碎有利于黃連中物質(zhì)的溶出。

2.2含量測定

照《中國藥典》2015年版高效液相色譜法（通則0512）測定。

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（50:50）（每100ml中加十二烷基硫酸鈉0.4g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）為流動相；檢測波長為345nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于5000。

對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含90.5μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取試驗樣品約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇—鹽酸（100:1）的混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液共10μl，注入液相色譜儀，測定，以鹽酸小檗堿對照品的峰面積為對照，分別計算小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀的含量，用待測成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對保留時間確定。

表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿的峰位，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5%范圍之內(nèi)，即得。相對保留時間如表3：

含量測定結(jié)果見表4。

表4 含量測定結(jié)果（n=2）

試驗結(jié)果表明，隨著物料的粉碎粒度變小，超微粉碎后的黃連，其小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿含量均明顯高于飲片、粗粉和細(xì)粉，相比黃連飲片，黃連微粉小檗堿含量高21.7%，黃連堿、巴馬汀、表小檗堿總含量高35.8%，提示超微粉碎對于提取黃連中有效成分效果顯著，可明顯節(jié)約原藥材，提高利用率從而保護(hù)環(huán)境。

本發(fā)明的優(yōu)點如下：

與本發(fā)明對比，重壓研磨式超微粉碎機(jī)的功率為9kw至13kw，是本發(fā)明所用翻轉(zhuǎn)式超微粉碎機(jī)（1kw）的9—13倍；維持溫度在—10℃～—20℃，是本發(fā)明（—5℃）所需能源的2倍；粉碎時間20～40分鐘所需能源是本發(fā)明（9分鐘）的2—4倍；且使用干冰一方面會明顯提升原材料購買與儲存成本，另外干冰用于物料的粉碎中很容易發(fā)生升華爆炸事故，存在安全隱患；中藥材作為多成分多靶點起效的傳統(tǒng)藥物，使用液體分散介質(zhì)是否會對原藥材化學(xué)性質(zhì)產(chǎn)生影響亦沒有進(jìn)行論證。由于本發(fā)明主要用于保證原藥材性質(zhì)不變的基礎(chǔ)上提高黃連的提取率，只需破損黃連細(xì)胞壁（高等植物細(xì)胞直徑約30—100μm）即可，并不是越細(xì)越好，粒徑在20μm—25μm即可提高提取率20%，與該發(fā)明專利的0.1—0.8μm顆粒提取率無明顯區(qū)別。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)對比，可在顯著節(jié)約能源（四十分之一）并保證不改變藥材性質(zhì)的同時提高提取率20%，減少對野生資源的無序采伐，操作程序簡單，無安全隱患。

附圖說明：

圖1為粒徑、粉碎時間、投樣量曲面圖。

圖2為粒徑、粉碎時間、過篩粒徑曲面圖。

圖3粒徑、投樣量曲面圖。

圖4鹽酸小檗堿對照品HPLC色譜圖。

圖5黃連飲片HPLC色譜圖。

圖6黃連粗粉HPLC色譜圖。

圖7黃連細(xì)粉HPLC色譜圖。

圖8黃連超微粉HPLC色譜圖.

具體實施方式：

超微粉碎法制備黃連微粉的工藝，該方法采用低溫干法超微粉碎法制備，具體包括下列步驟:

（1）原料處理：將檢驗合格的黃連藥材分級，洗滌后曬干，將曬干后的黃連原料投入切片機(jī)中進(jìn)行切片，厚度1.5mm；

（2）粉碎：在D級潔凈區(qū)將經(jīng)過步驟（1）處理后的黃連薄片在普通多功能粉碎機(jī)中粉碎，過二號篩，得到粗粉，

（3）篩分：將粗粉用藥典篩進(jìn)行篩分，過五號篩，得到細(xì)粉，顆粒直徑為0.15mm，

（4）超微粉碎：將得到的黃連細(xì)粉置于超微粉碎機(jī)中，占料盒的2/3，—5℃粉碎12min，平均粒徑在20μm—25μm，即得黃連微粉。

步驟（4）設(shè)置投黃連細(xì)粉350g粉碎時間12min，樣品粒徑（符合《中國藥典》2015年版規(guī)定）細(xì)粉（用數(shù)字“6”代替）響應(yīng)值為超微粉碎粒徑，經(jīng)中科院成都分析檢測中心檢測15組送樣黃連微粉，得到相應(yīng)粒徑檢測報告，粒度分析報告采用d（0.5）和d（0.9）作為響應(yīng)值。分組條件及響應(yīng)值結(jié)果見表1編號12。