本發(fā)明屬于口服乳劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙嘧達(dá)莫口服乳劑給藥系統(tǒng)及其制備方法。
背景技術(shù)：
雙嘧達(dá)莫又名潘生丁，作為一種較強(qiáng)的擴(kuò)冠脈藥物用于急、慢性冠脈功能不全、心絞痛,具有抗血栓形成作用，可抑制血小扳聚集，高濃度可抑制血小板釋放，雙嘧達(dá)莫對(duì)冠狀血管有較強(qiáng)的擴(kuò)張作用，可顯著增加冠脈流量，增加心肌供血量。長(zhǎng)期以來(lái)在臨床上成功用于防治心絞痛，預(yù)防心肌梗死復(fù)發(fā)及血栓形成等。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，雙嘧達(dá)莫有廣譜抗病毒活性，能抑制病毒特異性增殖過(guò)程，還能誘生干擾素增強(qiáng)機(jī)體對(duì)病毒的免疫功能，臨床應(yīng)用廣泛，尤其在兒科應(yīng)用普遍。對(duì)小RNA病毒、正粘液病毒和某些DNA病毒有抑制作用。目前臨床還用于嬰幼兒病毒性腹瀉、小兒病毒性急性上呼吸道感染、小兒手足口病、水痘、小兒皰疹性咽峽炎、流行性腮腺炎、乙型肝炎、流行性乙型腦炎、慢性腎功能衰竭、以及過(guò)敏性疾病、兒童哮喘、新生兒硬腫癥等疾病。
在治療小兒秋季腹瀉方面：雙嘧達(dá)莫抑制二氧嘧啶核苷通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入FL細(xì)胞，同時(shí)可以選擇性抑制病毒RNA的合成，而不會(huì)影響宿主正常的細(xì)胞內(nèi)RNA的合成。雙嘧達(dá)莫還可影響體內(nèi)前列腺素的代謝，減慢腸道活動(dòng)，使其分泌減少，進(jìn)而增加腸道對(duì)水和電解質(zhì)的吸收，恢復(fù)腸道功能。
在治療小兒病毒性上呼吸道感染方面：雙嘧達(dá)莫具有廣譜抗病毒活性，能完全抑制病毒特異的增殖過(guò)程。其機(jī)制是阻止二氧嘧啶核苷、腺苷、脫氧胞嘧啶核苷等進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而選擇性地抑制病毒RNA的合成，而治療量的雙嘧達(dá)莫對(duì)宿主的RNA合成無(wú)影響。雙嘧達(dá)莫還能誘生干擾素，增加機(jī)體對(duì)病毒的免疫功能。同時(shí)研究證明雙嘧達(dá)莫可抑制血小板、上皮細(xì)胞和紅細(xì)胞攝取腺苷，治療濃度時(shí)該抑制作用成依賴性，局部腺苷濃度增高使cAMP增多，同時(shí)雙嘧達(dá)莫可抑制各種組織中的磷酸二酯酶(PDF)，治療濃度抑制環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷二酯酶(cGMP-PDE)，對(duì)cAMP-PDE的抑制作用弱，因而強(qiáng)化內(nèi)皮舒張因子(EDRF)引起的cGMP的濃度增高。而cAMP既可穩(wěn)定細(xì)胞膜，抑制過(guò)敏性遞質(zhì)的釋放和減輕支氣管黏膜的充血水腫，又具有擴(kuò)張平滑肌的作用。同時(shí)雙嘧達(dá)莫能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等血管，降低血液黏稠度，從而對(duì)改善微循環(huán)、減輕肺水腫有一定作用，且安全范圍較大。
由于雙嘧達(dá)莫親脂性強(qiáng)，溶出度差，口服生物利用度僅為50％左右。鑒于以上原因?qū)е律锢枚鹊偷娜秉c(diǎn)，有必要采用制劑學(xué)手段以提高其生物利用度。而且目前國(guó)內(nèi)己上市的產(chǎn)品只有片劑，分散片，緩釋膠囊，注射劑。鑒于雙嘧達(dá)莫在小兒相關(guān)疾病的應(yīng)用日漸增多，且以上劑型均不適合兒童使用，開(kāi)發(fā)一款適合于兒童使用的劑型，提高兒童服藥順應(yīng)性，改善口感，提高生物利用度成為現(xiàn)在迫切需要解決的問(wèn)題。
將雙嘧達(dá)莫制作成口服乳制劑，具有其他劑型所無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)。首先液體劑型方便兒童服用，不會(huì)出現(xiàn)吞咽困難，無(wú)需用水送服，改善病人患者對(duì)服用藥物的恐懼心理，使病人患者(尤其兒童)從心理上樂(lè)于接受，病人患者(尤其兒童)服藥依從性好?？诜橹苿┛筛纳扑幤啡艹龆?，促進(jìn)藥物吸收，提高生物利用度，經(jīng)高壓勻質(zhì)后乳劑劑的粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好。本發(fā)明藥物包裝為單劑量，且劑量根據(jù)兒童用量，制備兒童最小單次劑量包裝，使服藥劑量準(zhǔn)確，避免過(guò)量或劑量人為分割不準(zhǔn)確而引起的兒童用藥安全隱患。
現(xiàn)有專利比如中國(guó)專利CN201010105210.9公開(kāi)了雙嘧達(dá)莫自乳化給藥系統(tǒng)及其制備方法，該專利的目的是改善雙嘧達(dá)莫的溶出度；口服后能顯著促進(jìn)藥物吸收，提高生物利用度，減小個(gè)體差異；其制得的雙嘧達(dá)莫自乳化給藥系統(tǒng)，加水后經(jīng)輕微攪拌或口服給藥后在體內(nèi)通過(guò)胃腸道蠕動(dòng)能自發(fā)形成乳滴粒徑為10～500nm的乳液。但是眾所周知乳劑在輕微攪拌或胃腸道蠕動(dòng)下，很難形成穩(wěn)定的乳狀液體，且粒徑大，乳劑的穩(wěn)定性至今仍是工藝上面臨解決的問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種雙嘧達(dá)莫口服乳劑給藥系統(tǒng)及其制備方法。
本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：
本發(fā)明提供了一種雙嘧達(dá)莫乳劑，所述雙嘧達(dá)莫乳劑包括如下重量份數(shù)的成分：雙嘧達(dá)莫1～2.5份、乳化劑5～75份、助乳化劑0.1～15份、油25～150份以及水250～500份；
所述油包括大豆油、芝麻油、蓖麻油、茶油、花生油、玉米油、橄欖油、油酸乙酯、油酸丁酯、長(zhǎng)鏈甘油三酯以及中鏈甘油三酯中的至少一種；
所述乳化劑包括吐溫類、司盤類、泊洛沙姆類、大豆磷脂、卵磷脂、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類、絲氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、腦磷脂、氫化磷脂以及蔗糖脂肪酸酯類中的至少一種；
所述助乳化劑包括油酸鈉、油酸、黃原膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、甘油、丙二醇、海藻酸鈉、瓊脂、瓜爾豆膠、果膠、單硬脂酸甘油脂、硬脂酸、聚乙二醇、月桂酸單甘油酯、聚甘油脂以及聚維酮中的至少一種。
上述配比經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可顯著提高雙嘧達(dá)莫乳劑的均一性和穩(wěn)定性，在保證藥效的同時(shí)使其更易于服用和儲(chǔ)存。
進(jìn)一步地，所述乳化劑為重量份數(shù)比為3～5:1～4:1的大豆磷脂、泊洛沙姆以及絲氨酸磷脂。
使用上述乳化劑組合，可以顯著改善雙嘧達(dá)莫乳劑的質(zhì)地，提高乳劑的均勻性和穩(wěn)定性，使乳劑質(zhì)地均勻、不易分層。
進(jìn)一步地，所述助乳化劑為重量份數(shù)比為2～3:1～2:1的海藻酸鈉、油酸鈉以及月桂酸單甘油酯。
使用上述助乳化劑組合，可以調(diào)節(jié)乳化劑的HLB值，提升乳化劑的乳化作用，形成的乳滴更小，使乳劑更加穩(wěn)定、均勻。
進(jìn)一步地，所述雙嘧達(dá)莫乳劑還包括重量份數(shù)為0.5～1份的甜味劑、1～2份的芳香劑以及0.25～0.5份的防腐劑。
進(jìn)一步地，所述甜味劑包括蔗糖、木糖醇、葡萄糖、甜菊糖苷、阿斯巴甜以及果糖中的至少一種。
進(jìn)一步地，所述芳香劑包括橘子香精、菠蘿香精、草莓香精、蘋果香精、香蕉香精、檸檬香精、櫻桃香精、牛奶香精以及巧克力香精中的至少一種。
甜味劑和芳香劑可以提升乳劑的口感，掩蓋不良味道，更利于使用者特別是兒童服用。
進(jìn)一步地，所述防腐劑包括對(duì)羥苯甲酸甲酯、對(duì)羥苯甲酸乙酯、羥苯甲酸丙酯、山梨酸、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、雙乙酸鈉、丙酸鈣、乳酸鈉、氯化膽堿以及納他霉素中的至少一種。
進(jìn)一步地，所述防腐劑為重量份數(shù)比為2～3:1～2:1的丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素。
使用上述防腐劑組合，可以有效抑制乳劑中有害微生物的滋生，提高乳劑的穩(wěn)定性、延長(zhǎng)保存期限。
本發(fā)明另一方面提供了一種制備上述所述的雙嘧達(dá)莫乳劑的方法，包括如下步驟：
(1)油相的制備：向所述油中加入雙嘧達(dá)莫、2/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0-80℃，制得油相；
(2)水相的制備：向1/2重量份數(shù)的水中加入1/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0-80℃，制得水相；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在4000～12000r/min的條件下攪拌1～5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入1/2重量份數(shù)的水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，在50～100Mpa的條件下均質(zhì)5～10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，或采用巴氏滅菌法進(jìn)行滅菌，得到成品乳劑。
進(jìn)一步地，所述方法包括如下步驟：
(1)油相的制備：向所述油中加入雙嘧達(dá)莫、2/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0-80℃，制得油相；
(2)水相的制備：向1/2重量份數(shù)的水中加入1/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，再加入所述甜味劑或所述芳香劑，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0-80℃，制得水相；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在4000～12000r/min的條件下攪拌1～5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入1/2重量份數(shù)的水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，加入所述防腐劑，在50～100Mpa的條件下均質(zhì)5～10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，或采用巴氏滅菌法進(jìn)行滅菌，得到成品乳劑。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供的雙嘧達(dá)莫乳劑質(zhì)地均勻、穩(wěn)定性好，藥品溶出度提高、易于被人體吸收、生物利用率高。經(jīng)高壓勻質(zhì)后乳劑的粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好。顯著改善了雙嘧達(dá)莫的溶出度，提高口服生物利用度，經(jīng)過(guò)初乳的高剪切-高壓勻質(zhì)后，乳劑粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好，使藥物口感順滑，液體劑型更易吞咽，無(wú)需沖泡使用方便，減小胃腸道不良反應(yīng)，提高患者服藥順應(yīng)性；乳劑中還可加入甜味劑、芳香劑等矯味劑，可有效掩蓋藥物不良味道，多種口味也為兒童提供了多種選擇。安全性高，服藥簡(jiǎn)單方便。采用充氮灌裝，105℃滅菌30min或采用巴氏滅菌生產(chǎn)工藝，可以少加或不加防腐劑，得到成品乳劑品質(zhì)更高，進(jìn)一步增加了兒童用藥的安全性。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
實(shí)施例2
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
實(shí)施例3
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向茶油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向125份水中加入油酸鈉和海藻酸鈉，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在4000r/min的條件下攪拌5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入125份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，在50Mpa的條件下均質(zhì)10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實(shí)施例4
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向橄欖油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向125份水中加入油酸鈉和海藻酸鈉，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在12000r/min的條件下攪拌1min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入125份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，在100Mpa的條件下均質(zhì)5次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進(jìn)行滅菌，得到成品乳劑。
實(shí)施例5
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向大豆油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、蔗糖以及鮮奶香精，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在10000r/min的條件下攪拌3min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在80Mpa的條件下均質(zhì)8次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實(shí)施例6
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向茶油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、阿斯巴甜和巧克力香精，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在4000r/min的條件下攪拌5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在50Mpa的條件下均質(zhì)10次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進(jìn)行滅菌，得到成品乳劑。
實(shí)施例7
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向橄欖油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、甜菊糖苷以及檸檬香精，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在12000r/min的條件下攪拌1min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入水補(bǔ)至250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在100Mpa的條件下均質(zhì)5次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實(shí)施例8
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向蓖麻油中加入雙嘧達(dá)莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、木糖醇以及菠蘿香精，充分?jǐn)嚢韬笾糜谒≈泻銣刂?0℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機(jī)中，在8000r/min的條件下攪拌3min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機(jī)進(jìn)料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在70Mpa的條件下均質(zhì)8次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進(jìn)行滅菌，得到成品乳劑。
對(duì)照例1
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例1。
對(duì)照例2
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例1。
對(duì)照例3
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例1。
對(duì)照例4
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例5。
對(duì)照例5
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例5。
對(duì)照例6
一種雙嘧達(dá)莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達(dá)莫乳劑的制備方法同實(shí)施例5。
實(shí)驗(yàn)例1
物理穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
以實(shí)施例1～4中提供的乳劑作為實(shí)驗(yàn)組1～4，以對(duì)照例1～3中提供的乳劑作為對(duì)照組1～3，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：
(1)極端溫度貯存實(shí)驗(yàn)
在60℃下敞口放置15天，分別于第5天、第10天和第15天取樣，比較各組乳劑的穩(wěn)定性。首先將各組乳劑置于潔凈的透明容器中，肉眼觀察、比較各組乳劑的性狀；然后取各組乳劑置于15ml尖底離心管中，以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，比較各組乳劑的性狀。
通過(guò)肉眼觀察，各組乳劑均為乳白色液體、帶有微黃顏色，流動(dòng)性好、無(wú)分層，無(wú)粘壁性、也無(wú)漂油，表明各組乳劑均質(zhì)地均一、質(zhì)感良好；經(jīng)過(guò)離心，各實(shí)驗(yàn)例中乳劑的顏色和氣味均無(wú)明顯變化，也未出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的不均勻、分層等現(xiàn)象；各對(duì)照例中乳劑在前10天無(wú)明顯變化，但在第15天時(shí)出現(xiàn)不同程度的顏色變深、油相水相分層等現(xiàn)象。這表明各實(shí)驗(yàn)例中乳劑較各對(duì)照例中乳劑穩(wěn)定性更好、貨架壽命更長(zhǎng)，能夠耐受較高的溫度。
(2)強(qiáng)光照射試驗(yàn)
將乳劑放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，于照度為4500lx±500lx的條件下放置15天，分別于第5天、第10天和第15天取樣，按照實(shí)驗(yàn)例1中所述的肉眼觀察和離心方法比較各組乳劑的穩(wěn)定性。
通過(guò)比較，各實(shí)驗(yàn)例中乳劑的顏色和氣味均無(wú)明顯變化，也未出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的不均勻、分層等現(xiàn)象；各對(duì)照例中乳劑在前10天無(wú)明顯變化，但在第15天時(shí)出現(xiàn)顏色變深、油相水相分層等現(xiàn)象。這表明各實(shí)驗(yàn)例中乳劑較各對(duì)照例中乳劑穩(wěn)定性更好、貨架壽命更長(zhǎng)，能夠耐受較長(zhǎng)時(shí)間的光照。由此可知，大豆磷脂+泊洛沙姆+絲氨酸磷脂的乳化劑組合加上海藻酸鈉+油酸鈉+月桂酸單甘油酯的助乳化劑組合共同使用時(shí)，乳劑的穩(wěn)定性優(yōu)于使用其中個(gè)別幾種或其他種類乳化劑和助乳化劑時(shí)的乳劑穩(wěn)定性。
實(shí)驗(yàn)例2
微生物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
以實(shí)施例5～8中提供的乳劑作為實(shí)驗(yàn)組1～4，以對(duì)照例4～6中提供的乳劑作為對(duì)照組1～3，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：
(1)菌液制備
a.將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種于5ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液的試管中，37℃培養(yǎng)18～24h。
b.將白色念珠菌和黑曲霉菌分別接種于10ml薩布羅氏培養(yǎng)液中，置于20～25℃下培養(yǎng)，白色念珠菌培養(yǎng)48小時(shí)，黑曲霉菌培養(yǎng)7d。
c.用0.1％蛋白胨水稀釋菌液，使其每毫升含菌量為1*108個(gè)，并立即使用。
(2)測(cè)定方法
A.以實(shí)施例6～8做為實(shí)驗(yàn)組1～3，以對(duì)照例3～4作為對(duì)照組1～2，取10ml各組乳劑樣品于滅菌錐形瓶中，每組樣品做三組平行，另取0.1％滅菌蛋白胨水10ml一份作空白對(duì)照。以上各菌液各取1ml分別加入上述供試品和對(duì)照管中，使其各菌數(shù)控制在106～107之間，搖勻置于20～25℃避光貯存，分別于第0h、24h、48h、7d、14d取樣測(cè)定細(xì)菌和霉菌的存活數(shù)。
b.取上述接種的供試液和對(duì)照液各1ml，用0.1％的蛋白胨水按1:10稀釋至適宜含菌數(shù)，然后取適宜濃度的供試液和對(duì)照液1ml于平皿中，每組3個(gè)平皿，再注入培養(yǎng)基，分別在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在30～37℃下培養(yǎng)48h后計(jì)算菌落數(shù)。霉菌用薩布羅氏瓊脂培養(yǎng)基，白色念球菌在20～25℃下培養(yǎng)72h、黑曲霉在20～25℃下培養(yǎng)5d后計(jì)算菌落數(shù)。
表3各組乳劑菌數(shù)變化情況
由表1可知，實(shí)驗(yàn)組1～4在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌和真菌的菌體個(gè)數(shù)均出現(xiàn)顯著降低，并且在培養(yǎng)48h以后菌體個(gè)數(shù)適中保持在0.01*103以下，表明實(shí)驗(yàn)組各組對(duì)細(xì)菌和真菌均具有良好的抑制能力。對(duì)照組1～3組在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌和真菌的菌體個(gè)數(shù)也出現(xiàn)明顯降低，但對(duì)照組各組的降低幅度顯著小于實(shí)驗(yàn)組各組，并且在培養(yǎng)至14天時(shí)，對(duì)照組各組真菌的菌體個(gè)數(shù)又出現(xiàn)上升趨勢(shì)，表明對(duì)照組各組也具有一定的抑菌性能，但其抑菌能力顯著低于實(shí)驗(yàn)組各組。由此可知，丙酸鈣+氯化膽堿+納他霉素的防腐劑組合，其抑菌能力顯著高于使用其中個(gè)別幾種防腐劑或其他防腐劑時(shí)的抑菌能力。
實(shí)驗(yàn)例3
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
1.實(shí)驗(yàn)材料
藥品：利巴韋林片，由馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)150401；
樣品：實(shí)施例1制得的雙嘧達(dá)莫口服乳；
甲型流感病毒A/PR8/34，由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所提供。
2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
昆明種小鼠30只，每只體重20±2g，由哈爾濱腫瘤醫(yī)院動(dòng)物室提供。
3.實(shí)驗(yàn)方法
(1)將30只小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只；
(2)用乙醚將小鼠輕度麻醉，陰性對(duì)照組小鼠以生理鹽水滴鼻，每鼠30μL；陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分別以4倍LD50(半數(shù)致死量，LD50＝10-471)的甲型流感病毒(A/PR8/34)液滴鼻感染，每鼠30μL，感染量為1倍LD50；
(3)滴鼻感染半小時(shí)后，用生理鹽水0.2ml對(duì)陰性對(duì)照組小鼠進(jìn)行灌胃，用利巴韋林溶液對(duì)陽(yáng)性對(duì)照組小鼠進(jìn)行灌胃(將利巴韋林片研碎后加生理鹽水混合，使利巴韋林濃度為10mg/kg)，用4mg/kg的雙嘧達(dá)莫乳劑對(duì)給藥組小鼠進(jìn)行灌胃，每天灌胃一次，連續(xù)7天。
(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀測(cè)記錄
A.對(duì)各組小鼠的生長(zhǎng)情況及行為變化進(jìn)行常規(guī)觀察；
B.計(jì)算肺指數(shù)：最后一次給藥后.以脫頸椎法處死各組小鼠，摘取小鼠完整肺組織，用潔凈紗布吸干水分，稱重后按照如下公式計(jì)算各組小鼠的肺指數(shù)：
肺指數(shù)＝肺全重(g)/體重(g)x10
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
(1)各組小鼠生長(zhǎng)情況及行為變化常規(guī)觀察
陰性對(duì)照組小鼠感染病毒后2天內(nèi)未出現(xiàn)明顯異常癥狀.第3天開(kāi)始出現(xiàn)呼吸急促，行動(dòng)遲緩，毛發(fā)無(wú)光澤，飲食減少、消瘦等表現(xiàn)，第4日開(kāi)始出現(xiàn)死亡.7天內(nèi)共死亡4只；給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠未出現(xiàn)明顯的病態(tài)癥狀，亦無(wú)小鼠死亡。飲食正常，毛色稍欠光澤。體重增長(zhǎng)緩慢。
(2)觀察肺指數(shù)
*表示P<0.05，即有顯著性差異。
與陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組均能降低上呼吸道感染小鼠肺指數(shù).與陰性對(duì)照組組比較具有顯著性差異(P<0.05)。表明雙嘧達(dá)莫口服乳劑能有效抑制甲型流感病毒引起的小鼠上呼吸道感染。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。