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      FPTHQ在制備治療卵巢癌的藥物中的應(yīng)用的制作方法

      文檔序號(hào):11090655閱讀:438來源:國(guó)知局
      FPTHQ在制備治療卵巢癌的藥物中的應(yīng)用的制造方法與工藝

      本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及化合物FPTHQ(4-(4-fluorophenyl)-2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroquinoline,4-(4-氟苯基)-2-苯基-5,6,7,8-四氫喹啉,簡(jiǎn)稱FPTHQ)在制備治療卵巢癌的藥物中的應(yīng)用。



      背景技術(shù):

      卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一,是僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌列居第三位的惡性疾病。卵巢癌主要分為上皮性、粘液型、子宮內(nèi)膜型、透明細(xì)胞型和未分化型卵巢癌。其中上皮性腫瘤占原發(fā)性卵巢腫瘤的70%左右,其惡性類型占卵巢惡性腫瘤的85%-90%。由于卵巢癌病灶深居盆骨,早期臨床癥狀極不明顯,很難被發(fā)現(xiàn),患者往往一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就已經(jīng)屬于晚期,這極大的威脅著婦女的生命。目前,治療卵巢癌的藥物主要有紫杉醇、鉑類、貝伐單抗、曲貝替定等,這些藥物的單獨(dú)用藥和聯(lián)合用藥并沒有有效的改善患者的生存期和總生存期,同時(shí)具有較強(qiáng)的副作用。目前的標(biāo)準(zhǔn)治療方案為手術(shù)配以化療,這種治療方案對(duì)早期患者比較受益,但對(duì)于晚期患者而言,并沒有多大的幫助盡管很多病人都對(duì)手術(shù)和由鉑劑及紫杉醇組成的標(biāo)準(zhǔn)化療有響應(yīng),但大多數(shù)病人都會(huì)經(jīng)歷復(fù)發(fā)并最終對(duì)多種化療試劑產(chǎn)生抗性而無(wú)藥可治。到目前為止卵巢癌仍缺乏有效的治療方法和手段。

      細(xì)胞衰老是一個(gè)不可逆的細(xì)胞周期停滯的生理過程,在抑制腫瘤進(jìn)程以及治療腫瘤方面具有重要作用。正常細(xì)胞在某種致瘤因素的刺激下,失去自身生長(zhǎng)的限制,從而具有無(wú)限增殖的能力而喪失了衰老的功能,形成腫瘤。因此,通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞衰老來穩(wěn)定的抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng),也許能夠作為一種治療腫瘤的方式。傳統(tǒng)腫瘤的治療方式如放療、化療等,主要是通過使腫瘤細(xì)胞死亡而實(shí)現(xiàn)治療目標(biāo),其優(yōu)勢(shì)在于具有較好的近期療效,即腫瘤包塊的迅速縮小,但由于轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)等不良情況的發(fā)生,使得傳統(tǒng)腫瘤治療模式的療效并不盡如人意。與此相應(yīng),衰老的腫瘤細(xì)胞并不立即死亡,甚至可以在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)仍具有存活力,但卻失去了增殖與轉(zhuǎn)移的能力,這樣的特性使得以細(xì)胞衰老為靶標(biāo)的治療在縮小腫瘤方面的作用并不是很強(qiáng),但卻可以帶瘤生存的方式顯著延長(zhǎng)腫瘤患者的生存時(shí)間,而且不良反應(yīng)沒有傳統(tǒng)化療與放療那么大。因此,恢復(fù)腫瘤細(xì)胞的衰老通路,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的衰老是一個(gè)很有研究前景的新的腫瘤終極治療靶標(biāo),尋找能夠特異性誘導(dǎo)癌細(xì)胞衰老的藥物來治療癌癥也是眾多研究者努力的方向。

      本發(fā)明所涉及的化合物FPTHQ是一種吡啶類衍生物,已于2016年報(bào)道于Tetrahedron雜志上。吡啶類衍生物的研究應(yīng)用范圍十分廣泛,主要運(yùn)用于醫(yī)藥、農(nóng)藥、飼料、染料等領(lǐng)域,其中在醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用十分重要,如結(jié)核病藥異煙肼,中樞興奮藥尼可剎米等。本發(fā)明所涉及的化合物FPTHQ為白色固體,熔點(diǎn)為131-132 ℃,呈弱堿性。本發(fā)明所述化合物FPTHQ在抗卵巢癌活性方面的相關(guān)生物學(xué)效應(yīng)研究,在國(guó)內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道。經(jīng)研究表明,F(xiàn)PTHQ能夠顯著的抑制卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和SKOV3的生長(zhǎng)。細(xì)胞周期檢測(cè)的結(jié)果表明,F(xiàn)PTHQ能夠影響卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞周期,使其阻滯在G1期,發(fā)生細(xì)胞周期停滯。衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色結(jié)果表明,F(xiàn)PTHQ處理后的細(xì)胞β-半乳糖苷酶的活性明顯增強(qiáng),而正常的人成纖維細(xì)胞無(wú)明顯變化。這些數(shù)據(jù)表明,F(xiàn)PTHQ能夠特異性的誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞衰老,而對(duì)正常的人成纖維細(xì)胞沒有作用。因此,本發(fā)明涉及的吡啶衍生物在抗卵巢癌活性方面具有非常大的作用,并且在今后卵巢癌的治療方面具有很大的潛在價(jià)值。



      技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

      本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷,為更好的治愈或?yàn)橹委熉殉舶┨峁┮环N可行的選擇,本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量創(chuàng)造性的勞動(dòng),篩選出一種化合物FPTHQ,在抗卵巢癌活性方面具有很好的抑制作用,進(jìn)而為治療卵巢癌或誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞的凋亡提供了新的療法或手段。

      本發(fā)明首先提供一種吡啶類衍生物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用,其中所述的吡啶類衍生物為4-(4-fluorophenyl)-2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroquinoline,4-(4-氟苯基)-2-苯基-5,6,7,8-四氫喹啉,簡(jiǎn)稱FPTHQ,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:

      其中,上面所述的癌癥為卵巢癌;

      所述應(yīng)用為抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)或促進(jìn)癌細(xì)胞衰老;具體的,所述的應(yīng)用為阻滯癌細(xì)胞周期。

      本發(fā)明還提供一種治療癌癥的藥物,所述藥物中的有效成分為吡啶類衍生物為4-(4-fluorophenyl)-2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroquinoline,4-(4-氟苯基)-2-苯基-5,6,7,8-四氫喹啉,簡(jiǎn)稱FPTHQ。

      其中所述的藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體或輔料,所述載體和/或輔料為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉,在此不做贅述。

      所述的藥物為抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)或促進(jìn)癌細(xì)胞衰老的藥物;具體的,所述的藥物為阻滯癌細(xì)胞周期的藥物。

      本發(fā)明通過對(duì)一類已報(bào)道的吡啶類化合物進(jìn)行生物學(xué)活性篩選,篩選出候選化合物,并研究其在抗卵巢癌活性方面的相關(guān)作用,實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞為卵巢癌SKOV3、A2780細(xì)胞和人正常成纖維IMR90細(xì)胞。通過篩選,得到化合物FPTHQ。進(jìn)一步通過檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞周期以及衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶活性來測(cè)定其誘導(dǎo)衰老的能力,從而確定該化合物在抗卵巢癌方面活性非常顯著。

      結(jié)果表明:細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該化合物對(duì)卵巢癌細(xì)胞A2780和SKOV3的生長(zhǎng)抑制,這種作用呈濃度依賴性;細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果表明,該化合物可使大量細(xì)胞停留在G1期,使其細(xì)胞周期停滯。體外SA-β-gal染色實(shí)驗(yàn)證實(shí)該化合物能夠誘導(dǎo)卵巢癌A2780和SKOV3細(xì)胞衰老,但在同等實(shí)驗(yàn)條件下,不能誘導(dǎo)正常人成纖維IMR90細(xì)胞衰老;以上研究得出化合物FPTHQ具有明顯的誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞衰老的活性,在對(duì)抗卵巢癌的研究和治療方面具有非常大的潛質(zhì),可以進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行治療卵巢癌藥物的制備。

      本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明所涉及的化合物可以選擇性促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的衰老,并且對(duì)正常細(xì)胞影響較小或沒有影響。這相較于傳統(tǒng)的抗卵巢癌藥物所引起的極大的毒副作用,具有十分明顯的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明所涉及的化合物可以對(duì)卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)行阻滯,使細(xì)胞周期S期受阻,細(xì)胞停滯于G1期,從而誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞衰老狀態(tài)。本發(fā)明所涉及的化合物具有明顯抗卵巢癌活性,在制備抗卵巢癌藥物和治療卵巢癌方面有很大的潛力,為今后的研究應(yīng)用提供新的選擇。

      附圖說明

      圖1. 4-FPTHQ的合成示意圖。

      圖2. A2780細(xì)胞增殖曲線圖,圖中**代表p值小于0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖3. SKOV3細(xì)胞增殖曲線圖,圖中**代表p值小于0.01, ***代表p值小于0.001,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖4. 不同作用濃度的FPTHQ處理卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞系A(chǔ)2780 48h后的細(xì)胞周期統(tǒng)計(jì)圖(上圖)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)圖(下圖,作用濃度從左至右依次為0μM、20μM、60μM)。圖中*代表p值小于0.05, **代表p值小于0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖5.不同作用濃度的FPTHQ處理卵巢癌細(xì)胞系SKOV3 48h后的細(xì)胞凋亡統(tǒng)計(jì)圖(上圖)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)圖(下圖,作用濃度從左至右依次為0μM、20μM、60μM)。圖中#代表p值大于0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, *代表p值小于0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖6. A2780細(xì)胞系SA-β-gal染色圖。

      圖7. A2780細(xì)胞系 SA-β-gal染色陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)圖,圖中**代表p值小于0.05, ***代表p值小于0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖8. SKOV3細(xì)胞系 SA-β-gal染色圖,SA-β-gal染色的陽(yáng)性細(xì)胞呈綠色,綠色程度和面積表明細(xì)胞衰老的程度。

      圖9. SKOV3 SA-β-gal染色陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)圖,圖中**代表p值小于0.05, ***代表p值小于0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      圖10. IMR90細(xì)胞系 SA-β-gal染色圖。

      圖11. IMR90細(xì)胞系 SA-β-gal染色陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)圖,圖中#代表p值大于0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, *代表p值小于0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      具體實(shí)施方式

      以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明,下述非限制性實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明。下述實(shí)施例中,如無(wú)特殊說明,所使用的實(shí)驗(yàn)方法均為常規(guī)方法,所用材料、試劑等均可從化學(xué)試劑公司購(gòu)買。

      本發(fā)明所涉及的具體化合物4-FPTHQ的制備方法請(qǐng)參見Chunyin Zhu*, Benwei Bi, Ya Ding, Te Zhang and Qiu-Yun Chen.Iodine-catalyzed aerobic oxidative formal [4+ 2] annulation for the construction of polyfunctionalized pyridines[J]. Tetrahedron, 2015, 71(49): 9251-9257.

      實(shí)施例1. 化合物4-FPTHQ的制備方法

      在10 mL單口燒瓶中,將4-氟查爾酮(0.5mM)溶于甲醇中(1.5mL),再加入環(huán)己酮(0.6mM)、碘(0.1mM)、吡咯烷(0.1mM)和乙酸銨(0.6mM),反應(yīng)在30 ℃條件下,氧氣的氛圍中攪拌,經(jīng)過TLC板監(jiān)測(cè)反應(yīng),8 h反應(yīng)完全,再用乙酸乙酯和水萃取三次,合并有機(jī)相,再用無(wú)水硫酸鈉干燥,過濾,減壓旋轉(zhuǎn)蒸出溶劑,得到混合物,再用硅膠柱層析,得到純的吡啶衍生物FPTHQ。

      實(shí)施例2. 細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代

      卵巢癌A2780、SKOV3細(xì)胞(購(gòu)于American type culture collection)體外分別培養(yǎng)于含10% 胎牛血清,100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM(購(gòu)于Life Technologies公司,美國(guó))培養(yǎng)基和含10% 胎牛血清及100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的RMPI-1640(購(gòu)于Life Technologies公司,美國(guó))培養(yǎng)基中;人成纖維IMR90細(xì)胞(購(gòu)于American type culture collection)培養(yǎng)于含10% 胎牛血清,100U/mL青霉素,100μg/mL鏈霉素的DMEM(購(gòu)于Life Technologies公司,美國(guó))培養(yǎng)基中。每天定期觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),待長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí)及時(shí)傳代(一般在貼壁細(xì)胞表面積占80% 及以上時(shí)傳代)。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)和傳代效果良好時(shí)進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

      實(shí)施例3. 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制

      第一步:在底面直徑為6cm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)卵巢癌A2780、SKOV3細(xì)胞,傳代良好后,棄原培養(yǎng)液,用2 mL PBS清洗,0.5 mL胰酶消化,加2 mL含10%胎牛血清,100U/mL 青霉素及100 μg/mL鏈霉素DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,取200 g溶液離心5 min,棄上清,加含10%胎牛血清,100U/mL 青霉素及100 μg/mL鏈霉素DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,取0.5 mL到EP管,用槍吸取10 μL于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)或稀釋相應(yīng)倍數(shù)后計(jì)數(shù)。每孔種5×104個(gè)細(xì)胞,一共3組孔,每組3個(gè)復(fù)孔,將細(xì)胞種到6孔板中,每孔吹打混勻。放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(Thermo scientific,37℃)靜止培養(yǎng)12h,使其貼壁。

      第二步:將FPTHQ按不同比例稀釋于DMSO(國(guó)際集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)中,將稀釋后的作用濃度為0μM、40μM、60μM或者0μM、60μM 、120μM的FPTHQ溶液加入6孔板中,保持每孔所加體積等量,放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(37℃)靜止培養(yǎng)36h,以不加FPTHQ為對(duì)照組。

      第三步:將6孔板中的細(xì)胞重新消化下來,用血球計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)后,將其全部種回6孔板,重復(fù)第一、二兩步操作3次,繪出不同化合物作用濃度下的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

      如圖2和圖3,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),F(xiàn)PTHQ處理組與對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)的差距明顯增大,說明處理組的細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制,并且隨著FPTHQ濃度的增加,這種趨勢(shì)就越明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FPTHQ能夠有效的抑制卵巢癌細(xì)胞A2780以及SKOV3的生長(zhǎng)。

      實(shí)施例4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期

      第一步:取培養(yǎng)和傳代良好得底面直徑6cm培養(yǎng)皿的卵巢癌A2780和SKOV3細(xì)胞后,棄原培養(yǎng)液,用2 mLPBS清洗,0.5 mL胰酶消化,加2 mL含10% 胎牛血清,100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,200 g離心5 min,棄上清,加含10% 胎牛血清100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,取0.5 mL到EP管,用槍吸取10 μL于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)或稀釋相應(yīng)倍數(shù)后計(jì)數(shù)。取底面直徑6cm的培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿種4×105細(xì)胞,放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(37℃)靜止培養(yǎng)24h,使其貼壁。

      第二步:將FPTHQ按不同比例稀釋于DMSO中,分別加作用濃度為0μM、20μM、60μM的FPTHQ溶液,加到上面所述的培養(yǎng)皿中,放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(37℃)靜止培養(yǎng)48h。

      第三步:將培養(yǎng)48h后的細(xì)胞取出,吸去培養(yǎng)基,分別取2mL的PBS清洗,吸去PBS,加0.5mL胰酶消化,加0.5mL相應(yīng)培養(yǎng)基終止消化,延孔壁吹洗,轉(zhuǎn)至EP管,重復(fù)用0.5mL培養(yǎng)基洗一次,減少細(xì)胞殘余。轉(zhuǎn)至4℃冰盒,并在4℃冷凍離心機(jī)中300g離心5min,吸去上清,刮勻。每管加300μL 4℃預(yù)冷的PBS,混勻,4℃冷凍離心機(jī)中300g離心5min,吸去上清,刮勻。每管加0.5mL-20℃預(yù)冷的70%的乙醇,混勻,放入4℃冰箱保存至少24h。

      第四步:從4℃取出待處理的細(xì)胞,4℃冷凍離心機(jī)中300g離心5min,棄上清,刮勻。每管加300μL4℃預(yù)冷的PBS,混勻,4℃冷凍離心機(jī)中300g離心5min。棄上清,刮勻,每管加500μL PI染色液(485Μlpbs+10μL1mg/mL的PI+5μL1mg/mL的RNASE),吹打4-5次混勻,轉(zhuǎn)至周期檢測(cè)管,避光中37℃水浴鍋中孵育1h。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

      如圖4和圖5所示,相對(duì)于未處理組組,實(shí)驗(yàn)組S期的細(xì)胞比例明顯降低,而G1期的細(xì)胞比例在升高。60μM濃度條件下,A2780細(xì)胞的G1期比例增長(zhǎng)了18.49%。SKOV3細(xì)胞的G1期比例增長(zhǎng)了10.54%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:相比于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞周期明顯受到阻滯,并且細(xì)胞停滯于G1期。

      實(shí)施例5. SA-β-gal檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞衰老

      第一步:取圓形玻片浸泡于95%的乙醇中,點(diǎn)燃酒精燈灼燒玻片,將玻片放入24孔板中,靜置放涼備用。底面直徑6cm培養(yǎng)皿的卵巢癌A2780、SKOV3細(xì)胞和人成纖維IMR90細(xì)胞培養(yǎng)和傳代良好后,棄原培養(yǎng)液,用2 mL PBS清洗,0.5 mL胰酶消化,加2 mL含10% 胎牛血清00U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,200 g離心5 min,棄上清,加含10% 胎牛血清及100U/mL青霉素及100μg/mL鏈霉素的DMEM(或RMPI-1640)培養(yǎng)基吹打混勻,取0.5 ml到EP管,用槍吸取10 μL于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)或稀釋相應(yīng)倍數(shù)后計(jì)數(shù)。A2780、SKOV3和IMR90每孔種4×104個(gè)細(xì)胞,分別將細(xì)胞種到24孔板中,吹打混勻。放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(Thermo scientific,37℃)靜止培養(yǎng)24h,使其貼壁。

      第二步:將FPTHQ按不同比例稀釋于DMSO中,分別加作用濃度為0μM、20μM、60μM、180μM的FPTHQ溶液到24孔板中,保持每孔所加體積等量,放入二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(37℃)靜止培養(yǎng)48h。

      第三步:將培養(yǎng)48h后的細(xì)胞取出,吸去培養(yǎng)基,加入0.5 mL的PBS清洗玻片,輕輕晃動(dòng),吸去PBS,重復(fù)三次。加入0.5mL的固定液(1 mL =54μL甲醛+80μL 2.5%戊二醛+866μL PBS),室溫下固定5min。吸去固定液,再用PBS清洗3次。每孔加入0.5mL染色液(1mL =798μL H2O+30μL 5M NaCl+2μL 1M MgCl+10μL 0.5M K3Fe(CN)6+10μL 0.5M K4Fe(CN)6+100μL 0.4M Na2HPO4+50μL 20mg/mL X-gal),置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育10h左右。取出,蒸餾水洗2遍,棄去。無(wú)水乙醇洗2遍,水洗三遍。取載玻片,滴5μL水于載玻片上,取出玻片,將其倒扣于水上,切勿產(chǎn)生氣泡,用指甲油將四周固封好。待指甲油干掉后,在玻片上加一滴水,用真空泵洗掉。在400倍倒置顯微鏡下拍照。

      如圖6和圖8所示,利用SA-β-gal染色方法來檢測(cè)細(xì)胞衰老的情況。相對(duì)于未處理組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞明顯染成了綠色,而且綠色的程度隨著濃度的增加而增強(qiáng),綠色程度和面積表明細(xì)胞衰老的程度。如圖7和圖9所示,隨著濃度的增加,SA-β-gal陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目越多,說明細(xì)胞衰老程度越高。如圖10和圖11所示,化合物FPTHQ處理,對(duì)人正常成纖維IMR90細(xì)胞則無(wú)明顯作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明化合物FPTHQ可以特異性誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞衰老,而對(duì)正常的人成纖維細(xì)胞沒有作用。

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