本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

引起肝損傷的原因有多個(gè)：1、病毒感染：由多種肝炎病毒引起，具有傳染性強(qiáng)，傳播途徑復(fù)雜，流行面廣泛，發(fā)病率高等特點(diǎn)。2、藥物或化學(xué)毒物：許多藥物和化學(xué)毒物都可引起肝臟損傷，發(fā)生藥物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精對(duì)肝臟的損害是很嚴(yán)重的，損害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代謝產(chǎn)物乙醛的毒性對(duì)肝細(xì)胞直接損害造成的。4、其他原因：原發(fā)和繼發(fā)的肝臟腫瘤、心功能不全導(dǎo)致肝臟淤血、某些先天性肝臟疾病、靜脈高價(jià)營(yíng)養(yǎng)等，都可以造成不同程度的肝損害，這些肝損害的早期表現(xiàn)往往是ALT(轉(zhuǎn)氨酶)或膽紅素的升高，不祛除病因，肝臟的損害會(huì)進(jìn)一步加重。目前在我國(guó)由于上述原因每年發(fā)生肝損傷的人數(shù)眾多，形勢(shì)不容樂(lè)觀。急需研發(fā)高效低毒的防治肝臟損傷藥物。

肝臟損傷的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問(wèn)題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物具有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗肝臟損傷活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗肝臟損傷活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為30％和70％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗肝臟損傷作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Psiguadial A的制備

化合物Psiguadial A(I)的制備方法參照Meng Shao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的方法。

實(shí)施例2 Psiguadial A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(474mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.16g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和12mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌8h。8h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(502mg，73％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ10.44(s,2H),7.24(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.31(s,4H),3.89(s,1H),3.74(s,4H),2.30(s,1H),2.12(s,1H),2.02(s,1H),1.92(s,1H),1.79(s,1H),1.73(s,1H),1.51(d,J＝19.8Hz,3H),0.99(s,3H),0.95(d,J＝4.7Hz,7H),0.85(s,3H),0.53(s,1H),0.43(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.69(s),170.54(s),165.42(s),163.38(s),142.72(s),129.71(s),127.96(s),127.08(s),118.00(s),116.82(s),114.82(s),72.73(s),40.19(s),34.75(s),34.32(s),31.75(s),30.93(s),28.09(s),26.43(s),24.48(s),23.74(s),21.18(s),20.77(s),19.99(s),14.39(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₃₄H₄₁Br₂O₅:689.1300；found 689.1303.

實(shí)施例3 Psiguadial A的O-(哌嗪基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和無(wú)水哌嗪(3446mg，40mmol)，混合物加熱回流4h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集黃色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末(254.8mg,73％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,2H),7.23(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.02(s,4H),3.96(s,1H),2.62(d,J＝8.0Hz,12H),2.31(s,8H),2.10(s,1H),2.01–1.85(m,3H),1.79(s,1H),1.66(s,1H),1.44(s,2H),1.38(s,1H),1.27(s,1H),1.05(s,2H),1.03(d,J＝45.8Hz,3H),0.93–0.70(m,9H),0.52(s,1H),0.23(s,1H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.62(s),170.44(s),165.27(s),163.22(s),142.59(s),129.52(s),127.80(s),126.91(s),117.86(s),116.67(s),114.65(s),69.34(s),54.61(s),54.05(s),45.17(s),40.02(s),34.61(s),34.17(s),30.77(s),27.92(s),26.29(s),24.33(s),23.57(s),21.00(s),20.62(s),19.84(s),14.21(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₂H₅₉N₄O₅:699.4485；found:699.4480。

實(shí)施例4 Psiguadial A的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物(IV)的合成

將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和1H-四氮唑(1401mg，20mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因?yàn)榛プ儺悩?gòu)作用，在反應(yīng)條件下會(huì)生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1，v/v)，收集黃色集中洗脫帶，再將洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，依次收集兩個(gè)淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個(gè)洗脫帶即得到化合物IV的淡黃色固體(89.9mg,27％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,2H),10.40(s,1H),10.26(s,1H),7.24(s,2H),7.21(d,J＝10.0Hz,3H),4.65(s,1H),4.60(s,1H),4.45(d,J＝2.6Hz,5H),4.42(s,1H),4.07(s,1H),2.20(s,1H),1.93–1.84(m,4H),1.72(s,1H),1.60–1.21(m,4H),0.99(s,3H),0.92–0.71(m,9H),0.55(s,1H),0.25(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.53(s),170.35(s),165.18(s),163.13(s),144.94(s),142.48(s),129.45(s),127.69(s),126.84(s),117.75(s),116.60(s),114.54(s),67.03(s),47.04(s),39.95(s),34.52(s),34.10(s),30.66(s),27.85(s),26.18(s),24.26(s),23.46(s),20.93(s),20.51(s),19.77(s),14.10(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₃₆H₄₃N₈O₅:667.3356；found:667.3352。

實(shí)施例5組合物防治肝損傷的作用

(一)組合物對(duì)D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用

組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的30mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的70mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

小鼠分5組。對(duì)照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射生理鹽水(0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測(cè)AST及ALT活力。D-GalN組、組合物3.0mg·kg^-1組、化合物III組和化合物IV組分別以生理鹽水、組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射D-GalN(800mg·kg^-1，0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測(cè)AST及ALT活力。

表1組合物對(duì)D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用

注：¹⁾p<0.01vs對(duì)照組，²⁾p<0.01vs D-GalN組

由表1可知，組合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升?；衔颕II和化合物IV無(wú)此作用。

(二)組合物對(duì)CCl₄誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用

小鼠分5組，對(duì)照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g^-1；CCl₄組及組合物、化合物III和化合物IV給藥組(3.0mg·kg^-1)分別以生理鹽水及組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl₄ 0.1mL·10g^-1。24h后處死動(dòng)物，取血清測(cè)AST及ALT活力。

表2組合物對(duì)CCl₄誘導(dǎo)的急性肝損傷的防護(hù)作用

注：¹⁾p<0.01vs對(duì)照組，²⁾p<0.01vs CCl₄組

由表2可知，組合物能抑制CCl₄引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升?；衔颕II和化合物IV無(wú)此作用。

結(jié)論：組合物能有效保護(hù)D-GalN引起的小鼠肝損傷，組合物能有效保護(hù)CCl₄引起的小鼠肝損傷，可以用來(lái)制備抗肝損傷藥物?；衔颕II和化合物IV不能有效保護(hù)D-GalN引起的小鼠肝損傷，不能有效保護(hù)CCl₄引起的小鼠肝損傷，不可以用來(lái)制備抗肝損傷藥物。

實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。