本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含有貓尾草的中藥組合物的制備方法及其在抑制豬病毒性腹瀉藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
豬的病毒性腹瀉病是一種較常見的豬群疾病，其致病病毒主要有豬流行腹瀉病毒、豬輪狀病毒、豬偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒等，感染其中一種或多種之后，染病豬群多出現(xiàn)水樣腹瀉和嘔吐等癥狀，且發(fā)病急，傳播快，一周齡內(nèi)仔豬出現(xiàn)癥狀后極易在2-7天內(nèi)迅速死亡，死亡率可達(dá)100％。成年豬可在3-7天的腹瀉后逐漸康復(fù)，但可能形成僵豬。豬的病毒性腹瀉是一種世界范圍內(nèi)的流行病，嚴(yán)重危害仔豬、成豬的健康，提高了豬的養(yǎng)殖成本，減少經(jīng)濟(jì)利益，對豬的養(yǎng)殖業(yè)造成較大的影響。
對于豬病毒性腹瀉的防治，目前除了對豬的生活環(huán)境進(jìn)行清潔消毒之外，以疫苗接種為主，提高豬的免疫，預(yù)防疾病的發(fā)生。豬的病毒性腹瀉疫苗分為強(qiáng)度疫苗和滅活疫苗，強(qiáng)毒疫苗是用本場發(fā)病豬的腸內(nèi)容物和糞便混入飼料喂食妊娠母豬，使其產(chǎn)生抗體，從而保護(hù)仔豬，但是該方法沒有消除病毒的存在，極易反復(fù)感染。而滅活疫苗的毒株毒力不穩(wěn)定，有毒力返強(qiáng)或毒力太弱不能形成免疫應(yīng)答等隱患。
除疫苗接種之外，防治豬病毒性腹瀉還可以使用抗生素等藥物來控制因病毒感染而導(dǎo)致的細(xì)菌感染，從而提高豬的成活率，但是抗生素的濫用會(huì)產(chǎn)生對環(huán)境的污染，甚至可能會(huì)篩選出超級細(xì)菌，從而使得疫情的防治變得更加困難，此外如果處理不當(dāng)，殘存在豬肉內(nèi)的抗生素有可能會(huì)對人體產(chǎn)生不利的影響，因此對于豬病毒性腹瀉的防治有潛在的風(fēng)險(xiǎn)。
而中草藥作為純天然來源的藥物，往往具有抗病毒，抗菌等功效，并能增強(qiáng)機(jī)體免疫力，還可以補(bǔ)充一些營養(yǎng)成分，因此既可以作為藥物防治疾病，又可以提升豬的品質(zhì)。因此以中草藥為主要原料來制備豬的病毒性腹瀉藥物擁有極大的前景，并引起了國內(nèi)外畜牧業(yè)的關(guān)注。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用，使得該中藥組合物能以來源充足的中草藥為原料而且能有效防治豬病毒性腹瀉，提高抗病毒效果。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種中藥組合物，由8-15份貓尾草、1-5份黃芪、1-5份甘草和1-5份光萼豬屎豆制成。作為優(yōu)選，由10份貓尾草、3份黃芪、3份甘草、4份光萼豬屎豆制成。
貓尾草，豆科貍尾草屬植物，生于干燥曠野坡地、路旁或灌叢中，含有4’-亞甲基二氧異黃酮，水飛薊賓，染料木素等多種黃酮類物質(zhì)，分布于中國華南、江西、云南及東南亞、澳大利亞等地，性甘，微苦，具有清肺止咳，散瘀止血的功效，主治蛇咬傷。
黃芪，豆科黃芪屬植物，生于林緣，灌叢或疏林下，廣泛分布于全國各地?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，黃芪可增強(qiáng)機(jī)體免疫，且有保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓等功能，并有廣泛的抗菌作用。
甘草，豆科甘草屬植物，是一種常見的中草藥，在我國主要分布在新疆、內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、山西等地的干旱或者半干旱沙土、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。氣微，味甜而特殊。主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。
光萼豬屎豆，豆科野百合屬植物，生于田園路邊及荒山草地，主要分布于中國華南，以及湖南、福建、臺(tái)灣、四川、云南等地。具有清熱解毒，散結(jié)祛瘀的功效，可外用治瘡?fù)?、跌打損傷等。
在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，致病病毒為豬流行性腹瀉病毒。
在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，致病病毒為豬傳染性胃腸炎病毒。
作為優(yōu)選，豬群為仔豬，公豬成豬和母豬成豬。
本發(fā)明所述中藥組合物可采用醇提或水煎的方法來制備，采用醇提法制備時(shí)，按重量份計(jì)，稱取8-15份貓尾草、1-5份黃芪、1-5份甘草和1-5份光萼豬屎豆混合并粉碎，將粉碎得到的混合物用乙醇加熱回流提取后過濾，濾液濃縮后即為中藥組合物，其中，所述混合物和乙醇的質(zhì)量比優(yōu)選為1:3-10，所述乙醇的體積百分?jǐn)?shù)優(yōu)選為40-95％，更優(yōu)選為60％，提取時(shí)間優(yōu)選為30-60min，提取次數(shù)優(yōu)選為2次，濃縮的倍數(shù)優(yōu)選為3倍，原料藥優(yōu)選10份貓尾草、3份黃芪、3份甘草和4份光萼豬屎豆。
在采用水煎法制備時(shí)，按重量份計(jì)，稱取8-15份貓尾草、1-5份黃芪、1-5份甘草和1-5份光萼豬屎豆混合并粉碎，將粉碎得到的混合物用水煎煮提取后過濾，濾液濃縮為浸膏后即為中藥組合物，其中，所述混合物和水的質(zhì)量比優(yōu)選為1:3-10，提取時(shí)間優(yōu)選為30-60min，提取次數(shù)優(yōu)選為2次，原料藥優(yōu)選10份貓尾草、3份黃芪、3份甘草和4份光萼豬屎豆。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明選用貓尾草為原料，并輔以黃芪、甘草和光萼豬屎豆制備成一種新型的、具有抑菌作用的中藥組合物，本發(fā)明所述中藥組合物原料藥不但來源充足，而且抑菌效果優(yōu)于現(xiàn)有產(chǎn)品，可以廣泛應(yīng)用到抗病毒藥劑特別是豬的病毒性腹瀉抗病毒藥劑的制備中。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明公開了一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述產(chǎn)品和方法已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
以下就本發(fā)明所提供的一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用做進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草150g、黃芪10g、甘草10g和光萼豬屎豆10g，粉碎后加入1600ml體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇加熱回流提取2次，每次40min，醇提后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例2：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草100g、黃芪30g、甘草40g和光萼豬屎豆40g，粉碎后加入630ml體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇加熱回流提取2次，每次30min，醇提后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例3：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草80g、黃芪30g、甘草50g和光萼豬屎豆50g，粉碎后加入2100ml體積分?jǐn)?shù)為40％的乙醇加熱回流提取2次，每次1h，醇提后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例4：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草150g，黃芪50g、甘草10g和光萼豬屎豆10g，粉碎，加入1110ml水煎煮2次，每次1h，水煎后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例5：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草120g，黃芪30g、甘草20g和光萼豬屎豆20g，粉碎，加入570ml水煎煮2次，每次1h，水煎后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例6：用本發(fā)明所述制備方法制備中藥組合物
稱取貓尾草100g，黃芪30g、甘草40g和光萼豬屎豆40g，粉碎，加入2100ml水煎煮2次，每次30min，水煎后過濾，濾液濃縮至浸膏即得。
實(shí)施例7：抗病毒活性試驗(yàn)
試驗(yàn)病毒：引起豬病毒性腹瀉的豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒。
試驗(yàn)細(xì)胞：永生化豬小腸上皮細(xì)胞ZYM-SIEC02。
試驗(yàn)分組：試驗(yàn)分為對照組和試驗(yàn)組，對照組施用市售中成藥維迪康；實(shí)驗(yàn)組分別施用實(shí)施例1至6提供的中藥組合物。
永生化豬小腸上皮細(xì)胞系(ZYM-SIEC02)，使用RPMI-1640培養(yǎng)基，配置完畢后加入100mL/L的牛血清并調(diào)節(jié)pH為中性。使用細(xì)胞維持液為不加牛血清的中性RPMI-1640培養(yǎng)基。將細(xì)胞置于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隨后取適量接種于96孔板后培養(yǎng)24h生長為單層，吸棄培養(yǎng)液。取本發(fā)明所述制備方法制備的中藥組合物用細(xì)胞維持液稀釋為200μg/mL并在各孔分別加入50μL，隨即將50μL病毒懸液分別加入相應(yīng)的培養(yǎng)孔。每塊孔板同時(shí)設(shè)陽性藥物對照組(200μg/mL維迪康稀釋液各50μL)。輕搖混勻后置于CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h，隨后在酶標(biāo)儀上測OD值，并計(jì)算半數(shù)細(xì)胞死亡所需濃度(IC50),依此數(shù)值大小表示抗病毒活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示：
表1 抗病毒活性檢測結(jié)果
由表1的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明實(shí)施例1至6提供的中藥組合物對引起豬病毒性腹瀉的豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒有較強(qiáng)的抑制作用，與陽性對照藥物的抗病毒活性相當(dāng)。
實(shí)施例8：中藥組合物在養(yǎng)殖廠仔豬群中的豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)
對養(yǎng)殖廠264頭發(fā)病仔豬隨機(jī)分為8組，每組均在饑餓一頓后按常規(guī)量減半喂食飼料，并按每公斤體重10ml進(jìn)行注射補(bǔ)鹽(補(bǔ)鹽液為0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白對照組不再進(jìn)行任何處理，陽性藥物對照組采用市售的中成藥維迪康，口服量分別為每公斤體重50mg。試驗(yàn)組施用本發(fā)明實(shí)施例1至6提供的中藥組合物，口服量同樣分別為每公斤體重50mg。7天后觀察一次仔豬的健康狀況，如果水樣腹瀉停止，糞便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，則為治愈，上述有一項(xiàng)恢復(fù)者則為有效，如果癥狀沒有緩解甚至死亡，則為無效。試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：
表2 仔豬群中豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)檢測結(jié)果
由表2的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明提供的中藥組合物對養(yǎng)殖廠的仔豬的豬病毒性腹瀉有較好的治療效果，同市售維迪康相比，其治愈率和有效率總和則明顯更高，說明本發(fā)明所提供的中藥組合物在仔豬中的抗病毒效果要優(yōu)于現(xiàn)有產(chǎn)品的效果，可更有效地抑制病毒活性，提高仔豬的生存率，為養(yǎng)豬場提供良好的飼養(yǎng)環(huán)境。
實(shí)施例9：中藥組合物在養(yǎng)殖廠公豬成豬群中的豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)
對養(yǎng)殖廠320頭發(fā)病公豬成豬隨機(jī)分為8組，每組均在饑餓一頓后按常規(guī)量減半喂食飼料，并按每公斤體重10ml進(jìn)行注射補(bǔ)鹽(補(bǔ)鹽液為0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白對照組不再進(jìn)行任何處理，陽性藥物對照組采用市售的中成藥維迪康，口服量分別為每公斤體重50mg。試驗(yàn)組施用土本發(fā)明實(shí)施例1至6提供的中藥組合物，口服量為每公斤體重50mg。7天后觀察一次公豬成豬的健康狀況，如果水樣腹瀉停止，糞便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，則為治愈，上述有一項(xiàng)恢復(fù)者則為有效，如果癥狀沒有緩解甚至死亡，則為無效。試驗(yàn)結(jié)果如表2所示：
表2 公豬成豬群中豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)檢測結(jié)果
由表2的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，空白對照組由于未施藥，公豬成豬治愈率為零；而試驗(yàn)組和陽性對照組在施藥后，公豬成豬的治愈率和有效率極大地增加了，且試驗(yàn)組的公豬成豬的無效率整體低于陽性對照組，這表明試驗(yàn)組的藥效要好于陽性對照組的藥效，說明本發(fā)明提供的中藥組合物可提高公豬成豬的成活率。
實(shí)施例10：中藥組合物在養(yǎng)殖廠母豬成豬群中的豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)
對養(yǎng)殖廠280頭發(fā)病母豬成豬隨機(jī)分為8組，每組均在饑餓一頓后按常規(guī)量減半喂食飼料，并按每公斤體重10ml進(jìn)行注射補(bǔ)鹽(補(bǔ)鹽液為0.4％NaCl、0.4％KCl和0.3％NaHCO3)。其中空白對照組不再進(jìn)行任何處理，陽性藥物對照組采用市售的中成藥維迪康，口服量為每公斤體重50mg。試驗(yàn)組施用本發(fā)明實(shí)施例1至6提供的中藥組合物，口服量為每公斤體重50mg。7天后觀察一次母豬成豬的健康狀況，如果水樣腹瀉停止，糞便褐色或黑色，能成堆，食欲正常，則為治愈，上述有一項(xiàng)恢復(fù)者則為有效，如果癥狀沒有緩解甚至死亡，則為無效。試驗(yàn)結(jié)果如表3所示：
表3 母豬成豬群中豬病毒性腹瀉治療效果試驗(yàn)檢測結(jié)果
由表3的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，空白對照組由于未施藥，母豬成豬僅有一例癥狀緩解；試驗(yàn)組和陽性對照組由于施藥后，母豬成豬的成活率極大地增加了，且試驗(yàn)組的治愈率和有效率要優(yōu)于陽性對照組。結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥組合物可提高母豬成豬的成活率。