本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從紅景天屬植物根中分離得到的紅景天有效部位及在制備治療肺動脈高壓藥物和保健品中的用途。
背景技術(shù)：
：紅景天屬植物為景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rhodiola)植物，為多年生草本或亞灌木植物，約有九十多種，我國有73種，主產(chǎn)于華北、東北、西南、西北和華中等地，儲藏量豐富，位居世界之首，青海是紅景天的主產(chǎn)區(qū)之一，以狹葉紅景天RhodiolaKirilowii和唐古特紅景天Rhodiolaalgida儲藏量大。紅景天在我國已經(jīng)有悠久的藥用歷史?！侗静菥V目》譽(yù)之為“八寶草”、“火焰草”、“經(jīng)中上品”，有“扶正固本、醒腦明目、輕身益氣、久服通神不老”之功效?！端牟酷t(yī)典》等藏醫(yī)藥典籍記載，紅景天具有潤肺、補(bǔ)腎、扶正固本、理氣養(yǎng)血、健腦益智和滋補(bǔ)強(qiáng)身等功效。紅景天植物中，化學(xué)成分種類較多，根據(jù)文獻(xiàn)報道，主要成分有酪醇及苷類；黃酮及其苷類；香豆素類；苯丙素類；萜類化合物；揮發(fā)油；酚酸類；多糖等。肺動脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是不同病因?qū)е碌囊苑蝿用}壓力和肺血管阻力升高為特點(diǎn)的一組疾病或臨床綜合征，其發(fā)病機(jī)制包括血管收縮、血管重構(gòu)和血栓形成。國際原發(fā)性肺動脈高壓專題研討會提出的分類系統(tǒng)將肺動脈高壓分成5種類型:1)與呼吸系統(tǒng)疾病和/或低氧血癥有關(guān)的肺動脈高壓；2)肺靜脈高壓；3)慢性血栓和/或栓塞性疾?。?)肺小動脈高壓；5)直接影響肺血管組織疾病所致的肺動脈高壓。如果PAH不加治療，最終可導(dǎo)致右心衰竭、容量負(fù)荷增加而至死亡。目前，治療肺動脈高壓的藥物主要是血管擴(kuò)張劑，如α受體阻滯劑、鈣拮抗劑血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、磷酸二酯酶抑制劑、前列腺素類(PG)藥物、硝基類血管擴(kuò)張劑等。這些藥物雖然具有改善患者呼吸困難、6分鐘步行距離(6MWD)和肺血液動力學(xué)等方面的作用，但在治療效果、制備和用藥成本、治療便利性方面均存在不同缺陷。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明主要是提供一種紅景天有效部位的制備方法；本發(fā)明的另一目的是提供前述紅景天有效部位在制備治療和/或預(yù)防肺動脈高壓的藥物和/或保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明第三個目的是提供前述紅景天有效部位在制備治療和/或預(yù)防肺動脈血管重構(gòu)的藥品和/或保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明第四個目的是提供前述紅景天有效部位在制備治療和/或預(yù)防肺血管上皮細(xì)胞損傷的藥品和/或保健品中的應(yīng)用；本發(fā)明第五個目的是提供該前述紅景天有效部位在制備治療和/或預(yù)防線粒體損傷的藥品和/或保健品中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種紅景天有效部位的制備方法，其特征在于：按以下步驟進(jìn)行，1)將紅景天屬植物的干燥根莖粉碎，用甲醇或乙醇進(jìn)行提取，提取液減壓濃縮成浸膏，得紅景天總提取物；2)將紅景天總提取物分散至純水中，并靜置沉淀，將沉淀過濾，得到濾液；3)濾液經(jīng)大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，用水、乙醇體系進(jìn)行梯度洗脫，將洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥后得紅景天有效部位。進(jìn)一步地，步驟1)中提取溶劑的濃度為10-100％，其用量為藥材重量的5-10倍；提取過程重復(fù)2-3次，每次提取時間為1-2小時；步驟2)中沉淀過程為在室溫下靜置12-24小時，所需純水的量為紅景天總提取物重量的5-10倍；步驟3)中采用的大孔吸附樹脂為HP20系列、HPD系列、D101系列、AB-8系列中的任一種；梯度洗脫首先用水進(jìn)行洗脫，然后用乙醇、水混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫；優(yōu)選依次采用水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇四個梯度進(jìn)行洗脫；每個梯度的洗脫劑用量為3至5個柱體積；優(yōu)選收集70％乙醇洗脫液得到的洗脫物。優(yōu)選地，所采用的紅景天屬植物包括但不限于大花紅景天、狹葉紅景天、高山紅景天、玫瑰紅景天、德欽紅景天、喜馬紅景天、帕里紅景天、菱葉紅景天、四裂紅景天、云南紅景天、大株紅景天、長鞭紅景天、唐古特紅景天、圣地紅景天、小叢紅景天和庫頁紅景天。通過前述方法制得紅景天有效部位。一種基于前述紅景天有效部位的藥物組合物，其包括紅景天有效部位以及藥學(xué)上可接受的載體。還涉及含有作為活性成份的紅景天有效部位以及常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物，通常紅景天有效部位占藥物組合物總重量的0.1～99％。該藥物組合物給藥途徑可為經(jīng)胃腸道或非經(jīng)胃腸道，如口服、肺、鼻腔、皮下、舌下、皮膚、肌肉、直腸等，優(yōu)選口服給藥；該藥物組合物的給藥途徑還可為注射給藥，注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、腹腔注射和穴位注射等。該藥物組合物的給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑、乳劑、混懸劑、注射劑、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等。固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。前述紅景天有效部位可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。該藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。該紅景天有效部位的每天合適劑量范圍為：用量為0.1～100mg/Kg體重，上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥。本發(fā)明的化合物或藥物組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用并調(diào)整劑量。為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的紅景天有效部位或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其他材料。本發(fā)明采用紅景天屬植物制得浸膏后再制成濾液，通過濾液提取紅景天有效部位，并根據(jù)紅景天有效部位的特性用于制備治療和/或預(yù)防肺動脈高壓藥物、治療和/或預(yù)防肺動脈高壓的保健品、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)和保護(hù)的藥物、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)和保護(hù)的保健品、細(xì)胞線粒損傷的藥物以及細(xì)胞線粒損傷的保健品，其原料供應(yīng)穩(wěn)定、成本低，且制備成本低，藥效可靠。附圖說明圖1為唐古特紅景天活性部位對低氧刺激下大鼠肺動脈壓的影響；圖2為唐古特紅景天活性部位給藥15天后對低氧所致肺小動脈血管重構(gòu)的影響；圖3為唐古特紅景天活性部位給藥30天后對低氧所致肺小動脈血管重構(gòu)的影響；圖4為唐古特紅景天活性部位對低氧所致大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響（其中，A為15天，B為30天）。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但這并不意味著對本發(fā)明的任何限制。一、紅景天有效部位的制備實(shí)施例1采用干燥的唐古特紅景天根莖作為原生藥，粉碎后以95％的乙醇回流提取3次，每次用量為原生藥重量的5倍，提取時間為每次1.5小時，將提取液合并后過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得浸膏；加入5倍量的水進(jìn)行水沉，5℃下靜置24小時，將沉淀過濾，濾液經(jīng)D101大孔吸附樹脂分離，采用純水、30%乙醇、70％乙醇三個梯度進(jìn)行洗脫，將70％乙醇的洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到唐古特紅景天的有效部位。實(shí)施例2采用干燥的高山紅景天根莖作為原生藥，粉碎后以100％的乙醇回流提取3次，每次用量為原生藥重量的10倍，提取時間為每次2小時，將提取液合并后過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得浸膏；加入10倍量的水進(jìn)行水沉，15℃下靜置24小時，將沉淀過濾，濾液經(jīng)HP20大孔吸附樹脂分離，采用純水、30%乙醇、70%乙醇、95％乙醇四個梯度進(jìn)行洗脫，將70％乙醇的洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到高山紅景天的有效部位。實(shí)施例3采用干燥的喜馬紅景天根莖作為原生藥，粉碎后以10％的乙醇回流提取2次，每次用量為原生藥重量的5倍，提取時間為每次1小時，將提取液合并后過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得浸膏；加入5倍量的水進(jìn)行水沉，20℃下靜置12小時，將沉淀過濾，濾液經(jīng)HPD大孔吸附樹脂分離，采用純水、70%乙醇、95%乙醇三個梯度進(jìn)行洗脫，將70%乙醇的洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到喜馬紅景天的有效部位。實(shí)施例4采用干燥的云南特紅景天根莖作為原生藥，粉碎后以45％的乙醇回流提取3次，每次用量為原生藥重量的7倍，提取時間為每次1.5小時，將提取液合并后過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得浸膏；加入7倍量的水進(jìn)行水沉，25℃下靜置15小時，將沉淀過濾，濾液經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂分離，采用純水、30％乙醇、95%乙醇三個梯度進(jìn)行洗脫，將30％乙醇的洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到云南紅景天的有效部位。實(shí)施例5采用干燥的唐古特紅景天根莖作為原生藥，粉碎后以75％的乙醇回流提取3次，每次用量為原生藥重量的9倍，提取時間為每次3小時，將提取液合并后過濾，濾液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得浸膏；加入10倍量的水進(jìn)行水沉，10℃下靜置20小時，將沉淀過濾，濾液經(jīng)D101大孔吸附樹脂分離，采用純水、70％乙醇、95％乙醇三個梯度進(jìn)行洗脫，將70％乙醇的洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到唐古特紅景天的有效部位。二、藥理活性實(shí)驗試驗例：唐古特紅景天提取物降低低氧性肺動脈壓的作用實(shí)驗動物：健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，購置于西安交通大學(xué)動物實(shí)驗中心（實(shí)驗動物使用許可證號SCXK(陜)2012-003），6-8周齡，體重為250-300g。實(shí)驗儀器：電子枰：SHANGPING(YP601N)、Biopac多導(dǎo)生理記錄儀、轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)（徠卡-2016，德國）；TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機(jī)（常州市中威電子儀器有限公司）；BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)（常州郊區(qū)中威電子儀器廠）；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司）；數(shù)碼三目攝像顯微鏡（BA400Digital，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）等；圖像分析軟件MoticImagesAdvanced。低氧性肺動脈高壓模型復(fù)制SD大鼠隨機(jī)分組，每組6只，分別為：①常氧組（Normal）：大鼠于當(dāng)天用20%烏拉坦腹腔麻醉（0.5ml/0.1kg）并測定肺動脈壓，仰臥固定后打開胸腔，將心肺快速取出，取材留樣。②低氧組（Hypoxia）：分為低氧1天、低氧3天、低氧7天、低氧15天、低氧30天五組，每組6只，大鼠置于低壓氧艙內(nèi)飼養(yǎng)（海拔5000米），連續(xù)1、3、7、15、30天，復(fù)制大鼠HPH模型。③低氧給予紅景天有效部位組（Hypoxia+HJT）：大鼠低氧暴露后，每天灌胃給藥提取的紅景天藥物高(55.00mg/ml)、中(27.50mg/ml)、低(13.75mg/ml)三個劑量1ml/200g體重，連續(xù)給予1、3、7、15、30天。導(dǎo)管法測量右心室收縮壓：分別于1天、3天、7天、15天、30天后，將各組大鼠用10g/L的戊巴比妥鈉（40mg/kg）麻醉后，固定于手術(shù)臺，分離出右頸外靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，動脈夾阻斷近心端，使用聚乙烯導(dǎo)管（導(dǎo)管內(nèi)充滿0.5％肝素溶液）行右頸靜脈插管術(shù)，連接壓力換能器和生理記錄儀。導(dǎo)管進(jìn)入血管后，緩慢推進(jìn)，并同時觀測記錄儀顯示，待顯示右心室動脈壓力曲線后，固定導(dǎo)管，并記錄30s壓力曲線。經(jīng)記錄儀分析軟件計算出右心室收縮末期壓力（right-ventricularsystolicpressure，RVSP)。右心室肥厚指數(shù)的測量：將mPAP測量完畢后，立即剪開大鼠胸腔，并確定導(dǎo)管位置在右心室，取出心臟，剪去左右心房組織，并沿室間隔邊緣剪下右心室組織，分別稱重。計算出右心室與左心室加室間隔比值（RV/LV+S），即右心室肥厚指數(shù)（rightventricularhypertrophyindex，RVHI），以此確定右心室有無肥厚。組織取材及固定：肺小血管重塑觀察及圖像處理，大鼠左側(cè)肺組織經(jīng)中性緩沖福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肺小血管重塑情況。取直徑100μm左右的肺動脈,用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行形態(tài)計量分析,以血管壁橫斷面積占血管橫斷面積比值(WA%)作為衡量缺氧性肺血管重塑的指標(biāo)。電鏡觀察：事先準(zhǔn)備好所需的器械和固定液，并把它放4℃冰箱內(nèi)預(yù)冷備用。大鼠左側(cè)肺組織經(jīng)離體后迅速用生理鹽水沖洗后或直接投入預(yù)冷的2.5%戊二醛固定液（保質(zhì)期為1個月）內(nèi)，并把它放4℃冰箱內(nèi)保存，把固定液滴在蠟板上，再把切下來的臟器用手術(shù)刀切成小塊，放在蠟板上的固定液中，接著在固定液中將組織切成約1立方毫米大小或橫切面約1平方毫米的長條形，后裝有固定液的小瓶內(nèi)，在固定液中充分震蕩，使其完全沉到瓶底為止用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行形態(tài)分析，以線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腫脹程度和Ⅰ型Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞作為衡量缺氧性肺血管重塑的指標(biāo)。統(tǒng)計分析：實(shí)驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM)表示，數(shù)據(jù)使用SPSS13.0軟件分析。組間差異使用One-wayANOVA分析，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。實(shí)驗結(jié)果：唐古特紅景天活性部位對低氧刺激下大鼠肺動脈壓的影響：與常氧組比較，低氧使大鼠肺動脈壓增加明顯（32.20±3.89vs17.31±1.60mmHg），同時右心室肥厚指數(shù)也明顯增加（22.65±1.30vs15.29±3.11）；唐古特紅景天有效部位干預(yù)后使這兩個指標(biāo)都有明顯降低（18.1±2.07vs16.47±1.45），如圖1和下表所示。唐古特紅景天活性部位對肺動脈壓和右心室的影響（）：PAP（mmHg）(RV/LV+S)%Number86Normal17.31±1.60***12.8±2.7***Hypoxia32.20±3.89***22.6±1.1HighDose18.1±2.07***16.5±1.5***MiddleDose20.34±1.90***17.8±1.2***LowDose21.46±1.9523.0±2.4F49.1431.31P<0.0001<0.0001注：*表示與低氧組比較P＜0.05唐古特紅景天活性部位對低氧所致肺小動脈血管重構(gòu)的影響：低氧導(dǎo)致了肺小動脈壁的明顯增厚（圖2、圖3），同時導(dǎo)致了肺動脈平滑肌層面積的顯著增加，同時伴隨了外膜增厚及血管外基質(zhì)沉積，而唐古特紅景天干預(yù)后明顯減輕了低氧引起的肺小動脈血管壁的增厚。唐古特紅景天活性部位對低氧所致大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響：機(jī)體缺氧時，細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體最快做出反應(yīng)，并出現(xiàn)腫脹等現(xiàn)象，從圖4中，缺氧處理至15天時，已能觀察到正常組較低氧損傷組的明顯差異，正常組中I型上皮細(xì)胞，核呈橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻。胞漿內(nèi)線粒體，核糖體等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰。II型上皮細(xì)胞核呈橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)板層顆粒，線粒體等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)正常。而低氧損傷組中線粒體出現(xiàn)明顯的腫脹。經(jīng)唐古特紅景天活性部位干預(yù)后，胞漿內(nèi)線粒體，核糖體等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰且正常，偶見線粒體的輕度腫脹。以上已將本發(fā)明做一詳細(xì)說明，以上所述，僅為本發(fā)明之較佳實(shí)施例而已，當(dāng)不能限定本發(fā)明實(shí)施范圍，即凡依本申請范圍所作均等變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3