本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種新型花色苷脂質(zhì)體凍干粉及其制備方法。

背景技術(shù)：

花色苷是一種安全、無(wú)毒的天然食用色素，其來(lái)源豐富，且具有很高的營(yíng)養(yǎng)和藥理價(jià)值，在食品、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域有著巨大應(yīng)用潛力。但是由于花色苷穩(wěn)定性較差、易降解、生物利用度低，限制了其廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，花色苷的穩(wěn)態(tài)技術(shù)，尤其是脂質(zhì)體制備技術(shù)成為了該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。通過(guò)將花色苷包埋在脂質(zhì)體中，既能在空間上防止花色苷與水分子接觸失活，也能穩(wěn)定花色苷的生物活性，改善花色苷的釋放速度，增加其生物可利用度。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)枺篊N201210177952.1)公開(kāi)了一種花色苷提取物脂質(zhì)體及其制備方法，其利用類(lèi)脂作為載運(yùn)體系；中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)枺篊N201610054330.8)公開(kāi)了一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其采用大豆卵磷脂和膽固醇作為壁材，制得楊梅花色苷脂質(zhì)體懸液。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)枺篊N201310413928.8)公開(kāi)了一種花青素脂質(zhì)體的制備方法，該方法采用了pH梯度結(jié)合逆向蒸發(fā)的方法，利用磷脂和膽固醇作為脂質(zhì)體壁材，獲得花青素脂質(zhì)體。由此可見(jiàn)，現(xiàn)在制備脂質(zhì)體采用天然磷脂與膽固醇按照一定比例復(fù)配為壁材，但是所得脂質(zhì)體性質(zhì)不穩(wěn)定、生物利用度低，且壁材種類(lèi)單一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種新型的花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法。

本發(fā)明還并提供了根據(jù)上述制備方法制備所得的新型花色苷脂質(zhì)體凍干粉。

本發(fā)明所述的一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將甘露糖赤蘚糖醇脂溶于第一溶劑中得到溶液甲；

(2)將花色苷溶解在第二溶劑中得到溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液混勻，超聲處理后靜置，然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后膜過(guò)濾，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入凍干保護(hù)劑，經(jīng)真空冷凍干燥即可。

步驟(1)中，所述甘露糖赤蘚糖醇脂是由Ustligo maydis或Pseudazyma屬菌株發(fā)酵合成，再經(jīng)分離純化得到，純度為95％以上。

具體合成步驟如下：

菌種Pseudozyma aphidis DSMZ70725購(gòu)買(mǎi)于德國(guó)微生物菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen)；Ustligo maydis(編號(hào)5.203)購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)。將上述購(gòu)買(mǎi)的菌株之一轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)基(3.0g/L酵母提取物，3.0g/L麥芽提取物，5.0g/L蛋白胨，10.0g/L葡萄糖，15.0g/L瓊脂，蒸餾水)中，28℃下活化2d，然后將其轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基(4.0g/L葡萄糖，3.0g/L NaNO₃，0.3g/L MgSO₄·7H₂O，0.3g/L KH₂PO₄，1.0g/L酵母提取物，蒸餾水，pH 6.0)中，于28℃、220rpm條件下培養(yǎng)3d。將培養(yǎng)好的種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基(85mL/L大豆油，3.0g/L NaNO₃，0.3g/L MgSO₄·7H₂O，0.3g/L KH₂PO₄，1.0g/L酵母提取物，蒸餾水)中，于28℃、220rpm條件下培養(yǎng)6d。將發(fā)酵產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，離心，上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)試劑，獲得甘露糖赤蘚糖醇脂粗產(chǎn)物。采用硅膠柱層析純化產(chǎn)物，首先將玻璃層析柱(3×40cm)洗凈烘干，并用氯仿潤(rùn)濕。用200～300目硅膠濕法裝柱，靜置12h平衡，保證硅膠柱內(nèi)無(wú)氣泡。將粗產(chǎn)物1.0g溶于3mL氯仿，上樣。用600mL有機(jī)溶劑氯仿:丙酮＝7:3洗脫得到組分，控制洗脫速率為0.8mL/min。洗脫的組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)試劑，得到MEL-A。

步驟(1)中，將甘露糖赤蘚糖醇脂(MEL-A)溶于第一溶劑中得到溶液甲，其中，所述第一溶劑為正己烷、氯仿或乙醚，配制所得溶液甲的濃度為15.0～20.0mg/L。優(yōu)選的，配制所得溶液甲的濃度為15.0～17.5mg/L。

優(yōu)選的，步驟(1)中，使用甘露糖赤蘚糖醇脂和磷脂混合物替換甘露糖赤蘚糖醇脂。進(jìn)一步的，將甘露糖赤蘚糖醇脂和磷脂按照1～4:1的質(zhì)量比混合溶于第一溶劑中，配制所得溶液甲的濃度為15.0～25.0mg/L。其中，所述磷脂為二月桂?；蚜字虼蠖孤蚜字?/p>

進(jìn)一步優(yōu)選的，甘露糖赤蘚糖醇脂和磷脂的質(zhì)量比為1～3:1。

步驟(2)中，所述的第二溶劑為蒸餾水或磷酸鹽緩沖液，配制所得溶液乙的濃度為100.0～800.0mg/L。

其中，所述磷酸鹽緩沖液pH為3.0～5.0、離子濃度為0.05～0.1M。

步驟(2)中，所述花色苷從富含花色苷的植物花、莖、葉、果實(shí)等原料中提取分離純化得到，具體步驟為：按照每100g原料，加入440mL濃度為50％的檸檬酸酸化乙醇(pH3.0)，在40℃水浴中避光超聲浸提60min。提取結(jié)束后，在4000rmp離心，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮為花色苷粗提液。在25℃條件下，將花色苷粗提液在A(yíng)B-8型樹(shù)脂吸附平衡5h，解吸平衡時(shí)間為4h，用75％乙醇溶液解吸。上樣速率為2.0mL/min，上樣體積為500mL粗提液，用3倍柱床體積的75％乙醇，以1.0mL/min洗脫速率洗脫。將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到花色苷。

步驟(2)中，所述花色苷也可以直接購(gòu)買(mǎi)獲取，CAS：7084-84-4，6906-38-3，18466-51-8。

步驟(3)中，將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比1～5:1混勻。

優(yōu)選的，所述甲、乙溶液體積比，優(yōu)選為2～4:1。

步驟(3)中，超聲處理溫度為30～40℃，時(shí)間為5～10min，超聲功率為100～300W，靜置15～20min。

步驟(3)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的真空度為0.001～0.1MPa，轉(zhuǎn)速為10～120rpm，溫度為35～55℃。

步驟(4)中，向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.22～0.45μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液。

步驟(5)中，向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.0％～12.0％凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑為甘露醇、蔗糖、海藻糖或麥芽糊精。

優(yōu)選的，步驟(5)中，所述凍干保護(hù)劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0％的甘露醇、8.0％的海藻糖或10.0％的蔗糖。

進(jìn)一步的，步驟(5)中，真空冷凍干燥的溫度為-10～-50℃，真空度為0.001～0.1MPa，時(shí)間為48～72h。

采用上述制備方法制備所得花色苷脂質(zhì)體凍干粉也在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

有益效果：本發(fā)明專(zhuān)利將甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A用于花色苷脂質(zhì)體的制備，一方面豐富了脂質(zhì)體制備的壁材來(lái)源，另一方面獲得了一種新型的花色苷脂質(zhì)體凍干粉；制備所得花色苷脂質(zhì)體凍干粉穩(wěn)定性好、易保存、生物利用度高，可應(yīng)用于食品和化妝品領(lǐng)域；制備方法中所用材料安全無(wú)毒，方法簡(jiǎn)單、成本低。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做出詳細(xì)說(shuō)明。

二月桂?；蚜字篊AS：127641-86-5。

大豆卵磷脂：CAS：8002-43-5。

甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A的制備：

由Ustligo maydis或Pseudazyma屬菌種發(fā)酵合成MELs，再經(jīng)分離純化得到甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A，純度為95％以上。具體包括如下步驟：

菌種Pseudozyma aphidis DSMZ70725購(gòu)買(mǎi)于德國(guó)微生物菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen)；Ustligo maydis(編號(hào)5.203)購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)。將上述購(gòu)買(mǎi)的菌株之一轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)基(3.0g/L酵母提取物，3.0g/L麥芽提取物，5.0g/L蛋白胨，10.0g/L葡萄糖，15.0g/L瓊脂，蒸餾水)中，28℃下活化2d，然后將其轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基(4.0g/L葡萄糖，3.0g/L NaNO₃，0.3g/L MgSO₄·7H₂O，0.3g/L KH₂PO₄，1.0g/L酵母提取物，蒸餾水，pH 6.0)中，于28℃、220rpm條件下培養(yǎng)3d。將培養(yǎng)好的種子液接入試驗(yàn)設(shè)計(jì)的發(fā)酵培養(yǎng)基(85mL/L大豆油，3.0g/L NaNO₃，0.3g/L MgSO₄·7H₂O，0.3g/L KH₂PO₄，1.0g/L酵母提取物，蒸餾水)中，于28℃、220rpm條件下培養(yǎng)6d。將發(fā)酵產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，離心，上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)試劑，獲得甘露糖赤蘚糖醇脂粗產(chǎn)物。采用硅膠柱層析純化產(chǎn)物，首先將玻璃層析柱(3×40cm)洗凈烘干，并用氯仿潤(rùn)濕。用200～300目硅膠濕法裝柱，靜置12h平衡，保證硅膠柱內(nèi)無(wú)氣泡。將粗產(chǎn)物1.0g溶于3mL氯仿，上樣。用600mL有機(jī)溶劑氯仿:丙酮＝7:3洗脫得到組分，控制洗脫速率為0.8mL/min。洗脫的組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機(jī)試劑，得到MEL-A。

花色苷的制備：

從富含花色苷的植物花、莖、葉、果實(shí)等原料中提取分離純化得到，具體步驟為：按照每100g原料，加入440mL濃度為50％的檸檬酸酸化乙醇(pH3.0)，在40℃水浴中避光超聲浸提60min。提取結(jié)束后，在4000rmp離心，上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮為花色苷粗提液。在25℃條件下，將花色苷粗提液在A(yíng)B-8型樹(shù)脂吸附平衡5h，解吸平衡時(shí)間為4h，用75％乙醇溶液解吸。上樣速率為2.0mL/min，上樣體積為500mL粗提液，用3倍柱床體積的75％乙醇，以1.0mL/min洗脫速率洗脫。將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到花色苷。

其中花色苷也可以直接購(gòu)買(mǎi)獲取。

花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法：

(1)花色苷脂質(zhì)體的熱穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是將花色苷脂質(zhì)體溶于蒸餾水(pH3.0)，溶液分別置于50℃、60℃和70℃恒溫水浴6h，每隔2h測(cè)定A520值，計(jì)算熱降解率(P)：P＝(1-A/A₀)×100％。式中:A為花色苷或花色苷脂質(zhì)體加熱后的吸光值，A₀為花色苷或花色苷脂質(zhì)體的初始吸光值。

(2)花色苷脂質(zhì)體的包封率測(cè)定是將花色苷脂質(zhì)體凍干粉溶于蒸餾水(pH3.0)，在12000rmp條件下離心20min，取上清，并向脂質(zhì)體沉淀中加入甲醇和氯仿。采用高效液相色譜法測(cè)定脂質(zhì)體和上清中花色苷的含量。計(jì)算公式：N(％)＝C/C₀×100％，其中，C是脂質(zhì)體中包封的花色苷含量，C₀是脂質(zhì)體花色苷的總量。

(3)花色苷脂質(zhì)體凍干粉的性能參數(shù)通過(guò)評(píng)價(jià)花色苷脂質(zhì)體凍干粉的色澤、凍干粉形態(tài)、溶解性來(lái)實(shí)現(xiàn)。

(4)體外抗氧化性評(píng)價(jià)是主要考察花色苷及花色苷脂質(zhì)體的1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除能力。取不同濃度0～60μg/mL的花色苷脂質(zhì)體溶液4.0mL加入1.0mL 0.2mM DPPH甲醇溶液，混勻，于避光條件下靜置30min，測(cè)定波長(zhǎng)515nm下的OD值。對(duì)照為花色苷溶液。根據(jù)公式計(jì)算花色苷脂質(zhì)體對(duì)DPPH自由基的清除率：自由基清除率(100％)＝[(A₀-A₁)/A₀]×100，A₀為DPPH的OD值(空白對(duì)照)，A₁為含有樣品的DPPH溶液的OD值。

(5)花色苷脂質(zhì)體的生物利用度評(píng)價(jià)：主要考察花色苷及花色苷脂質(zhì)體對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞細(xì)胞株HT-29的抑制率。采用的MTT方法如下：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔板，細(xì)胞密度約為10⁵個(gè)/孔，培養(yǎng)24h后，每孔加入50～400μg/mL的花色苷及花色苷脂質(zhì)體溶液100μL，每組設(shè)6個(gè)平行，對(duì)照孔加入RPMI-160培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。后取出并甩出孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入20μL 5mg/mL的MTT，放入CO₂培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出96孔板，每孔加入150μL DMSO，水平振蕩器搖動(dòng)，使孔內(nèi)甲臜充分溶解，然后用酶標(biāo)儀測(cè)定490nm的吸光度值。抑制率＝(1-實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值)×100％。采用藥物抑制濃度Logit法計(jì)算花色苷及花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度(IC₅₀)。

實(shí)施例1

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A溶于正己烷中得到濃度為15.0mg/L的溶液；

(2)將花色苷溶解在蒸餾水中得到濃度為100.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比1:1混勻，在30℃、功率為100W下超聲處理為5min，靜置15min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為120rpm，溫度為55℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.22μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0％的甘露醇，在-10℃、真空度為0.001MPa下冷凍干燥48h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(9.21％)、60℃(20.01％)、70℃(23.45％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)。花色苷脂質(zhì)體呈紫色，形態(tài)松散，溶解性好，對(duì)花色苷的包封率為74.74％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為123.25μg/mL，但高于對(duì)照組的89.14μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為135.50μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明制備所得花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性好，生物利用度高。

實(shí)施例2

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A溶于氯仿中得到濃度為20.0mg/L的溶液甲；

(2)將花色苷溶解在蒸餾水中得到濃度為300.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比3:1混勻，在40℃、功率為300W下超聲處理為10min，靜置20min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為100rpm，溫度為45℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.45μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0％的蔗糖，在-50℃、真空度為0.01MPa下冷凍干燥72h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(9.88％)、60℃(19.00％)、70℃(32.11％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)?；ㄉ罩|(zhì)體呈淺紫色，形態(tài)較松散，溶解性好，對(duì)花色苷的包封率為73.78％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為89.40μg/mL，與對(duì)照組的89.14μg/mL差異不大。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為180.62μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性好，生物利用度高。

實(shí)施例3

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂MEL-A溶于乙醚中得到濃度為17.5mg/L的溶液甲；

(2)將花色苷溶解在蒸餾水中得到濃度為800.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比4:1混勻，在30℃、功率為200W下超聲處理為8min，靜置18min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為100rpm，溫度為40℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.25μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.0％的海藻糖，在-30℃、真空度為0.05MPa下冷凍干燥50h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(8.21％)、60℃(16.32％)、70℃(35.01％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)?；ㄉ罩|(zhì)體呈紫色，形態(tài)松散，溶解性較好，對(duì)花色苷的包封率為72.15％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為65.20μg/mL，與低于對(duì)照組的89.14μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為154.68μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性好，生物利用度高。

實(shí)施例4

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂和大豆卵磷脂按照1:1的質(zhì)量比混合溶于正己烷中，配制得濃度為15.0mg/L的溶液甲；

(2)將花色苷溶解在蒸餾水中得到濃度為500.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比2:1混勻，在35℃、功率為150W下超聲處理為6min，靜置20min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為120rpm，溫度為45℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.35μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0％的甘露醇，在-40℃、真空度為0.008MPa下冷凍干燥50h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(3.42％)、60℃(10.21％)、70℃(20.20％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)?；ㄉ罩|(zhì)體呈淡紫色，形態(tài)松散，溶解性較好，對(duì)花色苷的包封率為86.24％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為103.64μg/mL，但略高于對(duì)照組的89.14μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為154.27μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性良好，生物利用度高。

實(shí)施例5

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂和二月桂?；蚜字凑?:1的質(zhì)量比混合溶于氯仿中，配制所得溶液甲的濃度為25.0mg/L；

(2)將花色苷溶解在pH為3.0～5.0、離子濃度為0.05～0.1M磷酸鹽緩沖液中得到濃度為200.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比4:1混勻，在35℃、功率為300W下超聲處理為5min，靜置20min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為120rpm，溫度為40℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.40μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.0％的蔗糖，在-20℃、真空度為0.008MPa下冷凍干燥50h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(5.19％)、60℃(11.19％)、70℃(15.65％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)?；ㄉ罩|(zhì)體呈淡紫色，形態(tài)松散，溶解性良好，對(duì)花色苷的包封率為81.23％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為110.55μg/mL，但略高于對(duì)照組的89.14μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為180.60μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性良好，生物利用度高。

實(shí)施例6

一種花色苷脂質(zhì)體凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

(1)將制備所得甘露糖赤蘚糖醇脂和二月桂?；蚜字凑?:1的質(zhì)量比混合溶于乙醚中，配制所得溶液甲的濃度為20.0mg/L；

(2)將花色苷溶解在pH為3.0～5.0、離子濃度為0.05～0.1M磷酸鹽緩沖液中得到濃度為600.0mg/L的溶液乙；

(3)將步驟(1)得到的甲溶液和步驟(2)得到的乙溶液按照體積比3:1混勻，在40℃、功率為100W下超聲處理為10min，靜置15min；然后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(真空度為0.1MPa，轉(zhuǎn)速為80rpm，溫度為35℃)中減壓蒸發(fā)得到脂質(zhì)膜；

(4)向步驟(3)所得脂質(zhì)膜中加入pH 5.0～7.0、離子濃度為0.05～0.1M的磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解后過(guò)0.38μm濾膜，得到脂質(zhì)體懸液；

(5)向步驟(4)所得脂質(zhì)體懸液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.0％的海藻糖，在-40℃、真空度為0.002MPa下冷凍干燥72h即可。

根據(jù)花色苷脂質(zhì)體的性能評(píng)價(jià)方法，測(cè)得花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(3.41％)、60℃(8.33％)、70℃(8.66％)，對(duì)照花色苷的熱降解率為50℃(9.67％)、60℃(19.54％)、70℃(35.42％)。花色苷脂質(zhì)體呈淺紫色，形態(tài)較松散，但略有皺縮，溶解性較好，對(duì)花色苷的包封率為90.74％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為88.25μg/mL，略低于對(duì)照組的89.14μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為149.50μg/mL(對(duì)照組花色苷的285.10μg/mL)。以上說(shuō)明花色苷脂質(zhì)體熱穩(wěn)定性良好，生物利用度高。

對(duì)比例1

根據(jù)中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)枺篊N201610054330.8)公開(kāi)的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法制備了花色苷脂質(zhì)體懸液，并將其制備成凍干粉。具體如下：

(1)將大豆卵磷脂與膽固醇(4.0mg/1.0mg)的比例溶解在乙醚中得溶液A，其中，固液比(mg/mL)為4:1；(2)將花色苷100mg溶解在1.0L pH7.4的磷酸鹽緩沖液溶解稀釋?zhuān)萌芤築；(3)將A、B液按體積比1:1混合，先經(jīng)磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經(jīng)磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；(4)向脂質(zhì)薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C；(5)將溶液C過(guò)濾膜，超聲，放4℃冰箱中保存，即得花色苷的脂質(zhì)體懸液；(6)將懸液加入10.0％甘露醇凍干保護(hù)劑，冷凍干燥制得花色苷脂質(zhì)體凍干粉。

對(duì)此花色苷脂質(zhì)體的性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)。測(cè)得該花色苷脂質(zhì)體的熱降解率為50℃(9.35％)、60℃(20.32％)、70℃(36.22％)。花色苷脂質(zhì)體凍干粉呈紫色，形態(tài)松散，復(fù)水性好，花色苷脂質(zhì)體的包封率為71.09％。對(duì)DPPH自由基的清除率IC₅₀為92.04μg/mL。體外抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，該花色苷脂質(zhì)體對(duì)HT-29細(xì)胞株的半抑制濃度IC₅₀為200.44μg/mL。

實(shí)施例1-6中利用甘露糖赤蘚糖醇脂以及磷脂為壁材所制備的花色苷脂質(zhì)體與對(duì)比例1相比，具有較好的熱穩(wěn)定性和生物利用度。