本發(fā)明涉及一種具有促進泌乳功能的益生菌組合物及其制備方法與應用,具體涉及一種由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成的益生菌組合物,及其在制備促進泌乳產品中的應用。
背景技術:
母乳是嬰兒成長最自然、最安全、最完整的天然食物,它不僅含有嬰兒生長所需的全部營養(yǎng)物質,包括碳水化合物、蛋白質、脂肪、維生素、礦物質、及對寶寶腦部發(fā)育很重要的脂肪酸和牛磺酸等;還含有增強嬰兒免疫力的多種抗體,特別是初乳中的母源抗體。新生兒能夠及時喝到初乳,對新生兒的身體發(fā)育及增強免疫力具有重要的作用。
通過調查發(fā)現,臨床上產后產婦乳汁不足較多見,且產后乳汁的缺乏對新生兒的身心發(fā)展和身體健康以及產婦的身心健康均會產生很大的不良影響。其一,母乳的“配方”會隨著嬰兒需要的改變而改變,使用其他喂養(yǎng)方式無法滿足嬰兒成長發(fā)育的全部營養(yǎng)需求;其二,母乳中含有大量的抗體,母乳喂養(yǎng)的嬰兒在斷奶后仍有較長時間具有抵抗疾病的能力,而缺少母乳喂養(yǎng)的嬰兒極易患腸胃感染、尿道感染、食物過敏、肺炎等;其三,缺乏母乳喂養(yǎng),無法滿足嬰兒的“口欲期”,孩子長大后會出現咬手指、吸煙、酗酒、愛吃零食等問題;其四,哺乳可刺激母親的子宮收縮,促進惡露的排出,母乳的缺乏會導致產婦患乳腺癌和卵巢癌的幾率增大。
中醫(yī)認為,產后乳汁分泌不足的主要原因有:一方面為氣血虛弱所致,素體脾胃虛弱,孕期產后調攝失宜,產后思慮過度而傷脾,高齡產婦氣血虛弱,分娩失血過多導致生化之源不足,氣血虧虛,乳汁生成乏源導致缺乳;另一方面為肝郁氣滯所致,素體抑郁,為情志所傷,導致氣肝郁結,氣機不暢,經脈澀滯,乳絡不通,阻礙乳汁排泄,導致缺乳。針對缺乳的兩大原因——“氣血虛弱”和“肝郁氣滯”,中醫(yī)治療缺乳一般都采用補氣養(yǎng)血和血、疏肝解郁、通經下乳等方法,常用的中藥為漏蘆、絲瓜絡、通草、穿山甲、王不留行等。目前市售的產品中多數為單純中藥補氣血產品,用藥時間長,用藥反饋不理想,副作用較大,長期食用后泌乳量減少、容易上火、引起腹瀉、便秘、血糖升高等不良反應。因此,迫切需要一種更安全、有效的促進產婦產后乳汁分泌的產品。
技術實現要素:
針對上述現有技術,本發(fā)明的目的是提供一種具有促進泌乳功能的益生菌組合物及其制備方法與應用。
為實現上述目的,本發(fā)明采用下述技術方案:
本發(fā)明的第一方面,提供一種具有促進泌乳功能的益生菌組合物。
本發(fā)明提供的益生菌組合物由植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成;
所述益生菌組合物中,植物乳桿菌的含量為2×107~2×109CFU/g,嗜酸乳桿菌的含量為2×107~2×109CFU/g,嗜熱鏈球菌的含量為5×107~5×109CFU/g。
優(yōu)選的,所述益生菌組合物中,植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌的活菌數比例為1:1:1。
進一步優(yōu)選的,所述益生菌組合物中,植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌的含量均為2×108CFU/g。
優(yōu)選的,所述植物乳桿菌為植物乳桿菌BLCC2-0126,已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號CCTCC NO:M2015128。記載在專利“一株具有吸附或降解腸毒素功能的乳酸菌及其應用”(CN104988104A)中。
所述嗜酸乳桿菌為嗜酸乳桿菌BLCC2-0024,已于2015年3月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號CCTCC NO:M2015129。記載在專利“一株降血糖益生菌制劑及其制備方法”(CN105039217A)中。
所述嗜熱鏈球菌為嗜熱鏈球菌BLST,已于2012年07月11日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號為:CCTCC NO:M 2012282。記載在專利“一株具有降膽固醇能力的嗜熱鏈球菌及其應用”(CN102899276A)中。
本發(fā)明還提供上述益生菌組合物的制備方法,步驟如下:
(1)分別將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌發(fā)酵培養(yǎng),至發(fā)酵液中的菌體濃度達到對數生長期0.5~2×109CFU/mL;
(2)將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌的發(fā)酵液分別離心,棄上清,收集菌泥;將菌泥與保護劑混合均勻,冷凍干燥,分別得到植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌的菌粉,按比例混合,即得益生菌組合物。
本發(fā)明還提供上述益生菌組合物在制備促進泌乳產品中的用途。
本發(fā)明的第二方面,提供一種促進泌乳的產品,其活性成分為上述益生菌組合物。
進一步的,所述促進泌乳的產品由上述益生菌組合物和一種或多種食品和/或藥品上可接受的載體制備而成。
所述食品和/或藥品上可接受的載體為現有技術中的常規(guī)產品,例如可以選自麥芽糊精、海藻糖、甜菜堿、淀粉、羧甲基纖維素鈉等。
所述促進泌乳的產品可以被制備成片劑、粉劑、膠囊劑等各種劑型。
本發(fā)明的第三方面,提供一種具有促進泌乳功能的中藥益生菌復合制劑,由上述益生菌組合物和中藥組合物復配而成;
所述中藥組合物由下述重量份的原料藥制成:
黃芪10-15份、熟地10-15份、茯苓9-15份、紅棗3-8份、桂圓3-8份、赤小豆5-10份、甘草5-10份。
中藥益生菌復合制劑中,植物乳桿菌的含量為2.5×106~2.5×109CFU/g,嗜酸乳桿菌的含量為2.5×106~2.5×109CFU/g,嗜熱鏈球菌的含量為2.5×106~2.5×109CFU/g。
優(yōu)選的,上述中藥益生菌復合制劑中,所述中藥組合物由下述重量份的原料藥制成:
黃芪12份、熟地12份、茯苓12份、紅棗3份、桂圓3份、赤小豆9份、甘草6份。
本發(fā)明還提供上述中藥益生菌復合制劑的制備方法,步驟如下:
(1)將黃芪、熟地、茯苓、紅棗、桂圓、赤小豆和甘草用水浸泡1-2h,再煎煮2-3次,合并煎煮液,將煎煮液濃縮至固形物含量在30%以上,冷凍干燥,即得中藥組合物;
(2)將步驟(1)制備的中藥組合物與益生菌進行復配,即得中藥益生菌復合制劑。
本發(fā)明的中藥益生菌復合制劑中含有中藥組分,而中藥的配伍講究相須、相使、相畏、相殺、相惡、相反,由于不同的中藥之間存在不同的配伍關系,因此在使用兩味以上中藥時,必須有所選擇,充分發(fā)揮藥物之間相須相使的配伍關系。本發(fā)明的中藥復方中通過將多味中藥進行配伍,藥物之間共同發(fā)揮了促進泌乳的作用,具有明顯的增效作用,充分發(fā)揮了相須相使的配伍關系。
本發(fā)明的有益效果:
(1)本發(fā)明采用益生菌為原料制備的具有促進泌乳功能的益生菌組合物,開發(fā)了益生菌促進乳汁分泌的新用途,具有安全有效的特點,能夠促進益生菌在人體內的增殖,調節(jié)人體腸道菌群、防止產婦便秘、促進食物營養(yǎng)吸收、維持血糖平衡、降低膽固醇、促進乳汁分泌。
(2)本發(fā)明提供的具有促進泌乳功能的中藥益生菌復合制劑,采用中藥提取物和益生菌組合物為原料,通過將中藥與益生菌進行合理配伍,二者起到了協(xié)同促進作用。中藥益生菌復合制劑中,各原料組分是一個有機的整體,缺一不可。發(fā)明人在研發(fā)過程中發(fā)現,減少上述復合制劑中的任何一種原料組分,或以具有相似藥性的原料藥對本發(fā)明中藥組合物的原料組分進行替換,或者對益生菌的組成進行替換,則復合制劑整體的作用效果顯著降低;在本發(fā)明的復合制劑的基礎上再增加其他的原料組分,復合制劑的整體效果并未有明顯的改善,甚至有復合制劑的整體效果降低的情況出現。經試驗驗證,采用本發(fā)明中藥提取物和益生菌組合物制備的中藥益生菌復合制劑,其促進泌乳的功能最為顯著,而且質量穩(wěn)定,功效確切。
具體實施方式
結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明,應該說明的是,下述說明僅是為了解釋本發(fā)明,并不對其內容進行限定。
實施例1:具有促進泌乳功能的益生菌組合物的制備
1材料
1.1種子液體培養(yǎng)基
種子液體培養(yǎng)基:葡萄糖2.0%,檸檬酸銨0.2%,乙酸鈉0.5%,磷酸氫二鉀0.5%,硫酸錳0.02%,硫酸鎂0.05%,蛋白胨1.0%,牛肉膏1.0%,酵母膏0.5%,吐溫-80 0.1%,均為質量百分數,pH6.0,0.1MPa滅菌15min。
1.2固體斜面培養(yǎng)基
固體斜面培養(yǎng)基為1.1種子液體培養(yǎng)基中添加質量分數為1.5%的瓊脂粉。
1.3發(fā)酵培養(yǎng)基
同1.1種子液體培養(yǎng)基。
2方法
2.1菌粉的制備工藝
①菌種:選用植物乳桿菌BLCC2-0126、嗜酸乳桿菌BLCC2-0024、嗜熱鏈球菌BLST;
②菌種的活化:
將其凍干粉菌種分別接種于斜面培養(yǎng)基上,在37℃培養(yǎng)24~48h;
③種子液的培養(yǎng):
分別將培養(yǎng)好的斜面,在無菌條件下用接種環(huán)接兩環(huán)于100mL種子液體培養(yǎng)基中,在37℃條件下,靜置培養(yǎng)16~48h;
④菌體的發(fā)酵:
采用5%的接種量,接種至3L大三角瓶中(裝液量為2.5L),37℃厭氧培養(yǎng)24~48小時,檢測其菌液濃度,菌含量超過10億/毫升,即可作為乳桿菌液體發(fā)酵終止。
⑤將各菌種發(fā)酵液后分別離心,棄上清,菌體沉淀洗滌,離心,棄上清,獲得菌泥。
⑥配制菌粉保護劑,配方為蔗糖含量為8g、脫脂奶粉26g、甘油1mL,蒸餾水100mL,115℃,滅菌15min。
⑦將菌粉保護劑分別和菌泥充分混合,然后將各混合物分別預凍,再進行真空冷凍干燥。
⑧粉碎過篩:將上述益生菌干粉,經超微粉碎后,過80-100目篩。
2.2菌粉計數
利用平板菌落計數法測量益生菌干粉的活菌數。
2.3配料
稱量過篩后的益生菌干粉,按照植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌的活菌數比例為1:1:1的比例進行配料,其中植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌含量均為2×108CFU/g。
2.4混合
將配好的益生菌及輔料充分混勻至色澤均勻一致,無色差,即得到具有泌乳功能的益生菌組合物1。
實施例2:
具體步驟同實施例1,不同之處在于:步驟2.3中配料,其中植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌含量均為2×107CFU/g,嗜熱鏈球菌含量為5×107CFU/g,輔料為脫脂奶粉,得到具有促進泌乳功能的益生菌組合物2。
實施例3:
具體步驟同實施例1,不同之處在于:步驟2.3中配料,其中植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌含量均為2×107CFU/g,嗜熱鏈球菌含量為5×109CFU/g,輔料為脫脂奶粉,得到具有泌乳功能的益生菌組合物3。
試驗例1:
1材料
1.1受試樣品:實施例1制備的益生菌組合物。人體推薦藥效成分劑量為2g/60kg。
1.2實驗動物:SPF級昆明白孕二胎小鼠,雌性,體重40~60g。
2實驗方法
2.1實驗分組:設置陰性空白對照和3個受試樣品劑量組。劑量分別為0.165g/kg·bw、0.33g/kg·bw、0.99g/kg·bw組,分別相當于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍。受試物以超純水配制,空白對照組用超純水灌胃,每組每只0.6ml。
2.2超負荷哺乳模型的建立:孕鼠適應性喂養(yǎng)3~4天后分娩,按照分娩后母鼠體重隨機分為空白對照組和各劑量組,每組10只母鼠,每只母鼠帶養(yǎng)10只仔鼠,微調各窩仔鼠體重使之差異不顯著,每只母鼠及其仔鼠單籠飼養(yǎng)。
2.3受試物給予方式:母鼠分娩后,穩(wěn)定哺乳一段時間,于產后第三天開始給予受試樣品,受試樣品給予時間15天。
2.4測定方法:
2.4.1仔鼠體重:實驗開始時稱量全窩仔鼠初始窩重,以后每天與仔鼠分離前固定時間稱量仔鼠體重,直至實驗結束,計算仔鼠平均日增重。
仔鼠平均增重=每窩仔鼠平均體重-初始平均體重;
2.4.2泌乳量:每天將母鼠與仔鼠隔離5~6h,再合籠后哺乳1h,觀察每窩仔鼠體重變化,計算泌乳量:
泌乳量=哺乳后仔鼠窩重-哺乳前仔鼠窩重;
2.4.3結果判定標準
實驗組在任一個時間點有兩個劑量組仔鼠體重增加與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義,或任兩個時間點仔鼠體重增加與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義;同時相應劑量組任一時間點3天累計泌乳量增加與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義,可判定該受試樣品促進泌乳功能動物實驗結果陽性。
3結果
3.1母鼠泌乳量的變化
統(tǒng)計各組母鼠分娩后第4天至第18天的每天1h泌乳量,結果見表1。與對照組相比,30倍劑量組在第4天、第8天可顯著性地提高母鼠泌乳量(P<0.05);10倍和5倍劑量在第8天、第12天可顯著地增加母鼠泌乳量(P<0.05),其中10倍劑量組在第16天仍能顯著地增加母鼠泌乳量(P<0.05)。
表1不同時間點1h母鼠泌乳量(±s)(單位:g)
由表2可知,母鼠分娩后第4~6天,三天累積泌乳量30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組均顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。
表2累積泌乳量
3.2平均日增重
統(tǒng)計各組仔鼠平均日增重,可以看出30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組在第8、11、14日齡仔鼠平均日增重均顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。
表3平均日增重
4結論
動物實驗結果可見,與空白對照組相比,30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組可使母鼠泌乳量和累積泌乳量顯著性提高(P<0.05),在第8、11、14日齡仔鼠平均日增重均顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。根據保健食品保健功能評價標準,可判斷該受試物促進泌乳功能動物實驗結果陽性。
實施例4:具有促進泌乳功能的中藥益生菌復合制劑的制備
具體方法如下:
(1)中藥組合物的制備:
稱取黃芪12份、熟地12份、茯苓12份、紅棗10份、桂圓肉10份、赤小豆9份、甘草6份,先用清水潤洗一遍,再用8倍體積水浸泡1~2h。
在中藥提取罐中煎煮,水開后繼續(xù)煎煮30min,過濾得到第一濾液;藥渣用8~10倍水進行二次煎煮,水開后繼續(xù)煎煮30min,過濾得到第二濾液與第一濾液混合均勻,通過減壓濃縮至固形物含量為30%以上,得到濃縮液與麥芽糊精以一定比例混合均勻后,進行冷凍干燥。得到冷凍干燥物,粉碎,過100目以上篩,即得中藥組合物。
(2)將中藥組合物與實施例1制備的益生菌組合物進行復配,即得中藥益生菌復合制劑。制備的中藥益生菌復合制劑中,植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌含量均為2×108CFU/g。
實施例5:
具體步驟同實施例4,不同之處在于:制備中藥組合物的原料藥的比例為:黃芪10份、熟地10份、茯苓9份、紅棗8份、桂圓肉8份、赤小豆5份、甘草5份。
實施例6:
具體步驟同實施例4,不同之處在于:制備中藥組合物的原料藥的比例為:黃芪15份、熟地15份、茯苓15份、紅棗12份、桂圓肉12份、赤小豆10份、甘草10份。
試驗例2:
具體步驟同試驗例1,不同之處在于:分組為空白對照組、受試物(實施例4制備的中藥益生菌復合制劑)30倍劑量、受試物10倍劑量、受試物5倍劑量,給藥體積為0.6mL/只)。本發(fā)明人對其促進泌乳動物實驗的結果進行分析。
1、母鼠泌乳量的變化
統(tǒng)計各組母鼠分娩后第4天至第16天的每天1h泌乳量,結果見表4。與對照組相比,30倍劑量組在第4天、第8天可顯著性地提高母鼠泌乳量(P<0.05);10倍劑量在第4、8、12、16天均可顯著地增加母鼠泌乳量(P<0.05);5倍劑量組在第4、8、16天可顯著地增加母鼠泌乳量(P<0.05)。
表4不同時間點1h母鼠泌乳量(±s)(單位:g)
由表5可知,母鼠分娩后第4~6天,三天累積泌乳量30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組均顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。
表5累積泌乳量(單位:g)
2、平均日增重
由表6統(tǒng)計各組仔鼠平均日增重,可以看出30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組在第8、11、17日齡仔鼠平均日增重均顯著性的高于空白對照組(P<0.05),其中10倍劑量組和5倍劑量組仔鼠在第14日齡平均日增重均顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。
表6平均日增重(單位:g)
3、對仔鼠體重變化的影響
表7可以看出,各實驗組未經處理時,仔鼠各實驗組體重沒有顯著差異(P>0.05),即實驗前各處理組仔鼠體重分布均勻。30倍劑量組、10倍劑量組、5倍劑量組在第8、12、16天時,仔鼠體重均顯著性高于空白對照組(P<0.05)。
表7仔鼠體重變化(單位:g)
4、結論
動物實驗結果可見,與空白對照組相比,30倍劑量組、10倍劑量組和5倍劑量組可顯著性的提高母鼠泌乳量和累積泌乳量(P<0.05),在第8、11、17日齡仔鼠平均日增重均顯著性的高于空白對照組(P<0.05),在第14日齡時,10倍劑量組和5倍劑量仔鼠平均日增重顯著性的高于空白對照組(P<0.05)。根據保健食品保健功能評價標準,可判斷該受試物促進泌乳功能動物實驗結果陽性。
試驗例3:臨床試驗
1、材料
1.1受試樣品:受試物(實施例4制備的中藥益生菌復合制劑)。人體推薦藥效成分劑量為每天20g/60kg。
1.2受試人群
1.2.1受試者納入標準:乳母年齡<35歲,單胎,乳量不足,嬰兒吃不飽,母子身體均健康的志愿受試者。
1.2.2排除受試者標準:乳母乳房發(fā)育不正常,有乳腺疾病者;有影響催乳素水平各種因素者;哺乳期再次妊娠者;有不良嗜好(抽煙、喝酒),服用其它有促泌乳藥物者;有產后大出血者;對本受試樣品過敏者;短期內服用與受試功能有關的物品,影響到結果的判斷者。
1.3試驗設計及分組
將100例受試者隨機分入空白對照組和試服組,每組50例,試服組給予受試樣品每次10g,每天2次;空白對照組不給予任何形式樣品或安慰劑。受試樣品給予時間15天。
1.4判定指標
1.4.1乳房脹度判斷標準
A 乳房脹滿、觸之疼痛、有溢奶現象或手擠有奶噴出 2分
B 乳房微脹、觸之微痛、無溢奶現象但手擠有奶噴出 1分
C 乳房不脹、觸之不痛、手擠無奶或滴狀奶 0分
累計服用受試樣品期間(15天)的積分。
有效:試食組與對照組的積分比較,差異有顯著性。
1.4.2泌乳量
于嬰兒上次哺乳后2小時,將乳汁全部擠出,測定泌乳量。分別于試驗開始時和試驗結束時測定一次。計算其試食期間泌乳量的增加值或直接比較泌乳量的差別。
1.4.3乳汁蛋白含量(參見GB5009.5—2010凱氏定氮法)
在試驗結束時,進行一次乳汁中蛋白質的含量測定。
1.5判定標準
試食后,試食組乳房脹度和泌乳量兩項指標自身比試食前明顯增強或增加,試食組兩項指標與對照組比明顯增強或增加,且乳汁蛋白質含量不低于對照組,可判定該受試樣品具有促進泌乳功能的作用。
2結果
2.1受試者一般情況
兩組受試者試用樣品15天后,受試者及其嬰兒情況良好,未見不良反應。
2.2乳房脹度
由表8可見,用t檢驗進行統(tǒng)計處理,乳房脹度15天總積分對照組和試服組比較,差異顯著(P<0.05),即本發(fā)明的中藥和益生菌組合物能夠增加乳房脹度。
表8乳房脹度積分(±s)
2.3對泌乳量的影響
由表9可見,原始數據方差齊,用t檢驗進行統(tǒng)計處理,試食組泌乳量顯著性的高于對照組,差異顯著性(P<0.05),即本發(fā)明的中藥和益生菌組合物能夠增加泌乳量。
表9對泌乳量的影響(±s)(單位:ml)
2.4乳汁蛋白含量
表10乳汁蛋白含量的測定
由表10可見,原始數據進行方差齊性檢驗,符合方差齊的要求,用t檢驗進行統(tǒng)計處理,其試食后乳汁蛋白質含量在對照組和試食組間比較差異無顯著性(P>0.05),本發(fā)明的中藥和益生菌組合物對乳汁中的蛋白含量無影響。
3結論
在本次試服試驗中,試服組食用本發(fā)明中藥和益生菌組合物15天后,能顯著增加乳房脹度,說明經過兩個小時的不如間隔后,能顯著增加乳汁的存儲,顯著增加泌乳量;對乳汁蛋白含量沒有影響,說明泌乳量的增加并不只是增加了乳汁中的水分,而是增加了整體的泌乳量。由此可見,本發(fā)明的中藥和益生菌組合物具有一定的促進泌乳作用。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式,但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制,其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化,均應為等效的置換方式,都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。