對(duì)電子提交的序列表的引用

與本申請(qǐng)一起提交的以ascii文本文件(名稱dpp4-100p1_sequence_listing.txt；大?。?6,741字節(jié)；和創(chuàng)建日期：2014年12月15日)電子提交的序列表的內(nèi)容通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。

發(fā)明背景

二肽基肽酶iv(dpp-4)(也稱為cd26或腺苷脫氨酶結(jié)合蛋白)為脯氨酰寡肽酶家族中的ii型跨膜絲氨酸蛋白酶，其催化來(lái)自在第2位具有脯氨酸或丙氨酸的多肽的n端的n端二肽的水解(酶學(xué)委員會(huì)(ec)號(hào)3.4.14.5(brenda|iubmb))。許多趨化因子和肽激素，包括glp-1、glp-2、胃抑制性多肽(gip)、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽(pacap)和神經(jīng)肽y被dpp-4切割和滅活。參見(jiàn)，例如，yarona.,naiderf.crit.rev.biochem.mol.biol.28,31–81(1993);mentleinr.regulpept.85(1):9-24(1999)。因此，dpp-4通過(guò)其抑制趨化因子和肽激素的能力調(diào)節(jié)葡萄糖代謝、食欲和疼痛調(diào)節(jié)。

除了作為調(diào)節(jié)性蛋白酶的作用，dpp-4還結(jié)合若干分子并誘導(dǎo)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。具體地，dpp-4通過(guò)結(jié)合至包括腺苷脫氨酶(ada)在內(nèi)的若干配體誘導(dǎo)t細(xì)胞共刺激/增殖和淋巴細(xì)胞-上皮細(xì)胞粘附。參見(jiàn)，例如，gines等人,biochem.j.361:203-209(2002)。還已經(jīng)報(bào)道dpp-4增強(qiáng)t-細(xì)胞成熟和遷移、細(xì)胞因子分泌、抗體產(chǎn)生、b細(xì)胞的免疫球蛋白同種型轉(zhuǎn)換，和細(xì)胞毒性t細(xì)胞活化。ohnuma等人frontbiosci.13:2299-310(2008)。

dpp-4為110kda的糖蛋白，由位于染色體2(2q24.3)上的基因編碼(abbott等人immunogenetics.40(5):331-8(1994))，作為由776個(gè)氨基酸組成的同型二聚體起作用。每一單體由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成：α/β水解酶結(jié)構(gòu)域和8-片β-螺旋槳結(jié)構(gòu)域。dpp-4在幾種組織中廣泛表達(dá)，包括肝、肺、腎、上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。heike等人clinexpimmunol.74:431–434(1988)；gorrell等人scandjimmunol.54:249–264(2001)。當(dāng)t細(xì)胞活化時(shí)，dpp-4表達(dá)在靜止t細(xì)胞上上調(diào)。還已經(jīng)觀察到dpp-4的可溶、活性形式，包含大部分的胞外結(jié)構(gòu)域(殘基39-766)，其包括關(guān)鍵催化結(jié)構(gòu)域。ikushimah等人cellimmunol.215(1):106-10(2002)。

dpp-4基因敲除小鼠顯示改善的對(duì)口服葡萄糖負(fù)荷的葡萄糖耐受性、增加的胰島素和glp-1活性、對(duì)飲食誘導(dǎo)的肥胖的抗性和高脂飲食之后增加的胰島素敏感性。marguet等人,procnatlacadsciusa.97(12):6874-9(2000);conarello等人,procnatlacadsciusa.100(11):6825-30(2003)。除了其在代謝病癥和血糖控制中的作用，dpp-4還牽涉控制免疫功能、細(xì)胞遷移、病毒進(jìn)入細(xì)胞、癌癥轉(zhuǎn)移和炎癥。參見(jiàn)，例如，aytac等人,currdrugtargetsimmuneendocrmetaboldisord4(1):11-8(2004)。

最近，dpp-4表達(dá)經(jīng)報(bào)道高度受白細(xì)胞介素-13(il-13)誘導(dǎo)。參見(jiàn)，例如，zhang等人,amjrespircritcaremed189:a4875(2014);shiobara等人,amjrespircritcaremed189:a4239(2014);brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014);2014年1月27日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/931,878，和2014年5月9日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/990,932，對(duì)于所有目的其各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。il-13為114個(gè)氨基酸的細(xì)胞因子，未修飾的分子量大約12kda。mckenzie,a.n.等人jimmunol,1993.150:5436-44;minty,a.等人nature,1993.362:248-50。il-13水平已經(jīng)顯示在許多疾病或病癥中與疾病嚴(yán)重性相關(guān)聯(lián)，包括，但不限于，哮喘、慢性阻塞性肺病、特發(fā)性肺纖維化和特應(yīng)性皮炎。例如，在過(guò)敏性炎癥的哮喘和嚙齒動(dòng)物模型中，提高的il-13水平已經(jīng)報(bào)道與疾病嚴(yán)重性相關(guān)聯(lián)(參見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2012-0052060，2012年3月1日出版，并通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)。

慢性阻塞性肺病(copd)包括具有不同程度慢性支氣管炎、小氣道疾病和肺氣腫的患者群體，特征在于進(jìn)行性不可逆肺功能下降，其對(duì)當(dāng)前基于哮喘的療法響應(yīng)差。zheng等人(jclininvest,2000.106:1081-93)證明在小鼠肺中il-13的過(guò)表達(dá)引起肺氣腫、提高的粘液產(chǎn)生和炎癥，反映人copd的方面。因此跡象為il-13在copd的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，特別是在具有哮喘樣特征的患者中。

il-13也可在炎癥性腸疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用，并且已經(jīng)與纖維化病況例如特發(fā)性肺纖維化(ipf)聯(lián)系在一起。參見(jiàn)，例如，jovani,m.,等人currdrugtargets.2013.12:1444-52;和rafii,r.,等人jthoracdis.2013.1:48-73。

特應(yīng)性皮炎是一種常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病，其常常與其它特應(yīng)性病癥例如過(guò)敏性鼻炎和哮喘相關(guān)(bieber,newenglandjournalofmedicine,2008,358:1483-1494)。il-13mrna的上調(diào)已經(jīng)在亞急性和慢性特應(yīng)性皮炎損傷中觀察到(tazawa等人,arch.dermatol.res.,2004,295:459-464;purwar等人,j.invest.derm.,2006,126,1043–1051;oh等人,jimmunol.,2011,186:7232-42)。

提高的dpp-4水平已經(jīng)在哮喘、copd和ad患者中觀察到(參見(jiàn)，例如，美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/931,878，2014年1月27日提交；和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/990,932，2014年5月9日提交，各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)。另外，在涉及哮喘患者的2b期臨床研究中，在用il-13抗體拮抗劑(tralokinumab)治療的患者中高血清dpp-4水平預(yù)測(cè)提高的響應(yīng)率，將dpp-4鑒定為il-13介導(dǎo)的疾病或病癥，包括il-13介導(dǎo)的肺疾病或病癥(例如，哮喘、ipf或copd)或il-13介導(dǎo)的慢性炎癥性皮膚疾病或病癥(例如，特應(yīng)性皮炎)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志。參見(jiàn)brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014)；和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/931,878，2014年1月27日提交；和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/990,932，2014年5月9日提交，其各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。因此，盡管已知增加的dpp-4水平與某些il-13介導(dǎo)的疾病或病癥相關(guān)聯(lián)并且已知dpp-4血清水平預(yù)測(cè)患者對(duì)抗il-13療法的響應(yīng)，但仍存在對(duì)測(cè)量患者(包括，但不限于，患有il-13介導(dǎo)的疾病或病癥的患者)中dpp-4的量和/或測(cè)定dpp-4水平變化的特異和靈敏的測(cè)定的需求。盡管存在市售可得的可用于測(cè)量患者血清dpp-4水平的試劑，但這些市售可得的試劑或試劑盒依賴于多克隆抗體，其不僅由于批次間差異引入測(cè)定變異，并且/或者不是非常靈敏。因此，仍存在對(duì)特異和靈敏的抗體、試劑和/或免疫測(cè)定的需求，以測(cè)量患者中dpp-4的量和/或測(cè)定dpp-4水平變化。

發(fā)明概述

本公開(kāi)內(nèi)容提供抗二肽基肽酶-4(dpp-4)抗體，其可用在，例如，診斷測(cè)定中以測(cè)定受試者的dpp-4水平。本公開(kāi)內(nèi)容的示例性的抗dpp-4抗體包括：(1)小鼠單克隆抗體m3b7.6，由在用于專利程序目的的關(guān)于微生物保藏的國(guó)際識(shí)別的布達(dá)佩斯條約的規(guī)定下于2015年1月8日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209并分配atcc登錄號(hào)pta-121870的雜交瘤產(chǎn)生；(2)小鼠單克隆抗體m5b7.7，由在用于專利程序目的的關(guān)于微生物保藏的國(guó)際識(shí)別的布達(dá)佩斯條約的規(guī)定下于2015年1月8日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209并分配atcc登錄號(hào)pta-121871的雜交瘤產(chǎn)生；(3)大鼠單克隆抗體r11a2.15，由在用于專利程序目的的關(guān)于微生物保藏的國(guó)際識(shí)別的布達(dá)佩斯條約的規(guī)定下于2015年1月8日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209并分配atcc登錄號(hào)pta-121872的雜交瘤產(chǎn)生；和(4)大鼠單克隆抗體r11a9.11，由在用于專利程序目的的關(guān)于微生物保藏的國(guó)際識(shí)別的布達(dá)佩斯條約的規(guī)定下于2015年1月8日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(atcc),10801universityboulevard,manassas,va.20110-2209并分配atcc登錄號(hào)pta-121873的雜交瘤產(chǎn)生。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或兩種或更多種這樣的抗體，其中所述一種或多種抗體競(jìng)爭(zhēng)性抑制(1)從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6，(2)從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7，(3)從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15，或(4)從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，或其任何組合的結(jié)合和/或結(jié)合與其相同的dpp-4表位。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供結(jié)合dpp-4的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其包含具有三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)，和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供的抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可包含與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供如上所述的抗原結(jié)合抗體片段。在某些方面，所述抗體片段可為fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、fv片段或單鏈抗體分子。

本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供在保藏號(hào)121870下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121873下保藏在atcc的雜交瘤和/或其組合。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供產(chǎn)抗體的細(xì)胞培養(yǎng)物，其包括在保藏號(hào)121870下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121873下保藏在atcc的雜交瘤和/或其組合。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供由如本文所提供的雜交瘤或如本文所提供的產(chǎn)抗體的細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)，進(jìn)一步包含與其融合的異源多肽。例如，在某些方面，所述異源多肽為穩(wěn)定多肽、標(biāo)簽、標(biāo)記或其組合。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)，綴合至異源部分。在某些方面，所述異源部分包括以下一種或多種：肽、蛋白、酶、脂質(zhì)、異源抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記或聚乙二醇(peg)。在某些方面，異源部分為，例如，生物素或釕螯合物。

本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供包含如本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，和/或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的組合物。在某些方面，所述組合物包含至少兩種這樣的抗體的組合。

在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供分離的多核苷酸，其包含編碼如本文所提供的抗體或其亞基、片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物所產(chǎn)生的抗體或其片段，或其亞基、片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的核酸分子。本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供包含如所提供的多核苷酸的載體。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供包含兩種或更多種編碼如本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體或其片段，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)的核酸分子的組合物。在某些方面，所述兩種或更多種核酸分子位于同一載體中。本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供包含位于同一載體中的如所提供的兩種或更多種核酸分子的載體。在某些方面，兩種或更多種核酸分子位于至少兩個(gè)單獨(dú)的載體中。本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供所述兩個(gè)單獨(dú)的載體。

本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供分離的宿主細(xì)胞，其包含提供的載體，或兩個(gè)或更多個(gè)提供的載體。本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供制備如本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗dpp-4抗體或其亞基、片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體，或其亞基、片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)的方法，其中所述方法包括(a)培養(yǎng)所提供的宿主細(xì)胞，和(b)回收抗體、其亞基、片段或衍生物。

在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供用于測(cè)量樣品中的dpp-4水平的試劑盒，其中所述試劑盒包含如本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或由本公開(kāi)內(nèi)容所提供的雜交瘤或細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的抗體，或其片段、變體或衍生物(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15或r11a9.11)。在某些方面，所述試劑盒包含至少兩種這樣的抗體或其片段、變體或衍生物。試劑盒可進(jìn)一步包含固體支持物和/或檢測(cè)試劑。在某些方面，至少兩種抗體或其片段、變體或衍生物的一個(gè)可為捕獲抗體或其片段、變體或衍生物，并且至少兩種抗體或其片段、變體或衍生物的一個(gè)可為檢測(cè)抗體或其片段、變體或衍生物。在某些方面，檢測(cè)抗體可包含可檢測(cè)標(biāo)記，例如，可檢測(cè)標(biāo)記可為生物素，并且試劑盒可包含檢測(cè)試劑例如鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物，或可檢測(cè)標(biāo)記可為釕螯合物。在某些方面：

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；和/或

捕獲抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體可為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

本公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)一步提供用于檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)樣品中的dpp-4水平的免疫測(cè)定，其中所述免疫測(cè)定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中一種抗dpp-4抗體可為競(jìng)爭(zhēng)性抑制從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的結(jié)合和/或結(jié)合與其相同的dpp-4表位的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；并且其中一種抗dpp-4抗體包括競(jìng)爭(zhēng)性抑制從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的結(jié)合和/或結(jié)合與其相同的dpp-4表位的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，所述免疫測(cè)定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中一種抗dpp-4抗體可為包含具有三個(gè)重鏈cdrsvhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的vh和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中所述分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的cdrs相同；并且其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含具有三個(gè)重鏈cdrsvhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的vh和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中所述分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，免疫測(cè)定包括使用至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；并且其中兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種可為包含與從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，免疫測(cè)定可為夾心免疫測(cè)定，其包括使用附著在固體支持物上的第一個(gè)抗dpp-4“捕獲”抗體或其抗原結(jié)合片段，和第二個(gè)抗dpp-4“檢測(cè)”抗體或其抗原結(jié)合片段(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)。例如，免疫測(cè)定可包括將捕獲抗體或其抗原結(jié)合片段附著到固體支持物；在足以允許dpp-4(如果樣品中存在的話)結(jié)合捕獲抗體或其抗原結(jié)合片段的條件下施加檢驗(yàn)樣品或?qū)φ諛悠罚辉谧阋栽试S結(jié)合已經(jīng)結(jié)合到捕獲抗體或其抗原結(jié)合片段的dpp-4的條件下施加檢測(cè)抗體或其抗原結(jié)合片段；和測(cè)量結(jié)合到dpp-4的檢測(cè)抗體或其抗原結(jié)合片段的量。在某些方面，檢測(cè)抗體可包含可檢測(cè)標(biāo)記，例如，可檢測(cè)標(biāo)記可為生物素，并且試劑盒可包含檢測(cè)試劑例如鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物，或可檢測(cè)標(biāo)記可為釕螯合物。

在某些方面，免疫測(cè)定可包括使用捕獲抗體和檢測(cè)抗體，其中：

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；和/或

捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供測(cè)量從受試者獲得的樣品中的dpp-4的量的方法，其中所述方法包括使用提供的免疫測(cè)定或試劑盒，和/或所提供的抗體或其片段、變體或衍生物，或兩種或更多種這樣的抗體(包括，例如，抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和/或r11a9.11)的組合測(cè)定樣品。在某些方面，樣品可為全血、血清、血漿、唾液、尿液、痰、支氣管肺泡灌洗液、肺上皮細(xì)胞或鼻息肉或皮膚的一種或多種。在某些方面，受試者具有選自以下的疾病或病況：il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥、肺疾病或病癥和慢性炎癥性皮膚疾病或病癥。例如，疾病或病況可為哮喘、特應(yīng)性哮喘、未經(jīng)皮質(zhì)類固醇治療的哮喘(corticosteroidnaiveasthma)、慢性哮喘、皮質(zhì)類固醇抵抗性哮喘、皮質(zhì)類固醇難治性哮喘、抽煙引起的哮喘、不受皮質(zhì)類固醇控制的哮喘、特發(fā)性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、特應(yīng)性皮炎(ad)、過(guò)敏性鼻炎、慢性鼻竇炎、皮膚纖維化、過(guò)敏性接觸性皮炎、濕疹和/或銀屑病。在某些方面，樣品可從受試者獲得并且可提交用于測(cè)量樣品中的dpp-4水平。在某些方面，受試者可為哮喘患者，并且從患者獲取的樣品可為血清。

附圖簡(jiǎn)述

圖1：用于rimms方案的引流淋巴結(jié)注射位點(diǎn)。對(duì)人dpp-4特異的小鼠和大鼠單克隆抗體使用多個(gè)位點(diǎn)重復(fù)免疫(rimms)方案(kilpatrick,k.,等人,hybridoma16:381-389(2009))產(chǎn)生。簡(jiǎn)言之，兩只wistar大鼠分別在第0、2、5、7、9和13天用30、15、7、3、3和3μgcd26免疫，至如圖1中所示的引流淋巴結(jié)位點(diǎn)a、b和c。小鼠免疫按照相同的時(shí)間表，但在每一時(shí)間點(diǎn)用一半的抗原量。

圖2a-d：抗dpp-4小鼠和大鼠抗體對(duì)人dpp-4特異，如使用直接結(jié)合elisa所顯示的。針對(duì)人dpp-4(r-dpp-4-his)(a)或人gp130-his(b)的直接結(jié)合elisa使用來(lái)自用人dpp-4免疫的兩只大鼠(r9472和r9473)的免疫前(左側(cè))或第13天檢驗(yàn)-出血(右側(cè))血清。第13天的大鼠血清特異性結(jié)合人dpp-4，而使用免疫前的血清未觀察到特異性結(jié)合。針對(duì)人dpp-4(r-dpp-4-his)(c)或人gp130-his(d)的直接結(jié)合elisa使用來(lái)自用人dpp-4免疫的5只小鼠(ms9447、ms9448、ms9449、ms9450和ms9451)的免疫前(左側(cè))或第13天檢驗(yàn)-出血(右側(cè))血清。第13天的小鼠血清特異性結(jié)合人dpp-4，而使用免疫前的血清未觀察到特異性結(jié)合。

圖3a-b：在免疫測(cè)定中使用m3b7.6抗體(a)或m5b7.7(b)作為捕獲抗體檢測(cè)人dpp-4。a.在夾心elisa測(cè)定中，將dpp-4加入pbs或1%正常人血清(nhs)中，使用m3b7.6作為捕獲抗體，r11a2.15、r11a9.11或?qū)φ湛贵wr222113(r&dsystemscatalogno.mab1180)作為檢測(cè)抗體。在夾心elisa測(cè)定中，m3b7.6+r11a2.15或m3b7.6+r11a9.11在測(cè)量人dpp-4中提供最好的靈敏度。b.在夾心elisa測(cè)定中，將dpp-4加入pbs或1%正常人血清(nhs)中，使用m5b7.7作為捕獲抗體，r11a2.15、r11a9.11或?qū)φ湛贵wr222113(r&dsystemscatalogno.mab1180)作為檢測(cè)抗體。在夾心elisa測(cè)定中，m5b7.7+r11a2.15或m5b7.7+r11a9.11在測(cè)量人dpp-4中提供最好的靈敏度。這些結(jié)果，結(jié)合圖2中報(bào)告的結(jié)果，證明抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11檢測(cè)內(nèi)源和重組人dpp-4二者。另外，與檢測(cè)dpp-4的抗體m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11相比，市售可得的抗體(r222113)在這些免疫測(cè)定中未能檢測(cè)到dpp-4。

圖4a-e：小鼠單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7互相競(jìng)爭(zhēng)，而大鼠單克隆抗體r11a2.15和r11a9.11互相競(jìng)爭(zhēng)。a.用于測(cè)定如圖4b-e中所示的m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11的相對(duì)結(jié)合特異性和競(jìng)爭(zhēng)概況的octet測(cè)定的示意圖。簡(jiǎn)言之，首先將檢驗(yàn)抗體生物素化，然后在鏈霉親和素生物傳感器上在200μl中以20μg/ml的濃度捕獲5min。生物傳感器然后用200μlpbs緩沖液洗滌1min，然后用10μg/ml重組人dpp-4孵育5min，并用200μlpbs緩沖液洗滌1min。將競(jìng)爭(zhēng)抗體與檢驗(yàn)抗體以1:1比率和各自20μg/ml的終濃度混合并以200μl裝載到生物傳感器上5min。顯示額外結(jié)合檢驗(yàn)抗體的競(jìng)爭(zhēng)抗體被認(rèn)為具有不同表位。否則其被認(rèn)為是共享相同表位。b.使用m3b7.6(a)作為檢驗(yàn)抗體的octet測(cè)定結(jié)果。m5b7.7(b)顯示與m3b7.6(a)相同的結(jié)合概況，而r11a2.15(c)和r11a9.11(d)顯示與m3b7.6(a)不同的結(jié)合概況?；谶@些結(jié)果，抗體m3b7.6和m5b7.7共享相同或重疊的表位。c.使用m5b7.7(b)作為檢驗(yàn)抗體的octet測(cè)定結(jié)果。m3b7.6(a)顯示與m5b7.7(b)相同的結(jié)合概況，而r11a2.15(c)和r11a9.11(d)顯示與m5b7.7(b)不同的結(jié)合概況?；谶@些結(jié)果，抗體m5b7.7和m3b7.6共享相同或重疊的表位。d.使用r11a2.15(c)作為檢驗(yàn)抗體的octet測(cè)定結(jié)果。r11a9.11(d)顯示與r11a2.15(c)相同的結(jié)合概況，而m3b7.6(a)和m5b7.7(b)顯示與r11a2.15(c)不同的結(jié)合概況。基于這些結(jié)果，抗體r11a2.15和r11a9.11共享相同或重疊的表位。e.使用r11a9.11(d)作為檢驗(yàn)抗體的octet測(cè)定結(jié)果。r11a2.15(c)顯示與r11a9.11(d)相同的結(jié)合概況，而m3b7.6(a)和m5b7.7(b)顯示與r11a9.11(d)不同的結(jié)合概況。基于這些結(jié)果，抗體r11a9.11和r11a2.15共享相同或重疊的表位。

發(fā)明詳述

本公開(kāi)內(nèi)容提供抗dpp-4單克隆抗體、包含一種或多種這些抗體的測(cè)定試劑盒，和使用一種或多種這些抗體用于檢測(cè)和測(cè)量獲自人類患者的樣品中的dpp-4水平的穩(wěn)健、靈敏和特異的免疫測(cè)定。

在本說(shuō)明書(shū)和所附的權(quán)利要求中，單數(shù)形式“a”、“an”和“the”包括復(fù)數(shù)，除非上下文另有清楚指示。術(shù)語(yǔ)“a”(或“an”)，以及術(shù)語(yǔ)“一個(gè)或多個(gè)”和“至少一個(gè)”在本文中可互換使用。

此外，本文中所使用的“和/或”理解為兩個(gè)指定特征或組分各自的具體公開(kāi)內(nèi)容，具有或不具有另一特征或組分。因此，如在本文中在短語(yǔ)例如“a和/或b”中使用的，術(shù)語(yǔ)“和/或”意在包括“a和b”、“a或b”、“a”(單獨(dú)的)和“b”(單獨(dú)的)。同樣，如在短語(yǔ)例如“a、b和/c”中使用的，術(shù)語(yǔ)“和/或”意在涵蓋每一下列方面：a、b和c；a、b或c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(單獨(dú)的)；b(單獨(dú)的)和c(單獨(dú)的)。

無(wú)論哪一方面在本文中用語(yǔ)言“包括”描述，也提供以“由……組成”和/或“基本由……組成”描述的其它類似方面。

如貫穿說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求與數(shù)值相連使用的，術(shù)語(yǔ)“約”表示本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉和可接受的準(zhǔn)確度區(qū)間。一般而言，這樣的準(zhǔn)確度區(qū)間為±10%。

除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本公開(kāi)內(nèi)容相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。例如，concisedictionaryofbiomedicineandmolecularbiology(生物醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)簡(jiǎn)明詞典),juo,pei-show,第2版,2002,crcpress;thedictionaryofcellandmolecularbiology(細(xì)胞和分子生物學(xué)詞典),第3版,1999,academicpress;和oxforddictionaryofbiochemistryandmolecularbiology(生物化學(xué)和分子生物學(xué)牛津詞典),2000年修訂,oxforduniversitypress,為技術(shù)人員提供本公開(kāi)內(nèi)容中使用的許多術(shù)語(yǔ)的通用詞典。

單位、前綴和符號(hào)以其systèmeinternationaldeunites(si)接受的形式表示。數(shù)值范圍包括定義范圍的數(shù)字。除非另有說(shuō)明，氨基酸序列從左至右以氨基至羧基定向書(shū)寫。本文提供的標(biāo)題并非對(duì)公開(kāi)內(nèi)容各方面的限制，其可作為整體參考說(shuō)明書(shū)。相應(yīng)地，緊接下面定義的術(shù)語(yǔ)通過(guò)以其整體參考說(shuō)明書(shū)更完整定義。

“分離”的物質(zhì)、組合物、實(shí)體和/或物質(zhì)、組合物或?qū)嶓w的任何組合，或其任何語(yǔ)法變體，例如，分離的生物學(xué)材料，為不在其天然環(huán)境中的物質(zhì)。不需要特定的純化水平。例如，分離抗體為不在其天然或自然環(huán)境中產(chǎn)生或不位于其天然或自然環(huán)境中的抗體。重組產(chǎn)生的生物學(xué)材料被認(rèn)為是如本文所公開(kāi)的分離的，在非天然細(xì)胞例如雜交瘤中產(chǎn)生的材料同樣如此。物質(zhì)，例如，生物學(xué)材料，如果已經(jīng)通過(guò)任何合適的技術(shù)分離、分級(jí)或部分或基本上純化，也認(rèn)為是“分離的”。在某些方面，分離的物質(zhì)，例如，分離的生物學(xué)材料，可為“非天然存在的”。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“非天然存在的”物質(zhì)、組合物、實(shí)體和/或物質(zhì)、組合物或?qū)嶓w的任何組合，或其任何語(yǔ)法變體是一種條件術(shù)語(yǔ)，其明確排除，但僅排除，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很好地理解為“天然存在的”或由法官或行政機(jī)構(gòu)例如美國(guó)專利商標(biāo)局(unitedstatespatentandtrademarkoffice)或司法機(jī)構(gòu)確定或解釋為在任何時(shí)間或可能在任何時(shí)間“天然存在”的物質(zhì)、組合物、實(shí)體和/或物質(zhì)、組合物或?qū)嶓w的任何組合的那些形式。例如，術(shù)語(yǔ)“非天然存在的抗體”明確排除天然存在的那些抗體，例如，將會(huì)天然存在于暴露于正?？乖碳きh(huán)境的小鼠的免疫系統(tǒng)中的抗體，或由行政機(jī)構(gòu)，例如美國(guó)專利商標(biāo)局，或司法機(jī)構(gòu)，例如聯(lián)邦法院，最終確定為“天然存在的”抗體。

“多核苷酸”或“核酸”，如本文中可互換使用的，指任何長(zhǎng)度的核苷酸聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或堿基，和/或其類似物，或可由dna或rna聚合酶引入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含修飾的核苷酸，例如，甲基化的核苷酸和其類似物。前述描述適用于本文提及的所有多核苷酸，包括rna和dna。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”指基因產(chǎn)生生化物質(zhì)，例如本文所提供的轉(zhuǎn)運(yùn)體分子的過(guò)程。該過(guò)程包括基因在細(xì)胞中功能存在的任何表現(xiàn)，包括，但不限于，基因敲減以及瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá)二者。其包括但不限于基因轉(zhuǎn)錄為一個(gè)或多個(gè)mrnas，和這樣的mrnas翻譯為一個(gè)或多個(gè)多肽。如果終產(chǎn)物為生化物質(zhì)，表達(dá)包括產(chǎn)生該生化物質(zhì)或任何前體。

“表達(dá)產(chǎn)物”可為核酸，例如基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的信使rna，或多肽。本文所描述的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)一步包括具有轉(zhuǎn)錄后修飾例如多腺苷酸化的核酸，或具有翻譯后修飾例如甲基化、糖基化、添加脂質(zhì)、與其它蛋白亞基締合、蛋白水解切割等的多肽。

術(shù)語(yǔ)“載體”或“表達(dá)載體”在本文中用于指用作媒介以引入宿主細(xì)胞和在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的表達(dá)產(chǎn)物的載體。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的，這樣的載體可容易地選自質(zhì)粒、噬菌體、病毒和反轉(zhuǎn)錄病毒。一般而言，載體可包含選擇標(biāo)志、適當(dāng)?shù)南拗莆稽c(diǎn)以幫助克隆特定核酸和進(jìn)入真核或原核細(xì)胞和/或在真核或原核細(xì)胞中復(fù)制的能力。載體的實(shí)例包括，但不限于，病毒載體、裸露dna或rna表達(dá)載體、質(zhì)粒、粘?；蚴删w載體、與陽(yáng)離子縮合劑締合的dna或rna表達(dá)載體、包裹在脂質(zhì)體中的dna或rna表達(dá)載體，和某些真核細(xì)胞，例如生產(chǎn)細(xì)胞。

術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”指內(nèi)含使用重組dna技術(shù)構(gòu)建的并且編碼至少一個(gè)表達(dá)產(chǎn)物的載體的細(xì)胞。在描述從重組宿主分離表達(dá)產(chǎn)物的過(guò)程中，除非另有清楚說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞”和“細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換使用，指表達(dá)產(chǎn)物的源，即從“細(xì)胞”回收表達(dá)產(chǎn)物意指從離心下來(lái)的全細(xì)胞回收，或從包含培養(yǎng)基和懸浮細(xì)胞二者的細(xì)胞培養(yǎng)物回收。

術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可互換使用，指任何長(zhǎng)度的氨基酸聚合物。聚合物可為線性或分支的，其可包含修飾的氨基酸，并且非氨基酸可使其中斷。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋已經(jīng)天然或干預(yù)修飾的氨基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂質(zhì)化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修飾，例如與標(biāo)記元件綴合。定義中還包括，例如，包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸類似物(包括，例如，非天然氨基酸等)以及本領(lǐng)域已知的其它修飾的多肽。應(yīng)理解，由于本公開(kāi)內(nèi)容的多肽基于抗體，在某些實(shí)施方案中，多肽可作為單鏈或締合鏈存在。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“dpp-4”指由dpp-4基因(cdna:seqidno:7)編碼的二肽基肽酶iv蛋白(ec3.4.14.5;uniprot:p27487(膜結(jié)合形式：seqidno:5；可溶形式：seqidno:6))。dpp-4也稱為dpp-iv、腺苷脫氨酶復(fù)合蛋白2或cd26(分化簇26)。dpp-4與吸引素、fap、dpp8和dpp9有關(guān)。dpp-4為高度保守的多功能ii型跨膜糖蛋白，其存在于循環(huán)中(血漿)和幾種細(xì)胞類型表面上，包括上皮、內(nèi)皮和淋巴細(xì)胞。dpp-4為絲氨酸蛋白酶家族的部分，牽涉t細(xì)胞共刺激、趨化因子生物學(xué)、ii型糖尿病和腫瘤生物學(xué)(zhong等人,atherosclerosis2013;226:305-314)。dpp-4的內(nèi)源底物包括廣泛不同的含脯氨酸肽，例如生長(zhǎng)因子、趨化因子、神經(jīng)肽和血管活性肽(gorrell,m.,clin.sci.108,277-292,2005;mcintosh,c.h.s.,等人int.j.biochem.cellbiol.38,860-872,2006)。giovannini-chami提示了dpp-4在炎癥性呼吸疾病如哮喘中的作用(giovannini-chami等人,europeanrespiratoryjournal.2012may;39(5):1197-205)，其發(fā)現(xiàn)具有塵螨過(guò)敏性鼻炎的兒童的鼻上皮中提高的dpp-4轉(zhuǎn)錄(和其它th2標(biāo)記基因)與不受控的哮喘相關(guān)。術(shù)語(yǔ)dpp-4也包括其片段、變體(例如，本領(lǐng)域已知的k1r、v7i、s437i、t557i、d663e變體)和衍生物(例如，dpp-4蛋白的糖基化或無(wú)糖基化蛋白形式，或該蛋白的其它化學(xué)修飾形式)。

術(shù)語(yǔ)“水平”或“量”，例如，如在“dpp-4水平”或“dpp-4的量”中，指使用用于檢測(cè)生物樣品中dpp-4(蛋白表達(dá))的存在或表達(dá)的分析方法做出的測(cè)量，其指示生物樣品中dpp-4的或dpp-4對(duì)應(yīng)的存在、不存在、絕對(duì)量或濃度、相對(duì)量或濃度、滴度、表達(dá)水平、測(cè)量水平的比率等。“值”或“水平”的準(zhǔn)確性質(zhì)取決于用以檢測(cè)dpp-4的具體分析方法(例如，如本文中所提供的免疫測(cè)定)的具體設(shè)計(jì)和元件。參見(jiàn)，例如，u.s.2010/00221752。

如本文關(guān)于dpp-4所使用的，術(shù)語(yǔ)“提高的dpp-4”、“高dpp-4”、“提高的dpp-4水平”或“高dpp-4水平”指比正常水平或范圍高的生物樣品(例如，血清)中的水平。dpp-4的正常水平或范圍根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐定義。因此，可將在特定生物樣品中測(cè)量的水平與相似正常樣品中測(cè)定的水平或水平范圍比較。當(dāng)dpp-4在檢驗(yàn)樣品中以比正常樣品中更高的水平或范圍存在時(shí)，dpp-4的水平稱為提高的。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“抗體”(或其片段、變體或衍生物)指在b細(xì)胞產(chǎn)生的典型抗體的背景下，至少能夠結(jié)合抗原的最小抗體部分，例如，至少重鏈的可變結(jié)構(gòu)域(vh)和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(vl)。脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中基本的抗體結(jié)構(gòu)已相對(duì)較好地理解。參見(jiàn)，例如，harlow等人,antibodies:alaboratorymanual(抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)),(coldspringharborlaboratorypress,第2版.1988)。除非另外指出，抗體“片段”、“變體”或“衍生物”指抗原結(jié)合“片段”、“變體”或“衍生物”。

當(dāng)關(guān)于如本文所公開(kāi)的抗體時(shí)，術(shù)語(yǔ)“片段”、“變體”、“衍生物”和“類似物”可包括保留參考抗體的至少一些活性，例如抗原結(jié)合活性，但結(jié)構(gòu)上不同的任何抗體?？贵w的片段包括，例如，fab、fab'和f(ab')2、fd、fvs、單鏈fvs(scfv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的fvs(sdfv)片段。變體包括如上所述的片段，并且還包括由于氨基酸置換、缺失或插入引起的具有改變的氨基酸序列(例如，在可變結(jié)構(gòu)域中)的抗體。變體可自發(fā)發(fā)生或有意構(gòu)建。有意構(gòu)建的變體可使用本領(lǐng)域已知的突變技術(shù)產(chǎn)生。變體抗體可包括保守或非保守氨基酸置換、缺失或插入。變化僅受抗體保留參考抗體功能的約束限制，例如，與參考抗體結(jié)合相同表位，或競(jìng)爭(zhēng)性抑制參考抗體。衍生物為已經(jīng)改變以便呈現(xiàn)天然抗體上不存在的額外特征的抗體。實(shí)例包括包含抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的融合蛋白或綴合的抗體?！把苌摹笨贵w可還包含通過(guò)功能側(cè)基反應(yīng)化學(xué)衍生的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。“衍生物”還包括包含一個(gè)或多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或合成的20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的氨基酸衍生物的那些抗體。例如，4-羥脯氨酸可置換脯氨酸；5-羥賴氨酸可置換賴氨酸，3-甲基組氨酸可置換組氨酸；高絲氨酸可置換絲氨酸；和鳥(niǎo)氨酸可置換賴氨酸。

輕鏈和重鏈二者均分為結(jié)構(gòu)和功能同源區(qū)。術(shù)語(yǔ)“恒定”和“可變”功能上使用。在這方面，將會(huì)理解輕鏈(vl)和重鏈(vh)部分二者的可變結(jié)構(gòu)域決定抗原識(shí)別和特異性。相反，輕鏈(cl)和重鏈(ch1、ch2或ch3)的恒定結(jié)構(gòu)域賦予重要的生物學(xué)性質(zhì)，例如分泌、經(jīng)胎盤遷移、fc受體結(jié)合、互補(bǔ)結(jié)合等。

如上文所指示的，可變區(qū)允許結(jié)合分子選擇性識(shí)別和特異性結(jié)合抗原上的表位。即，抗體的vl結(jié)構(gòu)域和vh結(jié)構(gòu)域，或互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)子集，聯(lián)合形成定義三維抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變區(qū)。該四元結(jié)合分子結(jié)構(gòu)形成在y的每一臂的末端存在的抗原結(jié)合位點(diǎn)。更具體地，抗原結(jié)合位點(diǎn)由每一vh和vl鏈上的三個(gè)cdrs定義。

在抗體中，每一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中存在的6個(gè)“互補(bǔ)決定區(qū)”或“cdrs”為短的非連續(xù)的氨基酸序列，隨著抗體在水性環(huán)境中呈現(xiàn)其三維構(gòu)象，其特別定位以形成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域中的剩余氨基酸，稱為“框架”區(qū)，顯示更少的分子間可變性?？蚣軈^(qū)主要采用β折疊構(gòu)象并且cdrs形成環(huán)，其連接β折疊結(jié)構(gòu)，并且在一些情況下形成β折疊結(jié)構(gòu)的一部分。因此，框架區(qū)作用于形成提供通過(guò)鏈間非共價(jià)相互作用以正確定向放置cdrs的支架。通過(guò)放置的cdrs形成的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域定義與免疫反應(yīng)性抗原上的表位互補(bǔ)的表面。該互補(bǔ)表面促進(jìn)抗體與其同源表位的非共價(jià)結(jié)合。對(duì)于任何給定的重鏈或輕鏈可變區(qū)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地鑒定分別包含cdrs和框架區(qū)的氨基酸，因?yàn)槠湟驯痪_定義(參見(jiàn)，"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫相關(guān)蛋白序列),"kabat,e.,等人,u.s.departmentofhealthandhumanservices,(1983);以及chothia和lesk,j.mol.biol.,196:901-917(1987)，通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)。

在其中術(shù)語(yǔ)的兩個(gè)或更多個(gè)定義在本領(lǐng)域中使用和/或接受的情況下，如本文所使用的術(shù)語(yǔ)的定義意在包括所有這樣的含義，除非明確說(shuō)明相反。一個(gè)具體實(shí)例為使用術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”(“cdr”)描述重鏈和輕鏈多肽二者的可變區(qū)中存在的非連續(xù)抗原結(jié)合位點(diǎn)。該特定區(qū)域已經(jīng)由kabat等人,u.s.dept.ofhealthandhumanservices,"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫相關(guān)蛋白序列)"(1983)和由chothia等人,j.mol.biol.196:901-917(1987)描述，其通過(guò)引用結(jié)合到本文中，其中該定義包括當(dāng)相互比較時(shí)氨基酸殘基的重疊或子集。雖然如此，任一定義指抗體或其變體的cdr的應(yīng)用意在在如本文所定義和使用的術(shù)語(yǔ)的范圍中。

抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物包括，但不限于，多克隆、單克隆、人、人源化或嵌合抗體，單鏈抗體，表位結(jié)合片段，例如fab、fab'和f(ab')2，fd、fvs、單鏈fvs(scfv)、單鏈抗體、二硫鍵連接的fvs(sdfv)、包含vl或vh結(jié)構(gòu)域的片段、fab表達(dá)文庫(kù)產(chǎn)生的片段。scfv分子為本領(lǐng)域所已知并且在，例如，美國(guó)專利5,892,019中描述。本公開(kāi)內(nèi)容涵蓋的免疫球蛋白或抗體分子可為任何類型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、種類(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亞類的免疫球蛋白分子。

“特異性結(jié)合”一般指抗體或其片段、變體或衍生物經(jīng)由其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合表位，并且結(jié)合需要抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和表位之間的一些互補(bǔ)性。根據(jù)該定義，當(dāng)經(jīng)由其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合表位比結(jié)合隨機(jī)不相關(guān)的表位更容易時(shí)，抗體被稱為“特異性結(jié)合”表位。

如果抗體或其片段、變體或衍生物優(yōu)先結(jié)合表位至其在某種程度上阻斷參考抗體或抗原結(jié)合片段與表位結(jié)合的程度，那么稱其為競(jìng)爭(zhēng)性抑制參考抗體或抗原結(jié)合片段與給定表位結(jié)合。競(jìng)爭(zhēng)性抑制可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法測(cè)定，例如，競(jìng)爭(zhēng)elisa測(cè)定。結(jié)合分子可稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制參考抗體或抗原結(jié)合片段與給定表位結(jié)合至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。

本文所公開(kāi)的抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物可依據(jù)其識(shí)別或特異性結(jié)合的抗原的表位或部分，例如靶多糖描述或定義。例如，與本公開(kāi)內(nèi)容中提供的抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性相互作用的人dpp-4的部分為“表位”。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“il-13介導(dǎo)的疾病或病癥”指在具有病癥的受試者中異常il-13水平(單獨(dú)或與其它介質(zhì)一起)引起、惡化、相關(guān)或延長(zhǎng)的任何病理學(xué)。il-13介導(dǎo)的疾病或病癥的非限制性實(shí)例包括哮喘、特發(fā)性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、特應(yīng)性皮炎(ad)、過(guò)敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“肺疾病或病癥”指至少部分影響肺或呼吸系統(tǒng)的任何病理學(xué)。非限制性實(shí)例包括哮喘、特應(yīng)性哮喘、未經(jīng)皮質(zhì)類固醇治療的哮喘、慢性哮喘、皮質(zhì)類固醇抵抗性哮喘、皮質(zhì)類固醇難治性哮喘、抽煙引起的哮喘、不受皮質(zhì)類固醇控制的哮喘、ipf、copd、過(guò)敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。在某些方面，肺疾病或病癥為il-13介導(dǎo)的。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“慢性炎癥性皮膚疾病或病癥”指至少部分影響皮膚的任何病理學(xué)。非限制性實(shí)例包括特應(yīng)性皮炎、皮膚纖維化、過(guò)敏性接觸性皮炎、濕疹或銀屑病。在某些方面，慢性炎癥性皮膚疾病或病癥為il-13介導(dǎo)的。

術(shù)語(yǔ)“哮喘”指作為可逆的氣道阻塞和/或支氣管高反應(yīng)性存在的疾病，在一些情況下與潛在的炎癥有關(guān)。哮喘的實(shí)例包括過(guò)敏性哮喘、特應(yīng)性哮喘、未經(jīng)皮質(zhì)類固醇治療的哮喘、慢性哮喘、皮質(zhì)類固醇抵抗性哮喘、皮質(zhì)類固醇難治性哮喘、抽煙引起的哮喘、不受皮質(zhì)類固醇控制的哮喘和如，例如，expertpanelreport3:guidelinesforthediagnosisandmanagementofasthma,nationalasthmaeducationandpreventionprogram(2007)("naeppguidelines")(通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)中所提及的其它哮喘。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“copd”指慢性阻塞性肺病。術(shù)語(yǔ)“copd”包括兩種主要病況：肺氣腫和慢性阻塞性支氣管炎。

術(shù)語(yǔ)“特發(fā)性肺纖維化”(ipf)指以肺的進(jìn)展性瘢痕或纖維化為特征的疾病。其為特定類型的間質(zhì)性肺病，其中肺泡逐漸被纖維組織替代。伴隨ipf，進(jìn)展性瘢痕形成導(dǎo)致正常薄和柔韌的組織增厚和變得堅(jiān)硬，使得肺更難擴(kuò)張，防止氧容易地進(jìn)入血流。參見(jiàn)，例如，am.j.respir.crit.caremed.2000.161:646-664。

術(shù)語(yǔ)“潰瘍性結(jié)腸炎”(uc)指影響結(jié)腸直腸的胃腸(gi)道的炎癥性病癥，包括特征性潰瘍或開(kāi)放性潰瘍。uc為間歇性疾病，具有惡化的癥狀周期和相對(duì)無(wú)癥狀的周期。活動(dòng)疾病的癥狀包括長(zhǎng)期(數(shù)周)持續(xù)的混有血液的恒定腹瀉、體重減輕、從gi道慢性失血、貧血、腹痛和輕微不適至痛苦的腸運(yùn)動(dòng)或伴隨腸運(yùn)動(dòng)的痛苦的腹部絞痛。參見(jiàn)，例如，danese,等人nengljmed.2011365(18):1713-25。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“特應(yīng)性皮炎”指慢性炎癥性、復(fù)發(fā)性、非接觸傳染的和發(fā)癢的皮膚病癥，其常常與其它特應(yīng)性疾病例如過(guò)敏性鼻炎和哮喘相關(guān)(bieber,newenglandjournalofmedicine,2008,358:1483-1494)。術(shù)語(yǔ)“特應(yīng)性皮炎”等于“神經(jīng)性皮炎”、“特應(yīng)性濕疹”或“內(nèi)源性濕疹”。特異性皮炎的具體形式，從其發(fā)生的位置或從其出現(xiàn)或從引起其的應(yīng)激因素得名，根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容也被術(shù)語(yǔ)“特應(yīng)性皮炎”包括。這些包括，但不限于，屈側(cè)性濕疹(eczemaflexurarum)、eczemamulluscatum、eczemaverrucatum、種痘后濕疹、eczemadyskoides、dyshydroticeczema、微生物性濕疹、錢幣狀濕疹、seborrhobiceczema和其它形式的濕疹；口周皮炎和眶周皮炎。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)特應(yīng)性皮炎還包括頻繁發(fā)生的細(xì)菌二次感染(例如由于例如金黃色葡萄球菌感染引起的那些)、膿皮病例如接觸性膿皰病及其衍生病，以及毛囊性須瘡或病毒二次感染。il-13牽涉疾病的發(fā)病機(jī)制并且是重要的體內(nèi)誘導(dǎo)物。參見(jiàn)，例如，oh等人,j.immunol.186:7232-42(2011);tazawa等人,arch.dermatol.res.295:459-464(2004);metwally等人egyptj.immunol.11:171-7(2004)。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“受試者”或“患者”指任何受試者，特別是哺乳動(dòng)物受試者，包括任何人類或非人動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“非人動(dòng)物”包括所有脊椎動(dòng)物，例如，哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物，例如，非人靈長(zhǎng)類、綿羊、狗、貓、馬、牛、熊、雞、兩棲類和爬行類等。

在本公開(kāi)內(nèi)容的一些方面，受試者為幼稚受試者。幼稚受試者為尚未給予治療，例如治療劑的受試者。在一些方面，幼稚受試者在診斷為具有il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥，例如哮喘、ifp、copd、ad或uc之前尚未用治療劑治療。在另一個(gè)方面，受試者在診斷為具有il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥之前已經(jīng)接受治療和/或一個(gè)或多個(gè)劑量的治療劑(例如，能夠調(diào)整與il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥、肺疾病或病癥、慢性炎癥性皮膚疾病或病癥或炎癥性腸疾病或病癥有關(guān)的炎性應(yīng)答的治療劑)。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“il-13拮抗劑”指可影響il-13在體外或體內(nèi)的表達(dá)、活性或半衰期，或具有il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥的受試者中il-13引起或惡化的癥狀、病理學(xué)或后遺癥的任何藥劑。il-13拮抗劑可為如下定義的任何“治療劑”，其可直接或間接抑制、減少或中和il-13活性，抑制或減少il-13表達(dá)、減少il-13半衰期，或可防止由于il-13引起的癥狀的惡化。在某些方面，il-13拮抗劑為抗il-13單克隆抗體，例如，tralokinumab(seqidnos3和4)，或2012年3月1日出版的美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2012-0052060(通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)中描述的其它抗il-13單克隆抗體。在其它方面，il-13拮抗劑包括，但不限于：(a)抗人il-13抗體，例如，來(lái)金珠單抗(lebrikizumab)(seqidnos1和2)(milr1444a/rg3637,roche/genentech)、abt-308(abbott)、gsk679586(glaxosmithkline)或qax576(novartis)；(b)抗人il-13rαl抗體，例如，merckmk6105；(c)il-13-毒素綴合物，例如il-13-pe38qqr(neopharm,inc.)；(d)il-4突變蛋白aerovant?(aerovance,inc.)；(e)抗il-4rα抗體例如dupilumab/regn668(regeneron)；(f)定向于il-4rα的雙鏈寡核苷酸例如air645(isis)；或(g)il-4/il-13雙特異性抗體例如gsk2434735(glaxosmithkline)。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療劑”指給予受試者以產(chǎn)生期需的，通常有益的效果的任何治療活性物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)治療劑包括，例如，典型的低分子量治療劑，通常稱為小分子藥物，和生物制品，包括但不限于：抗體或其活性片段、肽、脂質(zhì)、蛋白藥物、蛋白綴合物藥物、酶、寡核苷酸、核酶、遺傳物質(zhì)、朊病毒、病毒、細(xì)菌和真核細(xì)胞。治療劑也可為前藥，當(dāng)給予受試者時(shí)其代謝為期需的治療活性物質(zhì)。在一些方面，治療劑為預(yù)防劑。另外，治療劑可為藥學(xué)上配制的。治療劑也可為放射性同位素或通過(guò)一些其它形式的能量例如光或超聲能量，或通過(guò)可全身給予的其它循環(huán)分子活化的藥劑。

如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“樣品”包括從受試者獲得的任何生物學(xué)流體或組織，例如全血、血清、肌肉、唾液。樣品包括任何生物學(xué)流體或組織，例如全血、血清、肌肉、唾液、尿液、滑液、骨髓、腦脊液、鼻分泌物、痰、羊水、支氣管肺泡灌洗液、肺組織、外周血單核細(xì)胞、總白血細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞、脾細(xì)胞、扁桃體細(xì)胞或皮膚。在一些特定方面，樣品為血液或其級(jí)分、肌肉、皮膚或其組合。樣品可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何手段獲得。

為了應(yīng)用本公開(kāi)內(nèi)容的方法和系統(tǒng)，來(lái)自患者的樣品可在任何時(shí)間獲得。在一些情況下，連續(xù)的樣品可在治療開(kāi)始后或治療停止后從患者獲得。樣品可，例如，由醫(yī)療提供者(例如，醫(yī)生)或醫(yī)療福利提供者要求，通過(guò)相同或不同的醫(yī)療提供者(例如，護(hù)士、醫(yī)院)或臨床實(shí)驗(yàn)室獲得和/或處理，并且處理后，結(jié)果可轉(zhuǎn)發(fā)到又一個(gè)醫(yī)療提供者、醫(yī)療福利提供者或患者。相似地，測(cè)量/測(cè)定一個(gè)或多個(gè)分?jǐn)?shù)、分?jǐn)?shù)之間比較、評(píng)估分?jǐn)?shù)和治療決定可由一個(gè)或多個(gè)醫(yī)療提供者、醫(yī)療福利提供者和/或臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“醫(yī)療提供者”指直接交互和管理活受試者，例如人類患者的個(gè)體或機(jī)構(gòu)。醫(yī)療提供者的非限制性實(shí)例包括醫(yī)生、護(hù)士、技術(shù)人員、治療者、藥劑師、咨詢者、替代醫(yī)學(xué)實(shí)踐者、醫(yī)療設(shè)施、醫(yī)生辦公室、醫(yī)院、急診室、診所、急診中心、替代醫(yī)學(xué)門診/設(shè)施和提供與全部或任何部分患者健康狀態(tài)有關(guān)的一般和/或?qū)ｉT治療、評(píng)估、維護(hù)、療法、藥物和/或勸告(包括但不限于一般藥物、專門藥物、手術(shù)和/或任何其它類型的治療、評(píng)估、維護(hù)、療法、藥物和/或勸告)的任何其它實(shí)體。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“臨床實(shí)驗(yàn)室”指用于檢查或處理從活受試者例如人類來(lái)源的材料的設(shè)施。處理的非限制性實(shí)例包括為了提供信息，例如為診斷、預(yù)防或治療活受試者例如人類任何疾病或損傷，或評(píng)估活受試者例如人類的健康的目的，從人體來(lái)源的材料的生物學(xué)、生物化學(xué)、血清學(xué)、化學(xué)、免疫血液學(xué)、血液學(xué)、生物物理學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)、遺傳學(xué)或其它檢查。這些檢查還可包括收集或另外獲得樣品、準(zhǔn)備、測(cè)定、測(cè)量或另外描述活受試者例如人類體內(nèi)或從活受試者例如人類的身體獲得的樣品中各種物質(zhì)的存在或不存在的程序。

如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“醫(yī)療福利提供者”包括提供、呈現(xiàn)、提供、全部或部分支付或另外關(guān)于給予患者一種或多種醫(yī)療福利、福利計(jì)劃、健康保險(xiǎn)和/或醫(yī)療費(fèi)用賬戶程序的個(gè)體當(dāng)事人、機(jī)構(gòu)或組。

在一些方面，醫(yī)療提供者可管理或指示另一個(gè)醫(yī)療提供者給予或使用任何本文公開(kāi)的免疫測(cè)定或試劑盒以測(cè)量dpp-4。醫(yī)療提供者可實(shí)現(xiàn)或指示另一個(gè)醫(yī)療提供者或患者進(jìn)行下列行動(dòng)：獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉(zhuǎn)移樣品、分析或測(cè)量樣品、定量樣品、提供分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、接收分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、比較/評(píng)分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品后獲得的結(jié)果、從一個(gè)或多個(gè)樣品提供比較/分?jǐn)?shù)、從一個(gè)或多個(gè)樣品獲得比較/分?jǐn)?shù)、給予治療(例如治療il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥例如哮喘、ipf、copd、ad或uc的治療劑)、開(kāi)始給予治療、停止給予治療、繼續(xù)給予治療、臨時(shí)中斷給予治療、增加給予的治療劑的量、減少給予的治療劑的量、繼續(xù)給予一定量的治療劑、增加給予治療劑的頻率、減少給予治療劑的頻率、在一種治療劑上維持相同的給劑頻率、用至少另一種治療或治療劑替代治療或治療劑、組合治療或治療劑與至少另一種治療或額外的治療劑。

在一些方面，醫(yī)療福利提供者可授權(quán)或拒絕，例如，獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉(zhuǎn)移樣品、分析或測(cè)量樣品、定量樣品、提供分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、轉(zhuǎn)移分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、比較/評(píng)分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品后獲得的結(jié)果、轉(zhuǎn)移來(lái)自一個(gè)或多個(gè)樣品的比較/分?jǐn)?shù)、給予治療或治療劑、開(kāi)始給予治療或治療劑、停止給予治療或治療劑、繼續(xù)給予治療或治療劑、臨時(shí)中斷給予治療或治療劑、增加給予的治療劑的量、減少給予的治療劑的量、繼續(xù)給予一定量的治療劑、增加給予治療劑的頻率、減少給予治療劑的頻率、在一種治療劑上維持相同的給劑頻率、用至少另一種治療或治療劑替代治療或治療劑，或組合治療或治療劑與至少另一種治療或額外的治療劑。

另外，醫(yī)療福利提供者可，例如，授權(quán)或拒絕治療處方、授權(quán)或拒絕治療覆蓋、授權(quán)或拒絕償付治療費(fèi)用、決定或拒絕治療資格等。

在一些方面，臨床實(shí)驗(yàn)室可，例如，收集或獲得樣品、處理樣品、提交樣品、接收樣品、轉(zhuǎn)移樣品、分析或測(cè)量樣品、定量樣品、提供分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、接收分析/測(cè)量/定量樣品后獲得的結(jié)果、比較/評(píng)分分析/測(cè)量/定量一個(gè)或多個(gè)樣品后獲得的結(jié)果、從一個(gè)或多個(gè)樣品提供比較/分?jǐn)?shù)、從一個(gè)或多個(gè)樣品獲得比較/分?jǐn)?shù)，或其它相關(guān)活動(dòng)。

dpp-4作為生物標(biāo)志

提高的dpp-4水平已經(jīng)在哮喘、copd和ad患者中觀察到(參見(jiàn)，例如，美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/931,878，2014年1月27日提交；和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/990,932，2014年5月9日提交，各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中)。另外，在哮喘患者的2b期臨床研究中，在用il-13抗體拮抗劑(tralokinumab)治療的患者中高血清dpp-4水平預(yù)測(cè)提高的響應(yīng)率，將dpp-4鑒定為il-13介導(dǎo)的疾病或病癥包括il-13介導(dǎo)的肺疾病或病癥(例如，哮喘、ipf或copd)或il-13介導(dǎo)的慢性炎癥性皮膚疾病或病癥(例如，特應(yīng)性皮炎)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志。參見(jiàn)brightling等人,amjrespircritcaremed189:a6670(2014);和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/931,878，2014年1月27日提交；和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/990,932，2014年5月9日提交，其各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。

因此，在具有哮喘、ipf、copd、ad和uc，以及其它炎癥性疾病、肺部疾病或病癥或慢性炎癥性皮膚疾病或病癥的患者中，提高的dpp-4水平可用于鑒定可獲益于特定治療，包括但不限于中和il-13活性的治療的那些患者。提供了可用于測(cè)量患者的dpp-4水平的抗dpp-4抗體和使用本文公開(kāi)的抗dpp-4抗體的免疫測(cè)定和試劑盒。

抗dpp-4抗體

本公開(kāi)內(nèi)容提供分離的抗dpp-4抗體和其抗原結(jié)合片段。在某些方面，本文提供的抗dpp-4抗體和抗原結(jié)合片段可結(jié)合人dpp-4。

具體地，本公開(kāi)內(nèi)容提供結(jié)合人dpp-4的兩種小鼠單克隆抗體和兩種大鼠單克隆抗體。這些抗體通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生，并且產(chǎn)生這些抗體的雜交瘤已經(jīng)在2015年1月8日在布達(dá)佩斯條約下保藏于美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,manassas,va。小鼠抗dpp-4抗體在本文中稱為m3b7.6和m5b7.7，大鼠抗dpp-4抗體在本文中稱為r11a2.15和r11a9.11。還提供這些抗體的抗原結(jié)合片段、變體和/或衍生物。還提供在其結(jié)合相同表位或其能夠競(jìng)爭(zhēng)性抑制m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11中的一個(gè)或多個(gè)方面與這些抗體相關(guān)的抗體。小鼠單克隆抗體m3b7.6從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,manassas,va(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生，小鼠單克隆抗體m5b7.7從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生，大鼠單克隆抗體r11a2.15從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生，和大鼠單克隆抗體r11a9.11從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生。

在某些方面，提供分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中抗體與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結(jié)合相同dpp-4表位。

在某些方面，提供分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中抗體競(jìng)爭(zhēng)性抑制從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結(jié)合dpp-4，例如，人dpp-4。例如，單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7能夠相互競(jìng)爭(zhēng)性抑制結(jié)合人dpp-4，單克隆抗體r11a9.11和r11a2.15能夠相互競(jìng)爭(zhēng)性抑制結(jié)合人dpp-4。

在某些方面，提供分離的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物，其中抗體包含具有三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在某些方面，提供分離的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物，其中抗體包含與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

當(dāng)從一個(gè)或多個(gè)保藏的雜交瘤獲得一種或多種抗體時(shí)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可分離、克隆和測(cè)序表達(dá)的抗體，以確定vh、vl和cdr區(qū)域，而無(wú)過(guò)度實(shí)驗(yàn)。

在某些方面，提供雜交瘤，其中雜交瘤包括在保藏號(hào)121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤、在保藏號(hào)121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121873下保藏在atcc的雜交瘤或其組合。

在某些方面，提供產(chǎn)抗體的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物可用于表達(dá)如本文所提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物。在某些方面，細(xì)胞培養(yǎng)物包括在保藏號(hào)121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤、在保藏號(hào)121871下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121872下保藏在atcc的雜交瘤、在保藏號(hào)121873下保藏在atcc的雜交瘤，或其組合。

本公開(kāi)內(nèi)容所提供的任何抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可進(jìn)一步包含額外的多肽，例如，信號(hào)肽以定向分泌。另外，本公開(kāi)內(nèi)容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可為，例如，融合多肽、fab片段、scfvs或其它衍生物，如本文所描述。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容所提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可為融合蛋白的部分，即，抗體或其抗原結(jié)合片段可與異源多肽融合。術(shù)語(yǔ)“異源多肽”在本文中用于指從與抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物不同的實(shí)體衍生的多肽。在非限制性實(shí)例中，與抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物融合的“異源多肽”可衍生自相同物種的非免疫球蛋白多肽，或免疫球蛋白或非免疫球蛋白異源多肽。在一些方面，異源多肽可為，例如，穩(wěn)定多肽、標(biāo)簽、標(biāo)記或其組合。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可包含異源氨基酸序列或與抗體天然不關(guān)聯(lián)的一個(gè)或多個(gè)其它部分(例如，肽、蛋白、酶、脂質(zhì)、異源抗體或其片段、變體或衍生物、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(peg)或兩個(gè)或更多個(gè)任何所述試劑的組合)。在進(jìn)一步的方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供的抗dpp-4抗體或其片段、變體或衍生物可包含可檢測(cè)標(biāo)記，其選自酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記或兩種或更多種任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。在某些方面，可檢測(cè)標(biāo)記為生物素，其可與綴合至，例如，酶，例如，辣根過(guò)氧化物酶(hrp)的鏈霉親和素相互作用。在某些方面，可檢測(cè)標(biāo)記為釕螯合物，其可在暴露于電流時(shí)發(fā)光。其它可檢測(cè)的標(biāo)記為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知。

本文還提供包含一種或多種如上文所指出的抗dpp-4抗體或其片段的組合物。在某些方面，組合物包含“捕獲”抗體和“檢測(cè)”抗體，如本文它處所述。如本文所提供的組合物包括但不限于緩沖液、載體和防腐劑。防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖液、抗氧化劑和/或其它添加劑可包括緩沖液例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，例如抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑例如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯扎氯銨；芐索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；烷基對(duì)羥基苯甲酸酯類，例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3'-戊醇和間甲酚；低分子量多肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它糖類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如edta；糖類，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，例如鈉；金屬絡(luò)合物(例如zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)和/或非離子表面活性劑，例如tween?、pluronic?或聚乙二醇(peg)。本文所提供的組合物可在單一的小瓶或容器中混合，或可在兩個(gè)或更多個(gè)小瓶或容器中或作為試劑盒的部分提供，如本文它處所述。

多核苷酸

本公開(kāi)提供編碼本文所提供的任何抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的多核苷酸。在某些方面提供分離的多核苷酸或包含兩種或更多種多核苷酸的多核苷酸組合物，其單獨(dú)或共同編碼本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物。

在某些方面，本公開(kāi)提供分離的多核苷酸，其包含編碼抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的核酸，其中抗體包含具有三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典藏培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

本公開(kāi)還提供包含編碼抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的核酸的分離的多核苷酸，其中抗體包含與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典藏培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl。

本公開(kāi)進(jìn)一步提供包含兩種或更多種單獨(dú)或共同編碼本文所提供的抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的多核苷酸的組合物。

在某些方面，提供一種載體或兩種或更多種載體，以幫助本文所提供的抗-dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的展示、篩選、分離、克隆和/或表達(dá)。在某些方面，一種或多種載體為表達(dá)載體。

在某些方面，多核苷酸組合物的兩個(gè)或更多個(gè)核酸分子可位于相同的載體中。在某些方面，多核苷酸組合物的兩個(gè)或更多個(gè)核酸分子可位于至少兩個(gè)單獨(dú)的載體中。

表達(dá)載體用于表達(dá)編碼本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的分離的多核苷酸。重組表達(dá)載體為可復(fù)制的dna構(gòu)建體，其具有編碼轉(zhuǎn)運(yùn)體分子的多肽鏈的合成的或cdna衍生的dna片段，與從哺乳動(dòng)物、微生物、病毒或昆蟲(chóng)基因衍生的合適的轉(zhuǎn)錄或翻譯調(diào)節(jié)元件操作性連接。轉(zhuǎn)錄單元一般包括以下序列的裝配：(1)在基因表達(dá)中具有調(diào)節(jié)作用的一個(gè)或多個(gè)遺傳元件，例如，轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，(2)結(jié)構(gòu)或編碼序列，其轉(zhuǎn)錄為mrna并翻譯為蛋白，和(3)適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和翻譯起始和終止序列，如下文詳細(xì)描述的。這樣的調(diào)節(jié)元件可包括操縱子序列以控制轉(zhuǎn)錄?？深~外地并入通常由復(fù)制起點(diǎn)賦予的在宿主中復(fù)制的能力，和幫助識(shí)別轉(zhuǎn)化子的選擇基因。

在某些方面提供分離的多核苷酸或包含兩個(gè)或更多個(gè)分離的多核苷酸的組合物，包括與啟動(dòng)子操作性連接的核酸分子，或與兩個(gè)或更多個(gè)啟動(dòng)子操作性連接的兩個(gè)或更多個(gè)核酸分子，其中啟動(dòng)子可為相同的或不同的。

當(dāng)核酸區(qū)域彼此功能相關(guān)時(shí)，其為“操作性連接的”。例如，如果其作為參與多肽分泌的前體表達(dá)，信號(hào)肽的dna(分泌前導(dǎo)序列)與多肽的dna操作性連接；如果其控制序列的轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)子與編碼序列操作性連接；或如果其放置為允許翻譯，核糖體結(jié)合位點(diǎn)與編碼序列操作性連接。

表達(dá)控制序列和表達(dá)載體的選擇取決于宿主的選擇。廣泛不同的表達(dá)宿主/載體組合可使用。用于真核宿主的有用的表達(dá)載體包括，例如，包含來(lái)自sv40、牛乳頭瘤病毒、腺病毒和巨細(xì)胞病毒的表達(dá)控制序列的載體。用于細(xì)菌宿主的有用的表達(dá)載體包括已知的細(xì)菌質(zhì)粒，例如來(lái)自大腸桿菌的質(zhì)粒，包括pcr1、pbr322、pmb9和其衍生物，較寬宿主范圍質(zhì)粒，例如m13和絲狀單鏈dna噬菌體。

在某些方面提供包含如本文所提供的多核苷酸的分離的宿主細(xì)胞。在某些方面提供包含本文提供的多核苷酸組合物的兩個(gè)或更多個(gè)多核苷酸的一種或多種分離的宿主細(xì)胞。

合適的用于表達(dá)本文所提供的轉(zhuǎn)運(yùn)體分子的宿主細(xì)胞包括在適當(dāng)?shù)膯?dòng)子控制下的原核生物、酵母、昆蟲(chóng)或更高等的真核細(xì)胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽(yáng)性生物體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌。更高等的真核細(xì)胞包括如下所述的已建立的哺乳動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞系。也可采用無(wú)細(xì)胞翻譯系統(tǒng)。關(guān)于蛋白質(zhì)生產(chǎn)，包括抗體生產(chǎn)的方法的額外信息可見(jiàn)于例如美國(guó)專利出版號(hào)2008/0187954、美國(guó)專利號(hào)6,413,746和6,660,501以及國(guó)際專利出版號(hào)wo04009823，其各自通過(guò)引用以其整體結(jié)合到本文中。

各種哺乳動(dòng)物或昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)也可用于表達(dá)本文提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的實(shí)例包括hek-293和hek-293t、gluzman(cell23:175,1981)描述的猴腎細(xì)胞cos-7系，或其它細(xì)胞系，包括，例如，l細(xì)胞、c127、3t3、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)、ns0、hela和bhk細(xì)胞系。哺乳動(dòng)物表達(dá)載體可包含非轉(zhuǎn)錄元件例如復(fù)制起點(diǎn)、與待表達(dá)基因操作性連接的合適的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子和其它5'或3'側(cè)翼非轉(zhuǎn)錄序列，和5'或3'非翻譯序列，例如核糖體結(jié)合位點(diǎn)、多腺苷酸化位點(diǎn)、剪接供體和受體位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止序列。用于在昆蟲(chóng)細(xì)胞中產(chǎn)生異源蛋白的桿狀病毒系統(tǒng)由luckow和summers,biotechnology6:47(1988)綜述。

本文提供的宿主細(xì)胞可在制造本文所提供的抗dpp-4抗體或其亞基(例如，重鏈或輕鏈)、片段、變體或衍生物的方法中使用，其中所述方法包括(a)培養(yǎng)宿主細(xì)胞和(b)從宿主細(xì)胞分離表達(dá)的抗體、片段或亞基。

用于檢測(cè)dpp-4水平的測(cè)定

本公開(kāi)內(nèi)容提供測(cè)量從受試者獲得的樣品中的dpp-4水平的方法，包括使用利用至少一種，例如，至少兩種識(shí)別人dpp-4上的不同表位的抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段的免疫測(cè)定測(cè)定樣品。用于該方法的示例性抗體包括以下一種或多種：從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，如本文所描述的。

所述方法涉及使用特異和靈敏的用于檢測(cè)從受試者獲得的樣品中的dpp-4的免疫測(cè)定。樣品在利用至少一種，例如，至少兩種本文提供的抗dpp-4抗體的免疫測(cè)定中測(cè)定，所述抗體例如，從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，如本文所描述的。

例如，本公開(kāi)內(nèi)容提供測(cè)量從受試者獲得的樣品中的dpp-4水平的方法，包括在利用至少一種，例如，至少兩種識(shí)別人dpp-4上的不同表位的抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物的免疫測(cè)定中測(cè)定樣品。在一個(gè)方面，至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7結(jié)合相同dpp-4表位的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括與從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結(jié)合相同dpp-4表位的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在另一個(gè)方面，至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括競(jìng)爭(zhēng)性抑制從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7結(jié)合dpp-4的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；并且至少兩種抗dpp-4抗體的一種包括競(jìng)爭(zhēng)性抑制從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11結(jié)合dpp-4的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在另一個(gè)方面，兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含具有三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的cdrs相同；并且兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含具有三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdrs)vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和具有三個(gè)輕鏈cdrsvlcdr1、vlcdr2和vlcdr3的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，其中分離抗體或其片段、變體或衍生物的cdrs與從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的cdrs相同。

在另一個(gè)方面，兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含與從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6和/或從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物；并且兩種或更多種抗dpp-4抗體的一種為包含與從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11的vh和vl相同的vh和vl的分離抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

任何這些抗體或其片段可與一個(gè)或多個(gè)異源多肽融合，例如，穩(wěn)定多肽、標(biāo)簽、標(biāo)記或其組合，或可綴合到異源部分，例如，肽、蛋白、酶、脂質(zhì)、異源抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(peg)或兩種或更多種任何所述試劑的組合。在某些方面，抗體包含可檢測(cè)標(biāo)記例如生物素或釕螯合物。其它可檢測(cè)標(biāo)記為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知，并且包含在本公開(kāi)內(nèi)容中。

在某些方面，免疫測(cè)定包括夾心免疫測(cè)定，例如，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)或夾心電化學(xué)發(fā)光(ecl)測(cè)定，其中將第一種抗dpp-4“捕獲”抗體或其抗原結(jié)合片段附著到固體支持物，讓來(lái)自樣品的抗原或標(biāo)準(zhǔn)品與捕獲抗體結(jié)合，然后加入第二種抗dpp-4“檢測(cè)”抗體或其抗原結(jié)合片段，并通過(guò)酶促反應(yīng)、電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)、放射性或其它檢測(cè)方法檢測(cè)。

在某些方面，免疫測(cè)定包括以下：首先，讓捕獲抗體或其片段、變體或衍生物結(jié)合到固體支持物，例如，多孔板或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它測(cè)定裝置。讓捕獲抗體附著一段時(shí)間，例如，過(guò)夜，然后去除未結(jié)合的抗體。然后可將板洗滌以去除任何未結(jié)合的捕獲抗體。然后可將板用封閉溶液處理以讓非特異性蛋白結(jié)合固體支持物的任何未結(jié)合區(qū)域。典型的封閉溶液包括不相關(guān)的蛋白，例如，脫脂奶粉或血清白蛋白。然后可將板再次洗滌以去除任何未結(jié)合的封閉溶液。接著，將疑似包含dpp-4的樣品加入板。樣品通常連續(xù)稀釋并一式兩份或一式三份鋪板。包含標(biāo)準(zhǔn)量的dpp-4或其合適片段的對(duì)照和不同陰性對(duì)照也包括在內(nèi)。讓抗原結(jié)合捕獲抗體一段時(shí)間，例如，室溫1小時(shí)。孵育之后，然后可將板洗滌以去除任何未結(jié)合的抗原。

接著，加入檢測(cè)抗體。檢測(cè)抗體通常為結(jié)合與捕獲抗體不同的dpp-4表位的抗dpp-4抗體。檢測(cè)抗體可為標(biāo)記的或未標(biāo)記的。當(dāng)檢測(cè)抗體未標(biāo)記時(shí)，標(biāo)記的二抗可用于檢測(cè)，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。檢測(cè)抗體可用酶，例如，辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶直接標(biāo)記，或可用將會(huì)允許酶結(jié)合的標(biāo)簽標(biāo)記。例如，檢測(cè)抗體可綴合生物素，并且酶在后續(xù)步驟中通過(guò)允許酶綴合的鏈霉親和素結(jié)合生物素標(biāo)簽連接。或者檢測(cè)抗體可綴合化學(xué)發(fā)光、熒光或電化學(xué)發(fā)光標(biāo)簽。后者的實(shí)例為釕螯合物。孵育之后，然后可將板洗滌以去除任何未結(jié)合的檢測(cè)抗體。

檢測(cè)抗體的檢測(cè)通過(guò)基于使用的檢測(cè)抗體類型而不同的方法完成。如果檢測(cè)抗體用生物素標(biāo)記，則加入酶綴合的鏈霉親和素，洗去未結(jié)合的鏈霉親和素，并加入底物，底物提供可，例如，在分光光度計(jì)上閱讀的比色反應(yīng)。如果檢測(cè)抗體綴合釕螯合物，板經(jīng)受電流，并測(cè)量光發(fā)射。

在某些方面，所述方法直接測(cè)量患者樣品中的dpp-4水平，其中絕對(duì)水平通過(guò)在使用，例如，純化的全長(zhǎng)dpp-4或dpp-4片段的標(biāo)準(zhǔn)曲線上標(biāo)繪免疫測(cè)定結(jié)果計(jì)算。檢測(cè)到的來(lái)自檢測(cè)抗體的信號(hào)然后可基于板上包括的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照定量。通過(guò)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上標(biāo)繪結(jié)果，檢驗(yàn)樣品中dpp-4的絕對(duì)水平或量可，例如，以ng/ml或pgdpp-4/ml蛋白計(jì)算。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的免疫測(cè)定和方法的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

多種不同的受試者樣品可用在本文所呈現(xiàn)的方法中。樣品的示例性的非限制實(shí)例包括以下一種或多種：全血、血清、血漿、唾液、痰、鼻息肉、鼻粘液、支氣管肺泡灌洗液、皮膚細(xì)胞或肺組織，例如，肺上皮細(xì)胞。在特定方面，樣品為血清樣品、皮膚細(xì)胞或肺組織。

在具體的方面，本文所公開(kāi)的方法包括告知受試者dpp-4測(cè)定和/或至少部分基于dpp-4水平的診斷的結(jié)果?；颊呖煽陬^、書(shū)面和/或電子告知。診斷也可記錄在患者的醫(yī)療記錄上。

術(shù)語(yǔ)“醫(yī)療記錄”或“患者醫(yī)療記錄”指患者的檢查和/或治療報(bào)告，其通常包括下列一個(gè)或多個(gè)：患者的醫(yī)療歷史和投訴、醫(yī)生的身體發(fā)現(xiàn)、診斷檢驗(yàn)和程序的結(jié)果，和以及患者用藥和治療程序。醫(yī)療記錄通常由一個(gè)或多個(gè)醫(yī)生和/或醫(yī)生助理做出，并且其為書(shū)寫的、抄寫的或以其它方式記錄的記錄和/或需要醫(yī)療護(hù)理的各種疾病或損傷和/或接種和/或過(guò)敏和/或治療和/或預(yù)后的歷史，和/或關(guān)于患者、兄弟姐妹和/或職業(yè)的常見(jiàn)健康信息。在一些情況下，記錄可由醫(yī)生在診斷病況中回顧。

醫(yī)療記錄可為紙質(zhì)形式和/或可維持在計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)上。醫(yī)療記錄可由實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)生辦公室、醫(yī)院、健康護(hù)理維護(hù)組織、保險(xiǎn)公司和/或個(gè)人醫(yī)療記錄網(wǎng)站維持。在一些方面，至少部分基于dpp-4水平的診斷記錄在醫(yī)療警報(bào)物品上，例如卡、佩戴品和/或射頻識(shí)別(rfid)標(biāo)簽。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“佩戴品”指可佩戴在受試者身體上的任何物品，包括，但不限于，標(biāo)簽、腕帶、項(xiàng)圈、臂帶和頭帶。

在某些方面，所述方法可需要命令和/或進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)額外的測(cè)定。例如，如果dpp-4水平經(jīng)測(cè)定在正常范圍內(nèi)(即，未提高)，dpp-4測(cè)定可重復(fù)以排除假陰性結(jié)果，和/或一個(gè)或多個(gè)額外的dpp-4測(cè)定可進(jìn)行以監(jiān)測(cè)受試者的狀態(tài)。如果dpp-4水平經(jīng)測(cè)定提高，重復(fù)dpp-4測(cè)定以排除假陽(yáng)性結(jié)果可為期需的。

dpp-4檢測(cè)方法、測(cè)定和試劑盒

本公開(kāi)內(nèi)容提供方法、測(cè)定和試劑盒幫助測(cè)定或分析樣品中的dpp-4水平或dpp-4的量。在一些方面，本文所公開(kāi)的方法、測(cè)定和試劑盒由醫(yī)療提供者、醫(yī)療福利提供者或臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行或使用，以測(cè)定來(lái)自受試者的樣品中的dpp-4水平或dpp-4的量。

在某些方面，免疫測(cè)定在從受試者獲得的樣品上由治療患者的醫(yī)護(hù)專業(yè)人員進(jìn)行，例如，使用如本文所述的免疫測(cè)定，其配制為“護(hù)理點(diǎn)(pointofcare)”診斷試劑盒。在一些方面，樣品從患者獲得并且提交至，例如，臨床實(shí)驗(yàn)室，按照醫(yī)護(hù)專業(yè)人員的指令，例如，使用如本文所述的免疫測(cè)定測(cè)量樣品中的dpp-4水平。

在某些方面，具有或疑似具有il-13-介導(dǎo)的疾病或病癥的患者經(jīng)診斷患有肺疾病或病癥、炎癥性腸疾病或病癥或慢性炎癥性皮膚病況。在某些方面，具有或疑似具有il-13介導(dǎo)的病理學(xué)的疾病或病癥為哮喘、特發(fā)性肺纖維化(ipf)、慢性阻塞性肺病(copd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性鼻炎或慢性鼻竇炎。

本公開(kāi)內(nèi)容還提供在本文所公開(kāi)的免疫測(cè)定的實(shí)踐中使用的試劑盒。這樣的試劑盒可包括容器，各自具有方法中利用的一種或多種不同試劑(例如，以濃縮的形式)，包括，例如，一種或多種抗dpp-4抗體。一種或多種抗dpp-4抗體，例如，捕獲抗體可已經(jīng)附著在固體支持物上提供，并且一種或多種抗體，例如，檢測(cè)抗體可已經(jīng)綴合到可檢測(cè)標(biāo)記例如生物素或釕螯合物提供。試劑盒可還提供用于偶聯(lián)可檢測(cè)標(biāo)記與抗體的試劑(以及標(biāo)記本身)、緩沖液和/或支持本文所提供測(cè)定的實(shí)踐的試劑和設(shè)備。在某些方面，提供結(jié)合檢測(cè)抗體的標(biāo)記的二抗。本公開(kāi)內(nèi)容提供的試劑盒可進(jìn)一步包含合適的容器、板和實(shí)踐本文所提供的測(cè)定必需的任何其它試劑或材料。

用于測(cè)量樣品中的dpp-4水平的試劑盒可包含一種或多種本文提供的抗dpp-4抗體或其片段，例如，從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，和/或其抗原結(jié)合片段，變體或衍生物，或相關(guān)抗體或其抗原結(jié)合片段，同樣如本文所描述的。

在某些方面，如本文所提供的試劑盒包含兩種分離抗體或其抗原結(jié)合片段，捕獲抗體和檢測(cè)抗體。在某些方面捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。在本文所提供的試劑盒的某些方面，捕獲抗體為如從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，并且檢測(cè)抗體為如從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤所產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。

在某些方面，檢測(cè)抗體被可檢測(cè)地標(biāo)記。在某些方面，可檢測(cè)標(biāo)記為生物素并且檢測(cè)試劑包括鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶(hrp)綴合物和hrp的比色底物。在某些方面可檢測(cè)標(biāo)記為釕螯合物。如本文別處所描述的其它抗體、標(biāo)記和試劑也可用在如本文所提供的試劑盒中。

在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供用于檢測(cè)一個(gè)或多個(gè)樣品中的dpp-4水平的免疫測(cè)定，包括使用至少一種，例如，至少兩種抗dpp-4抗體或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，例如，如本文所描述的從在保藏號(hào)pta-121870下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m3b7.6、從在保藏號(hào)pta-121871下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的小鼠單克隆抗體m5b7.7、從在保藏號(hào)pta-121872下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a2.15和/或從在保藏號(hào)pta-121873下保藏在atcc的雜交瘤產(chǎn)生的大鼠單克隆抗體r11a9.11，或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物，或相關(guān)抗體或其抗原結(jié)合片段，同樣如本文所描述的。

在某些方面，本文所提供的免疫測(cè)定為夾心免疫測(cè)定，例如，elisa測(cè)定或ecl測(cè)定，包括附著在固體支持物上的第一個(gè)抗dpp-4“捕獲”抗體或其抗原結(jié)合片段，和第二個(gè)抗dpp-4“檢測(cè)”抗體或其抗原結(jié)合片段。免疫測(cè)定通過(guò)本文提供的方法或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知和理解的方法進(jìn)行。在一個(gè)方面，免疫測(cè)定包括將捕獲抗體或其片段、變體或衍生物附著到固體支持物；施加檢驗(yàn)樣品或?qū)φ諛悠罚试Sdpp-4(如果存在于樣品中的話)結(jié)合捕獲抗體或其片段、變體或衍生物；施加檢測(cè)抗體或其片段、變體或衍生物，其可結(jié)合已經(jīng)結(jié)合至捕獲抗體或其片段、變體或衍生物的dpp-4；和測(cè)量結(jié)合至dpp-4的檢測(cè)抗體或其片段、變體或衍生物的量。在某些方面，測(cè)定可進(jìn)一步包括洗滌步驟、封閉步驟和孵育步驟。

在某些方面，檢測(cè)抗體或其片段、變體或衍生物進(jìn)一步包含可檢測(cè)標(biāo)記，例如生物素或釕螯合物。

本公開(kāi)內(nèi)容的方面可通過(guò)參考下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步定義，其詳細(xì)描述本公開(kāi)內(nèi)容某些抗體的制備和使用本公開(kāi)內(nèi)容的抗體的方法。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)顯而易見(jiàn)的是，對(duì)材料和方法二者的許多修飾可實(shí)踐而不脫離本公開(kāi)內(nèi)容的范圍。

實(shí)施例

實(shí)施例1：對(duì)人hpp-4特異的大鼠和小鼠單克隆抗體的產(chǎn)生和表征

對(duì)人dpp-4特異的小鼠和大鼠單克隆抗體通過(guò)下列方法產(chǎn)生。將動(dòng)物使用多個(gè)位點(diǎn)重復(fù)免疫(rimms)方案(kilpatrick,k.,等人,hybridoma16:381-389(2009))免疫。簡(jiǎn)言之，5只balb/c小鼠和2只wistar大鼠(所有均為4-6周齡)在6個(gè)背側(cè)位點(diǎn)皮下注射混合完全弗氏佐劑(sigma)的r-人dpp4-his(r&dsystemscatalogno.1180)(第一輪，接著不完全弗氏佐劑用于后續(xù)免疫)，并在每一給劑日期在6個(gè)腹部位點(diǎn)皮下注射混合titermax(sigma)佐劑的抗原?？偣?，每一動(dòng)物在12個(gè)位點(diǎn)接受注射，如圖1中所示。檢驗(yàn)出血在第13天收集，并且出血前和免疫的血清二者通過(guò)直接結(jié)合elisa使用結(jié)合至elisa板的dpp-4(r-dpp-4-his,r&dsystems目錄號(hào)1180)和陰性對(duì)照糖蛋白130(r-gp130-his)檢驗(yàn)。將高結(jié)合elisa板的孔在4℃用50μl2μg/mlr-人dpp-4-his或gp130-his/pbs包被過(guò)夜。然后將板用200μl/孔洗滌緩沖液(pbs/0.1%tween-20?)洗滌3次。洗滌之后，將150μl/孔封閉緩沖液(pbs/3%脫脂奶粉/0.1%tween-20?)加入每一孔，并將板室溫孵育1h。然后如上面提到的，將板洗滌3次。

將前-和檢驗(yàn)-血清在pbs,ph7.2緩沖液中連續(xù)稀釋，從最初的1:100稀釋度至最終的稀釋度1:218,600。將50μl每一稀釋的樣品加入板并室溫孵育1h。將板如上面提到的洗滌3次。洗滌之后，將50μl檢測(cè)抗體加入每一孔。對(duì)于小鼠組，使用在pbs中1:8000稀釋的驢抗小鼠(h+l):hrp(jacksonimmunoresearch,catalogno.715-035-151)。對(duì)于大鼠組，使用在pbs中1:8000的驢抗大鼠(h+l):hrp(jacksonimmunoresearch,catalogno.715-035-153)。將板室溫孵育1h。然后將板洗滌3次，并加入預(yù)熱至室溫的50μl/孔的tmb底物(kpl,catalogno.52-00-04)。將板在黑暗中室溫孵育10min，將50μl終止溶液(1mhcl)加入每一孔中。將板在分光光度計(jì)上在λ=450nm處讀數(shù)。

對(duì)dpp-4的出血前和免疫血清抗體滴度在圖2中顯示。在第16和19天，從顯示穩(wěn)健血清滴度的大鼠和小鼠收集淋巴結(jié)，雜交瘤如下產(chǎn)生。在第19天，從動(dòng)物收集淋巴結(jié)，從淋巴組織提取淋巴細(xì)胞并通過(guò)70μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾?？乖禺愋詁細(xì)胞通過(guò)使用macs、鏈霉親和素微珠(miltenyibioteccatalog#130-048-101)使用制造商建議的方案分離。然后將dpp-4特異性b細(xì)胞與骨髓瘤p3x/63ag8.653細(xì)胞以1:1比率按照peg(roche)融合方法融合。將融合的細(xì)胞以2.5x10⁴b細(xì)胞/孔的密度接種在添加1xhat的雜交瘤生長(zhǎng)培養(yǎng)基(ex-cell610+10%hi-fbs+1%青霉素-鏈霉素+1xbm-condimedh1雜交瘤克隆補(bǔ)充物)中。融合后7天，將包含hat的培養(yǎng)基替換為添加1xht的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

將雜交瘤上清液篩查結(jié)合人dpp-4的抗體，并選擇四個(gè)產(chǎn)生雜交瘤的抗體用于進(jìn)一步研究：小鼠單克隆抗體m3b7.6(igg1/κ)、小鼠單克隆抗體m5b7.7(igg1/κ)、大鼠單克隆抗體r11a2.15(igg2a/κ)和大鼠單克隆抗體r11a9.11(igg2a/κ)。表達(dá)這4個(gè)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系在2015年1月8日在保藏號(hào)pta-121870(m3b7.6)、保藏號(hào)pta-121871(m5b7.7)、保藏號(hào)pta-121872(r11a2.15)和保藏號(hào)pta-121873(r11a9.11)下在布達(dá)佩斯條約下保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(atcc)。

實(shí)施例2：夾心elisa測(cè)定以檢測(cè)dpp-4

材料和方法

a.具有hrp檢測(cè)系統(tǒng)的dpp-4夾心elisa方案

基于hrp的夾心elisa測(cè)定如下進(jìn)行。具體細(xì)節(jié)例如抗dpp-4捕獲抗體、待檢驗(yàn)樣品和抗dpp-4檢測(cè)抗體在各個(gè)實(shí)施例中對(duì)具體實(shí)驗(yàn)指出。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)elisa方案的變更為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知，并且可根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容使用。

將高結(jié)合elisa板用抗dpp-4捕獲mab，例如，m3b7.6或m5b7.7(在pbs中5μg/ml;50μl/孔)包被，并在4℃孵育過(guò)夜。將板用200μl/孔洗滌緩沖液(pbs/0.1%tween-20?)洗滌3次。洗滌之后，將150μl/孔封閉緩沖液(pbs/3%脫脂奶粉/0.1%tween-20?)加入每一孔，并將板室溫孵育1h。然后如上面所提到的將板洗滌3次。

對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線，將dpp-4標(biāo)準(zhǔn)品(例如，從r&dsystemscatalog#1180-se可得的標(biāo)準(zhǔn)品)在pbs,ph7.2緩沖液或1%正常人血清中連續(xù)稀釋，例如，從500ng/ml2倍稀釋至0.49ng/ml。將50微升(50μl)每一標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋的樣品加入板，并將板室溫孵育1h。再次，如上面所提到的將板洗滌3次。洗滌之后，將50μl檢測(cè)mabr11a2.15、r11a9.11或222113.11(2μg/ml)加入每一孔，并將板室溫孵育1h。再次，如上面提到的將板洗滌3次。洗滌之后，將在pbs中1:8,000稀釋的50μl驢抗大鼠(h+l)-hrp綴合物(jacksonimmunoresearchcatalog#712-035-153)加入每一孔，并將板室溫孵育1h。再次，如上面提到的將板洗滌3次。洗滌之后，加入預(yù)熱至室溫的50μl/孔tmb底物(kpl,catalogno.52-00-04)，將板在黑暗中室溫孵育10min，并將50μltmb終止溶液(1mhcl)加入每一孔。最后將板在分光光度計(jì)上在λ=450nm處讀數(shù)。

結(jié)果

使用小鼠m3b7.6和m5b7.7作為捕獲抗體的結(jié)果分別在圖3a和圖3b中顯示。兩種小鼠和兩種大鼠mabs(mabr11a2.15或r11a9.11)形成4對(duì)不同的用于人cd26的檢測(cè)劑，其具有相似的檢測(cè)下限(llod)并在夾心elisa測(cè)定測(cè)量人dpp-4中提供高靈敏度。相反，市售可得的大鼠mab(r222113)(來(lái)自r&dsystems的人dppiv/cd26mab(克隆222113)、大鼠igg2a目錄號(hào)mab1180)檢測(cè)到較少的人cd26并且當(dāng)與兩種小鼠mabsm3b7.6和m5b7.7配對(duì)時(shí)在夾心elisa測(cè)定測(cè)量人dpp-4中明顯不太靈敏。參見(jiàn)圖3a-b。這些結(jié)果證明與市售可得的大鼠抗體r222113相比，本文提供的抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)在免疫測(cè)定檢測(cè)人cd26方面優(yōu)越。另外，本文提供的抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)檢測(cè)內(nèi)源和重組人cd26二者，使其可用作診斷試劑。

如圖3中所示，m3b7.6+r11a2.15、m3b7.6+r11a9.11、m5b7.7+r11a2.15和/或m5b7.7+r11a9.11在夾心elisa測(cè)定中有效測(cè)量人dpp-4。另外，無(wú)論選擇哪一對(duì)，研究中dpp-4的血清濃度在1-2μg/ml之間。

實(shí)施例3：使用octet的抗dpp-4mab表位框并(binning)

四種抗dpp-4抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)的表位框并通過(guò)octet進(jìn)行。將檢驗(yàn)抗體生物素化并以20μg/ml的濃度和以200μl/孔在鏈霉親和素生物傳感器上捕獲5min，然后用200μlpbs緩沖液洗滌1min。然后將生物傳感器用10μg/ml重組人dpp-4孵育5min并用200μlpbs緩沖液洗滌1min。將競(jìng)爭(zhēng)抗體以1:1比率與檢驗(yàn)抗體以終濃度20μg/ml混合，并在200μl中與生物傳感器一起孵育5min。

測(cè)定的示意圖在圖4a中示出，以四種不同抗體(m3b7.6、m5b7.7、r11a2.15和r11a9.11)作為檢驗(yàn)抗體的結(jié)果分別在圖4b-e中示出。結(jié)果證明小鼠單克隆抗體m3b7.6和m5b7.7互相競(jìng)爭(zhēng)，并且大鼠單克隆抗體r11a2.15和r11a9.11互相競(jìng)爭(zhēng)。小鼠抗體不與大鼠抗體競(jìng)爭(zhēng)，因此不共享表位?；谠摂?shù)據(jù)，我們得出結(jié)論兩種小鼠抗體(m3b7.6和m5b7.7)共享相同或重疊的表位，而兩種大鼠抗體(r11a2.15和r11a9.11)共享表位或重疊表位，并且表位與小鼠抗體共享的表位不同。

前文對(duì)具體方面的描述將會(huì)完全揭示本公開(kāi)內(nèi)容的一般特征，以致他人在無(wú)過(guò)度實(shí)驗(yàn)下可通過(guò)應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)內(nèi)的知識(shí)容易地為不同應(yīng)用修飾和/或改編這樣的具體方面，而不脫離本公開(kāi)內(nèi)容的一般概念。因此，基于本文呈現(xiàn)的教導(dǎo)和指南，這樣的改編和修飾意在落入所公開(kāi)方面的相等物的含義和范圍內(nèi)。應(yīng)理解本文中的短語(yǔ)和術(shù)語(yǔ)是為了說(shuō)明的目的，而非限制，以致本說(shuō)明書(shū)的術(shù)語(yǔ)或短語(yǔ)應(yīng)由技術(shù)人員按照教導(dǎo)和指南解釋。

本公開(kāi)內(nèi)容的寬度和范圍不應(yīng)受任何上述示例性方面限制，而是應(yīng)僅由下列權(quán)利要求及其相等物定義。

本申請(qǐng)中引用的所有出版物、專利、專利申請(qǐng)和/或其它文獻(xiàn)對(duì)于所有目的通過(guò)引用以其整體結(jié)合，至如同每個(gè)單獨(dú)的出版物、專利、專利申請(qǐng)和/或其它文獻(xiàn)單獨(dú)指明對(duì)于所有目的通過(guò)引用結(jié)合相同的程度。