本發(fā)明涉及茶葉領域，尤其是涉及一種歸芍茶的應用。
背景技術：
：中國是世界的產(chǎn)茶大國，各種茶的種類繁多。中國人飲茶的歷史悠久。茶具有多種保健功效。根據(jù)茶的儲存時間和氧化程度的不同，以前一般將茶分為“茶葉”、“陳茶”以及“經(jīng)久老茶葉”，其中“茶葉”一般指新茶或儲存時間和氧化程度不超過三年的茶；“陳茶”一般指儲存時間和氧化程度在三年到二十年之間的茶；“經(jīng)久老茶葉”一般指儲存時間和氧化程度在二十年以上的茶，以上沒有嚴格的標準。1973年陳椽提出按制茶時茶多酚氧化程度分為白、綠、黃、青、紅、黑茶六種?！敖?jīng)久老茶葉”在長時間存放中發(fā)生緩慢的氧化反應所產(chǎn)生的物質(zhì)，可能具有多種功效，目前對“經(jīng)久老茶葉”的成分及其藥效研究，尚屬空白。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明是在無意中發(fā)現(xiàn)部分“經(jīng)久老茶葉”在胃癌的防治，特別是對抑制胃癌腫瘤細胞的生長以及帶瘤生存期的延長具有顯著的效果。對此，本發(fā)明進行了大量的創(chuàng)造性實驗篩選，發(fā)現(xiàn)具有“中藥房混合味”的“經(jīng)久老茶葉”對胃癌的防治效果最為顯著。進一步，本發(fā)明對具有“中藥房混合味”的“經(jīng)久老茶葉”進行成分及藥效研究分析，命名并定義了一種新的茶，即歸芍茶，并規(guī)定了該歸芍茶的標準。具體的，本發(fā)明所述的歸芍茶，是指以同類新茶作為對照，通過氣質(zhì)聯(lián)用等檢測揮發(fā)性成分，其中新出現(xiàn)的或顯著增加的成分一定包括4-松油醇、β-蒎烯、β-水芹烯、β-月桂烯以及β-羅勒烯。同時，所述歸芍茶中咖啡因以及茶堿的含量都顯著減少。而且，所述歸芍茶在沖泡后香氣和茶湯具有濃烈的當歸和白芍為主的混合味道。進一步，以同類新茶作為對照，歸芍茶還包括一些其他的新出現(xiàn)的或顯著增加的成分，由于茶葉的品種(大、中、小葉種)、產(chǎn)地(江浙、云貴、湖廣)、制作工藝(發(fā)酵程度不同)、儲存環(huán)境和時間以及氧化程度的不同，茶葉的成分特點有所不同。下列成分是綜合了不同的品種、產(chǎn)地、制作工藝等因素后，茶葉主要內(nèi)含物顯著改變的成分，需要滿足如下十八種成分中的至少九種：6-甲基-5-庚烯-2-酮、α-檸檬烯、α-松油烯、α-水芹烯、vitispirane(一種倍半萜類物質(zhì))、十三烷、2,6,10-三甲基十二烷、6,10-二甲基-2-十一烷酮、羅漢柏烯、羥基二氫雞蛋果素、2,6-二叔丁基-1,4-苯醌、β-桉葉烯、壬基環(huán)己烷、甲基-2-內(nèi)-乙酰氨基[2.2.1]庚烷基-2-外羧酸酯(methyl2-endo-acetamidobicyclo[2.2.1]heptane-2-exo-carboxylate)、2-甲基十五烷、5,6-二氫-5,6-二甲基苯并[c]噌啉、3-甲基十六烷以及十九烷；更進一步，以同類新茶作為對照，歸芍茶中有部分揮發(fā)性成分消失或顯著降低，由于茶葉的品種(大、中、小葉種)、產(chǎn)地(江浙、云貴、湖廣)、制作工藝(發(fā)酵程度不同)、儲存環(huán)境和時間以及氧化程度的不同，茶葉的成分特點有所不同。下列成分是綜合了不同的品種、產(chǎn)地、制作工藝等因素后，茶葉主要內(nèi)含物顯著改變的成分，需要滿足以下十種成分中的至少五種：芳樟醇、α-松油醇、二氫獼猴桃內(nèi)酯、水楊酸甲酯、β-紫羅蘭酮、2-甲基丙酸-3-羥基-2,2-二甲基-1-(2-羥基-1-甲基乙基)戊基酯、甲基-n-鄰氨基苯甲酸甲酯、δ-杜松烯、1,1-二苯基-2-甲基丙烯及2,3-二氫-1-甲基-3-苯基-1h-茚。上面提到的顯著增加及顯著減少指滿足統(tǒng)計學指標中的p值小于0.05。所述同類新茶即上述存放時間和氧化程度不超過3年的茶葉。本發(fā)明經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，上述歸芍茶可以應用在制備治療胃癌和/或調(diào)節(jié)腸道菌群的藥物或食品中，效果顯著。如一種治療胃癌和/或調(diào)節(jié)腸道菌群的藥物或食品，其含有所述歸芍茶。所述藥物包括但不限于干膏、粉劑、片劑、水劑等。所述食品包括但不限于固體食品、半固體食品及液體飲料等。在其中一個實施例中，優(yōu)選的，所述歸芍茶是以其提取物的形式添加，所述提取物的提取方法包括如下步驟：將所述歸芍茶敲碎后加入沸水中，保持微沸，過濾后，將得到的提取液及茶渣分別加入沸水中，保持微沸，分別過濾，按照以上步驟重復提取多次后合并提取液，用減壓濃縮器進行減壓濃縮。在其中一個實施例中，進一步優(yōu)選的，所述提取物是干膏。本發(fā)明通過對經(jīng)久老茶葉的成分研究分析，提出并定義了歸芍茶，并通過對其的藥效研究發(fā)現(xiàn)，其具有抑制胃癌細胞生長和延長帶瘤生存期的效果，因而可用于制備治療胃癌藥物或食品中，從而為胃癌的治療提供了新的方法和思路。此外，本發(fā)明還對其進行腸道菌群的分析研究，發(fā)現(xiàn)其具有良好的調(diào)節(jié)腸道菌群的功效，因而可以應用于制備調(diào)節(jié)腸道菌群的藥物或食品中。附圖說明圖1為氣質(zhì)聯(lián)用檢測結果，其中1、2、4、5為“歸芍茶”，3、6為當年同類新茶；圖2為第1、3、5、7天不同分組的腫瘤體積情況；圖3為受試者的影響情況，圖中的time*group分組中看第一行(p＝0.007)，表示有統(tǒng)計學意義，說明劑量的效應隨著時間的改變而改變，即劑量和時間有交互作用；圖4為歸芍茶干膏抑制腫瘤生長的曲線，其中，中劑量組可抑制腫瘤生長，第7天時效果最顯著；圖5為各組腫瘤體積差，其中，中劑量體積差最小，說明中劑量對腫瘤生長抑制效果最顯著，低劑量體積差最大，說明低劑量促進腫瘤體積增大，高劑量體積差為0，因為高劑量1天后即死亡；圖6為多樣性分析，其中，6a為chao分析，6b為shannon分析；圖7為物種分類分析，其中7a為聚類圖，7b為熱圖，7c為graphlan繪制的分類和系統(tǒng)發(fā)育信息可視化圖；圖8為pca分析，發(fā)現(xiàn)正常組和中劑量組最相似；圖9為pcoa分析，為unweighted分析，發(fā)現(xiàn)正常組和中劑量組最相似；圖10為菌群豐度差異分析；圖11為基于cog和kegg進行菌群的功能分析；圖12為基于cog和kegg進行的分組間菌群功能差異比較，其中12a為基于cog的結果，12b為基于kegg的結果。具體實施方式為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關附圖及具體實施例對本發(fā)明進行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的較佳實施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來實現(xiàn)，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使對本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹全面。除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發(fā)明的
技術領域：
的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術語“和/或”包括一個或多個相關的所列項目的任意的和所有的組合。1.氣質(zhì)聯(lián)用和高效液相色譜檢測“歸芍茶”根據(jù)“中藥房混合味”的標準篩選中國茶葉公司廣西分公司“中茶牌”20年以上廣西茶磚、云南勐海春福潤茶葉公司“春福潤牌”30年以上云南茶磚、廣東圣凡貿(mào)易公司“中茶牌”30年以上云南茶磚(中國茶葉公司云南分公司)、廣西悟州釬源綠葉茶葉公司“農(nóng)家牌”30年以上廣西茶磚等4個廠家的經(jīng)久老茶葉共4種產(chǎn)品眾多個子款，以沖泡后氣味和味道帶有明顯濃烈的“中藥房混合味”茶為感觀標準篩選16款，也即每種產(chǎn)品篩選4個子款，送中科院廣州分析測試中心和南方醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院廣東省制劑重點實驗室兩個機構，用氣質(zhì)聯(lián)用(即氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用)和高效液相色譜進行檢測分析，并以中國茶葉公司廣西分公司“中茶牌”2015年生產(chǎn)的廣西茶磚、中國茶葉公司云南分公司“中茶牌”2015年生產(chǎn)的云南茶磚等2種當年同類新茶的不同子款作對照。1.1氣質(zhì)聯(lián)用檢測樣品處理將茶樣粉碎成20目，取50g茶葉粉置于自制實驗裝置(取帶橡膠塞的200ml密閉玻璃瓶一個，在橡膠塞上開兩口，將吹掃氮氣從其中一口引入瓶底，另一口用于吹掃氣體的排出，在排出口連接活性碳管采樣管，用于捕集吹掃氣體)中，將密封玻璃瓶固定于80℃恒溫水浴鍋中，通入吹掃氮氣，用流量計調(diào)節(jié)氮氣流量為150ml/min，出口端連接活性碳采樣管，動態(tài)頂空分離2小時。將采樣管中活性炭取出后加入0.5ml二硫化碳溶液進行解析。1.2氣質(zhì)聯(lián)用條件：吸取二硫化碳解析液1.0μl，手動進樣；gc進樣口模式為分流模式，分流比5：1；進樣口溫度250℃；載氣為he，載氣為恒流模式，柱流速1.0ml/min，平均線速37cm/sec；分析柱為thermo公司tg-5ms毛細石英管柱(30m×250μm×0.25μm)；升溫程序為初始溫度60℃，保持3min，以5℃/min升至150℃，保持10min，再以5℃/min升至250℃，保持9min，共計60分鐘。離子源溫度230℃，質(zhì)譜傳輸線溫度250℃，質(zhì)量掃描范圍30－550amu。1.3氣質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)分析：按上述氣質(zhì)聯(lián)用條件進樣得到樣品揮發(fā)性氣味總離子流圖，用面積歸一化法獲得各化合物的相對含量。使用wiley275、nist14數(shù)據(jù)庫對積分的色譜峰進行自動及人工檢索，最后鑒定化學成分。1.4高效液相色譜檢測樣品處理將茶樣粉碎成20目，取10g茶葉粉置于100ml錐形瓶中，加入50ml提取液(70％甲醇、29.7％水和0.3％乙酸)，在70cc下震蕩浸提30min，冷卻至室溫，在3500r/min下常溫離心10min，倒出上清液，用0.45μm濾膜過濾，所得濾液作為供試品溶液。精密稱取各對照品適量，置于10ml容量瓶中，加提取液溶解，配制成0.5mg/ml的對照品儲備液。1.5高效液相色譜條件：色譜柱為agilent—c18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相a：0.2％乙酸乙腈溶液；流動相b：0.2％乙酸水溶液。采用梯度洗脫的方法，流速為1.0ml/min，柱溫35℃，檢測波長為270mm。1.6高效液相色譜檢測數(shù)據(jù)分析：測定各成分的峰面積，并以峰面積(y)對進樣量(x，mg/ml)進行線性回歸分析。2.歸芍茶的干膏提取將700g歸芍茶的茶餅敲碎，加入到8倍量沸水中，保持微沸20min，過濾。將第一次提取液用5倍量沸水同法提取1次。茶渣用5倍量沸水浸泡20min，過濾。同法將第三次提取液用沸水浸泡處理。合并提取液，用減壓濃縮器在58℃下進行減壓濃縮，得干膏。3.歸芍茶干膏藥效學試驗3.1動物及飼養(yǎng)條件3.1.1實驗動物：5周齡spf級雄性裸鼠31只，平均體重20g/只。由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供，廣東省實驗動物質(zhì)量合格證明編號：no.44002100008649。3.1.2飼養(yǎng)設備：使用獨立通氣動物籠ivc鼠籠，單籠喂養(yǎng)，每籠3-4只裸鼠。使用前經(jīng)高壓蒸汽滅菌，每周清潔一次，或視需要處理，以保證環(huán)境清潔、干燥為標準；墊料選用研磨過的玉米桿，使用需經(jīng)高溫蒸汽滅菌。3.1.3飼養(yǎng)環(huán)境：spf級；室內(nèi)溫度26-28℃，室內(nèi)濕度40％-60％；每小時通風換氣10-15次；每日維持10小時光照，14小時無光的明暗周期，使用人工光照。3.1.4供食及供水飼料、飲水均在高壓滅菌后使用；隔天換水瓶，水瓶和飲水管在兩次使用之間必須清洗。3.2細胞株體外培養(yǎng)bgc-823人胃癌細胞株，培養(yǎng)基為10％胎牛血清的高糖dmem。3.3原料及試劑3.3.1原料：歸芍茶提取的干膏3.3.2劑量歸芍茶使用等效劑量：低劑量0.1g/只，中劑量0.5g/只，高劑量1.0g/只。干膏使用量：低劑量10mg/只/天，中劑量50mg/只/天，高劑量100mg/只/天。干膏采用去離子水溶解，配置成使用濃度：低劑量0.025g/ml，中劑量0.125g/ml，高劑量：0.250g/ml。溶液121℃滅菌30min。3.4建立胃癌模型3.4.1配置細胞懸液將bgc-823人胃癌細胞用胰蛋白酶消化，用高糖dmem配置成單細胞懸液3ml，細胞總量約為2×108個。3.4.2皮下注射胃癌細胞在無菌操作臺中，用耳標鉗在裸鼠右耳靠近頭皮處打耳號，在27只裸鼠的背部右下方靠近右下肢處注射bgc-823細胞懸液0.1ml/只，剩余4只裸鼠在同樣部位注射等量生理鹽水。3.5分組及給藥3.5.1分組建模后，每日觀察裸鼠狀態(tài)，稱重，用電子游標卡尺測量腫瘤長短徑，記錄數(shù)據(jù)。待腫瘤直徑達到8mm以上時(約2周)，以腫瘤直徑/體積為第一要素，裸鼠體重為第二要素進行分組：干膏高劑量組7只，干膏中劑量組7只，干膏低劑量組7只，陰性對照組(荷瘤生理鹽水組)6只，空白對照組4只。每組腫瘤直徑平均值接近，每組都有大、小腫瘤。3.5.2給藥1ml注射器吸取干膏溶液0.4ml，換上9號灌胃針頭，對各組裸鼠進行灌胃，其中陰性對照組灌胃去離子水，空白對照組不灌胃。每隔24h灌胃一次，連續(xù)灌胃至裸鼠自然死亡。3.6移植瘤的觀察每日記錄裸鼠體重及腫瘤長短徑，觀察每組裸鼠精神狀態(tài)及活動程度。4.腸道菌群檢測裸鼠開始灌胃后，每日用ep管收集裸鼠的糞便，做好標記，置于-80℃冰箱保存。實驗結束后，將所有裸鼠死亡前一天的糞便進行腸道菌群的宏基因組16sdna測序，擴增區(qū)域為v3-v4。5.統(tǒng)計分析采用spss13.0對實驗結果進行分析，其中采用秩和檢驗對生存時間進行分析，方差分析對灌胃前后腫瘤體積差進行分析，重復測量對時間和灌胃劑量的關系進行分析。6.結果6.1氣質(zhì)聯(lián)用檢測16款“中藥房混合味”的“經(jīng)久老茶葉”揮發(fā)性成分，與其他中藥揮發(fā)性成分比較后發(fā)現(xiàn)，主要成分跟當歸和白芍相同較多，主要成分跟當歸相同的有β-蒎烯、β-水芹烯、β-月桂烯、β-羅勒烯，跟白芍相同的有β-蒎烯、β-月桂烯、β-羅勒烯，因此根據(jù)其氣味近似程度，把具有“中藥房混合味”的“經(jīng)久老茶葉”命名為“歸芍茶”。6.2采用氣質(zhì)聯(lián)用和高效液相色譜對4種“歸芍茶”和2種當年同類新茶進行檢測發(fā)現(xiàn)，每種“歸芍茶”中各子款的圖譜數(shù)據(jù)基本一致，并且每種當年同類新茶中各子款的圖譜數(shù)據(jù)也基本一致。圖1示出了每種茶的其中一個子款的圖譜，每種茶的其他子款的圖譜數(shù)據(jù)也基本一致。請結合圖1和表1，相對于當年同類新茶，“歸芍茶”的主要成分共同新出現(xiàn)和顯著增加23種，共同消失和顯著減少12種。其中氣質(zhì)聯(lián)用檢測新出現(xiàn)和顯著增加主要成分主要包括：4-松油醇、6-甲基-5-庚烯-2-酮、α-檸檬烯、α-松油烯、β-月桂烯、β-羅勒烯、β-蒎烯、α-水芹烯、β-水芹烯、vitispirane、十三烷、2,6,10-三甲基十二烷、6,10-二甲基-2-十一烷酮、羅漢柏烯、羥基二氫雞蛋果素、2,6-二叔丁基-1,4-苯醌、β-桉葉烯、壬基環(huán)己烷、methyl2-endo-acetamidobicyclo[2.2.1]heptane-2-exo-carboxylate、2-甲基十五烷、5,6-二氫-5,6-二甲基苯并[c]噌啉、3-甲基十六烷及十九烷；消失和顯著減少主要成分主要包括：芳樟醇、α-松油醇、二氫獼猴桃內(nèi)酯、水楊酸甲酯、β-紫羅蘭酮、2-甲基丙酸-3-羥基-2,2-二甲基-1-(2-羥基-1-甲基乙基)戊基酯、甲基-n-鄰氨基苯甲酸甲酯、δ-杜松烯、1,1-二苯基-2-甲基丙烯及2,3-二氫-1-甲基-3-苯基-1h-茚。高效液相色譜檢測顯著減少主要成分包括：咖啡因和茶堿。表1高效液相色譜檢測結果化合物當年新茶歸芍茶歸芍茶與當年新茶比較的變化幅度/％咖啡因/％2.900.17-94.1茶堿/％0.03<0.01>-1006.3選擇4款歸芍茶中新出現(xiàn)和顯著增加成分含量最高的1款(云南勐海春福潤茶葉公司“春福潤牌”30年以上云南茶磚)，即圖1中4號，減壓浸提，得到干膏79克，出膏率為11.3％。6.4在裸鼠建立胃癌模型，采用歸芍茶干膏溶液灌胃6.4.1中劑量組具有顯著抑制腫瘤生長的作用(p<0.05)，第七天時抑制效果最顯著，如圖2、圖3和圖4所示。6.4.2低劑量組腫瘤增長最迅速，如表2、表3和圖5所示。表2各組裸鼠自然死亡時和開始灌胃時腫瘤的體積差report腫瘤體積差表3腫瘤體積差方差分析結果anova腫瘤體積差注：表中的看第一行betweengroups(p＝0.004)，表示有統(tǒng)計學意義，說明各組間腫瘤體積差有統(tǒng)計學差異。6.4.3生存時間分析表明，各組間生存時間具有顯著差異，其中低劑量組存活時間最長，說明低劑量組可以延長帶瘤生存時間。高劑量組1天后所有裸鼠死亡，說明高劑量組具有急性毒性作用，如表4、表5和表6所示。表4各組生存時間report給藥后生存時間(天)表5各組生存時間秩和檢驗結果ranks表6秩和檢驗結果teststatisticsa,ba.kruskalwallistestb.groupingvariable:group注：表中的看第一行asymp.sig(p＝0.000)，表示有統(tǒng)計學意義，說明各組存活時間有統(tǒng)計學差異。6.4.4總之，高劑量組由于干膏濃度過大，具有急性毒性作用。中劑量組可以顯著抑制腫瘤生長，但不能延長生存時間。低劑量組雖然腫瘤生長更快，但可以顯著延長帶瘤生存時間。6.5腸道菌群6.5.1首先研究群落生態(tài)學中微生物多樣性，通過單樣品的多樣性分析(alpha多樣性)，可以反映微生物群落的豐度和多樣性。其中chao說明群落分布豐度，shannon說明群落分布多樣性，由圖6可看出，正常組菌落豐度和多樣性在種瘤后明顯減少，種瘤后再灌胃歸芍茶干膏，菌落豐度和多樣性回復，其中，中濃度組菌落豐度和多樣性基本回復到正常水平，低濃度組菌落豐度和多樣性高于正常水平。6.5.2接著進行物種分類分析，可以得知樣品在各分類水平上的分類學比對情況，包括樣品中含有的微生物種類和相對豐度。由圖7的中的聚類圖a可以看出，正常組和中劑量組的微生物種類和豐度最相似，其次是低劑量組，陰性對照組和其他幾組均不同，說明正常組在種瘤后腸道菌群的微生物種類和豐度發(fā)生明顯改變，灌胃干膏后，微生物種類和豐度發(fā)生回復，其中，中濃度組基本回復到正常。由熱圖b、graphlan繪制的分類和系統(tǒng)發(fā)育信息可視化圖c可知，豐度前100個物種集中的門為：bacteroidetes、firmicutes、proteobacteria和verrucomicrobia，豐度最高的細菌的屬包括：bacteroides、falsiporphyromonas、coprobacter、prevotella、clostridiumxlva、alistipes等。6.5.3然后進行pca分析(屬于多維度分析)，其中bc是正常組(即空白對照組)，nc是腫瘤組(即陰性對照組)，m是中劑量組，l是低劑量組。由圖8可知，正常組和中劑量組最相似。6.5.4如圖9所示，進一步進行pcoa分析(屬于多樣品相似度分析)，說明正常組和中劑量組最相似。6.5.5如圖10所示，然后進行菌群豐度差異分析，發(fā)現(xiàn)各組間菌群差異如下，紅色為p<0.05具有顯著統(tǒng)計學差異的菌群。bc和nc間顯著差異的屬的菌群為nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus。nc和m顯著差異為comamonas。nc和l顯著差異為prevotella、pseudoflavonifractor、flavonifractor、butyrivibrio、methanothrix。bc和m顯著差異為neisseria、chelativorans、cellulomonas、dyella、gp7。bc和l顯著差異為pseudomonas、nitrososphaera、gp7、cellulomonas、neisseria、methanospirillum、terrimonas、pseudoxanthomonas、dyella、pseudolabrys。l和m間沒有差異。結果說明：nc組和bc組相比，nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus菌群豐度顯著下調(diào)(p<0.05)，m組和nc相比顯著改變的菌群comamonas雖然在nc組沒有統(tǒng)計學差異的改變，但輕微下調(diào)。推測nc組腫瘤生長的原因是nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus菌群豐度顯著下調(diào)和comamonas基本不變。m組中菌群豐度顯著升高的是comamonas(p<0.05)，bc組顯著高于nc組的菌群nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus的豐度基本在m組中都上調(diào)，雖然沒有統(tǒng)計學意義。推測m組抑制腫瘤生長是通過顯著上調(diào)comamonas和回復bc組顯著高于nc組的菌群nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus的豐度實現(xiàn)的。l組中，bc組顯著高于nc組的菌群nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus的豐度不但沒有上調(diào)，反而下降，雖然沒有統(tǒng)計學意義；m組顯著高于nc組的comamonas保持不變，沒有像m組那樣顯著上調(diào)，因此推測l組腫瘤生長迅速的原因是comamonas豐度不變和bc組顯著高于nc組的菌群nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus的豐度下調(diào)。l組和nc組相比顯著上調(diào)的菌群prevotella、pseudoflavonifractor、flavonifractor、butyrivibrio、methanothrix，但沒有回復到bc水平，而這些菌群在m組沒有統(tǒng)計學差異的改變，因此推測這些菌群可以延長帶瘤生存時間。綜上所述，nitrososphaera、pseudomonas、gp7、terrimonas、cellulomonas、methanomassiliicoccus、haemophilus的顯著下調(diào)，可以促進腫瘤的發(fā)生和生長，相當于抑癌菌屬。顯著上調(diào)comamonas可以抑制腫瘤生長，也相當于抑癌菌屬。顯著上調(diào)prevotella、pseudoflavonifractor、flavonifractor、butyrivibrio、methanothrix可以延長帶瘤生存時間，相當于抑癌菌屬。6.5.6如圖11所示，接著基于cog和kegg進行菌群的功能分析，發(fā)現(xiàn)菌群功能也是bc和m組最相近，其次為l組，和nc組差別最大。菌群功能最主要集中在carbohydratetransportandmetabolism碳水化合物的運輸和代謝、aminoacidtransportandmetabolism氨基酸運輸和代謝、membranetransport膜運輸、replication,recombinationandrepair復制、重組和修復、transcription轉(zhuǎn)錄、translation,ribosomalstructureandbiogenesis翻譯,核糖體結構和生物轉(zhuǎn)化、cellwall/membrane/envelopebiogenesis細胞壁/膜/信封生源論、generalfunctionpredictiononly通常功能預測、functionunknown未知功能。6.5.7如圖12所示，最后基于cog和kegg進行的分組間菌群功能差異比較，發(fā)現(xiàn)p<0.05的菌群功能如下：nc組菌群高表達的功能為carbohydratemetabolism碳水化合物代謝、transcription轉(zhuǎn)錄、membranetransport膜運輸，說明菌群通過增加碳水化合物的代謝、轉(zhuǎn)錄和膜運輸，達到促進腫瘤發(fā)生和生長的作用。l組菌群高表達的功能為coenzymetransportandmetabolism輔酶運輸和代謝、post-translationalmodification翻譯后修飾、environmentaladaptation環(huán)境適應、metabolismofcofactorsandvitamins輔酶因子和維生素代謝、folding,sortinganddegradation折疊,排序和退化、metabolismofterpenoidsandpolyketides多酮類化合物和萜類化合物的代謝、glycanbiosynthesisandmetabolism多糖生物合成和代謝，說明菌群通過增加輔酶運輸和代謝、翻譯后修飾、環(huán)境適應、輔酶因子和維生素代謝、折疊,排序和退化、多酮類化合物和萜類化合物的代謝、多糖生物合成和代謝，達到延長帶瘤生存時間的作用。德國科學家奧托·瓦伯格(ottowarburg)在上世紀20年代發(fā)現(xiàn)：癌細胞比其他細胞以更高的效率吸收葡萄糖來促進自身快速生長，然而這些葡萄糖主要是通過糖酵解途徑在細胞內(nèi)被利用。正常細胞只有在缺氧的情況下進行糖酵解，而腫瘤細胞即使在不缺氧的情況下也優(yōu)先進行糖酵解，消耗更多的葡萄糖和產(chǎn)生更多的乳酸，這就是著名的warburg效應。研究發(fā)現(xiàn)warburg效應跟腫瘤細胞旺盛的生長需求有關，糖酵解不僅為腫瘤細胞的增殖提供能量，而且還為其脂肪酸和核酸的合成提供原料。我們的菌群功能差異比較結果完全符合腫瘤代謝的特點。以上所述實施例的各技術特征可以進行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實施例中的各個技術特征所有可能的組合都進行描述，然而，只要這些技術特征的組合不存在矛盾，都應當認為是本說明書記載的范圍。以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。當前第1頁12