本發(fā)明涉及一種治療癌癥的聯(lián)合用藥物。
背景技術(shù)：
：隨著生活節(jié)奏的加快，癌癥的病發(fā)率越來越高，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。癌癥是指機(jī)體在各種致瘤因素作用下，局部細(xì)胞異常增生而形成的局部腫塊，細(xì)胞生長失控和細(xì)胞周期的失調(diào)是所有癌癥共有的特征。目前發(fā)現(xiàn)的癌癥包括肝癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等等。肝癌即肝臟惡性腫瘤，可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性肝臟惡性腫瘤起源于肝臟的上皮或間葉組織，前者稱為原發(fā)性肝癌，是我國高發(fā)的，危害極大的惡性腫瘤；后者稱為肉瘤，與原發(fā)性肝癌相比較較為少見。CI994，Tacedinaline，其結(jié)構(gòu)式為CAS號為112522-64-2，是一種新型的具有廣泛抗腫瘤活性的化合物，其作用機(jī)制可能涉及抑制組蛋白脫乙酰作用和細(xì)胞周期阻滯。CAY10683，SantacruzamateA，其結(jié)構(gòu)式為CAS號為1477949-42-0，是一種組蛋白脫乙?；敢种苿哂幸种平Y(jié)腸癌的作用。未見將二者聯(lián)合使用的報道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種治療癌癥的聯(lián)合用藥物，以克服單獨(dú)使用CI994藥效不佳的缺陷。本發(fā)明治療癌癥的聯(lián)合用藥物，它含有不同規(guī)格的單位制劑，用于同時或者分別給CI994和CAY10683，以及藥學(xué)上可接受的載體。CI994，Tacedinaline，其結(jié)構(gòu)式為CAS號為112522-64-2。CAY10683，SantacruzamateA，其結(jié)構(gòu)式為CAS號為1477949-42-0。優(yōu)選地，所述CI994和CAY10683的摩爾配比為：CI9940.25～600份，CAY106830.0001～30份；進(jìn)一步優(yōu)選地，CI9940.25～2份，CAY106830.0001～0.1份；再進(jìn)一步優(yōu)選地，所述CI994和CAY10683的摩爾配比為：CI9942份，CAY106830.1份。其中，所述制劑為注射制劑。本發(fā)明還提供了CI994和CAY10683在制備治療癌癥的聯(lián)合用藥物中的用途。優(yōu)選地，所述CI994和CAY10683的摩爾配比為：CI9940.25～600份，CAY106830.0001～30份；進(jìn)一步優(yōu)選地，CI9940.25～2份，CAY106830.0001～0.1份；再進(jìn)一步優(yōu)選地，所述CI994和CAY10683的摩爾配比為：CI9942份，CAY106830.1份。其中，所述治療癌癥的藥物是治療肝癌的藥物。本發(fā)明聯(lián)合用藥物可以有效治療癌癥，效果明顯優(yōu)于CAY10683和CI994單獨(dú)使用，特別是治療肝癌的療效明確，說明二者在本發(fā)明特定配比下配合使用后具有協(xié)同增效的作用，臨床應(yīng)用前景良好。下面通過具體實(shí)施方式對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對本發(fā)明的限制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。附圖說明圖1細(xì)胞形態(tài)圖圖2細(xì)胞周期分布圖圖3細(xì)胞凋亡率圖具體實(shí)施方式本發(fā)明各種材料和試劑均為市售品。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明聯(lián)合用藥物治療肝癌的作用1、實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株：HepG2細(xì)胞、Huh7細(xì)胞抑制劑：CI994(Tacedinaline)(IC50＝0.57μM，設(shè)置實(shí)驗(yàn)濃度為2μM)，HDAC2特異性抑制劑SantacruzamateA(CAY10683)(IC50＝119pM，設(shè)置實(shí)驗(yàn)濃度為100nM)，廣譜性HDAC抑制劑Vorinostat(SAHA)(IC50<86nM，設(shè)置實(shí)驗(yàn)濃度為5μM)。細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑：1640培養(yǎng)基，DMEM高糖培養(yǎng)基，進(jìn)口胎牛血清，胰酶。檢測試劑：細(xì)胞凋亡檢測試劑Anexin-V、細(xì)胞周期檢測試劑PI。2、實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)分組：對照組；CI994組；CAY10683組；CI994+CAY10683組和SAHA組。(1)肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞和Huh7細(xì)胞的培養(yǎng)將HepG2細(xì)胞、Huh7細(xì)胞分別復(fù)蘇接種在10mm培養(yǎng)皿中，接種密度為3×107個。HepG2細(xì)胞培養(yǎng)基為含10％胎牛血清的RPI1640培養(yǎng)基，Huh7細(xì)胞培養(yǎng)基為含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基。接種后37℃、5％CO2環(huán)境下孵箱培養(yǎng)8小時讓細(xì)胞貼壁。(2)HDAC1特異性抑制劑CI994和HDAC2特異性抑制劑CAY10683對肝癌細(xì)胞的誘導(dǎo)對照組：不作處理；CI994組：在培養(yǎng)第3天時加入CI994，加入時的濃度為2μMCAY10683組：在第2天時加入CAY10683，加入時的濃度為100nM；CI994+CAY10683組：在培養(yǎng)第2天時加入CAY10683，加入時的濃度為100nM；在培養(yǎng)第3天時加入CI994，加入時的濃度為2μM；加入CI994時和CAY10683時的體積相同。SAHA組：在培養(yǎng)第3天時加入SAHA，加入時的濃度為5μM；培養(yǎng)5天后，進(jìn)行檢測；(3)使用倒置顯微鏡對肝癌細(xì)胞形態(tài)的觀察；(4)使用碘化丙啶(propidiumiodide,PI)標(biāo)記細(xì)胞DNA并通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布；(5)使用AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1聯(lián)合用藥CI994+CAY10683導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變按照相應(yīng)濃度加入HDAC抑制劑并培養(yǎng)3天后，首先觀察了抑制劑對肝癌細(xì)胞形態(tài)的影響。結(jié)果由圖1可見，CI994或者CAY10683均不影響HepG2細(xì)胞的成團(tuán)重疊生長的特性，廣譜性HDAC抑制劑SAHA也不影響HepG2細(xì)胞的成團(tuán)重疊生長的特性；而聯(lián)合用藥CI994+CAY10683則導(dǎo)致HepG2細(xì)胞無法成團(tuán)生長，且明顯可見死亡漂浮細(xì)胞。在Huh7細(xì)胞中，單一性的CI994或者單一性的CAY10683培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)和對照相比無任何差別；廣譜性HDAC抑制劑SAHA使得部分細(xì)胞形態(tài)稍有變化；而聯(lián)合用藥CI994+CAY10683則導(dǎo)致Huh7細(xì)胞形態(tài)顯著性改變。3.2聯(lián)合用藥CI994+CAY10683導(dǎo)致細(xì)胞周期分布改變由于腫瘤細(xì)胞具有高增殖活性，我們通過流式檢測了細(xì)胞周期分布。結(jié)果如圖2所示，在HepG2細(xì)胞中，對照組細(xì)胞的G1期細(xì)胞比例為55.37％、S期細(xì)胞比例為35.55％、G2期細(xì)胞比例為9.08％。CI994抑制組的G1：S：G2＝59.88％：31.77％：8.35％，CAY10683組的G1：S：G2＝58.46％：34.86％：6.68％，SAHA抑制組G1：S：G2＝57.55％：35.16％：7.29％，以上幾組抑制劑對HepG2細(xì)胞周期的影響均無顯著性差異。而CI994+CAY10683抑制組的G1：S：G2＝70.02％：25.39％：4.6％。同樣的，在Huh7細(xì)胞中相應(yīng)的細(xì)胞比例為：對照組G1：S：G2＝62.23％：24.59％：13.18％；CI994抑制組G1：S：G2＝62.4％：29.35％：8.24％；CAY10683抑制組G1：S：G2＝65.69％：25.15％：9.16％；SAHA抑制組G1：S：G2＝64.13％：22.99％：12.88％；而CI994+CAY10683抑制組G1：S：G2＝76.75％：20％：3.25％。細(xì)胞周期中處于增殖周期的細(xì)胞(S期+G2期)顯示細(xì)胞增殖活性，在我們的實(shí)驗(yàn)中，單一性抑制劑均未使肝癌細(xì)胞的S期+G2期比例出現(xiàn)較大下降，而聯(lián)合用藥CI994+CAY10683使S期+G2期細(xì)胞比例降低了約15％，可見聯(lián)合用藥CI994+CAY10683能顯著性抑制HepG2細(xì)胞的增殖，從而起到治療肝癌的作用。3.3聯(lián)合用藥CI994+CAY10683導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率上升我們進(jìn)一步檢測了細(xì)胞凋亡比例。通過AnexinV染色，流式分析，結(jié)果顯示如圖3，HepG2細(xì)胞對照組的凋亡比例為8.16％，CI994抑制組為6.35％，CAY10683抑制組為8.09％，SAHA抑制組為4.5％，而CI994+CAY10683抑制組則上升到21.48％；Huh7細(xì)胞對照組的凋亡比例為11.34％，CI994抑制組為18.05％，CAY10683抑制組為14.44％，SAHA抑制組為24.39％，而CI994+CAY10683抑制組則上升到28.44％。從以上結(jié)果可見聯(lián)合運(yùn)用CI994+CAY10683可顯著性提高肝癌細(xì)胞的凋亡，從而起到治療肝癌的作用。根據(jù)以上結(jié)果可以看出，本發(fā)明將CI994+CAY10683聯(lián)合使用，可以有效抑制肝癌細(xì)胞、治療肝癌的作用，而且聯(lián)合使用的效果優(yōu)于CI994、CAY10683單獨(dú)使用效果的總和，說明二者聯(lián)合使用發(fā)揮了協(xié)同增效的作用。實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明聯(lián)合用藥物治療肝癌的作用1、實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株：HepG2細(xì)胞抑制劑：CI994(Tacedinaline)，HDAC2特異性抑制劑SantacruzamateA(CAY10683)，廣譜性HDAC抑制劑Vorinostat(SAHA)。細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑：1640培養(yǎng)基，DMEM高糖培養(yǎng)基，進(jìn)口胎牛血清，胰酶。檢測試劑：細(xì)胞凋亡檢測試劑Anexin-V、細(xì)胞周期檢測試劑PI。2、實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)分組：對照組；不同濃度的CI994組；不同濃度的CAY10683組；不同濃度的CI994+CAY10683組、不同濃度的SAHA組。(1)肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)將HepG2細(xì)胞復(fù)蘇接種在10mm培養(yǎng)皿中，接種密度為3×107個。HepG2細(xì)胞培養(yǎng)基為含10％胎牛血清的RPI1640培養(yǎng)基。接種后37℃、5％CO2環(huán)境下孵箱培養(yǎng)8小時讓細(xì)胞貼壁。(2)HDAC1特異性抑制劑CI994和HDAC2特異性抑制劑CAY10683對肝癌細(xì)胞的誘導(dǎo)對照組：不作處理；CI994組：在培養(yǎng)第3天時加入CI994，加入時的濃度分別為0.25μM、0.5μM、1μM和2μM；CAY10683組：在第2天時加入CAY10683，加入時的濃度分別為0.1nM、1nM、10nM、100nM；CI994+CAY10683組1：在培養(yǎng)第2天時加入CAY10683，加入時的濃度分別為0.25μM、0.5μM、1μM和2μM；在培養(yǎng)第3天時加入CI994，加入時的濃度分別為0.1nM、1nM、10nM、100nM；SAHA組：在培養(yǎng)第3天時加入SAHA，加入時的濃度為100nM，500nM，1μM和5μM；培養(yǎng)5天后，進(jìn)行檢測；使用AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)在HepG2細(xì)胞株中進(jìn)行了濃度梯度摸索實(shí)驗(yàn)檢測，結(jié)果如下表所示：組別凋亡率對照組8.16％CI994(0.25μM)7.37％CI994(0.5μM)6.03％CI994(1μM)7.93％CI994(2μM)6.35％CAY10683(0.1nM)7.59％CAY10683(1nM)6.51％CAY10683(10nM)7.61％CAY10683(100nM)8.09％CI994(0.25μM)+CAY10683(0.1nM)8.13％CI994(0.5μM)+CAY10683(1nM)12.72％CI994(1μM)+CAY10683(10nM)13.47％CI994(2μM)+CAY10683(100nM)21.48％SAHA(100nM)8.77％SAHA(500nM)8.36％SAHA(1μM)7.35％SAHA(5μM)4.5％實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明將CI994(0.25～600μM)+CAY10683(0.0001～30μM)聯(lián)合使用，可以有效抑制肝癌細(xì)胞、治療肝癌的作用，并且在CI994(2μM)+CAY10683(0.1μM)時，聯(lián)合使用的效果優(yōu)于CI994、CAY10683單獨(dú)使用效果的總和，說明二者聯(lián)合使用發(fā)揮了協(xié)同增效的作用。綜上，本發(fā)明聯(lián)合用藥物可以有效治療癌癥，特別是對肝癌的療效明確，而且效果明顯優(yōu)于CAY10683和CI994單獨(dú)使用，說明二者在本發(fā)明特定配比下配合使用后具有協(xié)同增效的作用，臨床應(yīng)用前景良好。當(dāng)前第1頁1 2 3