本發(fā)明涉及中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及薏米殼和薏米種皮提取物的應(yīng)用及含有其的中藥組合物和制備方法。
背景技術(shù)：
：經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，薏苡仁具有活性成分多和營養(yǎng)價(jià)值高兩大突出特點(diǎn)，如含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類、維生素、薏苡素、谷甾醇、生物堿、氨基酸、腺苷以及薏苡仁脂和薏苡仁多糖等營養(yǎng)成分和活性成分，并富含多種氨基酸和對(duì)人體有益的多種不飽和脂肪酸。但是，薏米殼和薏米種皮是薏米深加工的副產(chǎn)品，但至今為止，該資源并未得到有效地利用，如果能將薏米殼和薏米種皮得以有效的利用，開發(fā)出高品質(zhì)的具功能性的中藥組合物，并延伸產(chǎn)品鏈，將大大提高其附加值，有著重大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明首次提出薏米殼和薏米種皮提取物在抑制乙酰膽堿酯酶制劑中的應(yīng)用。神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病、亨廷頓氏病及帕金森氏病等均屬于臨床醫(yī)學(xué)難題和重大疾病范疇，阿爾茨海默病主要表現(xiàn)為腦細(xì)胞的廣泛死亡，特別是基底節(jié)區(qū)的腦細(xì)胞。正常情況下，基底節(jié)區(qū)發(fā)出的纖維投射到大腦與記憶和認(rèn)知有關(guān)的皮質(zhì)，它釋放乙酰膽堿。短期記憶的形成必須有乙酰膽堿的參與，患者與正常人相比乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的含量比正常人減少90％。乙酰膽堿酯酶(AchE)被認(rèn)為是一個(gè)的篩選抗阿爾茨海默病藥物的靶點(diǎn)，利用藥物抑制過量的AchE活性將有助于治療阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性病變。膽堿能藥物通過抑制膽堿酯酶(AchE)來提高病人體內(nèi)的乙酰膽堿水平改善病人的認(rèn)知和行為障礙，減緩疾病的進(jìn)展，對(duì)提高短期記憶效果明顯，如石杉?jí)A甲、多奈哌齊、利斯的明等屬于膽堿酯酶抑制劑藥物，但療效不理想?？寡趸瘎┚S生素E治療具有較好的安全性和耐受性，并刺激與認(rèn)知有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)來改善腦環(huán)境。還有其他一些治療藥物如丙炔苯丙胺、非類固醇類抗炎藥等，所有的這些治療老年癡呆的藥物都有待改善?，F(xiàn)有臨床藥物不能滿足治療需要，存在諸多問題：如藥物活性不強(qiáng)、服藥時(shí)間長(zhǎng)副作用明顯、患者出現(xiàn)耐藥性、療效下降、進(jìn)口藥物價(jià)格昂貴等，急需研究高效低毒、副作用少的抗阿爾茨海默病的新藥。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒以此，本發(fā)明的目的在于提出薏米殼和薏米種皮提取物在抑制乙酰膽堿酯酶方面的應(yīng)用，同時(shí)提出了一種能夠抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物及其制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種薏米殼和薏米種皮提取物在乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。進(jìn)一步的，應(yīng)用于一種抑制乙酰膽堿酯酶活性的中藥組合物。一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，按重量份計(jì)算，所述中藥組合物中各原料藥的重量份分別為：薏米殼30～50份、薏米種皮30～50份、益智仁1～10份、銀杏葉1～10份、三七1～10份以及黃芩1～10份。進(jìn)一步的，按重量份計(jì)算，所述中藥組合物中各原料藥的重量份分別為：薏米殼40份、薏米種皮40份、益智仁5份、銀杏葉5份、三七5份以及黃芩5份。進(jìn)一步的，按重量份計(jì)算，薏米殼：薏米種皮：益智仁：銀杏葉：三七：黃芩的質(zhì)量比為8:8:1:1:1:1。所述抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加水進(jìn)行浸泡；(3)去脂去蠟：將物料加入到2～10倍體積的1～2％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30～60min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：將原料粗液在120～140℃下加熱10～20min；然后降低溫度至60～70℃，繼續(xù)加熱30～60min；再升高溫度至120～140℃，繼續(xù)加熱10～20min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。進(jìn)一步的，所述步驟(2)中，加入2～10倍體積的水進(jìn)行浸泡處理1～12h。進(jìn)一步的，所述步驟(3)中，將物料加入到5倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min。進(jìn)一步的，所述步驟(5)煎煮過程為：在130℃下加熱10min；然后降低溫度至65℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至130℃，繼續(xù)加熱10min。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提出薏米殼和薏米種皮提取物在抑制乙酰膽堿酯酶方面的應(yīng)用，且其具有明顯的乙酰膽堿酯酶抑制率。以薏米殼和薏米種皮原料為主，配以益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩獲得了的一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，各組分之間相互協(xié)同增效，具有良好的乙酰膽堿酯酶抑制活性，可應(yīng)用于治療阿爾茨海默癥的新型藥物。此外，本發(fā)明制備方法可獲得高活性的乙酰膽堿酯酶抑制藥物。具體實(shí)施方式為對(duì)本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，發(fā)明人結(jié)合實(shí)施例進(jìn)行說明，但以下實(shí)施例所描述的僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。本發(fā)明提出一種薏米殼和薏米種皮提取物在抑制乙酰膽堿酯酶活性中的應(yīng)用，應(yīng)用時(shí)，將薏米殼和薏米種皮提取物加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料或藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體后，以常規(guī)的藥物制劑方法可制備成任何一種適宜的臨床制劑，例如可以是注射劑(粉針、凍干粉針、水針、輸液等)、片劑、口服液、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊、滴丸等。其中，所述的輔料可以是抗氧絡(luò)合劑、填充劑、骨架材料等；所述的藥學(xué)上可接受的載體是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化鈉、葡萄糖酸鈣或磷酸鈣中的一種或幾種，優(yōu)選為甘露醇或乳糖。實(shí)施例1一種薏米殼和薏米種皮提取物，有以下制備方法制得：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加水進(jìn)行浸泡；(3)去脂去蠟：將物料加入到5倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：將原料粗液在130℃下加熱10min；然后降低溫度至65℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至130℃，繼續(xù)加熱60min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏，即為產(chǎn)品。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果1)實(shí)驗(yàn)條件a、材料：DMSO(二甲基亞砜)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O；AchE酶；PNPG。b、實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀Bio-RadModel680型(Bio-RadLaboratoriesInc.)2)實(shí)驗(yàn)方法和過程樣品處理：將1mg實(shí)施例1樣品溶于20μL二甲基亞砜(DMSO)作為母液，取1μL母液加入249μL蒸餾水配成200μg·mL-1的溶液。在96孔酶標(biāo)板上測(cè)定樣品的AchE抑制活性。具體操作如下：在96孔酶標(biāo)板中依次加入20μLPB(100mM，pH8.0)，25μLAChE(0.033U/mL，pH8.0PB溶解稀釋)，25μL樣品溶液(40μg·mL－1)。冰浴5min后，加15μLATCI(0.6mM)及15μLDTNB(1.5mM)。37℃孵育60min后，用酶標(biāo)儀在412nm下測(cè)定其吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次求平均值，根據(jù)下式計(jì)算抑制率：酶活性抑制率％＝[A空白-(A樣品-A背景)]/A空白×100式中A空白：不加樣品反應(yīng)后的吸收值；A樣品：加入樣品反應(yīng)后的吸收值；A背景：只加樣品的吸收值。3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示：表1空白背景實(shí)施例1樣品OD值0.0140.2080.2210.0130.2220.2430.0120.2190.209均值0.0130.2160.224抑制率(％)38.4過以上實(shí)施例可表明本發(fā)明提出的薏米殼和薏米種皮提取物對(duì)AchE有較好抑制活性，可應(yīng)用于抗阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性病變的藥物制備中，具有重要的應(yīng)用前景。實(shí)施例2基于該應(yīng)用，本發(fā)明還提出一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，按重量份計(jì)算，所述中藥組合物中各原料藥的重量份分別為：薏米殼30份、薏米種皮30份、益智仁1份、銀杏葉1份、三七1份以及黃芩1份。該中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加入10倍體積的水進(jìn)行浸泡處理6h；(3)去脂去蠟：將物料加入到5倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：在130℃下加熱10min；然后降低溫度至65℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至130℃，繼續(xù)加熱10min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果1)實(shí)驗(yàn)條件a、材料：DMSO(二甲基亞砜)(科密歐公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(廣東汕頭市西隴化工廠)；AchE酶(美國Sigma公司)；PNPG(美國Sigma公司)b、實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀Bio-RadModel680型(Bio-RadLaboratoriesInc.)2)實(shí)驗(yàn)方法和過程樣品處理：將1mg實(shí)施例2樣品溶于20μL二甲基亞砜(DMSO)作為母液，取1μL母液加入249μL蒸餾水配成200μg·mL-1的溶液。在96孔酶標(biāo)板上測(cè)定樣品的AchE抑制活性。具體操作如下：在96孔酶標(biāo)板中依次加入20μLPB(100mM，pH8.0)，25μLAChE(0.033U/mL，pH8.0PB溶解稀釋)，25μL樣品溶液(40μg·mL－1)。冰浴5min后，加15μLATCI(0.6mM)及15μLDTNB(1.5mM)。37℃孵育60min后，用酶標(biāo)儀在412nm下測(cè)定其吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次求平均值，根據(jù)下式計(jì)算抑制率：酶活性抑制率％＝[A空白-(A樣品-A背景)]/A空白×100式中A空白：不加樣品反應(yīng)后的吸收值；A樣品：加入樣品反應(yīng)后的吸收值；A背景：只加樣品的吸收值。4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示：表2實(shí)施例3一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，按重量份計(jì)算，所述中藥組合物中各原料藥的重量份分別為：薏米殼40份、薏米種皮40份、益智仁5份、銀杏葉5份、三七5份以及黃芩5份。所述抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加入10倍體積的水進(jìn)行浸泡處理6h；(3)去脂去蠟：將物料加入到5倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：在130℃下加熱10min；然后降低溫度至65℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至130℃，繼續(xù)加熱10min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果1)實(shí)驗(yàn)條件a、材料：DMSO(二甲基亞砜)(科密歐公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(廣東汕頭市西隴化工廠)；AchE酶(美國Sigma公司)；PNPG(美國Sigma公司)b、實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀Bio-RadModel680型(Bio-RadLaboratoriesInc.)2)實(shí)驗(yàn)方法和過程樣品處理：將1mg實(shí)施例3樣品溶于20μL二甲基亞砜(DMSO)作為母液，取1μL母液加入249μL蒸餾水配成200μg·mL-1的溶液。在96孔酶標(biāo)板上測(cè)定樣品的AchE抑制活性。具體操作如下：在96孔酶標(biāo)板中依次加入20μLPB(100mM，pH8.0)，25μLAChE(0.033U/mL，pH8.0PB溶解稀釋)，25μL樣品溶液(40μg·mL－1)。冰浴5min后，加15μLATCI(0.6mM)及15μLDTNB(1.5mM)。37℃孵育60min后，用酶標(biāo)儀在412nm下測(cè)定其吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次求平均值，根據(jù)下式計(jì)算抑制率：酶活性抑制率％＝[A空白-(A樣品-A背景)]/A空白×100式中A空白：不加樣品反應(yīng)后的吸收值；A樣品：加入樣品反應(yīng)后的吸收值；A背景：只加樣品的吸收值。5)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示：表3實(shí)施例4一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，按重量份計(jì)算，所述中藥組合物中各原料藥的重量份分別為：薏米殼50份、薏米種皮50份、益智仁10份、銀杏葉10份、三七10份以及黃芩10份。所述抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加入10倍體積的水進(jìn)行浸泡處理6h；(3)去脂去蠟：將物料加入到5倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：在130℃下加熱10min；然后降低溫度至65℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至130℃，繼續(xù)加熱10min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果1)實(shí)驗(yàn)條件a、材料：DMSO(二甲基亞砜)(科密歐公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(廣東汕頭市西隴化工廠)；AchE酶(美國Sigma公司)；PNPG(美國Sigma公司)b、實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀Bio-RadModel680型(Bio-RadLaboratoriesInc.)2)實(shí)驗(yàn)方法和過程樣品處理：將1mg實(shí)施例4樣品溶于20μL二甲基亞砜(DMSO)作為母液，取1μL母液加入249μL蒸餾水配成200μg·mL-1的溶液。在96孔酶標(biāo)板上測(cè)定樣品的AchE抑制活性。具體操作如下：在96孔酶標(biāo)板中依次加入20μLPB(100mM，pH8.0)，25μLAChE(0.033U/mL，pH8.0PB溶解稀釋)，25μL樣品溶液(40μg·mL－1)。冰浴5min后，加15μLATCI(0.6mM)及15μLDTNB(1.5mM)。37℃孵育60min后，用酶標(biāo)儀在412nm下測(cè)定其吸光度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次求平均值，根據(jù)下式計(jì)算抑制率：酶活性抑制率％＝[A空白-(A樣品-A背景)]/A空白×100式中A空白：不加樣品反應(yīng)后的吸收值；A樣品：加入樣品反應(yīng)后的吸收值；A背景：只加樣品的吸收值。6)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示：表4實(shí)施例2至實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，按重量份計(jì)算，最佳配方為實(shí)施例3的配方，即為：薏米殼40份、薏米種皮40份、益智仁5份、銀杏葉5份、三七5份以及黃芩5份，即當(dāng)薏米殼：薏米種皮：益智仁：銀杏葉：三七：黃芩的質(zhì)量比為8:8:1:1:1:1時(shí)，其乙酰膽堿酯酶活性抑制率最好。此外，以實(shí)施例3最佳配方為例，研究制備方法的工藝參數(shù)，進(jìn)行實(shí)施例5和實(shí)施例6：實(shí)施例5一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加入2倍體積的水進(jìn)行浸泡處理1h；(3)去脂去蠟：將物料加入到2倍體積的1％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理30min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：將原料粗液在120℃下加熱10min；然后降低溫度至60℃，繼續(xù)加熱30min；再升高溫度至120℃，繼續(xù)加熱10min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果：乙酰膽堿酯酶活性抑制率為60.5％。實(shí)施例6一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)粉碎：將薏米殼、薏米種皮、益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩原料粉碎至過100～200目篩；(2)浸泡：加入5倍體積的水進(jìn)行浸泡處理12h；(3)去脂去蠟：將物料加入到10倍體積的2％質(zhì)量濃度的氫氧化鈉溶液中，攪拌均勻并煮沸，對(duì)物料進(jìn)行去脂去蠟處理60min；(4)清洗：離心分離濾液，將離心所得的沉淀水洗，水洗液與濾液合并得到原料粗液；(5)煎煮：將原料粗液在140℃下加熱20min；然后降低溫度至70℃，繼續(xù)加熱60min；再升高溫度至140℃，繼續(xù)加熱20min，離心得到原料液；(6)濃縮：濃縮原料液為室溫環(huán)境下相對(duì)密度1.1～1.2的稠膏。抑制乙酰膽堿酯酶活性測(cè)定結(jié)果：乙酰膽堿酯酶活性抑制率為62.3％。綜上所述，本發(fā)明提出薏米殼和薏米種皮提取物在抑制乙酰膽堿酯酶方面的應(yīng)用，且其具有明顯的乙酰膽堿酯酶抑制率。以薏米殼和薏米種皮原料為主，配以益智仁、銀杏葉、三七以及黃芩獲得了的一種抑制乙酰膽堿酯酶的中藥組合物，各組分之間相互協(xié)同增效，具有良好的乙酰膽堿酯酶抑制活性，可應(yīng)用于治療阿爾茨海默癥的新型藥物。此外，本發(fā)明制備方法可獲得高活性的乙酰膽堿酯酶抑制藥物。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3