本發(fā)明屬于藥物組合物領(lǐng)域，特別涉及一種抗癲癇藥物組合物。

背景技術(shù)：

癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)疾病僅次于腦血管疾病的第二大常見(jiàn)疾病，它是多種原因所致的慢性反復(fù)發(fā)作性短暫腦功能失調(diào)綜合征，以腦神經(jīng)元細(xì)胞異常放電為主要特征，其頻繁發(fā)作導(dǎo)致腦神經(jīng)元的進(jìn)行性損傷。世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)表明全世界有超過(guò)5000萬(wàn)癲癇患者，其中2000萬(wàn)癲癇患者通過(guò)正規(guī)抗癲癇藥物治療仍然不能控制或緩解，稱(chēng)為難治性癲癇。因而不斷深入研究和探索新的有效治療方法是神經(jīng)科學(xué)研究的焦點(diǎn)。

糖酵解過(guò)程是指細(xì)胞在細(xì)胞質(zhì)中分解葡萄糖生成丙酮酸的過(guò)程，此過(guò)程中伴有少量ATP的生成。在癇性發(fā)作的大鼠大腦皮質(zhì)中，糖酵解代謝率增高5倍；ATP下降15％，磷酸肌酸下降44％，而糖酵解代謝產(chǎn)物乳酸增加87％，這些研究結(jié)果表明在癇性發(fā)作的過(guò)程中，大腦皮質(zhì)ATP水平下降，能量相對(duì)供應(yīng)不足，無(wú)氧酵解增強(qiáng)參與癇性發(fā)作應(yīng)激供能。糖酵解抑制劑2脫氧葡萄糖(2DG)、1，6二磷酸果糖(FDP)也通過(guò)抑制糖酵解發(fā)揮抗癲癇作用。

糖酵解抑制劑2-DG作為葡萄糖類(lèi)似物，通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)大量蓄積以抑制糖酵解酶而發(fā)揮抗驚厥作用，其作用機(jī)制為2-DG通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制葡萄糖，生成6磷酸2-脫氧D葡萄糖，其不能被磷酸葡萄糖異構(gòu)酶轉(zhuǎn)換為6-磷酸果糖，從而抑制糖酵解代謝的后續(xù)步驟。因而2-DG可以作為糖酵解抑制劑。在諸多研究已發(fā)現(xiàn)2-DG在諸多癲癇模型中具有急性及慢性抗癲癇作用。在體外水平上，2-DG能降低高鉀、荷包牡丹堿、4-AP致癇的海馬腦片CA3區(qū)陣發(fā)性癲癇放電頻率，并且能夠降低高鉀致癇后的海馬腦片CA3區(qū)腦電圖癲癇樣發(fā)作。在體內(nèi)水平上，2-DG能夠在6HZ刺激癲癇模型[在0.5％丁卡因角膜麻醉的雄性白化病大鼠中通過(guò)角膜刺激(6HZ，0.2ms寬度矩形脈沖刺激，22mA強(qiáng)度刺激3s)形成癲癇點(diǎn)燃模型。]、耳源性癲癇模型(將大鼠在暴露于110dB,11KHZ聲音刺激20s或直到強(qiáng)直發(fā)作以建立癲癇點(diǎn)燃模型)抑制癲癇發(fā)作；在匹羅卡品致癇模型中，2-DG能延長(zhǎng)癲癇潛伏期，減少癲癇發(fā)作程度和持續(xù)時(shí)間；在通過(guò)perforant路徑的癲癇點(diǎn)燃模型中，2-DG能增加后放電閾。

1,6-二磷酸果糖(FDP)作為糖酵解途徑產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，它能產(chǎn)生反饋抑制磷酸果糖激酶，從而抑制糖酵解反應(yīng)。最近研究發(fā)現(xiàn)FDP在匹羅卡品、海仁酸和戊四氮所致的癲癇急性發(fā)作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中，其劑量依賴(lài)的抗癲癇作用要比2DG或KD更有效。而且FDP能降低化學(xué)致癇劑所致癲癇的發(fā)作持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度，也能抑制匹羅卡品所致癲癇持續(xù)狀態(tài)以后的自發(fā)性癲癇發(fā)作。

癲癇作為多種原因所致的慢性反復(fù)發(fā)作性短暫腦功能失調(diào)綜合征，其發(fā)作形式均不相同，不同的藥物在不同癲癇發(fā)作類(lèi)型中抗癲癇效果強(qiáng)弱不一，因此研究一種具有更好療效的抗癲癇藥物具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

神經(jīng)細(xì)胞興奮性的代謝調(diào)節(jié)作為控制癲癇發(fā)作的一個(gè)重要的因素已經(jīng)逐步被認(rèn)識(shí)到。本發(fā)明的目的在于提供一種抗癲癇的藥物組合物，具有更好的抗癲癇作用。

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗癲癇藥物組合物，由2脫氧葡萄糖和1，6二磷酸果糖組成，其中按照質(zhì)量比2脫氧葡萄糖:1，6二磷酸果糖＝1:(1-3)。

優(yōu)選方案，所述抗癲癇藥物組合物質(zhì)量比2脫氧葡萄糖:1，6二磷酸果糖＝1:2。

進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述癲癇為顳葉癲癇。

下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步解釋和說(shuō)明

癲癇是神經(jīng)科最常見(jiàn)疾病之一，目前國(guó)際上大部分癲癇患者都能通過(guò)口服常規(guī)抗癲癇藥物后均能控制癲癇發(fā)作，且療效良好，但目前仍有少數(shù)患者給予常規(guī)和新型抗癲癇藥物以及外科手術(shù)方法等諸多抗癇治療方法仍不能抑制其癇性發(fā)作最后發(fā)展成為難治性癲癇。

顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy,TLE)在難治性癲癇諸多類(lèi)型中一種,目前臨床上的

各種抗癲癇藥物治療效果均欠佳,且長(zhǎng)期藥物治療可伴隨嚴(yán)重副反應(yīng)；手術(shù)切除癲癇

灶或切斷癲癇放電播散途徑效果不確切，且對(duì)病人選擇性較強(qiáng)，因而癲癇發(fā)作治療

欠佳,迄今為止TLE的發(fā)病機(jī)制仍然需要進(jìn)一步研究。因此進(jìn)一步明確TLE的發(fā)病

機(jī)制，探索癲癇治療的新靶點(diǎn)成為目前急需解決的關(guān)鍵問(wèn)題。

體內(nèi)癲癇模型

顳葉癲癇的主要特點(diǎn)包括：1.邊緣系統(tǒng)，包括海馬，杏仁核和嗅皮質(zhì)等是癲癇發(fā)作的病灶的常見(jiàn)起源部位2.在發(fā)現(xiàn)顳葉癲癇以前存在神經(jīng)損傷事件如腦外傷、腫瘤、感染、缺氧、卒中、癲癇持續(xù)狀態(tài)、出生時(shí)腦損傷、中毒等；3.在出現(xiàn)神經(jīng)損傷事件后可出現(xiàn)一段或長(zhǎng)或短的潛伏期；4.行為上表現(xiàn)重復(fù)性、發(fā)作性的、短暫性的的自發(fā)性癇性發(fā)作；5.在病理學(xué)上有海馬硬化和門(mén)區(qū)中間神經(jīng)元丟失等特點(diǎn)。

目前國(guó)際上存在諸多體內(nèi)癲癇動(dòng)物模型，比較常用的是匹羅卡品癲癇模型、戊四氮癲癇模型、4-氨基吡啶癲癇模型、海仁酸癲癇模型等。

眾多的證據(jù)表明在行為學(xué)、神經(jīng)電生理學(xué)以及海馬神經(jīng)元損傷等病理學(xué)改變等方面，匹羅卡品致癇小鼠模型均與人類(lèi)顳葉癲癇非常相似,因此匹羅卡品致癇模型可以作為目前國(guó)際上顳葉癲癇的相關(guān)研究的理想模型之一。因?yàn)槠湓谛袨?、腦電圖、病理及藥理特性上與人類(lèi)顳葉癲癇非常相似，所以匹羅卡品致癇小鼠模型最近已經(jīng)廣泛用于癲癇發(fā)病機(jī)制和抗癲癇藥物研究。按照其行為改變過(guò)程和腦電圖改變可分為三個(gè)時(shí)期：1)急性期，小鼠被匹羅卡品誘發(fā)出現(xiàn)全身強(qiáng)直-陣攣發(fā)作，其臨床表現(xiàn)以面部肌肉抽搐為首發(fā)癥狀，隨著很快發(fā)展為持續(xù)性的全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作即癲癇持續(xù)狀態(tài)，癇性發(fā)作期以及發(fā)作間期的腦電圖表現(xiàn)為異常癇樣放電，為癲癇持續(xù)狀態(tài)前24小時(shí)；2)靜止期，又稱(chēng)為潛伏期，小鼠不出現(xiàn)癇性發(fā)作，其腦電圖和行為學(xué)改變大致正常，約4-14天；3)慢性癇性發(fā)作期，靜止期后反復(fù)出現(xiàn)自發(fā)性癇樣發(fā)作與人類(lèi)癲癇復(fù)雜部分性發(fā)作似。

4-氨基吡啶作為一種瞬時(shí)鉀通道阻滯劑,其致癇機(jī)制是其在中樞通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿、多巴胺和去甲腎上腺素等遞質(zhì)而導(dǎo)致癇性發(fā)作。其在行為學(xué)方面主要表現(xiàn)為:在給予給予4氨基吡啶后的數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)如胡須抽動(dòng)、擺尾,隨后出現(xiàn)節(jié)律性點(diǎn)頭、面肌痙攣、四肢陣攣,伴跌倒或翻轉(zhuǎn),大部分動(dòng)物出現(xiàn)強(qiáng)直陣攣發(fā)作，持續(xù)時(shí)間為數(shù)分鐘，強(qiáng)直陣攣發(fā)作后癇性發(fā)作強(qiáng)度逐漸減弱,整個(gè)癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)可達(dá)數(shù)小時(shí)。而在腦電圖方面表現(xiàn)為：在4-氨基吡啶致癇成功的動(dòng)物模型體內(nèi)可以迅速記錄到快速、成串出現(xiàn)的尖波、棘波及尖-慢復(fù)合波、棘-慢復(fù)合波。

戊四氮是通過(guò)興奮腦干促進(jìn)癇性發(fā)作。在行為學(xué)改變方面，動(dòng)物在注射戊四氮后其迅速出現(xiàn)四肢強(qiáng)直陣攣發(fā)作癥狀，其癇性發(fā)作特點(diǎn)為持續(xù)時(shí)間短，發(fā)作程度高，癲癇潛伏期短，因而其發(fā)作形式與急性發(fā)作或全身性發(fā)作癲癇模型相似。根據(jù)其藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn),癲癇的形成需要長(zhǎng)期反復(fù)閾下劑量導(dǎo)致一次較長(zhǎng)時(shí)間的癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作后才能出現(xiàn)，而不是單次大劑量腹腔注射戊四氮所致的癲癇持續(xù)狀態(tài)形成。其行為學(xué)改變主要表現(xiàn)為它可以在短時(shí)間內(nèi)(數(shù)分鐘)致動(dòng)物抽搐迅速發(fā)生，短時(shí)間使動(dòng)物處于癲癇持續(xù)狀態(tài)后，持續(xù)較短時(shí)間后癇性發(fā)作終止，其后的癇性發(fā)作形式與人類(lèi)慢性癲癇反復(fù)發(fā)作類(lèi)似。而在腦電圖方面表現(xiàn)為：可見(jiàn)高波幅棘波、棘慢波。其作用機(jī)制可能為戊四氮首先引起腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)興奮，然后傳導(dǎo)到其他腦區(qū)，導(dǎo)致大腦癇性放電。

海人酸又稱(chēng)紅藻氨酸或海藻氨酸(kainic acid,KA)主要通過(guò)使興奮性突觸后電流增加誘發(fā)癇性發(fā)作。其行為學(xué)變化主要為大鼠在注射海仁酸數(shù)分鐘后迅速出現(xiàn)出現(xiàn)凝視、面部抽搐、上肢抖動(dòng)等癇性發(fā)作癥狀，隨后大部分大鼠可出現(xiàn)四肢強(qiáng)直-陣攣樣發(fā)作，強(qiáng)直陣攣發(fā)作持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，一般持續(xù)時(shí)間大約為數(shù)小時(shí)，癇性發(fā)作間期，大鼠完全停止活動(dòng)。因而其行為學(xué)改變與人類(lèi)復(fù)雜部分性發(fā)作行為改變相似，是國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用目前研究人類(lèi)復(fù)雜部分性發(fā)作常見(jiàn)癲癇模型。其腦電圖主要表現(xiàn)為：EEG出現(xiàn)癇性樣腦電圖改變?cè)跁r(shí)間上與癇性行為發(fā)作行為學(xué)改變相對(duì)應(yīng)，不同腦區(qū)的癇性樣腦電圖改變不同。其作用機(jī)制主要可能為海人酸可以通過(guò)激活神經(jīng)元細(xì)胞興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸受體以及增加腦內(nèi)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的水平誘發(fā)癇性發(fā)作。

2脫氧葡萄糖、1、6二磷酸果糖的抗癲癇作用

在行為學(xué)改變方面，有研究發(fā)現(xiàn)在戊四氮癲癇模型中，2-DG有輕度抗癲癇作用，但是戊四氮癇性模型癇性發(fā)作行為學(xué)特點(diǎn)是癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間短，發(fā)作程度高，癲癇潛伏期短，因而其癲癇潛伏期太短其不能很好的模擬顳葉癲癇的癇性發(fā)作過(guò)程。4-氨基吡啶癇性模型與戊四氮癇性模型行為學(xué)改變相似，能迅速出現(xiàn)癇性發(fā)作，而且能持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，因而其癲癇潛伏期太短其不能很好的模擬顳葉癲癇。目前國(guó)際上暫無(wú)2-DG在海仁酸致癇模型中發(fā)揮抗癲癇作用的文獻(xiàn)。而最近研究發(fā)現(xiàn)1、6二磷酸果糖在匹羅卡品、海仁酸和戊四氮所致的癲癇急性發(fā)作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中，其劑量依賴(lài)的抗癲癇作用要比2DG或KD更有效。而且1、6二磷酸果糖能降低化學(xué)致癇劑所致癲癇的發(fā)作持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度，也能抑制匹羅卡品所致癲癇持續(xù)狀態(tài)以后的自發(fā)性癲癇發(fā)作。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2DG、1、6二磷酸果糖在體內(nèi)匹羅卡品癲癇模型、戊四氮癲癇模型、4-氨基吡啶癲癇模型、海仁酸癲癇模型均通過(guò)延長(zhǎng)癲癇潛伏期、降低癲癇發(fā)作時(shí)間及癲癇發(fā)作評(píng)分發(fā)揮抗癲癇作用，與以前實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)相對(duì)于2DG、1、6二磷酸果糖組，2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用組小鼠癲癇潛伏期增加、癲癇發(fā)作時(shí)間及癲癇發(fā)作評(píng)分均降低，這些結(jié)果顯示2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用抗癲癇療效優(yōu)于單用2DG、1、6二磷酸果糖。

在腦電圖改變方面，2-DG、1、6二磷酸果糖能通過(guò)降低癇性發(fā)作頻率及幅度發(fā)揮抗癇作用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照組腦電圖是以α、β波為主且波幅較小；匹羅卡品癲癇模型、戊四氮癲癇模型、4-氨基吡啶癲癇模型、海仁酸癲癇模型可見(jiàn)大量的尖波、棘波和尖慢波；2-DG、1、6二磷酸果糖組干預(yù)組腦電圖是也主要是以α、β波為主且波幅較小。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在匹羅卡品等體內(nèi)致癇模型上，2-DG、1、6二磷酸果糖能通過(guò)降低癇性的發(fā)作頻率及幅度發(fā)揮抗癇作用。而相對(duì)于2DG、1、6二磷酸果糖組，2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用組小鼠降低癇性發(fā)作頻率及幅度更加明顯，這些結(jié)果也顯示2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用抗癲癇療效優(yōu)于單用2DG、1、6二磷酸果糖。

體外海馬腦片癇性模型

60年前最早出現(xiàn)采用電生理實(shí)驗(yàn)方法在離體腦片上進(jìn)行研究,因?yàn)橹T多優(yōu)點(diǎn)此技術(shù)廣泛的應(yīng)用于各領(lǐng)域中，其中其在癲癇發(fā)病機(jī)制方面的研究進(jìn)展較快^[60-62]。這些都是離體腦片的諸多突出的優(yōu)點(diǎn)所致:(l)在解剖顯微鏡下可以直接觀(guān)察腦片的結(jié)構(gòu)和電極的動(dòng)態(tài)變化；(2)可以通過(guò)諸如pH值、溫度、滲透壓、離子濃度等的改變影響腦片外環(huán)境；(3)不存在血腦屏障,相關(guān)研究藥物可以直接作用在腦片上；(4)排除了麻醉、呼吸、心跳等對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。(5)不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳因素不同，在電生理實(shí)驗(yàn)中，一個(gè)動(dòng)物可產(chǎn)生很多腦片，因而不存在遺傳因素影。而在癲癇發(fā)病機(jī)制研究方面，除了腦片共有的優(yōu)點(diǎn)外,離體海馬腦片還具有其它特有特點(diǎn):(l)腦組織對(duì)缺氧最敏感和癲癇發(fā)作閾值最低的結(jié)構(gòu)就是海馬:(2)海馬腦片中神經(jīng)元和纖維組織的排列非常有序而且其神經(jīng)解剖通路未受影響而非常完整，這些是海馬組織的重要結(jié)構(gòu)特點(diǎn)之一,因而海馬組織不同區(qū)在電生理實(shí)驗(yàn)中非常容易定位：(3)有完整的神經(jīng)環(huán)路,(4)而且在離體海馬腦片上,采用驚厥藥可以迅速誘發(fā)癇樣放電,因而海馬腦片是非常理想而且簡(jiǎn)便并且可用于細(xì)胞水平研究癲癇發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?sup>[63]。

膜片鉗技術(shù)作為電生理實(shí)驗(yàn)方法中最重要的實(shí)驗(yàn)方法，近年來(lái)其已經(jīng)大量用于離體腦片的相關(guān)研究^[65-66]?？梢暦てQ技術(shù)和盲法膜片鉗技術(shù)是目前國(guó)際上最主要的兩種膜片鉗技術(shù)方法[64]。其中盲法膜片鉗技術(shù)是在無(wú)法看見(jiàn)神經(jīng)元的條件下完成縫接，因此要求實(shí)驗(yàn)人員有較高的實(shí)驗(yàn)操作水平和豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，但是實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高，適合在國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。

目前國(guó)際上存在諸多體外海馬腦片癇性模型，如高鉀致癇模型、荷包牡丹堿致癇模型、高頻電刺激致癇模型等，其中荷包牡丹堿致癇模型中荷包牡丹堿作為GABAA受體的特異拮抗劑,即它能和GABA特異地競(jìng)爭(zhēng)在神經(jīng)元上的GABAA受體一離子通道復(fù)合體的結(jié)合位點(diǎn)從而抑制GABAA受體功能，導(dǎo)致癇性樣放電；高鉀致癇模型是通過(guò)增加人工腦脊液中細(xì)胞外的鉀離子濃度發(fā)揮抗癇作用[67]。它們都是典型的體外海馬腦片致癇模型，本研究發(fā)現(xiàn)1、6二磷酸果糖、2-DG可以降低高鉀、荷包牡丹堿致癇模型的神經(jīng)元細(xì)胞高頻癇性樣發(fā)作頻率。而相對(duì)于2DG、1、6二磷酸果糖組，2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用組小鼠降低癇性發(fā)作頻率更加明顯，這些結(jié)果也進(jìn)一步說(shuō)明2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用抗癲癇療效優(yōu)于單用2DG、1、6二磷酸果糖。

本發(fā)明研究結(jié)果顯示，2-DG、1、6二磷酸果糖在體內(nèi)、體外癲癇模型上具有抗癇作用，2DG與1、6二磷酸果糖聯(lián)用抗癲癇療效優(yōu)于單用2DG、1、6二磷酸果糖

附圖說(shuō)明

圖1為匹羅卡品癲癇模型組小鼠癲癇潛伏期結(jié)果對(duì)比；

圖2為匹羅卡品癲癇模型組小鼠癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間結(jié)果對(duì)比；

圖3為匹羅卡品癲癇模型組小鼠癇性癲癇評(píng)分結(jié)果對(duì)比；

圖4為4AP癲癇模型組小鼠癲癇潛伏期結(jié)果對(duì)比；

圖5為4AP癲癇模型組小鼠癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間結(jié)果對(duì)比；

圖6為4AP癲癇模型組小鼠癇性癲癇評(píng)分結(jié)果對(duì)比；

圖7為戊四氮癲癇模型組小鼠癲癇潛伏期結(jié)果對(duì)比；

圖8為戊四氮癲癇模型組小鼠癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間結(jié)果對(duì)比；

圖9為戊四氮癲癇模型組小鼠癇性癲癇評(píng)分結(jié)果對(duì)比；

圖10為海人酸癲癇模型組小鼠癲癇潛伏期結(jié)果對(duì)比；

圖11為海人酸癲癇模型組小鼠癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間結(jié)果對(duì)比；

圖12為海人酸癲癇模型組小鼠癇性癲癇評(píng)分結(jié)果對(duì)比；

圖13為不同模型組小鼠的腦電圖記錄結(jié)果對(duì)比，圖13A為正常小鼠腦電圖，圖13B為匹羅卡品癲癇模型組小鼠腦電圖，圖13C為2DG治療組小鼠腦電圖(匹羅卡品癲癇模型)，圖13D為1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(匹羅卡品癲癇模型)，圖13E為2DG+1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(匹羅卡品癲癇模型)；

圖14為不同模型組小鼠的腦電圖記錄結(jié)果對(duì)比，圖14A為正常小鼠腦電圖，圖14B為4AP癲癇模型組小鼠腦電圖，圖14C為2DG治療組小鼠腦電圖(4AP癲癇模型)，圖14D為1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(4AP癲癇模型)，圖14E為2DG+1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(4AP癲癇模型)；

圖15為不同模型組小鼠的腦電圖記錄結(jié)果對(duì)比，圖14A為正常小鼠腦電圖，圖14B為戊四氮癲癇模型組小鼠腦電圖，圖14C為2DG治療組小鼠腦電圖(戊四氮癲癇模型)，圖14D為1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(戊四氮癲癇模型)，圖14E為2DG+1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(戊四氮癲癇模型)；

圖16為不同模型組小鼠的腦電圖記錄結(jié)果對(duì)比，圖14A為正常小鼠腦電圖，圖14B為海人酸癲癇模型組小鼠腦電圖，圖14C為2DG治療組小鼠腦電圖(海人酸癲癇模型)，圖14D為1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(海人酸癲癇模型)，圖14E為2DG+1,6二磷酸果糖治療組小鼠腦電圖(海人酸癲癇模型)；

圖17為體外海馬腦片CA3區(qū)用7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖18為體外海馬腦片CA3區(qū)用7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，使用10mM 2-DG后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖19為體外海馬腦片CA3區(qū)用7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，使用10mM 1，6二磷酸果糖后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖20為為體外海馬腦片CA3區(qū)用7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，使用10mM 2-DG+10mM1，6二磷酸果糖后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖21為體外海馬腦片CA3區(qū)10uM荷包牡丹堿模擬癇性發(fā)作神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖22為體外海馬腦片CA3區(qū)用10uM荷包牡丹堿模擬癇性發(fā)作，使用10mM 2-DG后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖23為體外海馬腦片CA3區(qū)用10uM荷包牡丹堿模擬癇性發(fā)作，使用10mM 1，6二磷酸果糖后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖；

圖24為為體外海馬腦片CA3區(qū)用10uM荷包牡丹堿模擬癇性發(fā)作，使用10mM 2-DG+10mM1，6二磷酸果糖后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例

1.分別建立匹羅卡品、戊四氮、4AP、海仁酸癲癇小鼠模型，應(yīng)用糖酵解抑制劑2-DG、1，6二磷酸果糖、1，6二磷酸果糖和2-DG聯(lián)合處理小鼠，采用行為學(xué)觀(guān)察方法、腦電圖方法檢測(cè)處理前后小鼠行為學(xué)、腦電圖變化。

2.建立體外原代神經(jīng)元細(xì)胞模型，應(yīng)用高鉀、荷包牡丹堿誘導(dǎo)驚厥模型，采用膜片鉗使用應(yīng)用糖酵解抑制劑2-DG、1，6二磷酸果糖、1，6二磷酸果糖和2-DG聯(lián)合使用后動(dòng)作到位的變化。

實(shí)驗(yàn)方法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

本實(shí)驗(yàn)入選動(dòng)物均為6-8周健康雄性C57BL/6小鼠，體重22-24克，均購(gòu)自中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心并各實(shí)驗(yàn)組小鼠均在此中心監(jiān)護(hù)喂養(yǎng)，不同組的C57BL/6小鼠均放至在人工晝夜12小時(shí)循環(huán)照明環(huán)境中(7:00AM-7:00PM)中飼養(yǎng)，入組的小鼠分為4-6只分別分籠飼養(yǎng)，在籠中小鼠能自由攝食及飲水；定時(shí)更換小鼠日用食物及飲水。所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法均通過(guò)中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院倫理委員會(huì)以及中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心批準(zhǔn)使用。

入選6-8周健康雄性C57BL/6小鼠，隨機(jī)平均分為4組：正常對(duì)照組；癲癇模型組(匹羅卡品癲癇模型組、戊四氮癲癇模型組、4AP癲癇模型組、海仁酸癲癇模型組)；2-DG干預(yù)組；1，6二磷酸果糖干預(yù)組；1，6二磷酸果糖和2-DG聯(lián)合干預(yù)組。

2.銀-氯化銀微電極的安裝

90mg/kg苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉不同組小鼠，然后將其固定在腦立體定位儀上。腦定位方法以前囟作參考點(diǎn)，小鼠海馬區(qū)按照小鼠腦定位圖譜定位(一個(gè)記錄電極為前囟后3.0mm，矢狀線(xiàn)右側(cè)旁1.8mm，硬膜下3mm，另一個(gè)記錄電極放置在小鼠額區(qū))。然后在定位點(diǎn)上采用牙科鉆垂直顱骨緩慢鉆透顱骨。使用銀-氯化銀微電極作為記錄電極置入，然后用牙托粉和502膠攪勻在微電極上并將其固定在顱骨上，最后逐層縫合皮膚。經(jīng)過(guò)7天的恢復(fù)期之后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)^[29]。

3.建立癲癇模型以及行為學(xué)監(jiān)測(cè)

將不同組C57BL/6小鼠做好標(biāo)記，6只一籠分別喂養(yǎng)，(1)匹羅卡品致癇模型組：取6-8周健康雄性C57BL/6小鼠。首先給予致癇組小鼠注射東莨菪堿硝酸甲酯(注射劑量：1mg/kg，濃度：0.2mg/ml，ip)其目的主要是為了將外周的M膽堿受體反應(yīng)減少到最少程度，30分鐘后給予匹羅卡品(其作為毒蕈堿膽堿能受體激動(dòng)劑注射劑量：320mg/kg,濃度：40mg/ml，ip)、(2)4AP劑量:4AP(2.5mg/kg,濃度:0.5mg/ml組；ip)(3)海人酸劑量:側(cè)腦室內(nèi)注入0.1μg(0.1μg/5μl)的海人酸，(4)戊四氮慢速點(diǎn)燃癲癇模型：腹腔注射給藥：隔天給藥，26天內(nèi)給藥13次，每次均為上午9:00-11:30進(jìn)行。給藥前稱(chēng)體重，致癇組每只小鼠腹腔注射0.5％的PTZ，劑量為32mg/kg，合0.0064ml/g，以誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)。

2-DG、1，6二磷酸果糖以及1，6二磷酸果糖和2-DG聯(lián)合干預(yù)組：(1).2-DG干預(yù)組；取6-8周健康雄性C57BL/6小鼠標(biāo)記，腹腔注射東莨菪堿硝酸甲酯(注射劑量：1mg/kg，濃度：0.2mg/ml，ip)以及2-DG(注射劑量：250mg/kg，濃度：400mg/ml，ip)，分別給予不同致癇劑誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)。并將已經(jīng)進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)的致癇組以及2-DG干預(yù)組小鼠單獨(dú)放置在鼠籠中(一籠一只)，為避免外界刺激使其處于安靜的環(huán)境中，如小鼠的癲癇持續(xù)狀態(tài)達(dá)到兩小時(shí)以上而仍未得到完全控制，立即給予地西泮終止癇性發(fā)作(注射劑量：7.5mg/kg,濃度：2.5mg/ml，ip)。(2).1，6二磷酸果糖干預(yù)組；取6-8周健康雄性C57BL/6小鼠標(biāo)記，腹腔注射1，6二磷酸果糖(500mg/kg FDP，ip)，分別給予不同致癇劑誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)。并將已經(jīng)進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)的致癇組以及2-DG干預(yù)組小鼠單獨(dú)放置在鼠籠中(一籠一只)，為避免外界刺激使其處于安靜的環(huán)境中，如小鼠的癲癇持續(xù)狀態(tài)達(dá)到兩小時(shí)以上而仍未得到完全控制，立即給予地西泮終止癇性發(fā)作(注射劑量：7.5mg/kg,濃度：2.5mg/ml，ip)。(3).1，6二磷酸果糖和2-DG聯(lián)合干預(yù)組；取6-8周健康雄性C57BL/6小鼠標(biāo)記，腹腔注射東莨菪堿硝酸甲酯(注射劑量：1mg/kg，濃度：0.2mg/ml，ip)以及2-DG(注射劑量：250mg/kg，濃度：400mg/ml，ip)以及1，6二磷酸果糖(500mg/kg FDP，ip)，分別給予不同致癇劑誘發(fā)癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)。并將已經(jīng)進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)的致癇組以及2-DG干預(yù)組小鼠單獨(dú)放置在鼠籠中(一籠一只)，為避免外界刺激使其處于安靜的環(huán)境中，如小鼠的癲癇持續(xù)狀態(tài)達(dá)到兩小時(shí)以上而仍未得到完全控制，立即給予地西泮終止癇性發(fā)作(注射劑量：7.5mg/kg,濃度：2.5mg/ml，ip)。

正常對(duì)照組：選擇與造模成功體重相似的致癇組以及2-DG干預(yù)組小鼠作為對(duì)照，除了與注射匹羅卡品等劑量的生理鹽水，其余除了與干預(yù)組相同。本實(shí)驗(yàn)所有所需的藥物溶液均在使用前制備，所有實(shí)驗(yàn)步驟都是在上午08:00至11:00之間進(jìn)行。將不同實(shí)驗(yàn)組小鼠置于索尼DV的攝像頭下(不影響小鼠晝夜生活節(jié)律前提下觀(guān)察和記錄行為學(xué)變化)，連續(xù)監(jiān)測(cè)小鼠的行為學(xué)變化以及監(jiān)測(cè)不同組小鼠癲癇潛伏期、癇性發(fā)作程度、癲癇持續(xù)時(shí)間。

小鼠癇性發(fā)作級(jí)別按照改良后的Racine標(biāo)準(zhǔn)^[30]：0級(jí)-無(wú)陣攣；1級(jí)-面肌陣攣；2級(jí)-面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭；3級(jí)-面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭+前肢陣攣；4級(jí)-前肢陣攣+后肢站立+面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭；5級(jí)-跌倒+后肢站立+前肢陣攣+面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭；6級(jí)-亂竄驚叫+跌倒+后肢站立+前肢陣攣+面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭；7級(jí)-全身肌強(qiáng)直+亂竄驚叫+跌倒+后肢站立+前肢陣攣+面肌陣攣+節(jié)律性點(diǎn)頭。

4.腦電圖測(cè)定

將金屬微電極安裝在不同組小鼠的海馬區(qū)，并全時(shí)程腦電圖監(jiān)測(cè)不同組小鼠腦電圖的變化，其中記錄電極植入海馬區(qū)及額區(qū)，小鼠耳電極為參考電極。致癇組小鼠注射東莨菪堿硝酸甲酯以及匹羅卡品、戊四氮、海人酸、4-AP，2-DG干預(yù)組、1，6二磷酸果糖組、2-DG+1，6二磷酸果糖聯(lián)用組，正常對(duì)照組注射相應(yīng)劑量的生理鹽水，觀(guān)察不同組的小鼠的腦電圖變化。

5.在體外海馬腦片CA3區(qū)，給予10uM荷包牡丹堿、7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，誘發(fā)動(dòng)作電位頻率增加，應(yīng)用盲法膜片鉗技術(shù)監(jiān)測(cè)使用10mM 2-DG(分子量164)、10mM 1，6二磷酸果糖(分子量354)、10mM 2-DG+10mM 1，6二磷酸果糖(換算成質(zhì)量比約為1:2)前后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化。

(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

將不同組出生后2周左右的C57BL/6小鼠做好標(biāo)記，6只一籠分別喂養(yǎng)，分為癲癇組、1，6二磷酸果糖組、2DG組、1，6二磷酸果糖+2DG組，所有藥物溶液使用前制備，所有實(shí)驗(yàn)都是在上午08:00至11:00之間。

(2)海馬切片的制備

將C57BL/6小鼠給予腹腔注射1％戊巴比妥鈉(60～75mg/kg)麻醉后，用眼科剪快速斷頭，去除顱骨后取出全腦，并將其迅速置于用已經(jīng)準(zhǔn)備好的氧氣混合(95％O2+5％CO2)飽和的低溫人工腦脊液artificial cerebrospinal fluid(ACSF)中冷卻30s。事先取出通過(guò)制冰機(jī)已經(jīng)制好的冰粒并放至在玻璃培養(yǎng)皿周?chē)瑢⒁延肁CSF浸濕的濾紙放至在玻璃培養(yǎng)皿上，將大腦取出并放至在濾紙上。從大腦半球腹內(nèi)側(cè)分離出海馬，迅速把海馬放至在瓊脂上，固定于振動(dòng)切片機(jī)標(biāo)本托上，在0～4℃和供氧混合氣體條件下，連續(xù)切取厚400μm的腦片，每切一次，用沾有人工腦脊液的柔軟毛筆尖將已切完的腦片與瓊脂分開(kāi)，隨后迅速將懸浮在人工腦脊液中腦片放入冰冷的、事先已經(jīng)通95％O2和5％CO2混合氣的人工腦脊液中，室溫下20～25℃孵育90-120分鐘待用。重復(fù)上述過(guò)程，一直到腦片完全被切完為止，一般一側(cè)海馬切片可以切8-14片。室溫下記錄。浴槽的溫度為22℃，從斷頭到腦片轉(zhuǎn)移至浴槽之間的時(shí)間應(yīng)控制在5-6分鐘。

(3)腦片固定

在灌流槽中放入腦片，將附著有尼龍絲的U形金屬架輕輕覆蓋在腦片上，ACSF從恒流泵中恒速流入灌流槽中，流速為1～2L/min，液面高于腦片約1～2mm。采用具有紅外線(xiàn)DIC系統(tǒng)的顯微鏡監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖像，將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖像通過(guò)成像系統(tǒng)與電腦連接，采用圖像采集軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)圖片和數(shù)據(jù)進(jìn)行觀(guān)察和分析。所有實(shí)驗(yàn)操作以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的采集與分析均在室溫下進(jìn)行。

(4)盲法膜片鉗技術(shù)監(jiān)測(cè)正常海馬腦片的CA3區(qū)神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢活l率

1、將Ag/AgCl電極置于灌流槽中構(gòu)成電流回路。

2、雙手接觸屏蔽罩以釋放操作者身體靜電。

3、打開(kāi)膜片鉗放大器POWER→ON，記錄模式選擇SEARCH檔。

4、打開(kāi)patch-clamp軟件，點(diǎn)擊按鈕，監(jiān)測(cè)電阻及電流變化。

5、電極內(nèi)液充灌玻璃微電極，并安裝。用放大器檢測(cè)電極電阻是否在最佳范圍內(nèi)(2-5M歐姆)。

6、用注射器給電極內(nèi)施加適度正壓。

7、降低電極入水，用微電極操縱器步進(jìn)馬達(dá)以每次2微米的速度斜下穿插，并接近腦片。

8、封接：盲法膜片鉗技術(shù)形成膜片鉗記錄的封接方法與傳統(tǒng)方法相同即用微操縱儀操縱記錄電極尖端接近、但不接觸標(biāo)本的海馬CA3區(qū)表面。在電極后部用一個(gè)玻璃注射器(總量為20ml)給予其正壓，以防止海馬組織內(nèi)堵塞電極尖端。調(diào)整好放大器并施與方波刺激，在示波器上可以看到矩形的變化。此時(shí)將注射器正壓釋放并轉(zhuǎn)為給予負(fù)壓吸引即可形成封接。等待約1min,待封接完全形成,再適當(dāng)加大負(fù)壓,直至抽破細(xì)胞膜。此時(shí)神經(jīng)元特有的電容特征波形可在示波器上見(jiàn)到,這就說(shuō)明形成封接的是神經(jīng)元。解除刺激方波。

9、迅速點(diǎn)擊按鈕，記錄模式選擇VC檔。

10、觀(guān)察，記錄動(dòng)作電位變化。

(5).建立網(wǎng)絡(luò)致癇模型

將致癇劑荷包牡丹堿(10μM)或高鉀(7.5mM)加入氧混合氣飽和的ACSF配置10μM荷包牡丹堿、7.5mM高鉀溶液，輸液泵持續(xù)灌流10μM荷包牡丹堿、7.5mM高鉀溶液1分鐘，灌流速度10-15ml/分鐘，建立網(wǎng)絡(luò)致癇模型

(6)在.2DG組、1，6二磷酸果糖組、1，6二磷酸果糖+2DG組分別加入10mM 2-DG、10mM 1，6二磷酸果糖、10mM 2-DG+10mM 1，6二磷酸果糖加入氧混合氣飽和的ACSF配置中，輸液泵持續(xù)灌流1分鐘，灌流速度10-15ml/分鐘

(7).盲法膜片鉗技術(shù)記錄2-DG干預(yù)后海馬腦片神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化，具體操作同前。

(8)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并作圖。所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的兩個(gè)獨(dú)立樣本間均數(shù)比較采用兩樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)。如滿(mǎn)足方差齊性采用LSD法，如不滿(mǎn)足方差齊性則采用Games-Howell法。P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.不同組小鼠癲癇潛伏期、癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間、癲癇評(píng)分結(jié)果(見(jiàn)圖1-12)

匹羅卡品癲癇模型：

1)潛伏期：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間延長(zhǎng)；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間長(zhǎng)于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

2)癲癇評(píng)分：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇發(fā)作評(píng)分降低；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組評(píng)分低于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

3)癲癇持續(xù)時(shí)間：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇持續(xù)時(shí)間縮短；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間短于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

4AP癲癇模型：

1)潛伏期：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間延長(zhǎng)；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間長(zhǎng)于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

2)癲癇評(píng)分：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇發(fā)作評(píng)分降低；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組評(píng)分低于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

3)癲癇持續(xù)時(shí)間：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇持續(xù)時(shí)間縮短；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間短語(yǔ)2DG組和1,6二磷酸果糖組。

戊四氮癲癇模型：

1)潛伏期：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間延長(zhǎng)；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間長(zhǎng)于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

2)癲癇評(píng)分：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇發(fā)作評(píng)分降低；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組評(píng)分低于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

3)癲癇持續(xù)時(shí)間：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇持續(xù)時(shí)間縮短；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間短語(yǔ)2DG組和1,6二磷酸果糖組。

海人酸癲癇模型：

1)潛伏期：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間延長(zhǎng)；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間長(zhǎng)于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

2)癲癇評(píng)分：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇發(fā)作評(píng)分降低；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組評(píng)分低于2DG組和1,6二磷酸果糖組。

3)癲癇持續(xù)時(shí)間：與對(duì)照組相比，2DG組、1,6二磷酸果糖組及2DG+1,6二磷酸果糖組癲癇持續(xù)時(shí)間縮短；其中，2DG+1,6二磷酸果糖組時(shí)間短語(yǔ)2DG組和1,6二磷酸果糖組。

2.不同組小鼠的腦電圖記錄結(jié)果，見(jiàn)圖13-16。

3.在體外海馬腦片CA3區(qū)，給予10uM荷包牡丹堿、7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，誘發(fā)動(dòng)作電位頻率增加，應(yīng)用盲法膜片鉗技術(shù)監(jiān)測(cè)使用10mM 2-DG、10mM 1，6二磷酸果糖、10mM 2-DG+10mM 1，6二磷酸果糖前后神經(jīng)元細(xì)胞動(dòng)作電位頻率的變化。

荷包牡丹堿、高鉀模擬癇性發(fā)作CA3區(qū)神經(jīng)元的動(dòng)作電位頻率增加，1、6二磷酸果糖、2-DG均能降低CA3區(qū)神經(jīng)元的動(dòng)作電位頻率增加的作用，1、6二磷酸果糖+2DG組降低CA3區(qū)神經(jīng)元的動(dòng)作電位頻率增加的作用更加明顯。

見(jiàn)圖17-20，在體外海馬腦片CA3區(qū)上，給予7.5mM高鉀模擬癇性發(fā)作，10mM2-DG、10mM 1、6二磷酸果糖降低荷包牡丹堿致癇模型的動(dòng)作電位頻率.1、6二磷酸果糖+2DG組降低CA3區(qū)神經(jīng)元的動(dòng)作電位頻率增加的作用更加明顯。

見(jiàn)圖21-24，在體外海馬腦片CA3區(qū)上，給予10uM荷包牡丹堿模擬癇性發(fā)作，10mM2-DG、10mM 1、6二磷酸果糖降低荷包牡丹堿致癇模型的動(dòng)作電位頻率.1、6二磷酸果糖+2DG組降低CA3區(qū)神經(jīng)元的動(dòng)作電位頻率增加的作用更加明顯。