本發(fā)明屬于瑪卡提取物應用技術領域，具體涉及一種瑪卡有效成分、提取方法及應用。

背景技術：

瑪卡(lepidummeyenii,maca)是原產于秘魯安第斯山區(qū)的一種草本植物，屬于十字花科獨荇菜屬，含有蛋白質、糖類、脂類、氨基酸、脂肪酸、礦物元素等多種營養(yǎng)成分，千百年來被當地居民作為食用和藥用的優(yōu)質資源。研究表明，瑪卡具有提高生育能力、抗疲勞、改善性功能、抗氧化、抑制前列腺增生、緩解更年期綜合癥、增強免疫力等多種功效，而且無任何毒副作用，以瑪卡為主要原料生產的各類保健品近年來在市場上已得到越來越多消費者的青睞。但有關瑪卡抑制炎癥反應，降低肝損傷，抑制自身免疫性肝炎，并沒有相關報道。

自身免疫性肝炎是由自身免疫反應介導的慢性進行性肝臟炎癥性疾病，其臨床特征為不同程度的血清轉氨酶升高、高γ-球蛋白(interferon-γ，ifn-γ)血癥、自身抗體陽性，組織學特征為以淋巴細胞、漿細胞浸潤為主的界面性肝炎，嚴重病例可快速進展為肝硬化和肝衰竭，該病在世界范圍內均有發(fā)生。

我國是肝病高發(fā)生的國家之一，尋找和研究既具有抗病毒又具有保肝作用的有效天然藥物，一直是中醫(yī)藥科研工作的重要方向。西醫(yī)用于肝炎的治療多見于抗病毒藥、免疫調節(jié)藥及護肝降酶類等藥物。臨床治療結果表明，這些藥物多具有良好的抑制病毒復制，恢復正常肝功能，保護肝細胞等作用，并且療效迅速。但是西藥的不足之處為遠期療效不穩(wěn)定，易反復，轉陰率低，有些藥品價格昂貴和表現(xiàn)一定的副作用。另一方面，現(xiàn)代醫(yī)學在干預肝損傷的治療方面多采用休息加強營養(yǎng)補充維生素和對癥治療等，嚴重者甚至被迫終止用藥，并無特異性藥物。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的一種瑪卡有效成分、提取方法及應用，瑪卡有效成分可以有效降低肝損傷，在制備護肝藥物方面具有良好的應用前景。

本發(fā)明提供了一種瑪卡有效成分的提取方法，包括以下步驟：

步驟1，將風干的瑪卡研磨成粉末，得到瑪卡粉；

步驟2，將瑪卡粉置于密閉容器內，并用95％的酒精浸泡攪拌2-3h，然后過濾，得到醇提液；

步驟3，將醇提液轉移至40-50℃條件下恒溫旋轉蒸發(fā)4-5h，得到濃縮液；

步驟4，將濃縮液冷凍干燥，得到瑪卡有效成分。

優(yōu)選的，上述瑪卡有效成分的提取方法中，步驟1中，將風干的瑪卡研磨成粉末，過80目篩，得到瑪卡粉。

優(yōu)選的，上述瑪卡有效成分的提取方法中，步驟2中，所述過濾采用的是濾紙過濾或者板框過濾機過濾。

優(yōu)選的，上述瑪卡有效成分的提取方法中，步驟4中，冷凍干燥的條件為：溫度-20℃、真空度5-10帕。

本發(fā)明還提供了一種根據上述提取方法制備而成的瑪卡有效成分。

本發(fā)明還提供了一種上述瑪卡有效成分在制備預防或者修復肝損傷制品中的應用。

優(yōu)選的，將瑪卡有效成分用于制備抗乙肝病毒的藥物。

優(yōu)選的，將瑪卡有效成分用于制備抑制轉氨酶升高的藥物。

優(yōu)選的，將瑪卡有效成分用于制備抑制轉氨酶升高、預防肝損傷的保健品。

優(yōu)選的，將瑪卡有效成分用于制備抑制轉氨酶升高、預防肝損傷的功能飲料。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的瑪卡有效成分具有以下有益效果：

1、運用整體觀念、辨證論治的特色，發(fā)揮瑪卡的多途徑、多層次、多靶點，價格低廉、副作用少的優(yōu)勢，在抗乙肝病毒和抗肝損傷治療中取得了不錯的療效。

2、可以明顯降低自身免疫性、病毒性及酒精性肝炎導致的轉氨酶升高和炎癥因子釋放，降低肝臟組織損傷，具有保肝護肝的效果，在制備護肝藥物、制備抑制轉氨酶升高的保健品、功能飲料(預防肝損傷)方面具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中不同實驗組的小鼠存活率；

圖2為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中不同實驗組的小鼠血液中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的酶活力；

其中，圖2a為8h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2b為8h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖2c為16h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2d為16h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖2e為24h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2f為24h谷丙轉氨酶(alt)活力值；

圖3為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中不同實驗組血液中炎性細胞因子的含量；

圖3a為8htnf-α含量，圖3b為8hifn-γ含量，圖3c為16htnf-α含量，圖3d為16hifn-γ含量，圖3e為24htnf-α含量，圖3f為24hifn-γ含量；

圖4為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中h&e法觀察不同實驗組肝臟損傷和炎癥細胞親潤情況的顯微視圖；

圖5為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中tunel凋亡檢測法觀察不同實驗組肝臟損傷和炎癥細胞親潤情況的顯微視圖；

其中，圖5a1為陰性對照組細胞質的染色圖片，圖5a2為陰性對照組細胞核的染色圖片，圖5a3為陰性對照組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5b1為肝炎模型組細胞質的染色圖片，圖5b2為肝炎模型組細胞核的染色圖片，圖5b3為肝炎模型組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5c1為瑪卡有效成分注射組細胞質的染色圖片，圖5c2為瑪卡有效成分注射組細胞核的染色圖片，圖5c3為瑪卡有效成分注射組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5d1為瑪卡有效成分治療組細胞質的染色圖片，圖5d2為瑪卡有效成分治療組細胞核的染色圖片，圖5d3為瑪卡有效成分治療組細胞質和細胞核的共同染色圖片；

圖6為cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中不同實驗組肝臟中免疫抑制細胞數量變化圖；

其中，圖6a為陰性對照組，圖6b為肝炎模型組，圖6c為瑪卡有效成分注射組，圖6d為瑪卡有效成分治療組；

圖7為polyi:c誘導的急性病毒性肝炎模型中不同實驗組的小鼠血液中谷丙轉氨酶的酶活力；

其中，圖7a為8h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖7b為16h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖7c為24h谷丙轉氨酶(alt)活力值；

圖8為酒精性肝炎模型中不同實驗組的小鼠血液中谷丙轉氨酶的酶活力。

具體實施方式

下面結合具體實施例和附圖對本發(fā)明進行詳細說明，但不應理解為本發(fā)明的限制。下列實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規(guī)條件操作，由于不涉及發(fā)明點，故不對其步驟進行詳細描述。

當實施例給出數值范圍時，應理解，除非本發(fā)明另有說明，每個數值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數值均可選用。除非另外定義，本發(fā)明中使用的所有技術和科學術語與本技術領域技術人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設備、材料外，根據本技術領域的技術人員對現(xiàn)有技術的掌握及本發(fā)明的記載，還可以使用與本發(fā)明實施例中所述的方法、設備、材料相似或等同的現(xiàn)有技術的任何方法、設備和材料來實現(xiàn)本發(fā)明。

本發(fā)明提供的一種瑪卡有效成分的提取方法，包括以下實施例：

實施例1

一種瑪卡有效成分的提取方法，包括以下步驟：

步驟1，將風干的瑪卡研磨成粉末，過80目篩，得到瑪卡粉；

步驟2，將瑪卡粉置于密閉容器內，并用95％的酒精浸泡攪拌2h，然后用濾紙過濾，得到醇提液；

步驟3，將醇提液轉移至40℃條件下恒溫旋轉蒸發(fā)4h，得到濃縮液；

步驟4，將濃縮液于溫度-20℃、真空度5-10帕的條件下冷凍干燥，得到瑪卡有效成分，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以此法制備而成的瑪卡有效成分在抗乙肝病毒和抗肝損傷的治療中具有良好的效果。

實施例2

一種瑪卡有效成分的提取方法，包括以下步驟：

步驟1，將風干的瑪卡研磨成粉末，過80目篩，得到瑪卡粉；

步驟2，將瑪卡粉置于密閉容器內，并用95％的酒精浸泡攪拌2.5h，然后用濾紙過濾，得到醇提液；

步驟3，將醇提液轉移至45℃條件下恒溫旋轉蒸發(fā)4.5h，得到濃縮液；

步驟4，將濃縮液于溫度-20℃、真空度5-10帕的條件下冷凍干燥，得到瑪卡有效成分。

以此法制備而成的瑪卡有效成分在抗乙肝病毒和抗肝損傷的治療中具有良好的效果。

實施例3

一種瑪卡有效成分的提取方法，包括以下步驟：

步驟1，將風干的瑪卡研磨成粉末，過80目篩，得到瑪卡粉；

步驟2，將瑪卡粉置于密閉容器內，并用95％的酒精浸泡攪拌3h，然后用濾紙過濾，得到醇提液；

步驟3，將醇提液轉移至50℃條件下恒溫旋轉蒸發(fā)5h，得到濃縮液；

步驟4，將濃縮液于溫度-20℃、真空度5-10帕的條件下冷凍干燥，得到瑪卡有效成分，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以此法制備而成的瑪卡有效成分在抗乙肝病毒和抗肝損傷的治療中具有良好的效果。

下面以實施例1的方法制備而成的瑪卡有效成分為例，說明其護肝作用。

首先將瑪卡有效成分用磷酸鹽緩沖液(pbs)溶解，制備工作濃度為20mg/ml的瑪卡有效成分工作液，充分溶解后，使用孔徑為0.22微米的微膜過濾至無菌離心管，得到實驗用的瑪卡有效成分，-20℃凍存，備用。

一、瑪卡有效成分對急性自身免疫性肝炎的保護作用

自身免疫性肝炎是一種機體過度異常的免疫刺激造成的肝臟疾病。自身免疫性肝炎主要表現(xiàn)為大量淋巴細胞浸潤，細胞因子釋放和氧化應激等，各種誘因激活淋巴細胞，其分泌的炎癥介質相互作用形成肝臟內的炎性介質網，從而損傷肝臟組織。植物凝集素刀豆蛋白a(concanavalina，cona)誘導的小鼠免疫性肝炎模型與人類的自身免疫性肝炎類似，kupffer細胞產生大量的tnf-α在疾病進程中起到重要作用。

刀豆蛋白(concanavalin–a，cona)是一種在體內對肝細胞具有特異性毒性作用的植物凝集素，它進入循環(huán)后，引起淋巴細胞迅速向肝臟遷移，炎癥細胞浸潤肝細胞實質，繼而激活和白介素等細胞因子，引發(fā)炎癥反應，通過肝細胞凋亡等多種途徑損害肝細胞，造成免疫性肝損傷。該模型只需一次性尾靜脈注射，最主要特點是發(fā)病迅速，肝臟損害明顯。這一實驗模型很好地模擬了人類自身免疫性肝病等疾病，是篩選急性肝損傷和暴發(fā)性肝衰竭治療藥物比較理想的動物模型。

1.1小鼠存活率實驗

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分治療組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組10只。

陰性對照組不做任何處理；

瑪卡有效成分注射組和瑪卡有效成分治療組中，每只小鼠腹腔注射濃度為20毫克/毫升的瑪卡有效成分，每只小鼠每次注射300微升，共注射兩次，且兩次間隔時間為16h，肝炎模型組不注射瑪卡有效成分；

第二次注射后2h，肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只小鼠按30毫克/千克老鼠體重的致死劑量，尾靜脈注射急性自身免疫性肝炎誘導劑刀豆蛋白a(cona)，24h內觀察各組小鼠存活率，結果如圖1所示。

由圖1可知，陰性對照組與瑪卡有效成分注射組的小鼠未出現(xiàn)死亡，二者的小鼠存活率均為100％，且兩組的變化趨勢相同，故圖中僅以瑪卡有效成分注射組的線條表征；肝炎模型組從8h開始陸續(xù)出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象，至18h全部死亡；瑪卡有效成分治療組只有在12h時出現(xiàn)兩只小鼠死亡。結果顯示瑪卡有效成分治療組可以很好地降低致死劑量cona造成的小鼠死亡。

1.2瑪卡有效成分在cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中對轉氨酶及血清中炎性細胞因子的影響

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分治療組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組5只。

陰性對照組不做任何處理；瑪卡有效成分注射組和瑪卡有效成分治療組中，每只小鼠腹腔注射濃度為20毫克/毫升的瑪卡有效成分，每只小鼠每次注射300微升，共注射兩次，且兩次間隔時間為16h，肝炎模型組不注射瑪卡有效成分；

第二次注射后2h，肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只小鼠按15毫克/千克老鼠體重的致死劑量，尾靜脈注射cona，然后分別在注射cona后第8h、16h和24h三個時間點，使用一次性定量毛細管眼眶靜脈叢采血法，各組每只老鼠采血200微升。將裝有血液的離心管，室溫靜置2h，3500轉/分鐘，室溫離心5分鐘，小心吸取上層血清至新的pcr管，-20℃保存。按賴氏法轉氨酶檢測試劑盒，檢測各組8h、16h和24h三個時間點的小鼠血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的酶活力，結果如圖2所示。

圖2a為8h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2b為8h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖2c為16h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2d為16h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖2e為24h谷草轉氨酶(ast)活力值，圖2f為24h谷丙轉氨酶(alt)活力值。結果顯示，瑪卡有效成分治療組8h、16h和24h三個時間點血清樣品谷丙轉氨酶(alt)和谷草轉氨酶(ast)水平均遠遠低于自身免疫性肝炎模型組(cona)，說明瑪卡有效成分抑制轉氨酶升高效果非常明顯。

同時，我們利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)，按照elisa檢測試劑盒說明書操作，檢測各組8h、16h和24h三個時間點分離得到的血清中，腫瘤壞死因子(tnf-α)和干擾素-γ(ifn-γ)的含量。結果如圖3所示。

圖3a為8htnf-α含量，圖3b為8hifn-γ含量，圖3c為16htnf-α含量，圖3d為16hifn-γ含量，圖3e為24htnf-α含量，圖3f為24hifn-γ含量。結果顯示，瑪卡有效成分治療組顯著降低血清中腫瘤壞死因子(tnf-α)和干擾素-γ(ifn-γ)的含量。

1.3瑪卡有效成分在cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中對肝損傷的影響

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分治療組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組5只。

陰性對照組不做任何處理；瑪卡有效成分注射組和瑪卡有效成分治療組中，每只小鼠腹腔注射濃度為20毫克/毫升的瑪卡有效成分，每只小鼠每次注射300微升，共注射兩次，且兩次間隔時間為16h，肝炎模型組不注射瑪卡有效成分；

第二次注射后2h，肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只小鼠按15毫克/千克老鼠體重的致死劑量，尾靜脈注射cona，24h后，小鼠摘眼球放血，脫頸處死。取肝葉邊緣少量組織，使用10％福爾馬林固定肝組織。根據蘇木精和伊紅染色法(h&e)處理福爾馬林固定的肝組織，觀察肝臟損傷和炎癥細胞親潤情況，結果如圖4所示。圖4中陰性對照組和瑪卡有效成分注射組的細胞形態(tài)規(guī)則，肝炎模型組細胞形態(tài)發(fā)生嚴重的變形，瑪卡有效成分治療組細胞形態(tài)接近于規(guī)則，說明瑪卡有效成分可以很好的降低自身炎癥造成的肝臟細胞損傷壞死。

同時，我們根據tunel凋亡檢測法處理福爾馬林固定的肝組織，觀察肝臟細胞壞死情況，結果如圖5所示。

其中，圖5a1為陰性對照組細胞質的染色圖片，圖5a2為陰性對照組細胞核的染色圖片，圖5a3為陰性對照組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5b1為肝炎模型組細胞質的染色圖片，圖5b2為肝炎模型組細胞核的染色圖片，圖5b3為肝炎模型組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5c1為瑪卡有效成分注射組細胞質的染色圖片，圖5c2為瑪卡有效成分注射組細胞核的染色圖片，圖5c3為瑪卡有效成分注射組細胞質和細胞核的共同染色圖片；圖5d1為瑪卡有效成分治療組細胞質的染色圖片，圖5d2為瑪卡有效成分治療組細胞核的染色圖片，圖5d3為瑪卡有效成分治療組細胞質和細胞核的共同染色圖片。

結果顯示，瑪卡有效成分治療組小鼠解剖后肝臟實物，he切片及tunel細胞凋亡檢測，肝炎模型組的熒光亮點較多，其他組的較少，且出肝炎模型組外的其他三組形態(tài)較為接近，說明與肝炎模型組相比，瑪卡有效成可以很好的降低自身炎癥造成的肝臟細胞損傷壞死。

1.4瑪卡有效成分在cona誘導的急性自身免疫性肝炎模型中對肝臟中免疫抑制細胞的影響

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組5只。

陰性對照組不做任何處理；瑪卡有效成分注射組和瑪卡有效成分治療組中，每只小鼠腹腔注射濃度為20毫克/毫升的瑪卡有效成分，每只小鼠每次注射300微升，共注射兩次，且兩次間隔時間為16h，肝炎模型組不注射瑪卡有效成分；

第二次注射后2h，肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只小鼠按15毫克/千克老鼠體重的致死劑量，尾靜脈注射cona，16h后，各組小鼠摘眼球放血，脫頸處死。取小鼠肝臟，200目紗網研磨，使用磷酸鹽緩沖液(pbs)吹洗勻漿，轉至干凈的50毫升離心管。4℃，60g離心3分鐘，將懸液輕緩轉至新的50毫升離心管，4℃，1060g離心10分鐘，棄上清，3毫升的紅細胞裂解液吹散重選細胞泥，冰上靜置2分鐘，4℃，1026g離心十分鐘，棄上清，42％的percoll溶液吹散重懸細胞泥，使用移液管沿管壁輕緩加入裝有70％percoll溶液的15毫升離心管液面。室溫，1260g，升6降2離心30分鐘，使用移液管將中間層的細移至新的15毫升離心管，4℃，1026g離心5分鐘，棄上清液，加入5毫升pbs重懸細胞，4℃，1026g離心5分鐘，棄上清液。使用5毫升pbs重懸細胞泥，細胞液為分離肝臟單個核細胞。將每組分離到的肝臟單個核細胞各取500微升移入1.5毫升離心管，每組樣品加入cd11b與gr-1流式檢測抗體各1微升，混勻，避光，冰上撫育1h。4℃，500g離心5分鐘，加入500微升pbs重懸細胞，4℃，500g離心5分鐘，棄上清液。使用500毫升pbs重懸細胞。使用bd流式細胞儀，檢測各組肝臟中免疫抑制細胞mdscs的數量變化，結果如圖6所示。其中，圖6a為陰性對照組，圖6b為肝炎模型組，圖6c為瑪卡有效成分注射組，圖6d為瑪卡有效成分治療組，圖6a-d中的q2象限均為mdscs細胞。

圖6結果顯示，與肝炎模型組相比，瑪卡有效成分治療組小鼠肝臟中髓系免疫抑制細胞(mdscs)數量明顯升高，說明瑪卡有效成分招募更多的免疫抑制細胞在肝臟中聚集，抑制炎癥因子釋放，降低免疫細胞浸潤，從而降低肝臟細胞損傷和組織壞死。

二、瑪卡有效成分在polyi:c誘導的急性病毒性肝炎模型中對轉氨酶的影響

聚肌苷酸-聚胞苷酸(ployi:c)是一種雙鏈rna病毒模擬物。d-氨基半乳糖(d-galn)作為肝臟致敏劑，同時再給小鼠注射ployi:c，能夠模擬病毒感染型爆發(fā)性肝臟損傷。表現(xiàn)為肝臟局部充血、壞死和高轉氨酶水平。

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分治療組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組5只。

陰性對照組不做任何處理；瑪卡有效成分注射組和瑪卡有效成分治療組中，每只小鼠腹腔注射濃度為20毫克/毫升的瑪卡有效成分，每只小鼠每次注射300微升，共注射兩次，且兩次間隔時間為16h；

第二次注射后2h，肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只20克(±2克)小，腹腔注射濃度10毫克/毫升的d-galn200微升，尾靜脈注射1微克ployi:c(200微升)，分別在第8h、16h和24h三個時間點，使用一次性定量毛細管眼眶靜脈叢采血法，各組每只老鼠采血200微升左右。裝有血液的離心管，室溫靜置2h，3500轉/分鐘，室溫離心5分鐘，小心吸取上層血清至新的ep管，-20℃保存。按賴氏法轉氨酶檢測試劑盒，檢測各組8h、16h和24h三個時間點的谷丙轉氨酶的酶活力。結果如圖7所示。

圖7a為8h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖7b為8h谷丙轉氨酶(alt)活力值，圖7c為16h谷丙轉氨酶(alt)活力值。結果顯示，瑪卡有效成分治療組8h、16h和24h三個時間點血清樣品谷丙轉氨酶(alt)水平均遠遠低于自身免疫性肝炎模型組，說明瑪卡有效成分抑制轉氨酶升高效果非常明顯。

三、瑪卡有效成分在酒精性肝炎模型中對谷丙轉氨酶的影響

長期過量飲酒可以造成酒精性肝病，由此造成接近4％的死亡率，飲酒過量可以造成酒精性肝損傷，比如肝炎和肝硬化是造成慢性肝臟疾病和肝癌的主要因素，進而導致肝臟衰竭以致死亡。每日一次長時間(4周)小鼠食用白酒灌胃，模擬人類酒精性肝損傷，是研究酒精引起肝臟疾病的常用模型。

共設計陰性對照組(說明書所有附圖中記作control)、肝炎模型組(說明書所有附圖中記作cona)、瑪卡有效成分注射組(說明書所有附圖中記作maca)、瑪卡有效成分治療組(說明書所有附圖中記作cona+maca)四組實驗，取6-8周齡的balb/c雌鼠，每組5只。

陰性對照組不做任何處理；

瑪卡有效成分灌胃組和瑪卡有效成分治療組，每只老鼠每天使用40毫克/毫升的瑪卡有效成分500微升灌胃1次；瑪卡有效成分灌胃2h后，酒精性肝炎模型組和瑪卡有效成分治療組，每只20克(±2克)小鼠，灌胃56°紅星二鍋頭200微升，按照上述方法連續(xù)灌胃28天。第29天各實驗組小鼠摘眼球取血法采血500微升左右，室溫靜置2h，3500轉/分鐘，室溫離心5分鐘，小心吸取上層血清至新的pcr管，-20℃保存。按賴氏法轉氨酶檢測試劑盒，檢測各組谷丙轉氨酶的酶活力。結果如圖8所示，結果顯示，瑪卡有效成分治療組谷丙轉氨酶水平明顯低于白酒灌胃組。說明瑪卡有效成分可以很好抑制酒精性肝炎造成的谷丙轉氨酶升高。

肝損傷是肝病的病理基礎。肝損傷的發(fā)生機制頗為復雜，可分為化學性和免疫性?；瘜W機制主要通過細胞色素及結合反應產生的中間代謝產物產生損傷，如改變質膜的完整性、線粒體功能失調細胞內離子濃度變化、降解酶的活性和自由基的作用等；免疫機制則通過細胞因子、一氧化氮、補體及免疫變態(tài)反應等產生損傷。肝炎病毒是最為常見的致肝損傷原因。目前，多數學者認為肝炎病毒感染引起的肝損傷主要與機體免疫應答有關。同時自身免疫性刺激、病毒或寄生蟲感染也是肝損傷特別是肝炎的主要的原因。研究肝損傷的發(fā)病機制和保肝藥物的作用原理需要建立合適的實驗性肝損傷動物模型，以判斷藥物療效和作用機制。誘導肝損傷模型是近年來發(fā)展起來的由淋巴細胞介導肝損傷模型。

上述實驗證明，利用本發(fā)明的方法提取的瑪卡有效成分，在對急性自身免疫性肝炎、在polyi:c誘導的急性病毒性肝炎模型、酒精性肝炎模型中均可以有效抑制肝臟中轉氨酶的升高；可以明顯降低自身免疫性、病毒性及酒精性肝炎導致的轉氨酶升高和炎癥因子釋放，降低肝臟組織損傷，具有保肝護肝的效果，在制備預防和護肝藥物方面具有良好的應用前景。

盡管已描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施例，但本領域內的技術人員一旦得知了基本創(chuàng)造性概念，則可對這些實施例作出另外的變更和修改。所以，所附權利要求意欲解釋為包括優(yōu)選實施例以及落入本發(fā)明范圍的所有變更和修改。

顯然，本領域的技術人員可以對本發(fā)明進行各種改動和變型而不脫離本發(fā)明的精神和范圍。這樣，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權利要求及其等同技術的范圍之內，則本發(fā)明也意圖包含這些改動和變型在內。