本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及中藥提取物，具體涉及具有抗血栓作用的廣西莪術(shù)提取物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

血栓性疾病嚴(yán)重威脅人類健康和生命，冠心病、心絞痛、腦中風(fēng)、心肌梗死等血栓性疾病發(fā)病率、致殘率和致死率都很高，且近年來，血栓性栓塞引起的疾病發(fā)病率逐漸增加，造成病患者生活質(zhì)量下降，勞動力喪失致殘，嚴(yán)重阻礙了經(jīng)濟發(fā)展與人民生活水平的進一步提高。從中藥中應(yīng)用具有良好抗血栓作用的中藥及其提取物，用于防治血栓性疾病。

廣西莪術(shù)為姜科植物廣西莪術(shù)（Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）的干燥根莖，性味辛、苦、溫，具有行氣破血，消積止痛之功效，在廣西、云南、四川、福建等地有分布，在廣西主產(chǎn)于欽州、南寧、大新、貴港、上思等地，是廣西地道藥材，做為中藥莪術(shù)使用，在廣西已大量人工栽培種植成功，為廣西大宗藥材，廣西民間廣泛用于瘀血經(jīng)閉、食積脹痛、跌打損傷等。

廣西莪術(shù)主要含桉油精、樟腦、異龍腦、莪術(shù)烯等30余種揮發(fā)油成分及姜黃素類、吉馬酮、β-谷甾醇、羽扇豆醇等化學(xué)成分，現(xiàn)代藥理研究表明，廣西莪術(shù)具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、抗?jié)兊人幚碜饔谩?/p>

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是從廣西莪術(shù)（Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）的干燥根莖中提取分離得到的廣西莪術(shù)提取物，而該提取物具有抗血栓方面的用途，用于治療血栓性疾病，為血栓性疾病患者帶來福音。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題。

廣西莪術(shù)藥材用水提取，提取液濃縮后，80℃烘干得干膏，上聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水、體積濃度為30%的乙醇、體積濃度為50%的乙醇、體積濃度為70%的乙醇、體積濃度為90%的乙醇進行梯度洗脫，分別收集各洗脫部位液體，減壓濃縮，真空干燥，得水洗脫部位、體積濃度為30%乙醇洗脫部位、體積濃度為50%乙醇洗脫部位、體積濃度為70%乙醇洗脫部位、體積濃度為90%乙醇洗脫部位。

以對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內(nèi)血栓形成的影響試驗，對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響試驗，對電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成的影響試驗，對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響試驗為抗血栓作用藥效學(xué)指標(biāo)，進行抗血栓作用藥效學(xué)評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位和大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位具有很好的抗血栓作用，用于制備治療血栓性疾病的抗血栓方面的藥物。

所述的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂為D101大孔吸附樹脂，而用D101大孔吸附樹脂柱進行洗脫完成后的處理：待洗脫完成后，在D101大孔吸附樹脂柱中，加入高于大孔吸附樹脂層10-20厘米的體積濃度為5%鹽酸溶液浸泡4小時后，用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%鹽酸溶液沖洗，再用蒸餾水充分沖洗，直至出口洗滌液pH值呈中性，然后以體積濃度為5%氫氧化鈉溶液按以上方法浸泡4小時，并用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%氫氧化鈉溶液沖洗，再用蒸餾水充分沖洗直至出水pH值呈中性后，D101大孔吸附樹脂柱可重新使用。

上述提取方法中涉及的提取、濃縮、洗脫、干燥均為本領(lǐng)域的常規(guī)操作。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1、本發(fā)明采用水提取廣西莪術(shù)藥材后，用大孔吸附樹脂柱進行洗脫分離，得到抗血栓作用有效洗脫提取部位：廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位。

2、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位提取物及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物可明顯抑制膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內(nèi)血栓形成，降低動物死亡和偏癱數(shù)，提高恢復(fù)數(shù)；明顯減輕大鼠體內(nèi)靜脈血栓濕重；明顯延長電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成時間；明顯減輕大鼠動靜脈旁路血栓濕重；具有明顯的抗血栓作用，可用于血栓性疾病的治療。

具體實施方式

為了更好地說明本發(fā)明的特點和實質(zhì)，下面用實施例的形式提供廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位抗血栓作用的藥理試驗結(jié)果，說明其在醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的用途。

以下是本發(fā)明的實施例，具體實施例并不對本發(fā)明做任何限制。

實施例1 廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位的制備方法

將晾干的廣西莪術(shù)藥材切碎，用按物料重量8倍量的水浸泡1h后，加熱煮沸2h，過濾；濾渣加8倍量水后加熱煮沸1h，過濾；濾渣再加8倍量水后加熱煮沸1h，過濾，合并3次濾液，濃縮后，80℃烘干得干膏，上聚苯乙烯型大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水、體積濃度為30%乙醇、體積濃度為50%乙醇、體積濃度為70%乙醇、體積濃度為90%乙醇進行梯度洗脫，分別收集各洗脫部位液體，減壓濃縮，真空干燥，得廣西莪術(shù)水洗脫部位、體積濃度為30%乙醇洗脫部位、體積濃度為50%乙醇洗脫部位、體積濃度為70%乙醇洗脫部位、體積濃度為90%乙醇洗脫部位。

所述的聚苯乙烯型大孔吸附樹脂為D101大孔吸附樹脂，而用D101大孔吸附樹脂柱進行洗脫完成后的處理：待洗脫完成后，在D101大孔吸附樹脂柱中，加入高于大孔吸附樹脂層10-20厘米的體積濃度為5%鹽酸溶液浸泡4小時后，用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%鹽酸溶液沖洗，再用蒸餾水充分沖洗，直至出口洗滌液pH值呈中性，然后以體積濃度為5%氫氧化鈉溶液按以上方法浸泡4小時，并用5-7倍柱體積量的體積濃度為5%氫氧化鈉溶液沖洗，再用蒸餾水充分沖洗直至出水pH值呈中性后，D101大孔吸附樹脂柱可重新使用。

實施例2 廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內(nèi)血栓形成的影響

取體重18～22g小鼠120只，隨機分為12組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組，血塞通組，廣西莪術(shù)各洗脫部位提取物高、低劑量組。各藥物組小鼠每日灌胃給藥一次，正常對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)7d，于末次給藥后1h，小鼠自尾靜脈注射膠原蛋白（225μg/只）與腎上腺素（9μg/只）的混合誘導(dǎo)劑，注射后觀察5min內(nèi)小鼠死亡數(shù)和15min內(nèi)小鼠偏癱的未恢復(fù)數(shù)。結(jié)果見表1。

表1結(jié)果表明，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、低劑量組均能明顯抑制膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內(nèi)血栓形成，降低動物死亡和偏癱數(shù)，提高恢復(fù)數(shù)，對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)的小鼠體內(nèi)血栓具有抗血栓作用。

實施例3 廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對大鼠體內(nèi)靜脈血栓形成的影響

取體重200～250g SD大鼠120只，隨機分為12組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組，血塞通組，廣西莪術(shù)各洗脫部位提取物高、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次，正常對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)7d，末次給藥前禁食不禁水12h，末次給藥后1h，大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg^－1），剖開腹腔，分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用手術(shù)絲線結(jié)扎，縫合腹壁，4h后重新打開腹腔，在結(jié)扎處下方2cm處用止血鉗夾閉血管，縱向打開血管，取出血栓，放于濾紙上，吸干血液，用電子分析天平稱其血栓濕重。結(jié)果見表2。

表2結(jié)果表明，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、低劑量組均能明顯減輕大鼠體內(nèi)靜脈血栓濕重，具有明顯的抗血栓作用。

實施例4 廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成的影響

取體重250～300g SD大鼠80只，隨機分為8組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組，血塞通組，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次，正常對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)7d，末次給藥后1h，各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg^－1），分離右側(cè)頸總動脈，用YLS-14B小動物血栓生成儀進行電刺激右側(cè)頸總動脈形成血栓，記錄血栓形成時間（秒，S）。結(jié)果見表3。

表3結(jié)果表明，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、中、低劑量組均能明顯延長電刺激致大鼠頸總動脈血栓形成時間，抑制血栓形成，具有明顯的抗血栓作用。

實施例5 廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位、廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響

取體重250～300g SD大鼠80只，隨機分為8組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組，血塞通組，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位高、中、低劑量組。各藥物組大鼠每日灌胃給藥一次，正常對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)7d，末次給藥后1h，各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg^－1），分離右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸外動脈，取在中段放入長5cm的4號手術(shù)絲線的三段聚乙烯管組成的套管，將肝素生理鹽水溶液（50U/ml）充滿聚乙烯管腔，一端插入左側(cè)頸外動脈，另一端插入右側(cè)頸總動脈，建立動靜脈旁路，開放血流15min后中斷血流，取出絲線，在濾紙上吸除浮血后稱重，總重量減去絲線重即為血栓濕重。結(jié)果見表4。

表4結(jié)果表明，廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為50%乙醇洗脫部位及廣西莪術(shù)大孔吸附樹脂體積濃度為70%乙醇洗脫部位提取物高、中、低劑量組均能明顯減輕大鼠動靜脈旁路血栓濕重，具有明顯的抗血栓作用。