本申請是申請日為2012年1月4日的中國專利申請201280011787.0(pct/ep2012/050080)的分案申請。引言和
背景技術(shù)：
：本發(fā)明提供了包含來自結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)復(fù)合菌株的脂質(zhì)體制劑，以及包含這些制劑的懸液和藥物組合物及其在治療方法(特別是治療或預(yù)防結(jié)核)中的相應(yīng)用途。本發(fā)明的制劑含有蔗糖和/或平均顆粒尺寸低于結(jié)核治療的基于脂質(zhì)體的常規(guī)藥劑，導(dǎo)致更高的生物利用度和效力。
背景技術(shù)：
結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mycobacteriumtuberculosis-complex，mtb-c，其包括分枝桿菌m.tuberculosis、m.bovis、m.microti和m.africanum)桿菌導(dǎo)致的慢性感染性疾病。分枝桿菌細(xì)胞包膜的主要獨(dú)特特征是厚且為蠟質(zhì)的細(xì)胞壁。細(xì)胞壁屏障的特性還促進(jìn)該生物的胞內(nèi)存活，這是通過作為宿主與mtb-c桿菌之間免疫反應(yīng)的直接調(diào)節(jié)劑來實(shí)現(xiàn)的。包膜由兩個不同部分組成：質(zhì)膜，及其周圍的壁。細(xì)胞壁是由共價連接的肽聚糖結(jié)構(gòu)形成的骨架，具有通過磷酸二酯鍵附著的支鏈多糖——阿拉伯半乳聚糖。阿拉伯半乳聚糖的遠(yuǎn)端被高分子量脂肪酸(分枝菌酸，具有分枝菌的獨(dú)特大小和結(jié)構(gòu))酯化。據(jù)世界衛(wèi)生組織稱，全世界每年有9,000,000例人感染該疾病的新病例記錄在案，約2,000,000人死亡。全世界的感染人數(shù)被認(rèn)為超過2,700,000,000，每年又產(chǎn)生九百萬至一千萬的新感染。本領(lǐng)域中已經(jīng)描述了多種基于有毒力或無毒力分枝桿菌菌株細(xì)胞壁片段的針對結(jié)核的疫苗。目前用于對結(jié)核進(jìn)行預(yù)防性處理的疫苗是基于稱為bcg(卡介苗，m.bovis的一種減毒變體)菌株的細(xì)菌。還已知，疫苗組合物中使用的佐劑能極大地影響其有效性。海藻糖分枝菌酸酯(特別是海藻糖二分枝菌酸酯)是結(jié)核分枝桿菌提取物中最具生物活性的脂質(zhì)，其誘導(dǎo)影響肉芽腫形成的促炎性級聯(lián)。應(yīng)該指出，關(guān)于結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中這些化合物的存在量，并沒有生物學(xué)數(shù)據(jù)。來自該物種的任何樣品都具有高度生物復(fù)雜性。因此，為了實(shí)施定量分析，將需要激進(jìn)的、復(fù)雜的并且漫長的純化步驟，導(dǎo)致用于進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)構(gòu)分析的純化化合物的量過低。這正是沒有關(guān)于結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁中每種化合物確切百分比的已公開數(shù)據(jù)的原因。一些糖脂是mtb-c細(xì)胞的典型組分，例如脂阿拉伯甘露聚糖。脂阿拉伯甘露聚糖與mtb-c毒力有關(guān)。e.ribietal.，nature1963，198，1214-1215頁描述了用包含無毒力卡介苗(bcg)菌株細(xì)胞壁片段和礦物油的組合物進(jìn)行的免疫測定。所述片段通過在礦物油中對所述菌株的培養(yǎng)物進(jìn)行勻漿而獲得。該組合物比常規(guī)疫苗(bcg)更有效。盡管如此，同一文章中還描述了所述細(xì)胞壁片段當(dāng)在水中勻漿并且不存在礦物油時不誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。d.p.paletal.，indianj.med.res.1977，65，340-345頁描述了用有毒力的h37rv菌株的細(xì)胞壁片段和礦物油制備的疫苗。在這種情況下，細(xì)胞壁片段通過在水相中對死細(xì)胞進(jìn)行勻漿而獲得，然后向組合物中加入礦物油。還描述了，在水相中勻漿的細(xì)胞壁片段無免疫原性，必須存在礦物油才能使疫苗有效。g.k.khulleretal.，foliamicrobiol.，1992，37，407-412頁描述了結(jié)核分枝桿菌的無毒力h37ra菌株的細(xì)胞壁的不同級分的保護(hù)性效力，所述級分與弗氏不完全佐劑(也包括礦物油)配制在一起。e.m.aggeretal.，scand.j.immunol.，2002，56，443-447頁描述了包含有毒力的h37rv菌株的細(xì)胞壁片段的疫苗，其在包含陽離子型表面活性劑二甲基雙十八烷基溴化銨作為佐劑的情況下有效。還描述了，用不包含所述佐劑的勻漿結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行的測定在小鼠模型中不產(chǎn)生針對結(jié)核的抗性水平。i.m.ormevaccine，2006，24，2-19頁是一篇結(jié)核疫苗的綜述文章，其描述了，基于常規(guī)卡介苗(bcg)的疫苗在為成年人提供針對結(jié)核的保護(hù)中基本無效?？赡苁芤嬗谏婕敖Y(jié)核的治療或預(yù)防的個體可分為以下亞組：(i)未接觸該疾病的個體。預(yù)防性疫苗接種可防止這些個體發(fā)生感染。(ii)已接觸該疾病但尚未感染的個體。皮膚結(jié)核菌素測試(tst)為陰性。初級預(yù)防(primaryprophylaxis)能防止這些個體發(fā)生感染。(iii)具有潛伏期結(jié)核的未發(fā)病的個體?？赏ㄟ^施用化學(xué)治療來降低疾病爆發(fā)的風(fēng)險?；瘜W(xué)治療還提供了使這些個體基本停止作為高風(fēng)險感染源的優(yōu)點(diǎn)。(iv)患病個體，即患有該疾病，通常是該疾病的原發(fā)形式，但沒有或基本沒有傳染性?；瘜W(xué)治療避免這些個體變成傳染性。感染開始后，本領(lǐng)域描述了多種用于在感染個體(即具有潛伏期結(jié)核的個體)中防止發(fā)生活動性結(jié)核的治療。例如，在專利申請ep2196473a1中描述了，為了治療感染個體中的結(jié)核可以在長至數(shù)月的時間中向尚未發(fā)病以及已經(jīng)發(fā)病的個體施用多種藥物，包括異煙肼。在專利申請es2231037a1中描述了免疫治療劑，其包含結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)的有毒力菌株的細(xì)胞片段，用于制備與其他藥物(如異煙肼或利福霉素)聯(lián)合用于治療感染個體中的結(jié)核的藥物。該專利申請還描述了用于制備包含mtb-c菌株之細(xì)胞壁片段的免疫治療劑的方法。如wo2010/031883a1所指出，潛伏期結(jié)核感染的傳播主要通過吸入被結(jié)核分枝桿菌感染的氣溶膠而發(fā)生。因此，與患肺結(jié)核并因此能夠散播感染氣溶膠的患者直接接觸的人(例如與他們住在一起或者有任何類型的充分或頻繁接觸的人)被認(rèn)為是風(fēng)險群體。因此，通常向i組個體(見上文)施用的感染初級預(yù)防是基于每天施用5mg/kg劑量的異煙肼(不超過300mg/天)的初級化學(xué)預(yù)防。該處理適用于與感染個體住在一起和/或任何類型密切接觸的任何年齡的所有tst陰性個體。在這種情況下，化學(xué)預(yù)防需要在停止接觸感染源后或感染源不具感染性后維持三個月。然而，化學(xué)預(yù)防在一些情況下可導(dǎo)致繼發(fā)性的不良效果，如martínezetal.，arch.bronchoneumol.，2005，41(1)，27-33所述。包含有毒力結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)片段的藥物已經(jīng)描述于例如ep1690549b1、ep2090318a1和pct/es2009/000436。ep2090318a1和pct/es2009/000436描述了包含有毒力結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)片段的藥物組合物，其作為適于預(yù)防性防止結(jié)核(任選地與其他藥物組合)的藥物。另一方面，ep1690549b1描述了適于治療結(jié)核的藥物組合物，其包含任選地與其他藥物組合的mtb-c片段。專利申請ep2090318a1中報道，施用包含基于有毒力mtb-c菌株細(xì)胞壁片段之藥劑的藥物能夠誘導(dǎo)針對結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的產(chǎn)生干擾素-γ的th1型應(yīng)答。所述抗原包括ag85b和ag85a，它們是復(fù)合體ag85的部分，后者由一系列低分子量蛋白組成，這些蛋白在細(xì)胞壁的生物合成中發(fā)揮決定作用，并且在細(xì)菌培養(yǎng)處于指數(shù)生長(log)期時以可觀的量產(chǎn)生。ep2090318a1還報道了，基于常規(guī)卡介苗(bcg)的疫苗不產(chǎn)生針對復(fù)合體ag85的免疫保護(hù)應(yīng)答。特定淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的干擾素-γ發(fā)揮關(guān)鍵作用：它使得感染的巨噬細(xì)胞能夠終止桿菌的生長(north&young，ann.rev.immunol.，2004，22：599-623)。世界衛(wèi)生組織認(rèn)識到，與無hiv感染的人相比，患有hiv的人發(fā)生結(jié)核(tb)的風(fēng)險估計要高20-37倍。“guidelinesforintensifiedtuberculosiscase-findingandisoniazidpreventivetherapyforpeoplelivingwithhivinresource-constrainedsettings”whoguidelines2011，isbn：9789241500708)中給出了概況。然而，異煙肼預(yù)防性治療不是會為hiv陽性個體提供持久保護(hù)的疫苗接種。相反，異煙肼必須定期施用，并且異煙肼抗性也降低了該療法。因此，仍然需要提供用于hiv陽性人受試者的強(qiáng)有力的預(yù)防和治療性處理。發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供改進(jìn)的藥劑，其在hiv陽性和hiv陰性人受試者中都適于預(yù)防或治療結(jié)核，例如預(yù)防潛伏期結(jié)核、初級預(yù)防和/或治療潛伏期或活動性結(jié)核。另一個目的是提供適于制備所述藥劑的mtb-c菌株。制備該藥劑的方法是本發(fā)明的另一個目的。定義“fcmtb”代表來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段。如果沒有另外指明，則“顆粒尺寸”(亦稱“粒度”)指顆粒的直徑。當(dāng)顆粒尺寸無法準(zhǔn)確測定時，則指近似顆粒尺寸?！皕-平均”是如“材料和方法”章節(jié)中所述測定的平均顆粒尺寸。縮寫aids獲得性免疫缺陷綜合征bcg卡介苗cfu集落形成單位dp藥物產(chǎn)品ds藥物物質(zhì)elisa酶聯(lián)免疫吸附測定elispot酶聯(lián)免疫點(diǎn)測定emea歐洲藥品管理局fcmtb結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞的片段fim首次在人中hiv人免疫缺陷病毒ifn-γ干擾素γigtipgermanstriasipujol的衛(wèi)生科學(xué)研究所imp研究性藥物產(chǎn)品ipc過程控制(inprocesscontrols)lcs脂質(zhì)體濃縮物懸液ltbi潛伏期結(jié)核感染lps脂多糖mtb結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)mtb結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mycobacteriumtuberculosis-complex)nzb新西蘭黑nzw新西蘭白ppd蛋白純化衍生物q.s.適量tb結(jié)核tst結(jié)核皮膚測試who世界衛(wèi)生組織w/v重量/體積w/w重量/重量技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了脂質(zhì)體制劑，其包含來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段(fcmtb)和脂質(zhì)體形成劑。在一個具體實(shí)施方案中，顆粒的z-平均尺寸(通過動態(tài)光散射測定)為120nm或更小，優(yōu)選110nm或更小，更優(yōu)選95nm或更小，最優(yōu)選80nm或更小。在一個備選實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑包含1-20％(w/v)的蔗糖，優(yōu)選2-12％(w/v)的蔗糖，更優(yōu)選3-8％(w/v)的蔗糖，最優(yōu)選4-6％(w/v)的蔗糖。重要的是要注意，盡管這兩個實(shí)施方案的每一個都可以獨(dú)立實(shí)現(xiàn)，但這些實(shí)施方案不視為互斥的，而是完全可以組合。在一個具體實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑的z-平均顆粒尺寸為40-120nm，優(yōu)選50-110nm，更優(yōu)選55-95nm，最優(yōu)選55-80nm。在另一個具體實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑的平均顆粒尺寸可以更小，使得該脂質(zhì)體制劑為乳劑，即，該具體實(shí)施方案中顆粒的z-平均尺寸優(yōu)選小于40nm。在上述實(shí)施方案中任何一種或更多種的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑是顆粒多分散性指數(shù)為0.4或更小(優(yōu)選0.3或更小)的脂質(zhì)體制劑。在任何上述實(shí)施方案的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株是有毒力的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株。在任何上述實(shí)施方案中，還優(yōu)選(a)所述來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段與(b)所述脂質(zhì)體形成劑之間的比例為0.01∶1至1∶1，優(yōu)選0.06∶1至0.1∶1。在任何上述實(shí)施方案的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑還包含：(d)表面活性物質(zhì)(tensioactiveagent)。在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，包含(d)表面活性物質(zhì)的脂質(zhì)體制劑是這樣的脂質(zhì)體制劑，其中(a)與(d)的比值為0.1∶1至10∶1(w/w)，優(yōu)選0.5∶1至2∶1(w/w)，最優(yōu)選0.6∶1至0.8∶1(w/w)。在上述實(shí)施方案的一個具體實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑中的脂質(zhì)體形成劑是磷脂，優(yōu)選卵磷脂，更優(yōu)選選自蛋卵磷脂或大豆卵磷脂，最優(yōu)選大豆卵磷脂，其中每一種都可以是氫化的，部分氫化的或非氫化的。在含有表面活性劑的脂質(zhì)體制劑的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述表面活性物質(zhì)選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥珀酸單酯(cholesterolhemisuccinate)。在一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑是這樣的脂質(zhì)體制劑，其中mtb-c細(xì)胞的片段是細(xì)胞壁片段或者包含細(xì)胞壁片段。在另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含mtb-c菌株nctc13536的片段，該菌株的保藏編號為nctc13536，保藏單位代碼為nctc-國家典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2010年12月3日，保藏單位地址為英國倫敦科林代爾大街健康保護(hù)機(jī)構(gòu)，分類命名為mycobacteriumtuberculosisstrainruti。該菌株也稱為511，因此nctc13536和511這兩種名稱可互換使用。在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含以下的至少兩項(xiàng)，優(yōu)選三項(xiàng)，更優(yōu)選四項(xiàng)，最優(yōu)選全部：(i)第一多肽，其分子量為約70kda，與結(jié)核分枝桿菌hsp70蛋白(rv0350)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(ii)第二多肽，其分子量為約38kda，與結(jié)核分枝桿菌38kda蛋白(rv0934)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(iii)第三多肽，其分子量為約30kda，與結(jié)核分枝桿菌ag85b蛋白(rv1866c)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(iv)第四多肽，其分子量為約10kda，與結(jié)核分枝桿菌cfp10蛋白(rv3874)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(v)第五多肽，其分子量為約6kda，與結(jié)核分枝桿菌esat-6蛋白(rv3875)的質(zhì)量指紋圖譜相似。在另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑包含分子量約19kda的脂多肽，其與與結(jié)核分枝桿菌19kda脂蛋白抗原前體lpqh(rv3763)的質(zhì)量指紋圖譜相似。甚至更優(yōu)選地，上述脂質(zhì)體的特征還在于存在以下結(jié)核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段：hsp70、38kda蛋白和ag85b。這里的“片段”是指任何這些多肽的任何部分，例如降解產(chǎn)物。在一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含通?？梢娪诮Y(jié)核分枝桿菌中的脂質(zhì)或其衍生物，例如綴合產(chǎn)物如糖綴合脂質(zhì)。還優(yōu)選的是，包含一種或更多種分枝菌酸，優(yōu)選i、iii或iv型中的任何一種或更多種。作為替代或補(bǔ)充，該制劑中可包含糖綴合的分枝菌酸酯，優(yōu)選海藻糖二分枝菌酸酯。作為替代或補(bǔ)充，還優(yōu)選的是，本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑中存在至少一種mtb-c衍生糖脂，一種優(yōu)選的糖脂是脂阿拉伯甘露聚糖。上述脂質(zhì)體制劑還可包含一種或更多種表面活性劑，其優(yōu)選來自非離子型表面活性劑組。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，前述任一權(quán)利要求的脂質(zhì)體制劑還包含一種或更多種鹽或其溶液，其中優(yōu)選的鹽是氯化鈉。在任何上述實(shí)施方案的一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑是凍干的。本發(fā)明還提供懸液，其中任一前述權(quán)利要求的脂質(zhì)體制劑重構(gòu)于溶劑中。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該懸液的的溶劑是含水溶劑，優(yōu)選是生理血清或者包含生理血清。本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含上述任何一個或更多個實(shí)施方案所述的脂質(zhì)體制劑或者上述任何一個或更多個實(shí)施方案所述的懸液，以及可藥用載體或稀釋劑或賦形劑，其中可以施用任何適于作為載體、稀釋劑或賦形劑的物質(zhì)。在其一個優(yōu)選實(shí)施方案中，該藥物組合物還包含可藥用佐劑。本發(fā)明還提供用于治療人或動物體的方法中的產(chǎn)品。即，提供上述任何一個或更多個實(shí)施方案的脂質(zhì)體制劑、上述任何一個或更多個實(shí)施方案的懸液或上述任何一個或更多個實(shí)施方案的藥物組合物，其用于治療人或動物體的方法中。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于注射的該脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于結(jié)核治療或預(yù)防方法中的該脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物。這些具體實(shí)施方案可以單獨(dú)或組合實(shí)現(xiàn)。在一個更具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供上文就其在人體治療方法中的用途描述的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其特征還在于，其用于以包含1至1000、優(yōu)選3至250、更優(yōu)選4至80、最優(yōu)選約5、約25或約50μg/劑fcmtb的劑量施用于人體。在又三個具體實(shí)施方案中(a)至(c)中，上文就其在人體治療方法中的用途描述的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物是(a)用于在具有潛伏期結(jié)核感染的個體中預(yù)防活動性結(jié)核的方法中，(b)用于結(jié)核初級預(yù)防方法中，以防止已接觸疾病單尚未感染的個體發(fā)生感染，或(c)用于治療或預(yù)防潛伏期結(jié)核的方法中。上述脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物用于人或動物體治療方法的一個優(yōu)選實(shí)施方案是其用于聯(lián)合治療或輔助治療(adiunctivetherapy)中。輔助治療是與首要治療(primarytreatment)結(jié)合的額外治療或第二治療，其提高治療疾病的有效性。聯(lián)合治療的一個具體實(shí)施方案是這樣的，其中所述聯(lián)合治療包含抗生素，優(yōu)選異煙肼和利福霉素中的一種或更多種，其中安沙霉素是最優(yōu)選的利福霉素。在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案中，輔助治療適用于hiv陽性人受試者，優(yōu)選25μgfcmtb的單劑量。本發(fā)明還提供用于制備任何所述藥劑(所述脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物)的方法。本發(fā)明還提供2010年保藏于倫敦nctc的mtb-c菌株nctc13536。發(fā)明詳述本發(fā)明提供脂質(zhì)體制劑，其包含來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段(fcmtb)和脂質(zhì)體形成劑。除非另外指明，否則本申請上下位中使用的術(shù)語“包含”均表示除了以“包含”引入的成員列表之外還可任選地包含其他成員。但是，作為本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案，術(shù)語“包含”也包括不存在其他成員的可能性，即對于該實(shí)施方案而言，“包含”應(yīng)理解成具有“由……組成”的含義。本發(fā)明詳述公開了本發(fā)明各個特征的具體和/或優(yōu)選變化方案。作為特別優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明還考慮通過將針對本發(fā)明兩個或更多特征描述的兩個或更多個具體和/或優(yōu)選變化方案組合而產(chǎn)生的那些實(shí)施方案。公認(rèn)的是，脂質(zhì)體形成(liposoformation)過程產(chǎn)生脂質(zhì)環(huán)境，提高溶解度并產(chǎn)生物質(zhì)(如fcmtb)的懸液。本發(fā)明意義上的脂質(zhì)體可以是單層的、多層的或其組合。fcmtb可以是來自mtb-c菌株的任何類型的物質(zhì)，其中來自蛋白質(zhì)和/或脂質(zhì)的片段是優(yōu)選的。本申請意義上的fcmtb通常是來自mtb-c細(xì)胞的不同蛋白質(zhì)抗原和脂質(zhì)的混合物。細(xì)胞片段可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適于破碎微生物或細(xì)菌細(xì)胞(例如特別是mtb-c細(xì)胞)的方法(如勻漿)來獲得。勻漿可通過超聲處理來進(jìn)行，或通過將直徑約0.1mm的小珠(例如二氧化硅或氧化鋯/二氧化硅珠)與機(jī)械勻漿機(jī)一起使用來進(jìn)行?？梢允褂玫臋C(jī)械勻漿機(jī)例如biospec型。通過這種勻漿過程破碎mtb-c細(xì)胞，從而獲得小的細(xì)胞片段，通常包括小細(xì)胞壁片段。細(xì)胞片段制造中的特別重要的特征是通過脫脂作用對細(xì)胞壁片段進(jìn)行“脫毒”，脫脂作用是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的允許除去內(nèi)毒素樣分子的方法。因此，優(yōu)選對fcmtb進(jìn)行脫毒和巴氏消毒，其后所得的脂質(zhì)體制劑是無菌并無內(nèi)毒素的。細(xì)胞片段在緩沖液中的分散體可以任選地凍干，以利于其保存。為此，將分散體分配到瓶中并在約-15℃至-120℃的溫度(例如-45℃)下以真空(例如0.1至0.5mbar)凍干。本發(fā)明的脂質(zhì)體的尺寸分布通常為至少99.9％(以數(shù)量計)小于1μm。在一個具體實(shí)施方案中，顆粒的z-平均尺寸(通過動態(tài)光散射測定的)為120nm或更小，優(yōu)選110nm，更優(yōu)選110nm或更小，更優(yōu)選95nm或更小，最優(yōu)選80nm或更小。在動態(tài)光散射中，z-平均參數(shù)被認(rèn)為是可通過該技術(shù)獲得的穩(wěn)定且重要的數(shù)字，以及優(yōu)選用于質(zhì)量控制目的的尺寸數(shù)字。優(yōu)選地，本發(fā)明制劑中的脂質(zhì)體是單峰(monomodal)的，即，它們在動態(tài)光散射測定中僅顯示一個峰。更優(yōu)選地，本發(fā)明制劑中的脂質(zhì)體是球狀的，這可通過對該脂質(zhì)體制劑的冷凍破碎制備物進(jìn)行電子顯微術(shù)來測試，如實(shí)施例9所示。由此，球狀是指對于至少90％的脂質(zhì)體顆粒(以數(shù)目計)而言，各個顆粒的所有表面點(diǎn)距離脂質(zhì)體的中心都具有相似或相同的距離，即，這種顆粒的最小半徑與同一顆粒的最大半徑相比關(guān)系為0.6或更高，0.7或更高，0.8或更高或0.9或更高。本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑可包含多層或單層脂質(zhì)體或其混合物。與本領(lǐng)域技術(shù)人員的標(biāo)準(zhǔn)知識一致，動態(tài)光散射測量應(yīng)在合適的緩沖液(即本身不導(dǎo)致脂質(zhì)體破碎、崩解或融合以任何方式使它們顯著不穩(wěn)定的緩沖液)中進(jìn)行。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，任何緩沖液都可以是合適的，只要離子強(qiáng)度和ph值都與形成所述脂質(zhì)體的緩沖液相當(dāng)。優(yōu)選地，使用與形成所述脂質(zhì)體的緩沖液在組成上相似或相同的緩沖液。在另一實(shí)施方案中，脂質(zhì)體制劑還包含1-20％(w/v)的蔗糖，優(yōu)選2-12％(w/v)的蔗糖，更優(yōu)選3-8％(w/v)的蔗糖，最優(yōu)選4-6％(w/v)的蔗糖。約5％的蔗糖是特別優(yōu)選的。重要的是要注意，盡管這些實(shí)施方案(一個涉及具體的顆粒尺寸，另一個涉及蔗糖的存在情況)的每一個都可以獨(dú)立實(shí)現(xiàn)，但這些實(shí)施方案不視為互斥的，而是完全可以組合。在一個具體實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑的z-平均顆粒尺寸為40-120nm，優(yōu)選50-110nm，更優(yōu)選55-95nm，最優(yōu)選55-80nm。z-平均顆粒尺寸優(yōu)選通過動態(tài)光散射測定，如上文的一般描述和下文“材料和方法”章節(jié)中的詳細(xì)描述。在另一個具體實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑的z-平均顆粒尺寸可以更小，使得該脂質(zhì)體制劑為乳劑，即，該具體實(shí)施方案中顆粒的z-平均尺寸優(yōu)選小于40nm。在上述實(shí)施方案中任何一種或更多種的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明制劑中的脂質(zhì)體還是單分散的，這意味著觀察不到顯著的尺寸分布寬度。這在技術(shù)上通過以動態(tài)光散射測定的低多分散性指數(shù)(pdi)來測試，如0.4或更小，優(yōu)選0.3或更小。因此，所述脂質(zhì)體制劑是這樣的脂質(zhì)體制劑，其中通過動態(tài)光散射測定的顆粒多分散性指數(shù)為0.4或更小，優(yōu)選0.3或更小，最優(yōu)選0.25或更小。來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段可通過包含上游方法和下游方法的方法獲得。出于舉例目的，本文簡要描述了五個主要步驟，實(shí)施該方法的具體模式在下文實(shí)施例2和3給出。上游方法(實(shí)施例2)：步驟1：培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌，步驟2：收獲結(jié)核分枝桿菌并冷凍粗提取物。下游方法(實(shí)施例3)：步驟3：細(xì)胞破碎和脫脂，步驟4：巴氏消毒，步驟5：凍干(任選的)。在任何上述實(shí)施方案的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株是有毒力的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株。毒力是指致病性和/或桿菌侵入宿主組織的能力。所述有毒力菌株可以是屬于mtb-c物種的任何有毒力菌株，但屬于結(jié)核分枝桿菌的菌株是優(yōu)選的。本發(fā)明的mtb-c菌株可通過接種在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的培養(yǎng)基(如middlebrook7h10或7h11瓊脂、sauton′s培養(yǎng)基或proskauer-beck培養(yǎng)基)中來進(jìn)行培養(yǎng)。所述有毒力菌株的培養(yǎng)優(yōu)選在長時間中進(jìn)行，例如等于或大于3周的時間，優(yōu)選3周至4周。培養(yǎng)溫度優(yōu)選維持在34℃至38℃。培養(yǎng)結(jié)束后，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)(如專利申請es2231037-a1中描述的那些)收獲和分離細(xì)胞。脂質(zhì)體制劑中的脂質(zhì)體劑優(yōu)選是氫化的、部分氫化的或非氫化的磷脂。所用磷脂可以是(或包含)例如磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇。最典型的是磷脂酰膽堿，它可以是合成的或分離自多種天然來源。優(yōu)選地，所述脂質(zhì)體形成劑是(或包含)卵磷脂(lecithin)，其選自蛋卵磷脂(egglecithin)和大豆卵磷脂(soylecithin)。大豆卵磷脂是磷脂(尤其是包括磷脂酰膽堿)的混合物，并且是特別優(yōu)選的。還可包含在所述制劑中(作為脂質(zhì)體形成劑本身或者作為其他組分)的典型脂質(zhì)是磷酸二鯨蠟酯(dcp)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(dmpc)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)、二油酰磷脂酰膽堿(dopc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、二油酰磷脂酰絲氨酸(dops)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(dppg)、磷脂酰膽堿(pc)和/或磷脂酰絲氨酸(ps)，其中每種脂質(zhì)可以是氫化的，部分氫化的或者非氫化的。所述脂質(zhì)體可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的輔助脂質(zhì)(auxiliarylipids)和技術(shù)(如專利申請es2231037-a1中所述)形成。還優(yōu)選的是，在任何上述實(shí)施方案中，(a)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段與(b)脂質(zhì)體形成劑的比值為0.01∶1至1∶1，優(yōu)選0.06∶1至0.1∶1。在任何上述實(shí)施方案的一個更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑還包含：(d)表面活性物質(zhì)。通常，所有類型的能夠改變表面張力值的試劑都可用作本發(fā)明意義上的表面活性物質(zhì)，但要排除的是落入上文給出的脂質(zhì)體形成劑定義之中的化合物。有多種類型的表面活性物質(zhì)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，并可用于本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑中。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，表面活性物質(zhì)通常是具有極性-非極性結(jié)構(gòu)的化合物。不希望受限于任何特定理論，表面活性物質(zhì)通常具有定位于顆粒表面的傾向，由此在界面上產(chǎn)生降低表面張力值的單分子層。在含有表面活性劑的脂質(zhì)體制劑的一個優(yōu)選實(shí)施方案，表面活性物質(zhì)選自固醇及其衍生物，例如膽固醇，和或膽汁鹽(bilesalt)，例如膽酸鹽(cholate)。特別優(yōu)選的實(shí)施方案是其中表面活性物質(zhì)選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥珀酸單酯。實(shí)施本發(fā)明的一個優(yōu)良(但非限制性)的模式是其中制劑的脂質(zhì)體同時包含大豆衍生的卵磷脂和膽酸鈉。在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，包含(d)表面活性物質(zhì)的脂質(zhì)體制劑是這樣的脂質(zhì)體制劑，其中(a)與(d)之間的比值為0.05∶1至3∶5(w/w)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，可以使用多種類型的脂質(zhì)體形成劑。脂質(zhì)體可任選地含有提高其穩(wěn)定性的添加劑，例如維生素e，其據(jù)信發(fā)揮脂質(zhì)體抗氧化劑作用。在一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑是這樣的脂質(zhì)體制劑，其中mtb-c細(xì)胞的片段是(或包括)細(xì)胞壁片段。可以使用任何屬于mtbc的菌株，優(yōu)選任何屬于結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis)的菌株。在另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含2010年保藏于倫敦nctc的mtb-c菌株nctc13536的片段(實(shí)施例1)。另一個可以使用(因此在脂質(zhì)體制劑中包含其片段)的菌株稱為h37rv，其可得自例如英國倫敦國家典型培養(yǎng)物中心(nctc)(保藏號nc007416)，并且經(jīng)常為本領(lǐng)域研究者使用。還可以使用多于一種菌株，即，脂質(zhì)體制劑包含多種(例如兩種、三種或多于三種)菌株的片段?？紤]到結(jié)核分枝桿菌包含約4000種推定抗原，針對全部這些蛋白來分析藥物物質(zhì)是不可能的。盡管如此，某些mtb-c蛋白已經(jīng)顯示出與期望的免疫應(yīng)答相關(guān)。它們是近似大小為6、10、30、38和70kda的五個蛋白質(zhì)條帶(renshaw，etal.，2005，embojournal24，2491-2498；singh，etal.，2005，clin.diagn.lab.immunol.12(2)，354-358)。因此，在一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含以下的至少兩項(xiàng)，優(yōu)選三項(xiàng)，更優(yōu)選四項(xiàng)，最優(yōu)選全部：(i)第一多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約70kda，其中所述第一多肽的質(zhì)量指紋圖譜(massfingerprint)與結(jié)核分枝桿菌hsp70蛋白(rv0350)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約38kda，其中所述第二多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌38kda蛋白(rv0934)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約30kda，其中所述第三多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌ag85b蛋白(rv1866c)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約10kda，其中所述第四多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌cfp10蛋白(rv3874)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(v)第五多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約6kda，其中所述第五多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌esat-6蛋白(rv3875)的質(zhì)量指紋圖譜相似。在另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑還包含分子量(在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量)約19kda的脂多肽，其中所述脂多肽與結(jié)核分枝桿菌19kda脂蛋白抗原前體lpqh(rv3763)的質(zhì)量指紋圖譜相似。相應(yīng)條帶可通過本領(lǐng)域已知方法(如銀染)來顯現(xiàn)。本發(fā)明的研究者意想不到地發(fā)現(xiàn)，該多肽誘導(dǎo)高全igg體液應(yīng)答，其可以是制劑的全部抗原中最高的體液應(yīng)答。如何鑒定多肽或脂多肽的實(shí)例在實(shí)施例4中給出。甚至更優(yōu)選地，上述脂質(zhì)體制劑的特征還在于存在以下結(jié)核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段：hsp70、38kda蛋白和ag85b，最優(yōu)選hsp70、38kda和ag85b中至少之一。這里的“片段”是指任何這些多肽的任何部分，例如降解產(chǎn)物?？梢允褂枚喾N方法獲得這些片段，例如化學(xué)或酶水解，由此，破碎是否有意發(fā)生、在脂質(zhì)體形成之前或之后發(fā)生并不重要。優(yōu)選的是，相應(yīng)片段可以歸因于其相應(yīng)來源，例如由于氨基酸序列顯著重疊，例如至少5、至少10、至少20個連續(xù)氨基酸。本發(fā)明的片段優(yōu)選得自在饑餓、低氧和低ph脅迫條件下培養(yǎng)的桿菌。低氧是由于在培養(yǎng)期(例如21天)中密封在氣密袋中的平板上細(xì)菌的生長，導(dǎo)致微氧環(huán)境。低ph的解釋如下：培養(yǎng)開始時ph值為7.0-6.8，結(jié)束時(通常在培養(yǎng)21天后)，ph值為6.4-6.5。在這些條件下，細(xì)菌的代謝較慢，導(dǎo)致穩(wěn)定生長。應(yīng)該理解，這使得桿菌對脅迫的抗性更高。在這些條件下，培養(yǎng)的桿菌產(chǎn)生與ltbi(潛伏期結(jié)核感染)中體內(nèi)潛伏期桿菌相似的特征。因此，預(yù)計fcmtb中存在的抗原會觸發(fā)針對潛伏期桿菌之抗原(所謂的“結(jié)構(gòu)”抗原)以及脅迫應(yīng)答相關(guān)的抗原的新免疫應(yīng)答。分枝桿菌糖脂長期以來就被認(rèn)為具有免疫調(diào)節(jié)活性，特別是誘導(dǎo)肉芽腫應(yīng)答和發(fā)揮強(qiáng)佐劑樣效應(yīng)。因此，在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑包含通?？梢娪诮Y(jié)核分枝桿菌中的脂質(zhì)或其衍生物，例如綴合脂質(zhì)如糖綴合脂質(zhì)。已經(jīng)在結(jié)核分枝桿菌樣品中鑒定出一些免疫原性脂質(zhì)組分(brennan，tuberculosis(edinburgh)，2003，83(1-3)，91-97)，并開發(fā)了用于其測定的分析方法(電泳、sds-page、薄層層析)。盡管每種脂質(zhì)組分的分離將需要如此激進(jìn)的處理以致于很難獲得mtb-c提取物或脂質(zhì)體制劑中每種可檢測組分的定量數(shù)據(jù)或百分比，但定量表征將用于表征本發(fā)明的更優(yōu)選實(shí)施方案。根據(jù)這一優(yōu)選實(shí)施方案，包含一種或更多種分枝菌酸，優(yōu)選屬于i、iii或iv型中的任何一種或更多種。作為替代或補(bǔ)充，制劑中可包含糖綴合分枝菌酸酯，優(yōu)選海藻糖二分枝菌酸酯。作為替代或補(bǔ)充，制劑中可包含脂阿拉伯甘露聚糖(lam)這種糖脂。此外，相信所述片段的多抗原性性質(zhì)(多抗原性蛋白質(zhì)混合物加脂質(zhì)，而不是僅有純化的抗原)是有利的，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠改動細(xì)胞破碎過程以允許獲得最佳細(xì)胞抗原混合物。mtb-c細(xì)胞的勻漿在一種或更多種表面活性劑(優(yōu)選非離子型表面活性劑)存在下進(jìn)行。因此，上述脂質(zhì)體制劑還可包含一種或更多種這些表面活性劑。大量這種表面活性劑在本領(lǐng)域技術(shù)人員的標(biāo)準(zhǔn)知識中。優(yōu)選地，所用的非離子型表面活性劑選自乙氧基化烷基酚和乙氧基化山梨糖醇酯。更優(yōu)選地，所述非離子型表面活性劑選自乙氧基化辛基酚。甚至更優(yōu)選地，使用具有包含7至8摩爾環(huán)氧乙烷含量的乙氧基辛基酚，該表面活性劑以triton這一名稱銷售。對含有細(xì)胞壁片段的勻漿物進(jìn)行常規(guī)處理以分離并移除未破碎細(xì)胞和溶解組分。es2231037-a1描述了例如可以使用不同速度的離心和用緩沖液進(jìn)行的洗滌。進(jìn)行上述純化過程后獲得含有細(xì)胞壁片段的沉淀。將所述沉淀分散在磷酸鹽緩沖液(pbs)中并進(jìn)行常規(guī)處理，以確保在破碎和純化過程后可能仍保留活力的mtb-c細(xì)胞完全失活。所述處理可以是化學(xué)處理，例如用甲醛處理，或者是物理處理，例如高壓滅菌或巴氏消毒處理。下文實(shí)施例5給出了脂質(zhì)表征的實(shí)例。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，上述脂質(zhì)體制劑還包含一種或多種鹽或其溶液，其中優(yōu)選的鹽是氯化鈉。在任何上述實(shí)施方案的一個甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體制劑是凍干的?？梢詫λ鲋|(zhì)體進(jìn)行凍干以由此獲得凍干脂質(zhì)體形式的免疫治療劑。為此，可將分散體分配到瓶中并在低溫(如約-15℃至-120℃的溫度，例如-45℃)下以真空(例如0.1至0.5mbar)凍干。凍干后得到的瓶中含有適于作為免疫治療劑的脂質(zhì)體制劑，它們優(yōu)選保存在極低的溫度下，例如-70℃。本發(fā)明還提供懸液，其中任一前述權(quán)利要求的脂質(zhì)體制劑重構(gòu)在溶劑中。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該懸液的溶劑是含水溶劑，更優(yōu)選并且最優(yōu)選是(或包含)生理血清。將脂質(zhì)體制劑懸浮在溶劑中的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。本發(fā)明制劑的一個特別有利的特性是，其能夠比包含mtb-c片段的常規(guī)脂質(zhì)體制劑更快地懸浮(見實(shí)施例9)。本發(fā)明的一個目的是提供用于制備藥物組合物的包含mtb-c菌株細(xì)胞壁片段的藥劑，其中所述藥劑是(或包含)上文任何所述實(shí)施方案中所述的脂質(zhì)體制劑或其組合。藥物物質(zhì)的藥物制劑/蓋倫制劑(galenicformulation)的主要范圍是獲得懸液，其有效性和穩(wěn)定性足以被細(xì)胞充分識別，并具有在人或動物體中觸發(fā)相關(guān)細(xì)胞免疫應(yīng)答的潛力。為此，本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含上述任何一個或更多個實(shí)施方案中描述的脂質(zhì)體制劑或懸液，以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。多種這樣的載體、賦形劑和稀釋劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，它們絕不受限于本公開內(nèi)容。相反，任何適于作為載體、賦形劑或稀釋劑的物質(zhì)均可使用。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物組合物還包含可藥用佐劑。由此，佐劑應(yīng)理解為本發(fā)明該實(shí)施方案中包含的一種物質(zhì)，其中所述佐劑是能夠在適用于人或動物體時刺激免疫系統(tǒng)應(yīng)答于靶抗原的物質(zhì)，其中所述佐劑本身不賦予免疫力。不限于任何具體的佐劑物質(zhì)，優(yōu)選的實(shí)施方案是其中佐劑是鋁鹽例如氯化鋁，或者礦物油或含有礦物油的組合物例如弗氏不完全佐劑(ifa)或弗氏完全佐劑(cfa)，或者鹵化銨如溴化烷基銨，例如溴化二甲基雙十八烷基銨。本發(fā)明還提供用于人或動物體治療方法的產(chǎn)品。即，提供用于人或動物體治療方法的任何上述一個或更多個實(shí)施方案的脂質(zhì)體制劑、任何所述一個或更多個實(shí)施方案的懸液或任何上述一個或更多個實(shí)施方案的藥物組合物。所述藥物可在粘膜中施用，例如眼、鼻內(nèi)、口、胃、腸、陰道或尿道的粘膜，或者腸胃外施用，例如皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)施用。優(yōu)選腸胃外施用。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于注射的該脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于結(jié)核治療或預(yù)防方法中的該脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物。這些具體實(shí)施方案可以單獨(dú)或組合實(shí)現(xiàn)。本研究的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的制劑導(dǎo)致提高的細(xì)胞免疫應(yīng)答，還控制常見的再感染過程(否則這可在潛伏期結(jié)核感染中發(fā)生)，這是通過加強(qiáng)針對生長中桿菌的免疫力和誘導(dǎo)針對非復(fù)制桿菌的免疫力來實(shí)現(xiàn)的。上文就其在人或動物體治療方法中的用途描述的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物的合適劑量取決于若干參數(shù)，包括施用方法和受治者。在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，其用于對人體施用。在其一個優(yōu)選實(shí)施方案中，這以1至1000、優(yōu)選3至250、更優(yōu)選4至80、最優(yōu)選約5、約25或約50μg/劑fcmtb的劑量實(shí)現(xiàn)。特別優(yōu)選25μg的劑量。在又三個具體實(shí)施方案中(a)至(c)中，上文就其在人或動物體治療方法中的用途描述的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物是(a)用于在具有潛伏期結(jié)核感染的個體中預(yù)防活動性結(jié)核的方法中。在另一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，(b)用于結(jié)核初級預(yù)防方法中，以防止已接觸疾病單尚未感染的個體發(fā)生感染，或(c)用于治療或預(yù)防潛伏期結(jié)核的方法中。用于人或動物體治療方法中的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物可以單劑量形式施用，或者同以某時間間隔重復(fù)而以多劑量(如2、3、4、5或多于5)施用。優(yōu)選地，以2至5周(優(yōu)選3至4周)的間隔分開使用兩劑。實(shí)施例8、10和12是怎樣將本發(fā)明脂質(zhì)體制劑施用于人或動物受試者的實(shí)例。上述物質(zhì)的一個優(yōu)選實(shí)施方案是用于聯(lián)合治療或輔助治療的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物。醫(yī)學(xué)從業(yè)者經(jīng)常使用輔助治療以獲得更好的治愈率或針對首要治療更快的應(yīng)答。聯(lián)合治療或輔助治療包括使用多于一種藥物來治療人或動物體。聯(lián)合治療的第一個具體實(shí)施方案是其中所述聯(lián)合治療包含抗生素，優(yōu)選異煙肼和安沙霉素，其中所述安沙霉素最優(yōu)選是利福霉素。其第二個具體實(shí)施方案是其中所述聯(lián)合治療包含其他針對結(jié)核的預(yù)防性疫苗，例如s.h.e.kaufmann，naturerev.immunol.，2006，6，699-704頁中提到的那些，例如卡介苗(bcg)疫苗、亞單位疫苗或重組bcg疫苗。第一個和第二個具體實(shí)施方案可以組合。在聯(lián)合治療或輔助治療中，這兩種(或更多種)物質(zhì)的施用可以是同時的，或者可以以在時間上分開的兩次(或更多次)接種中完成。接種之間的時間甚至可以是若干年。在聯(lián)合治療的情況中，接種在時間上分開進(jìn)行，首先優(yōu)選施用針對結(jié)核的預(yù)防性疫苗，隨后施用包含有毒力mtb-c菌株之細(xì)胞壁片段的藥物，其作為先接種疫苗的再刺激劑(加強(qiáng)劑)。在一個實(shí)施方案中，僅對人受試者施用單劑量，該劑量優(yōu)選為25μgfcmtb?；蛘?，在輔助治療中同時使用若干不同治療策略或處置類型。在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案中，將輔助治療施用于免疫系統(tǒng)受損的人受試者(例如患hiv的個體)，或者任何由于其他原因而易于感染結(jié)核和/或需要這種治療的個體。輔助治療中也可以施用異煙肼。此外，輔助治療可包括施用治療受損免疫系統(tǒng)(例如治療hiv感染)的任何藥物或藥物組合。治療hiv感染的典型藥物是抗病毒藥，其非限制性綜述可見于“antiretroviraltherapyforhivinfectioninadultsandadolescentsrecommendationsforapublichealthapproach：2010年版”，作者：worldhealthorganization，isbn：9789241599764。因此，本發(fā)明人為向hiv陽性人受試者提供有效結(jié)核保護(hù)(如疫苗接種)的需求提供了解決方案。可以通過允許檢測待測個體體液中人免疫缺陷病毒(hiv)－－導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征(aids)的病毒－—存在情況的任何測試來測試個體是被認(rèn)為hiv陽性或否(即hiv陰性)，其中體液通常是選自血清、唾液或尿中的任何一種。這種測試可檢測抗體、抗原或rna。合適的篩查測試的概況在chouetal.，ann.intern.med.2005jul5；143(1)：55-73中給出。本發(fā)明的發(fā)明人意想不到地發(fā)現(xiàn)，對hiv陽性人受試者施用的25μgfcmtb單劑量提供了強(qiáng)應(yīng)答。25μgfcmtb單劑量在施用于hiv陰性人受試者時也是強(qiáng)有力的。本發(fā)明人顯示，這在患有潛伏期結(jié)核的受試者中特別有用(實(shí)施例12)。因此，本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案是要向hiv陽性或hiv陰性個體施用的25μgfcmtb單劑量。本發(fā)明還提供制造方法，其特征在于，該方法適于獲得任何上述一個或更多個實(shí)施方案的脂質(zhì)體制劑以及懸液和包含它們的藥物組合物。一個非限制性實(shí)例在下文實(shí)施例11中給出。本發(fā)明還提供2010年保藏于倫敦nctc的mtb-c菌株nctc13536。該菌株具有低遺傳多態(tài)性。因此，包含nctc13536之片段的制劑由于這種低遺傳多態(tài)性而具有可重復(fù)性極高的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選模式優(yōu)選的是，使用50μgfcmtb/劑或25μgfcmtb/劑或5μgfcmtb/劑的具體劑量。例如，劑量為50μgfcmtb時，在一瓶制劑中存在表1中給出的量/物質(zhì)：1含有磷脂酰膽堿(94.0％(w/w))2作為nacl0.9％溶液加入。表1.對于25μg/劑或5μg/劑的施用，準(zhǔn)備其他的瓶，其中表1中的所有數(shù)字(除了蔗糖以外)各自除以2或10。制劑(50μg、25μg和5μg)中的蔗糖含量總是20000μg單位/瓶。由高度富含磷脂酰膽堿(94.0％(w/w))的大豆卵磷脂(脂質(zhì)體形成劑)和膽酸鈉(表面活性物質(zhì))制成的脂質(zhì)體制劑已經(jīng)證明足以保證藥物物質(zhì)在制造過程中和在重構(gòu)懸液中的更高溶解度。脂質(zhì)體制劑中fcmtb溶解度的一個重要參數(shù)是構(gòu)成脂質(zhì)體的組分的比例。在測試不同的fcmtb/脂質(zhì)比例之后，確認(rèn)了非常好的比例是約0.03∶0.2∶0.7(fcmtb∶膽酸鈉∶大豆卵磷脂，w/w/w)。還觀察到，水相中鹽的存在增強(qiáng)了脂質(zhì)體形成。因此，該具體制劑中包含氯化鈉。表2：藥物產(chǎn)品(fcmtb)，在凍干脂質(zhì)體組合物重構(gòu)后測定在一個優(yōu)選模式中，實(shí)施本發(fā)明以使得本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑具有表2的特性。為對活受試者進(jìn)行施用，用0.4ml注射用水重構(gòu)該瓶，得到含有166.7μg/mlfcmtb的懸液。表3顯示了以50μg/劑重構(gòu)后每瓶中每一組分的濃度。對于25μg/劑或5μg/劑的應(yīng)用，使用其他的瓶，使得像對表1描述的那樣，表3中的所有數(shù)值(除了蔗糖以外)都分別除以2或10。制劑(50μg、25μg和5μg)中的蔗糖含量總是50000ug/ml。表3用0.4ml注射用水重構(gòu)后的組分濃度材料和方法參考材料a)單克隆抗體：使用特異性單克隆抗體(抗hsp70、抗38kda、抗ag85b，(來自lionexdiagnosticgmbh，braunschweig，germany))來鑒定fcmtb批次的蛋白質(zhì)譜。b)白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品：用于測定蛋白含量的該標(biāo)準(zhǔn)品由0.9％鹽水溶液(2mg/ml)中的牛白蛋白構(gòu)成，保存于疊氮化鈉中(生產(chǎn)商：pierce)。c)來自結(jié)核分枝桿菌的海藻糖6，6’-二分枝菌酸酯(tdm)標(biāo)準(zhǔn)品：使用市售tdm(sigma)來鑒定fcmtb批次中的tdm。d)來自結(jié)核分枝桿菌的分枝菌酸標(biāo)準(zhǔn)品使用市售分枝菌酸(sigma)來鑒定fcmtb批次中的分枝菌酸。e)分子量標(biāo)記：使用名為pluspre-stainedstandard”(invitrogen)的分子量標(biāo)記。參數(shù)的測定a)ph根據(jù)ph.eur.2.2.3和usp＜791＞，通過電位測定法測定重構(gòu)fcmtb懸液(20mg/ml)的ph。b)含水量使用電量測定karlfisher裝置進(jìn)程進(jìn)行測定凍干fcmtb殘留水的測試，遵循ph.eur.，method2.5.12和usp＜921＞waterdetermination的一般指導(dǎo)。c)測定總蛋白含量測定fcmtb總蛋白含量的測試使用市售試劑盒(bcakit，pierce)進(jìn)行，遵循ph.eur.，method2.5.33，method4(bicinchoninicacidorbcaassay)和usp＜1057＞。d)通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)鑒定蛋白質(zhì)譜該測試根據(jù)ph.eur.，method2.2.31和usp＜726＞進(jìn)行，凝膠中蛋白質(zhì)的檢測通過改進(jìn)的考馬斯染色或銀染進(jìn)行。測試樣品：以40或20mg/ml濃度在純凈水中重構(gòu)的fcmtb。參照溶液：分子量標(biāo)記，純化抗原，fcmtb參照標(biāo)準(zhǔn)品。純化抗原結(jié)核分枝桿菌hsp70蛋白(rv0350)結(jié)核分枝桿菌38kda蛋白(rv0934)結(jié)核分枝桿菌ag85b蛋白(rv1886c)結(jié)核分枝桿菌19kda蛋白(rv3763)結(jié)核分枝桿菌cfp10蛋白(rv3874)結(jié)核分枝桿菌esat6蛋白(rv3875)表4：參照抗原為進(jìn)行考馬斯染色，根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用gel-codebluestain試劑溶液(pierce)。為進(jìn)行銀染，根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用來自invitrogen的protsil1試劑盒。為進(jìn)行westernblot分析，根據(jù)本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法通過sdspage分離蛋白質(zhì)，然后電泳轉(zhuǎn)移到pvdf膜上，用特異性單克隆抗體進(jìn)行免疫檢測?？乖?抗體相互作用通過與觸發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抗抗體一起孵育來顯現(xiàn)。使用來自來自lionex(braunschweig，germany)的抗原(結(jié)核分枝桿菌hsp70蛋白(70kda)、結(jié)核分枝桿菌38kda蛋白、結(jié)核分枝桿菌ag85b蛋白(30kda))以及來自lionex的特異性單克隆抗體抗hsp70、抗38kda和抗ag85b。e)分枝菌酸的鑒定根據(jù)ph.eur.，method2.2.27，通過一維tlc檢查fcmtb中的分枝菌酸：凍干fcmtb，40mg。參照溶液：分枝菌酸標(biāo)準(zhǔn)品(sigma)。方法：a)提取過程：用氯仿∶甲醇(1∶1)提取樣品，然后孵育過夜。除去上清液級分。b)分枝菌酸的酯化：向每個管中加入2ml甲醇∶甲苯∶硫酸(30∶15∶1；vol/vol)，然后酯化過夜。然后加入4ml正己烷。在氮?dú)饬飨赂稍?，重懸?00μl己烷。c)tlc：在與平板(silicagel60(20x20cm)(merck)邊緣平行的線上應(yīng)用10μl每種樣品。以流動相(乙醚：正己烷(15∶85，vol/vol))的飽和水箱將層析分離進(jìn)行3次。然后將平板晾干。d)通過向平板噴霧磷鉬酸在96°乙醇中的溶液并在120℃加熱10分鐘而使分枝菌酸顯現(xiàn)。通過與分枝菌酸市售標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)進(jìn)行比較來測定fcmtb樣品中的分枝菌酸。結(jié)果表達(dá)為定性數(shù)據(jù)(評估的分枝菌酸存在(陽性)/不存在(陰性))。f)鑒定海藻酸6，6’-二分枝菌酸酯(tdm)：測試樣品：凍干的fcmtb，40mg。參照溶液：tdm標(biāo)準(zhǔn)品(sigma)。方法：(i)提取過程：用氯仿∶甲醇(1∶1)提取樣品，然后孵育過夜。將上清液級分在氮?dú)饬髦懈稍锊⒎Q重。最后將干燥的樣品以40mg/ml終濃度重懸于氯仿中。(ii)tlc：在與平板(silicagel60(20x20cm)(merck)邊緣平行的線上應(yīng)用10μl每種樣品。以流動相(氯仿∶甲醇∶水(60∶12∶1，vol/vol))的飽和水箱進(jìn)行層析分離。然后將平板晾干。(iii)檢測：通過向平板噴霧硫酸中的1％蒽酮溶液并在120℃加熱5分鐘而使tdm顯現(xiàn)。(iv)鑒定：通過與用于產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)的市售tdm進(jìn)行比較來測定fcmtb樣品中的tdm。結(jié)果表達(dá)為定性數(shù)據(jù)(評估的tdm存在(陽性)/不存在(陰性))g)鑒定脂阿拉伯甘露聚糖(lam)：對于lam的western印跡分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法通過sdspage分離化合物，然后電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，使用特異性抗體cs35進(jìn)行免疫檢測。通過與觸發(fā)熒光反應(yīng)的抗抗體(igggoatanti-mouseirdye800cw)孵育而使抗原-抗體相互作用顯現(xiàn)。h)無菌度根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識，所有需要無菌的過程都在無菌條件下進(jìn)行，這也適用于沒有針對需要無菌的任何給定步驟明確提到的情況。無菌度測定如ph.eur.2.6.1(usp＜71＞)的規(guī)定進(jìn)行評估。i)分枝桿菌的滅活根據(jù)ph.eur.2.6.2評估分枝桿菌的滅活。j)細(xì)菌內(nèi)毒素細(xì)菌內(nèi)毒素的測試(lal測試，limulusamoebocytelysate)根據(jù)ph.eur.，method2.6.14的一般指導(dǎo)進(jìn)行，遵循methodd(生色動態(tài)法)和usp＜85＞。桿菌的破碎桿菌破碎的選擇認(rèn)為允許最優(yōu)地呈遞細(xì)胞抗原，特別是細(xì)胞壁抗原。fcmtb的破碎通過動態(tài)光散射(如下文所述)和激光衍射法測定。激光衍射允許測定0.04μm至2000μm范圍內(nèi)的破碎。該測定在servicioscientífico-técnicosdelauniversitatdebarcelona，spain進(jìn)行。儀器：coulterls13320，裝有universalliquidemodule(ulm)。溶劑：純凈水/礦物油。結(jié)果：繪制成直方圖，表示顆粒直徑(0.04μm-2000μm)之前的顆粒數(shù)目相對頻率(％)。測定z-平均顆粒尺寸和多分散性指數(shù)本文件描述的平均顆粒尺寸通過動態(tài)光散射(dls)測定，是基于顆粒布朗運(yùn)動的物理概念，以stokes-einstein方程定義：其中-d(h)＝流體力學(xué)直徑d＝平動擴(kuò)散系數(shù)k＝玻爾茲曼常數(shù)t＝絕對溫度η＝粘度不希望限于任何理論，stokes-einstein方程確立了，液體介質(zhì)中懸浮動顆粒處于恒定和隨機(jī)動運(yùn)動中，其速度取決于其尺寸：顆粒越大，布朗運(yùn)動就越慢。在動態(tài)光散射測定中，用單色光源(優(yōu)選激光)照亮含有待測顆粒的樣品，并在相關(guān)函數(shù)中分析散射光的強(qiáng)度如何隨時間波動。例如，如果測定大顆粒，由于它們運(yùn)動得慢，則散射光強(qiáng)度的波動也慢，其相關(guān)性需要很長時間才衰減；另一方面，如果測定小顆粒，因?yàn)樗鼈冞\(yùn)動得快，因此散射光強(qiáng)度的波動也快，信號的相關(guān)性迅速衰減。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選用以下儀器測定顆粒：zetasizernanozs(malverninstruments)，使用純凈水/礦物油作為溶劑。如果沒有相反說明，則儀器根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用，調(diào)節(jié)和校準(zhǔn)(如果有的話)也根據(jù)生產(chǎn)商的說明進(jìn)行。使用多種算法由相關(guān)函數(shù)計算尺寸。在本情況下使用iso13321第8頁定義的“cumulantsanalysis”。相關(guān)性函數(shù)在單指數(shù)曲線中的擬合結(jié)果允許計算以下參數(shù)：-顆粒分布的平均尺寸或z-平均直徑。該平均尺寸為強(qiáng)度平均。-多分散性指數(shù)(pdi)，即對應(yīng)于顆粒尺寸分布的寬度。結(jié)果通常繪制成直方圖，表示為顆粒數(shù)目相對頻率(％)相對于顆粒直徑(可以是1nm至3μm范圍內(nèi)包含的任何直徑)。效力測試無特定病原體的6-7周齡雌性c57bl/6小鼠由harlaniberica(spain)提供。測試樣品：表3的制劑和安慰劑(無活性組分的疫苗制劑)。a)用單劑量對體內(nèi)感染結(jié)核分枝桿菌的小鼠模型進(jìn)行疫苗接種：實(shí)驗(yàn)設(shè)計包括：第0天：用mtb菌株h37rvpasteur(4x104cfus)在小鼠下腹部進(jìn)行皮下感染。第14天：用單次口服劑量的利福噴汀(25mg/kg)和異煙肼(10mg/kg)對動物進(jìn)行化學(xué)預(yù)防處理，從而導(dǎo)致1周的抗生素效應(yīng)。第21天：用單劑量疫苗/安慰劑和/或水在頸部皮下進(jìn)行疫苗接種。獲得所有樣品并對單個小鼠進(jìn)行分析。每個實(shí)驗(yàn)包括：感染小鼠加安慰劑的基礎(chǔ)組和感染小鼠加疫苗接種的實(shí)驗(yàn)組。組由6-7只動物組成，實(shí)驗(yàn)一式二份進(jìn)行。第28天：用異氟烷麻醉小鼠。b)用雙劑量對體內(nèi)感染結(jié)核分枝桿菌的小鼠模型進(jìn)行疫苗接種：實(shí)驗(yàn)設(shè)計包括：第0天：用mtb菌株h37rvpasteur(4x104cfus)在小鼠下腹部進(jìn)行皮下感染。第14天：用單次口服劑量的利福噴汀(25mg/kg)和異煙肼(10mg/kg)對動物進(jìn)行化學(xué)預(yù)防處理，從而導(dǎo)致1周的抗生素效應(yīng)。第21天：用第一劑疫苗/安慰劑和/或水在頸部皮下進(jìn)行疫苗接種。第36天：用第二劑疫苗/安慰劑和/或水在頸部皮下進(jìn)行疫苗接種。獲得所有樣品并對單個小鼠進(jìn)行分析。每個實(shí)驗(yàn)包括：感染小鼠加安慰劑的基礎(chǔ)組和感染小鼠加疫苗接種的實(shí)驗(yàn)組。組由6-7只動物組成，實(shí)驗(yàn)一式二份進(jìn)行。第42天：用異氟烷麻醉小鼠。對于上文a)和b)，在處死后，使用脾細(xì)胞懸液通過elispot對干擾素-γ點(diǎn)形成單位(sfu)參數(shù)進(jìn)行離體分析，以用于細(xì)胞免疫應(yīng)答。測定在結(jié)核分枝桿菌健康小鼠模型中的免疫原能力。無特定病原體的6-7周齡雌性c57bl/6小鼠由harlaniberica(spain)提供。用雙劑量對體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌健康小鼠模型進(jìn)行疫苗接種。實(shí)驗(yàn)設(shè)計包括：第0天根據(jù)實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選模式用第一劑疫苗或安慰劑和/或水在頸部皮下進(jìn)行疫苗接種。第21天用第二劑疫苗或安慰劑和/或水在頸部皮下進(jìn)行疫苗接種。獲得所有樣品并對單個小鼠進(jìn)行分析。每個實(shí)驗(yàn)包括：感染小鼠加安慰劑的基礎(chǔ)組和感染小鼠加疫苗接種的實(shí)驗(yàn)組。第28天用異氟烷麻醉小鼠。處死后，使用小鼠血清通過elisa對igg抗體進(jìn)行分析，以用于體液免疫應(yīng)答。結(jié)核的診斷結(jié)核的診斷方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。quantiferon測試和tst已知能夠給出可靠的結(jié)果，并可單獨(dú)或組合使用，用于將受試者就其對本發(fā)明產(chǎn)品治療的適用性進(jìn)行分類。quantiferon也稱為qft，是針對結(jié)核感染或潛伏期結(jié)核的市售測試，由cellestislimited，chadstone，melbourne，victoria，australia生產(chǎn)。qft是用于結(jié)核診斷的干擾素-γ釋放測定(igra)。其根據(jù)生產(chǎn)商的說明使用。mantoux測試(也稱為mantoux篩選測試、結(jié)核菌素敏感性測試、(tst測試)、劃痕測試，或用于純化蛋白衍生物的ppd測試)是一種結(jié)核診斷工具。這兩種測試的概況可見于frankenetal.，clinvaccineimmunol.2007，april；14(4)：477-480。實(shí)施例：給出以下實(shí)施例以為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供可工作的模式以及關(guān)于本發(fā)明一些具體實(shí)施方案的解釋。這些實(shí)施例為說明性目的，而不旨在以任何方式對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。實(shí)施例1：分離mycobacteriumtuberculosisnctc13536菌株用于生產(chǎn)fcmtb的起始材料是菌株nctc13536(也稱為511或mycobacteriumtuberculosisnctc13536，是從西班牙巴塞羅那的一名有免疫力的肺結(jié)核患者中分離的結(jié)核分枝桿菌菌株)的接種物。其在2010年保藏于倫敦nctc(符合布達(dá)佩斯條約的官方保藏組織)。該菌株還保藏于西班牙巴塞羅那serviceofmicrobiologyofthehospitaldesantpau的菌株中心。在1995年和1996年分別對原始菌株進(jìn)行了兩次傳代。mslpb#1對應(yīng)于原始菌株結(jié)核分枝桿菌nctc13536的第二代，其在1996年10月進(jìn)行，獲得了100管(3ml無菌玻璃管)，保存于-70±5℃。如本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)方法所測定的，該菌株具有低遺傳多態(tài)性。實(shí)施例2：生產(chǎn)mtb-c細(xì)胞的上游方法本方法的流程圖在圖1中給出。用于生產(chǎn)fcmtb的起始材料是菌株nctc13536(實(shí)施例1)的接種物。為確保該起始材料的持續(xù)供應(yīng)，優(yōu)選使用種子批系統(tǒng)(seedlotsystem)。因此，用來自主種子批(msl，masterseedlot)的工作種子批(wsl，workingseedlot)產(chǎn)生fcmtb。將mycobacteriumtuberculosisnctc13536(實(shí)施例1)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)3至5周。然后將細(xì)菌生長物傳代到37±2℃的proskauerbeck培養(yǎng)基中并以100±5rpm攪拌。一旦達(dá)到最高細(xì)菌濃度(目測)后，在proskauerbeck培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)并孵育。實(shí)現(xiàn)相似的細(xì)菌濃度后，取小的等分試樣。通過在37±2℃接種3-4周后在middlebrook瓊脂培養(yǎng)基中獲得的集落形成單位(cfu)來測定活性細(xì)菌數(shù)。細(xì)菌數(shù)必須為2-5x107cfus/ml。(1)培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌fcmtb的生產(chǎn)開始于自在7h11瓊脂平板中接種0.2mlwsl并在37±1℃孵育15±2天。然后將集落轉(zhuǎn)移至含有少量玻璃珠的管中?；旌虾?，加入約5ml注射用水(wfi)以獲得細(xì)菌懸液。此時，進(jìn)行活性平板計數(shù)和無菌度測試。使用浸有細(xì)菌懸液的拭子用結(jié)核分枝桿菌接種約100middlebrook7h11瓊脂平板，以獲得會合培養(yǎng)物。平板在37±1℃下孵育21±2天。如下進(jìn)行無菌度測試作為過程控制：無菌度測試的目的是確保不存在真菌和除mycobacteria之外的細(xì)菌。測試通過根據(jù)無菌度測試的ph.eur2.6.1直接接種來進(jìn)行。測試樣品必須是無菌的。使用7h11培養(yǎng)基代替7h10(ph.eur.2.6.2中提到的)。7h11以7h10培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入1g酪胰蛋白酶消化物以增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌菌株的生長。(2)收獲結(jié)核分枝桿菌并冷凍粗提物孵育期之后，通過對瓊脂平板進(jìn)行目測和進(jìn)行無菌度測試來控制細(xì)菌培養(yǎng)物的純度。然后，從瓊脂平板上收集細(xì)菌生長物并轉(zhuǎn)移至無菌管中。將獲得的粗提物稱重(20-22g)。將混合物保持在-80℃±5℃。實(shí)施例3：用于產(chǎn)生得自粗提物的脂質(zhì)體的下游方法本方法的流程圖在圖2中給出。(3)細(xì)胞破碎和脫脂將粗提物(實(shí)施例2)在37±1℃解凍，然后在4℃下加入含有4％(w/w)triton-x114的無菌pbs緩沖液(ph7.0-7.5)?；旌虾?，隨后將其轉(zhuǎn)移至含有無菌二氧化硅/氧化鋯珠的無菌聚碳酸酯容器中。然后，在beadbeater中通過應(yīng)用以下破碎方法來實(shí)施細(xì)胞破碎：3個循環(huán)，每個循環(huán)由5個開/關(guān)周期加10分鐘休息組成。方法完成后，通過隨后在含有4％triton-x114的無菌pbs緩沖液(ph7.0-7.5)中洗滌(反復(fù)搖動和沉淀)而將細(xì)胞破碎級分與珠子分開。然后收集經(jīng)洗滌的細(xì)胞破碎級分懸液的等分試樣以進(jìn)行ph控制，然后在4℃下以845g最終離心30分鐘。為了除去胞質(zhì)級分并獲得富含細(xì)胞片段的懸液，在4℃下以20000g進(jìn)行兩次約60分鐘的高速離心。第一次離心后，將淡黃色的上清液(富含可溶性蛋白和脂質(zhì))棄去，將沉淀重懸于pbs中，在上述相同條件下再次離心。其后，棄去的上清液的外觀必須是澄清無色的。最后，將所得沉淀重懸于50-60mlpbs的最終體積中(fcmtb懸液)。(4)巴氏消毒接著將fcmtb懸液在65±2℃巴氏消毒60分鐘。巴氏消毒結(jié)束后，通過石蕊濾紙測定經(jīng)巴氏消毒的fcmtb的ph。ph6.5-7.5范圍內(nèi)認(rèn)為是可以接受的。將0.5ml產(chǎn)物懸液裝入無菌并去熱原的管中，進(jìn)行針對無菌度和mycobacteria失活的ipc。將裝好的管冷凍在-80±5℃。材料在進(jìn)行巴氏消毒后將與未處理材料物理分離，即，巴氏消毒之前利用的空間與其后填充過程使用的空間完全分開。(5)凍干接著在約-45℃至30℃的溫度和0.310mbar的壓力下對所有含有冷凍產(chǎn)物的管凍干約18小時(每管約0.5ml體積)。使用無菌操作并在氮?dú)夥障聦⒐芗尤?biāo)注。然后將包裝好的藥物物質(zhì)在-20°±5℃保存多至12個月。實(shí)施例4：蛋白表征圖3給出了就蛋白質(zhì)譜而言的表征策略的概況基于文獻(xiàn)(andersenp.，1997，scandj.immunol.；45(2)：115-31；geiseletal.，2005，j.immunol.；174(8)：5007-15；stewartetal.2005，infect.immun.，73(10)：6831-7.，wangetal.，2007，j.mol.biol.，366(2)：375-81)選擇了6個蛋白質(zhì)條帶作為蛋白質(zhì)譜評估的代表：hsp70蛋白(rv0350)、38kda蛋白(rv0934)、(rv1866c)、19kda蛋白(rv3763)、cfp10蛋白(rv3874)和esat-6蛋白(rv3875)。a.測定總蛋白含量：通過二辛可寧酸(bca)法對fcmtb的總蛋白水平進(jìn)行定量?？偟鞍渍糵cmtb內(nèi)容物的約10％(w/w)。參照標(biāo)準(zhǔn)品fcmtb-0429-16和fcmtb-52.1分別含有167μg蛋白/mgfcmtb和115μg蛋白/mgfcmtb。b.通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)鑒定蛋白質(zhì)譜：通過與對應(yīng)于以下結(jié)核分枝桿菌參照抗原進(jìn)行比較來測定藥物物質(zhì)fcmtb的蛋白質(zhì)譜：esat6(6kda)(7)；cfp10(10kda)(6)；ag85b(30kda)(1)；38kda(2)；hsp70(70kda)(4)以及分子量標(biāo)記mw(5)，如所示(見圖4)。通過考馬斯染色進(jìn)行藥物物質(zhì)fcmtb的蛋白質(zhì)譜測定和條帶(約70kda，38kda，30kda，10kda和6kda)鑒定。通過銀染進(jìn)行19kda條帶(脂多肽)的鑒定。c.用特異性單克隆抗體通過western印跡鑒定蛋白質(zhì)譜：使用以下單克隆抗體(mab)獲得的圖譜確定藥物物質(zhì)fcmtb的蛋白質(zhì)譜：抗hsp70(70kda，fig.5c)、抗38kda(fig.5d)、抗ag85b(30kda，fig.5e)。fcmtb-52.1是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施的優(yōu)選模式的fcmtb的優(yōu)選批次。實(shí)施例6：脂質(zhì)表征fcmtb脂質(zhì)譜的表征由基于氯仿∶甲醇(1∶1)提取的分級分離法組成。本研究中實(shí)施的分級分離方案發(fā)基于delmaseta1.，1997，glycobiology7(6)，811-7描述的方法。用于分析fcmtb中脂質(zhì)和糖脂含量的方法是薄層層析(tlc)。具體地，通過薄層層析(tlc)在參照菌株h37rv和nctc13536以及不同fcmtb批次中都鑒定出了多?；Ｔ逄?polyaciltrehalose(pt))、海藻糖二分枝菌酸酯(tdm)、二?；Ｔ逄?dat)、磷脂酰肌醇甘露糖苷(pim)和其他糖脂以及結(jié)核菌醇二分枝菌酸酯(phthioceroldimycocerosates(pdim))和分枝菌酸。見圖7a。通過tlc分析上清液中海藻糖6，6’-二分枝菌酸酯(tdm)的含量。根據(jù)tlc法對沉淀中的分枝菌酸進(jìn)行測定。盡管對于mtb-c脂質(zhì)譜沒有已知的定量數(shù)據(jù)，但本研究中建立的定性脂質(zhì)譜與目前的科學(xué)知識一致，并允許對目前已知的免疫原性脂質(zhì)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)表征。將fcmtb與結(jié)核分枝桿菌菌株nctc13536和h37rv的全細(xì)胞脂質(zhì)級分和tdm商品標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了比較(見圖7a和7b)?？傮w而言，本發(fā)明包含fcmtb的脂質(zhì)體的不同批次中的脂質(zhì)含量是一致的。圖7d顯示了lam的表征。實(shí)施例6：破碎的細(xì)胞材料的表征使用兩種方法獲得的初步結(jié)果都顯示，fcmtb的片段大小主要是小于1μm(99％＜1μm)，fcmtb電子顯微術(shù)確證了這一點(diǎn)：片段的尺寸主要為100至300nm。通過260nm的吸光度研究了酚/氯仿混合物提取后的殘余dna水平(檢出限：0.2μgdna/mgfcmtb)。目前獲得的典型結(jié)果低于15μgdna/mgfcmtb。在不同fcmtb批次之間可重復(fù)的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)譜顯示了該藥物物質(zhì)生產(chǎn)過程的一致性。實(shí)施例7：免疫小鼠并使生物活性可見fcmtb蛋白質(zhì)條帶與小鼠免疫血清的相互作用：利用western印跡法，可以使與血清中存在的igg抗體相互作用的fcmtb蛋白質(zhì)條帶可見，所述血清得自用本發(fā)明基于脂質(zhì)體制劑的疫苗接種兩次的感染小鼠。這被認(rèn)為是生物活性的指示(圖6)。實(shí)施例8：包含fcmtb的脂質(zhì)體制劑的體內(nèi)活性如下在體內(nèi)模型中研究該疫苗的生物活性：評估無脂質(zhì)體的fcmtb(用注射用水wfi重構(gòu))和本發(fā)明最佳實(shí)施模式的脂質(zhì)體制劑(5％蔗糖，見上文)中的fcmtb的免疫原能力(圖8)。這些結(jié)果顯示了含有蔗糖的脂質(zhì)體制劑的優(yōu)勢。脂質(zhì)體的聚集或融合狀態(tài)是已證明對疫苗生物活性有顯著影響的參數(shù)。因此，本發(fā)明的研究者對疫苗的生產(chǎn)過程中和批次釋放時的顆粒尺寸和多分散性指標(biāo)進(jìn)行了充分的控制。實(shí)施例9：蔗糖的效果在最初的測試中，在包含mtb-c菌株nctc13536片段的脂質(zhì)體制劑中任選地加入以下賦形劑之一：(a)1.5％甘油和(b)5％蔗糖。隨后，對兩種制劑的相關(guān)理化特性和生物活性進(jìn)行比較評估。凍干脂質(zhì)體組合物重構(gòu)后和根據(jù)目前的批次釋放規(guī)格參數(shù)測試后的測定結(jié)果在表5中給出。(a)多分散性指數(shù)(1)存在脂質(zhì)體聚集物nd＝未測定表5：凍干脂質(zhì)體組合物重構(gòu)后測定的三種不同制劑的規(guī)格結(jié)果本研究者意想不到地發(fā)現(xiàn)，5％蔗糖制劑提供了更好的生理化學(xué)結(jié)果(例如含水量或重構(gòu)時間)。但是，最關(guān)鍵的事實(shí)是含蔗糖制劑與其他兩種制劑相比，顯示出脂質(zhì)體聚集(顆粒尺寸，z平均)的重要降低。動態(tài)光散射分析顯示，含蔗糖脂質(zhì)體的z-平均為75±20nm(多分散性指數(shù)≤0.350)。含蔗糖制劑凍干制備物的電子顯微術(shù)顯示出尺寸為40至100nm的多層和單層脂質(zhì)體的混合(圖9)。鑒于5％蔗糖制劑的這種改進(jìn)的參數(shù)以及觀察到的更低的含水量(≤2％)，預(yù)計該制劑有改進(jìn)的穩(wěn)定性結(jié)果。事實(shí)正是如此。本研究者關(guān)于室溫保存3個月的以1.5％甘油配制的實(shí)驗(yàn)批次的數(shù)據(jù)顯示出ppd(免疫原效力)生物活性的大幅損失。相反，在室溫保存3個月后對含5％蔗糖的制劑進(jìn)行研究時，ppd活性基本不變。因此，蔗糖還提供了更好地保持生物活性的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施例10：含蔗糖制劑的生物特性將表3的制劑用于生物學(xué)研究?？梢酝ㄟ^elispot來測量結(jié)核分枝桿菌感染小鼠模型中由接種本發(fā)明最佳實(shí)施模式的疫苗(單次接種)所觸發(fā)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，結(jié)果在表6中給出。nd：未測定表6：小鼠中接種后的免疫應(yīng)答在使用elispot測定應(yīng)答水平時，基于脂質(zhì)體制劑的疫苗的接種導(dǎo)致體內(nèi)細(xì)胞免疫應(yīng)答與感染動物的基礎(chǔ)值相比顯著提高。相對于基礎(chǔ)應(yīng)答的比值為4-8倍(ppd)和8-14倍(ag85b)?；谥|(zhì)體制劑的疫苗還能夠誘導(dǎo)多抗原體液應(yīng)答，這特別是在存在高感染傳播的情況下有保護(hù)作用(guiradoetal.，2006，microbesinfect.8，1252-1259)。特別地在無蔗糖制劑和含有蔗糖作為主要賦形劑的制劑的免疫原效力數(shù)據(jù)之間進(jìn)行了比較。所得結(jié)果明確指出，在單次疫苗接種模型中，50μgfcmtb劑量的含蔗糖制劑所引發(fā)的細(xì)胞免疫應(yīng)答是相同劑量無蔗糖制劑所得應(yīng)答的約1.5倍。在以下兩個效力測試中都獲得了這種更高的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平：為批次釋放規(guī)格而進(jìn)行的測試(單次疫苗接種模型)，以及可比性研究中包括的額外測試(兩次疫苗接種的模型)。此外，在兩個效力測試中，50μgfcmtb劑量含蔗糖制劑引發(fā)的細(xì)胞免疫應(yīng)答都顯示出與200μgfcmtb無蔗糖制劑相似的水平。凍干脂質(zhì)體組合物重構(gòu)后測量的結(jié)果在圖10a和10b中給出。含蔗糖制劑顯示出脂質(zhì)體聚集顯著降低。這被認(rèn)為是免疫原效力增大的原因。用50μg劑量的這種新制劑獲得的細(xì)胞免疫應(yīng)答與200μg劑量無蔗糖制劑幾乎相當(dāng)。本領(lǐng)域已知，所述細(xì)胞應(yīng)答被認(rèn)為是有關(guān)系的應(yīng)答(northrj，jungyj(2004).annu.rev.immunol.22：599-623)。實(shí)施例11：凍干脂質(zhì)體制劑的生產(chǎn)方法包含本發(fā)明脂質(zhì)體制劑的藥物組合物的生產(chǎn)方法的一個實(shí)施方案示于圖11。簡言之，其包括以下步驟1至5。(1)lcs本體組分(bulkcomponent)的制備將lcs的本體大豆卵磷脂溶于乙醇(1∶1；w/w)，并將膽酸鈉溶于水(1∶5；w/w)。通過過濾對溶液進(jìn)行除菌。將卵磷脂鈉溶液與膽酸鈉溶液混合后，在攪拌下加入凍干的fcmtb(實(shí)施例1)。組分比為0.03∶0.2∶0.7(fcmtb∶膽酸鈉∶大豆卵磷脂；w/w/w)。(2)lcs本體的制備將水相轉(zhuǎn)移至無菌不銹鋼混合器中。以0.7∶0.3(水相∶脂質(zhì)相，w/w)的比例加入(1)的包含大豆卵磷脂、膽酸鈉和fcmtb的脂質(zhì)相。將各相以2200rads/s混合3分鐘以進(jìn)行勻漿和脂質(zhì)體形成。勻漿后，將本體lcs轉(zhuǎn)移至另一容器并使其靜置至少5分鐘。對該lcs本體的顆粒尺寸進(jìn)行ipc。(3)lcs本體的稀釋，脂質(zhì)體懸液的最終制備制備10％(w/w)蔗糖溶液并滅菌。以適當(dāng)?shù)谋壤龑⒃撜崽侨芤号c水和lcs本體混合，以獲得5％蔗糖溶液中21mglcs/ml重構(gòu)的最終脂質(zhì)體懸液(ls)本體。對ph、無菌度和顆粒尺寸進(jìn)行測試，作為過程控制。(4)填裝在管中裝入0.4mlls(在持續(xù)攪動下)并部分密封以進(jìn)行冷凍和凍干。(5)凍干、包裝和標(biāo)記將管在-80℃±5℃下冷凍直至凍干開始。凍干在-45℃至25℃的溫度和0.150mbar下進(jìn)行。該過程持續(xù)24小時。凍干結(jié)束時，在氮?dú)夥罩袑⒐芡耆?，包裹、?biāo)記并保存在5℃±3℃。實(shí)施例12：針對ltbi的輔助治療僅需要單次注射25μgofcmtb設(shè)置ii期雙盲隨機(jī)臨床試驗(yàn)，以在具有潛伏期結(jié)核感染(ltbi)(tst+并且quantiferon+)的96名hiv陽性(hiv+)和hiv陰性(hiv-)受試者中對3種fcmtb劑量(5、25、50μg各自根據(jù)本發(fā)明最佳實(shí)施方式制備)和安慰劑進(jìn)行評價，所述受試者在接受1個月的異煙肼治療后隨機(jī)分入n＝12的組。在剛進(jìn)行異煙肼化學(xué)治療后以及相隔4周后，用fcmtb(5、25、50μg各自根據(jù)本發(fā)明最佳實(shí)施方式制備)對受試者接種兩次。免疫譜：fcmtb(5、25、50μg各自根據(jù)本發(fā)明最佳實(shí)施方式制備)引發(fā)了在所有劑量下激發(fā)的鐘形的針對分泌抗原(esat-6，ag85b)和結(jié)構(gòu)抗原(16kda，38kda)的多抗原應(yīng)答(圖12和13)。fcmtb(5、25、50μg各自根據(jù)本發(fā)明最佳實(shí)施方式制備)還在較高劑量下引發(fā)了與預(yù)防效果相容的長期記憶應(yīng)答(who測試)。意想不到的是，盡管總體免疫應(yīng)答在hiv-中強(qiáng)于hiv+，但25μgfcmtb(5、25、50μg各自根據(jù)本發(fā)明最佳實(shí)施方式制備)單次接種在兩個人群中都引發(fā)最佳的免疫應(yīng)答(圖12和13)。結(jié)論：25μg單次疫苗接種是hiv陰性和hiv陽性受試者中針對ltbi的輔助治療的最佳選擇。附圖簡述圖1：流程圖，其顯示藥物物質(zhì)fcmtb的上游方法，包括該方法中涉及的材料和試劑以及合適的流程控制。圖2：流程圖，其顯示藥物物質(zhì)fcmtb的下游方法，包括該方法中涉及的材料和試劑以及合適的流程控制。圖3：蛋白表征的流程。圖4：通過sds-page和考馬斯藍(lán)染色法鑒定抗原。顯示了參照抗原esat6(6kda)(7)；cfp10(10kda)(6)；ag85b(30kda)(1)；38kda(2)；hsp70(70kda)(4)和分子量標(biāo)記mw(5)。圖5：蛋白表征。圖5a：蛋白質(zhì)譜：15.6μgfcmtb/ml(1，2)、6.25μgfcmtb/ml(3，4)和1.56μgfcmtb/ml(5，6)終濃度的參照標(biāo)準(zhǔn)品fcmtb-52.1(1-6)的蛋白質(zhì)譜，sdspage隨后是考馬斯染色。mw以kda計。圖5b：19kda條帶的鑒定，sdspage隨后是銀染。圖5c：蛋白質(zhì)譜：與來自lionex的esat-6標(biāo)準(zhǔn)品并行地，通過sds-page和銀染法鑒定所示fcmtb批次中的條帶(10kda和6kda)。不同的fcmtb批次(1、2、3、9、10、11，(第9道為fcmtb-52.1批次))，不同濃度的來自lionex的esat-6標(biāo)準(zhǔn)品(4至8)；圖5d：與結(jié)核分枝桿菌hsp70并行地，使用特異性抗體通過western印跡在fcmtb批次中進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌hsp70(rv0350)抗原的westernblot鑒定。不同的fcmtb批次(1、2、3、4、7、8、9)，esat-6標(biāo)準(zhǔn)品(5、6)；圖5e：與來自lionex的結(jié)核分枝桿菌38kda并行地，使用特異性抗體通過western印跡法在fcmtb批次中進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌38kda(rv0934)抗原的鑒定。使用odyssey系統(tǒng)進(jìn)行熒光檢測。不同的fcmtb批次(1、2、3、6、7)，38kda標(biāo)準(zhǔn)品(4、5)。圖5f：與來自lionex的結(jié)核分枝桿菌ag85b并行地，使用特異性抗體通過western印跡法在fcmtb批次中進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌ag85b(rv1886c)抗原的鑒定。使用odyssey系統(tǒng)進(jìn)行熒光檢測。不同的fcmtb批次(1、2、3、5、6、7)，ag85b標(biāo)準(zhǔn)品(4)。圖6：使用western印跡法測定的不同fcmtb批次(50μg/條帶)的所示蛋白條帶與1/8000稀釋的血清之間的相互作用，所述血清得自用本發(fā)明基于脂質(zhì)體制劑之藥物疫苗組合物接種兩次的感染小鼠。圖7：脂質(zhì)分析。圖7a：通過tlc法鑒定了參照菌株(h37rv(2)和nctc13536(1)和不同fcmtb批次(3-9)中的多酰基海藻糖(polyacyltrehalose(pt))、海藻糖6，6’-二分枝菌酸酯(tdm)、二?；Ｔ逄?dat)以及tdm標(biāo)準(zhǔn)品(10)。圖7b：通過tlc法鑒定fcmtb批次中的海藻糖6，6’-二分枝菌酸酯(tdm)。圖(a)和(b)代表兩個獨(dú)立測定。(a)tdm標(biāo)準(zhǔn)品(11)和(12)，其他道為不同的fcmtb批次。b：(1)tdm標(biāo)準(zhǔn)品(1)，其他道為不同的fcmtb批次。圖7c：通過tlc法測定的fcmtb批次中的分枝菌酸i、iii和iv的圖譜。圖(a)、(b)和(c)代表3個獨(dú)立測定。(a)fcmtb批次(1-6(fcmtb-51.2標(biāo)準(zhǔn)品6))。(b)用于說明/參考，(c)批次fcmtb-47b(1)與分枝菌酸標(biāo)準(zhǔn)品(2)相比。圖7d：lam的鑒定(參照在左道，其余道為產(chǎn)生自本發(fā)明脂質(zhì)體的樣品)。圖8：相同劑量(50μg/劑)下，重懸于注射用水(wfi)的fcmtb與用脂質(zhì)體制備的fcmtb(標(biāo)記為ruti疫苗，批次10a)的細(xì)胞免疫效力的比較。圖9：脂質(zhì)體濃縮物(lcs)本體的冷凍破碎(電子顯微術(shù))。圖10：a：在效力測試中用兩種制劑(一次疫苗接種)測試的每批次的細(xì)胞免疫應(yīng)答。b，同a一樣，但為兩次疫苗接種?！爸苿﹊i”：包含5％(w/w)蔗糖，根據(jù)本文件的表1?！爸苿﹊”，同制劑ii一樣，只是不存在蔗糖。μg指μgfcmtb/劑。85b：ag85b。圖11：本發(fā)明最佳實(shí)施方式的方法的流程圖。圖12：實(shí)施例12描述的1次接種ruti25μg的免疫譜。圖13：實(shí)施例12描述的免疫原性(hiv-和hiv+)。實(shí)施方式具體而言，本發(fā)明涉及以下實(shí)施方式：實(shí)施方式1.脂質(zhì)體制劑，其包含：(a)來自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株的片段，(b)脂質(zhì)體形成劑，(c)1至20％(w/v)的蔗糖，優(yōu)選2至12％(w/v)的蔗糖，更優(yōu)選3至8％(w/v)的蔗糖，最優(yōu)選4至6％(w/v)的蔗糖，其中顆粒的z-平均尺寸為120nm或更小。實(shí)施方式2.實(shí)施方式1的脂質(zhì)體制劑，其中所述顆粒的z-平均尺寸為40至110nm，更優(yōu)選55至95nm。實(shí)施方式3.實(shí)施方式1或2中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述脂質(zhì)體制劑為乳劑，并且其中顆粒的z-平均尺寸優(yōu)選小于40nm。實(shí)施方式4.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中顆粒的多分散性指數(shù)為0.4或更小，優(yōu)選0.3。實(shí)施方式5.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株是有毒力的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mtb-c)菌株，優(yōu)選為2010年保藏于倫敦nctc的mtb-c菌株nctc13536。實(shí)施方式6.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其還包含(d)表面活性物質(zhì)，和/或(e)一種或更多種非離子型表面活性劑。實(shí)施方式7.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述mtb-c細(xì)胞的片段是細(xì)胞壁片段或者包含細(xì)胞壁片段。實(shí)施方式8.實(shí)施方式6的脂質(zhì)體制劑，其中(a)與(d)的比值為0.05∶1至1∶5(w/w)。實(shí)施方式9.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述脂質(zhì)體形成劑是氫化的、部分氫化的或非氫化的磷脂，優(yōu)選卵磷脂，最優(yōu)選大豆卵磷脂。實(shí)施方式10.實(shí)施方式6至8中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述表面活性物質(zhì)選自膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、膽固醇和膽固醇琥珀酸單酯。實(shí)施方式11.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述mtb-c細(xì)胞的片段是細(xì)胞壁片段或者包含細(xì)胞壁片段。實(shí)施方式12.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其包含2010年保藏于倫敦nctc的mtb-c菌株nctc13536的片段。實(shí)施方式13.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其包含以下的至少兩項(xiàng)，優(yōu)選三項(xiàng)，更優(yōu)選四項(xiàng)，最優(yōu)選全部：(i)第一多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約70kda，其中所述第一多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌hsp70蛋白(rv0350)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約38kda，其中所述第二多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌38kda蛋白(rv0934)的質(zhì)量指紋圖譜相似，(iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約30kda，其中所述第三多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌ag85b蛋白(rv1866c)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約10kda，其中所述第四多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌cfp10蛋白(rv3874)的質(zhì)量指紋圖譜相似，和(i)第五多肽，其在十二烷基硫酸鈉(sds)聚丙烯酰胺凝膠電泳后測量的分子量為約6kda，其中所述第五多肽的質(zhì)量指紋圖譜與結(jié)核分枝桿菌esat-6蛋白(rv3875)的質(zhì)量指紋圖譜相似。實(shí)施方式14.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中存在以下結(jié)核分枝桿菌抗原的至少一種或其片段：hsp70、38kda蛋白和ag85b。實(shí)施方式15.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其包含一種或更多種分枝菌酸和/或糖綴合分枝菌酸酯優(yōu)選海藻糖二分枝菌酸酯，和/或糖脂優(yōu)選脂阿拉伯甘露聚糖。實(shí)施方式16.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其還包含一種或更多種非離子型表面活性劑。實(shí)施方式17.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其還包含一種或更多種鹽或其溶液，其中所述鹽優(yōu)選為氯化鈉。實(shí)施方式18.前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑，其中所述脂質(zhì)體制劑是凍干的。實(shí)施方式19.懸液，其中前述實(shí)施方式中任一種的脂質(zhì)體制劑重構(gòu)于溶劑中，其中所述溶劑優(yōu)選為含水溶劑，更優(yōu)選為生理血清或包含生理血清。實(shí)施方式20.藥物組合物，其包含實(shí)施方式1至18中任一種的制劑或?qū)嵤┓绞?9的懸液，以及可藥用載體或稀釋劑，和/或可藥用佐劑。實(shí)施方式21.實(shí)施方式1至18中任一種的脂質(zhì)體制劑、實(shí)施方式19的懸液或?qū)嵤┓绞?0的藥物組合物，其用于治療人或動物體的方法中。實(shí)施方式22.實(shí)施方式21的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于治療或預(yù)防結(jié)核的方法中。實(shí)施方式23.實(shí)施方式22的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其選自以下：a)用于在具有潛伏期結(jié)核感染的個體中預(yù)防活動性結(jié)核的方法中；b)用于結(jié)核的初級預(yù)防方法中，以防止接觸過該疾病但尚未感染的個體發(fā)生感染，或c)用于治療或預(yù)防潛伏期結(jié)核的方法中。實(shí)施方式24.實(shí)施方式21至23中任一種的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于以包含1至1000、優(yōu)選3至250、更優(yōu)選4至80、最優(yōu)選約5、約25或約50μg/劑fcmtb的劑量施用于人體。實(shí)施方式25.實(shí)施方式21至23中任一種的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于以25pgfcmtb的單次接種劑量施用于人體。實(shí)施方式26.實(shí)施方式21至25中任一種的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于聯(lián)合治療中，所述聯(lián)合治療優(yōu)選包含抗生素，更優(yōu)選異煙肼和安沙霉素中的一種或更多種，其中所述安沙霉素最優(yōu)選是利福霉素。實(shí)施方式27.實(shí)施方式125的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于輔助治療中。實(shí)施方式28.實(shí)施方式27的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于在輔助治療中施用于hiv陽性人受試者。實(shí)施方式29.實(shí)施方式25的脂質(zhì)體制劑、懸液或藥物組合物，其用于施用于hiv陰性人受試者。當(dāng)前第1頁12