本發(fā)明涉及天然藥物的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及小檗堿在制備治療急性軟組織損傷的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

小檗堿，又稱黃連素，是一種重要的生物堿，在我國應(yīng)用歷史悠久的中藥(如黃連、黃柏、三顆針等)中都可以提取獲得。在植物界中分布較廣，大約有4個(gè)科10個(gè)屬內(nèi)發(fā)現(xiàn)有本品存在。臨床應(yīng)用主要為本品的鹽酸鹽和硫酸鹽。我國現(xiàn)用合成法大量生產(chǎn)。小檗堿為廣譜抗菌劑，并有加強(qiáng)白細(xì)胞吞噬金黃色葡萄球菌的作用，能對(duì)抗病原微生物，對(duì)多種細(xì)菌如痢疾桿菌、結(jié)核桿菌、肺炎球菌、傷寒桿菌及白喉?xiàng)U菌等都有抑制作用。其中，對(duì)痢疾桿菌作用最強(qiáng)，常用來治療細(xì)菌性胃腸炎、痢疾等消化道疾病。除此之外，具有降低血壓及擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈的作用，對(duì)心臟有雙相作用，小劑量興奮，大劑量呈抑制狀態(tài)；具有抗膽堿酯酶、增強(qiáng)乙酰膽堿的作用；有強(qiáng)大的抗箭毒作用；對(duì)血管平滑肌呈抑制作用，而對(duì)子宮、膀胱、支氣管、胃腸平滑肌則呈興奮作用。

急性軟組織損傷系指人體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)、皮膚以下骨骼之外的組織所發(fā)生的一系列急性挫傷或(和)裂傷，包括肌肉、韌帶、筋膜、肌腱、滑膜、脂肪、關(guān)節(jié)囊等組織以及周圍神經(jīng)、血管的不同情況的急性損傷。這些組織受到外來或內(nèi)在的不同致傷因素的作用，造成組織急性破壞和組織生理功能的暫時(shí)紊亂而產(chǎn)生損傷。急性軟組織損傷一般是受外來的機(jī)構(gòu)應(yīng)力的作用，當(dāng)應(yīng)力作用達(dá)到一定的強(qiáng)度超過軟組織承受負(fù)荷，即能誘發(fā)損傷，產(chǎn)生癥狀，以腫脹、疼痛為主要表現(xiàn)。急性期，局部滲血、水腫，疼痛劇烈。晚期可能出現(xiàn)肌肉、肌腱的粘連、缺血性攣縮，關(guān)節(jié)周圍炎，甚至引起關(guān)節(jié)僵直。通常可以通過鎮(zhèn)痛、理療、制動(dòng)、中成藥活血化淤等方法治療。在受傷24小時(shí)內(nèi)局部冷敷可以使皮毛血管收縮，組織水腫消退，起到止血消腫止痛的作用。對(duì)于軟組織挫傷采用早期敷藥方法治療，有著非常好的療效。患者往往在敷藥后就能即時(shí)消腫止痛，敷藥時(shí)的繃帶固定，不僅能保持關(guān)節(jié)于受傷韌帶松弛的位置，暫時(shí)限制肢體活動(dòng)，還有利于損傷韌帶的修復(fù)，從而縮短了治療時(shí)間。

目前，尚無文獻(xiàn)報(bào)道小檗堿可用于治療急性軟組織損傷，經(jīng)檢索，沒有公開小檗堿用于治療急性軟組織損傷的專利文獻(xiàn)，也沒有將小檗堿作為治療急性軟組織損傷藥物使用的制劑上市。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供小檗堿在制備治療急性軟組織損傷的藥物中的應(yīng)用。小檗堿具有良好的抗炎消腫作用，可以有效的減少急性軟組織損傷患者的炎癥滲出液，緩解疼痛癥狀。

為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

小檗堿在制備治療急性軟組織損傷的藥物中的應(yīng)用，所述小檗堿的分子式為C20H18NO4，分子量是235.32，CAS登錄號(hào)為2086-83-1。本發(fā)明所述的小檗堿可以從黃連、黃柏中提取得到，也可以由合成或其他方法制得。小檗堿可以通過商業(yè)購買獲得，其提取或合成方法也有大量的文獻(xiàn)報(bào)道；所述的黃連來源于毛茛科植物黃連、三角葉黃連或云連的干燥根莖，以上三種分別習(xí)稱“味連”、“雅連”、“云連”；所述的黃柏來源于蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮，習(xí)稱“川黃柏”；蕓香科植物黃檗的干燥樹皮，習(xí)稱“關(guān)黃柏”。急性軟組織損傷的主要臨床表現(xiàn)為疼痛、腫脹，尚無有關(guān)治療急性軟組織損傷的文獻(xiàn)報(bào)道。

小檗堿具有良好的抗炎消腫作用，可以有效的減少急性軟組織損傷患者的炎癥滲出液，緩解疼痛癥狀，針對(duì)于急性軟組織損傷有很好的治療效果，不含任何有毒有害成分，既安全又有效。

更進(jìn)一步地說明，按重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算，所述的藥物中小檗堿的含量為1％～99.5％，其余為藥學(xué)上可以接受的輔料；輔料可為防腐劑、溶劑、乳化劑或促滲劑等常規(guī)輔助物質(zhì)。

更進(jìn)一步地說明，所述的藥物是常規(guī)制藥設(shè)備可以制得的劑型。

更進(jìn)一步地說明，所述的劑型為洗劑、噴霧劑、軟膏劑和凝膠劑。同一藥物，劑型不同，適用于疾病的發(fā)生發(fā)展階段不同，不同劑型可根據(jù)疾病不同時(shí)期的癥狀和特點(diǎn)正確選用，如皮膚病，一般急性期局部有紅腫、水皰、糜爛時(shí)，多選用溶液劑濕敷，可起到消炎作用；有滲液者，先用溶液劑濕敷，后用油劑；皮損處于亞急性期時(shí)，紅腫減輕，滲液減少，可酌情選用洗劑，以發(fā)揮其消炎、止癢、收斂和保護(hù)作用；慢性期皮損增厚，多用軟膏劑或凝膠劑，其穿透力強(qiáng)，作用持久，且有潤(rùn)滑護(hù)膚作用。

更進(jìn)一步地說明，按重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算，所述的藥物中小檗堿的含量為99.5％，此含量為最優(yōu)含量，采用該含量所制備成的藥物組合物在急性軟組織損傷具有更優(yōu)異的治療效果。

本發(fā)明的有益效果：小檗堿具有抗微生物、抗心律失常、降血脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠等多種藥理作用。小檗堿經(jīng)皮膚給藥濃度高，直達(dá)病所，除了起局部作用外，還可通過皮膚進(jìn)人血液循環(huán)，發(fā)揮全身作用，有效緩解患者的疼痛、腫脹癥狀。另外，皮膚角質(zhì)層還有貯存作用，使血藥濃度曲線平穩(wěn)，有超越一般給藥方法獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。通過小鼠熱刺激試驗(yàn)、小鼠醋酸扭體試驗(yàn)、小鼠甲醛致痛試驗(yàn)、小鼠二甲苯耳腫脹試驗(yàn)、小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)證明中藥單體成分小檗堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛功效，通過臨床實(shí)例證明其具有治療急性軟組織損傷的作用。本發(fā)明為治療急性軟組織損傷提供一種中藥單體成分新藥，其功能明確、無毒副作用，同時(shí)拓寬了小檗堿防治疾病的范圍。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明方案進(jìn)行詳細(xì)說明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下列實(shí)施為優(yōu)選實(shí)施例，其僅對(duì)本發(fā)明方案進(jìn)行解釋說明，而且其中可能會(huì)有對(duì)公知技術(shù)的適當(dāng)省略，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)結(jié)合公知技術(shù)與實(shí)施例的說明，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行理解。

實(shí)施例1-洗劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)10kg，羥苯乙酯(防腐劑)1kg，苯甲酸鈉(防腐劑)2kg，蒸餾水適量(溶劑)。

制備方法：將活性成分和其它輔料溶解于蒸餾水中，定容至1000L，分裝，滅菌，即得。

使用方法：紗布或棉簽蘸取藥液，清洗或濕敷患處，一日2次。

實(shí)施例2-洗劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)11kg，羥苯乙酯(防腐劑)1kg，苯甲酸鈉(防腐劑)2kg，蒸餾水適量(溶劑)。

制備方法：將活性成分和其它輔料溶解于蒸餾水中，定容至1000L，分裝，滅菌，即得。

使用方法：紗布或棉簽蘸取藥液，清洗或濕敷患處，一日2次。

實(shí)施例3-洗劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)13kg，羥苯乙酯(防腐劑)1kg，苯甲酸鈉(防腐劑)2kg，蒸餾水適量(溶劑)。

制備方法：將活性成分和其它輔料溶解于蒸餾水中，定容至1000L，分裝，滅菌，即得。

使用方法：紗布或棉簽蘸取藥液，清洗或濕敷患處，一日2次。

實(shí)施例4-噴霧劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)10kg，冰片(促滲劑)1kg，蒸餾水(溶劑)適量。

制備方法：將活性成分和其它輔料(輔料可預(yù)先處理)溶解于蒸餾水中，定容至1000L，分裝至噴霧器，滅菌，即得。

使用方法：均勻噴敷患處，一日2次。

實(shí)施例5-軟膏劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)1.0kg，硬脂酸(基質(zhì))2.4kg，單硬脂酸甘油脂(基質(zhì))1.4kg，白凡士林(基質(zhì))0.2kg，羊毛脂(基質(zhì))1.0kg，液體石蠟(基質(zhì))1.2kg，吐溫(乳化劑)80 0.08kg，蒸餾水(溶劑)適量。

制備方法：取硬脂酸、單硬脂酸甘油脂、白凡士林和液體石蠟置小燒杯中，于水浴上加熱至80℃左右，攪拌使熔化(油相)。另取吐溫80和計(jì)算量蒸餾水置另一個(gè)小燒杯，于水浴上加熱至約80℃，攪拌均勻(水相)。在同溫下，將水相以細(xì)流加到油相中，并于水浴上不斷順方向攪拌成乳白色半固體狀，再在室溫下攪拌至近冷凝。取鹽酸小檗堿置于軟膏板上和研缽中，分次加入制得的O/W型乳化劑基質(zhì)，研勻即得。

使用方法：均勻涂抹患處，一日2次。

實(shí)施例6-凝膠劑的制備

配方：鹽酸小檗堿(活性成分)1.0kg，羥甲基纖維素鈉(基質(zhì))1.2kg，甘油(保濕劑)2.0kg，苯甲酸鈉(防腐劑)0.1kg，蒸餾水適量。

制備方法：取羥甲基纖維素鈉置于置于研磨中，加入甘油研勻，然后邊研勻邊加入溶有苯甲酸鈉和鹽酸小檗堿的水溶液，待溶脹后研勻，即得。

使用方法：均勻涂抹患處，一日2次。

1、藥效實(shí)驗(yàn)：鎮(zhèn)痛作用

本部分實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的藥物進(jìn)行藥效學(xué)研究。通過小鼠熱刺激試驗(yàn)、小鼠醋酸扭體試驗(yàn)、小鼠甲醛致痛試驗(yàn)，觀察小檗堿的鎮(zhèn)痛作用。

1.1、實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1.1、小鼠熱刺激致痛試驗(yàn)

昆明種雌性小鼠65只，體重18-22g，選取基礎(chǔ)痛閾在5-30s之間的合格雌性小鼠，隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組，扶他林陽性對(duì)照組，小檗堿高濃度組(10mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、低濃度組(2.5mg/ml)，每組13只。小鼠被放到預(yù)先加熱至55℃左右的金屬板上，以舔后足作為疼痛反映指標(biāo)，觀察給藥前、后痛閾值的變化。每天給予相應(yīng)的藥物涂抹雙足，連續(xù)給藥5天，末次給藥后測(cè)定0.5h、1h、1.5h、2h的小鼠痛閾值。

1.1.2、小鼠醋酸扭體試驗(yàn)

昆明種小鼠70只，體重18-22g，隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組，扶他林陽性對(duì)照組，小檗堿高濃度組(10mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、低濃度組(2.5mg/ml)，每組15只。每天給予相應(yīng)的藥物涂抹腹部，連續(xù)給藥5天，末次給藥60min后，各組小鼠均腹腔注射0.7％醋酸0.1ml/10g，觀察15min內(nèi)小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.1.3、小鼠甲醛致痛試驗(yàn)

昆明種小鼠70只，雌雄各半，體重18-22g，隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì)照組、扶他林陽性對(duì)照組、小檗堿高濃度組(10mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、低濃度組(2.5mg/ml)，每組14只，連續(xù)給藥5天，末次給藥后60min各組動(dòng)物以微量注射器在左后足底皮下注射2.5％甲醛溶液(50ul/只)后立即置入平底大玻璃容器內(nèi)，觀察小鼠舔后足的累計(jì)時(shí)間(觀察時(shí)間為注射后0-10min和15-30min兩個(gè)時(shí)間段)。

1.2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.1、小檗堿對(duì)熱刺激致痛的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，扶他林給藥組在給藥后0.5h、1.5h與空白對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05)，但小檗堿高、中、低劑量對(duì)熱刺激引起的疼痛沒有明顯的鎮(zhèn)痛作用。見表1。

表1、小檗堿對(duì)熱刺激引起疼痛的影響(n＝13)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

1.2.2、小檗堿對(duì)醋酸扭體反應(yīng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小檗堿高、中劑量對(duì)醋酸引起的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。見表2。

表2、小檗堿對(duì)醋酸誘發(fā)扭體反應(yīng)的影響(n＝14)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

1.2.3、小檗堿對(duì)甲醛引發(fā)小鼠疼痛的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小檗堿高、中劑量對(duì)甲醛引起的舔足反應(yīng)在0-10min有明顯的緩解作用，與空白對(duì)照比較，差異有顯著性(P<0.05)。見表3。

表3、小檗堿對(duì)甲醛誘發(fā)小鼠舔足反應(yīng)的影響(n＝12)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

1.3、結(jié)論

小檗堿對(duì)小鼠熱刺激致痛試驗(yàn)無明顯鎮(zhèn)痛作用，對(duì)甲醛、醋酸引起的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。說明小檗堿具有一定的鎮(zhèn)痛作用，對(duì)炎癥引起的疼痛作用明顯。

2、藥效實(shí)驗(yàn)：抗炎作用

本部分實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的藥物進(jìn)行藥效學(xué)研究。通過小鼠二甲苯耳腫脹試驗(yàn)、小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)，觀察小檗堿的抗炎作用。

2.1、實(shí)驗(yàn)材料和方法

2.1.1、小鼠二甲苯耳腫脹試驗(yàn)

小鼠隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組，扶他林陽性對(duì)照組，小檗堿高濃度組(10mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、低濃度組(2.5mg/ml)，每組15只。連續(xù)給藥7天，末次給藥60min后，在小鼠左耳廓兩面均勻涂抹二甲苯，右耳不涂為正常耳，30min后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓邊緣剪下左、右兩耳，用直徑為6mm的打孔器在左右兩側(cè)耳相同部位取下圓耳片，立即用分析天平稱重，計(jì)算耳廓腫脹度，并計(jì)算耳腫脹抑制率。

2.1.2、小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)

小鼠60只，雌雄各半，體重18-22g，隨機(jī)分為5組，空白對(duì)照組，陽性對(duì)照組，小檗堿高濃度組(10mg/ml)、中濃度組(5mg/ml)、低濃度組(2.5mg/ml)，每組12只。上述各組小鼠連續(xù)給藥7天，第7天給藥后60min，小鼠尾靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)(0.1ml/10g)，隨后立即腹腔注射0.6％醋酸(0.1ml/10g)，20min后脫臼處死，每只小鼠腹腔用6ml生理鹽水沖洗，吸取腹腔液，3000rpm離心15min，取上清液于紫外分光光度計(jì)上590nm測(cè)定OD值。

2.2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1、小檗堿對(duì)二甲苯小鼠耳腫脹的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照比較，小檗堿高、中、低劑量對(duì)二甲苯引起的耳腫脹有顯著的抑制作用(P<0.01)，提示小檗堿對(duì)炎性滲出腫脹有顯著的抑制作用。見表4。

表4、小檗堿對(duì)二甲苯耳腫脹的影響(n＝15)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2.2、小檗堿對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小檗堿高劑量組對(duì)醋酸引起的毛細(xì)血管通透性增加有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照比較，差異有顯著性(P<0.05)。見表5。

表5、小檗堿對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響(n＝15)

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3、結(jié)論

小檗堿對(duì)二甲苯引起的耳腫脹及醋酸引起的毛細(xì)血管通透性增加有顯著的抑制作用，說明小檗堿具有抗炎作用。

3、臨床療效觀察：治療急性軟組織損傷

本部分實(shí)驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的藥物進(jìn)行臨床療效觀察。通過急性軟組織損傷癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查，觀察比較小檗堿的治療效果。

3.1、臨床資料與方法

選取符合急性軟組織損傷診斷的臨床病例200例。其中，男性105例，女性95例；年齡最大60歲，最小15歲；損傷部位為軀干或四肢。隨機(jī)分為2組，一組采用扶他林治療，作為對(duì)照組；另一組選用小檗堿制劑治療，作為試驗(yàn)組。觀察比較對(duì)照組和試驗(yàn)組的治療效果。

3.2結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小檗堿治療急性軟組織損傷效果優(yōu)于扶他林，總有效率為97％，結(jié)果見表6。與扶他林相比，小檗堿可有效減輕患者的腫脹和創(chuàng)面，周徑差較小(P<0.05)，瘀斑消減迅速(P<0.01)，見表7。

表6兩組療效的比較

表7兩組常見的急性軟組織損傷癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查比較(n＝100)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；同組內(nèi)與治療前比較，#P<0.05，##P<0.01。

3.3結(jié)論

小檗堿可用于治療急性軟組織損傷。相比扶他林，小檗堿起效快、療效好，更具臨床優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，本發(fā)明的小檗堿具有良好的抗炎消腫作用，可以有效的減少急性軟組織損傷患者的炎癥滲出液，緩解疼痛癥狀。

本發(fā)明的小檗堿具有抗微生物、抗心律失常、降血脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠等多種藥理作用。小檗堿經(jīng)皮膚給藥濃度高，直達(dá)病所，除了起局部作用外，還可通過皮膚進(jìn)人血液循環(huán)，發(fā)揮全身作用，有效緩解患者的疼痛、腫脹癥狀。另外，皮膚角質(zhì)層還有貯存作用，使血藥濃度曲線平穩(wěn)，有超越一般給藥方法獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。通過小鼠熱刺激試驗(yàn)、小鼠醋酸扭體試驗(yàn)、小鼠甲醛致痛試驗(yàn)、小鼠二甲苯耳腫脹試驗(yàn)、小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)證明中藥單體成分小檗堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛功效，通過臨床實(shí)例證明具有治療急性軟組織損傷的作用。本發(fā)明為治療急性軟組織損傷提供一種中藥單體成分新藥，其功能明確、無毒副作用，拓寬了小檗堿防治疾病的范圍，市場(chǎng)前景可觀。

上述的對(duì)實(shí)施例的描述是為便于該技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能理解和使用發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對(duì)這些實(shí)施例做出各種修改，并把在此說明的一般原理應(yīng)用到其他實(shí)施例中而不必經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動(dòng)。因此，本發(fā)明不限于上述實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。