本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及含Survivin抑制劑和IRE1抑制劑的藥物及用途。
背景技術(shù)：
：癌癥是僅次于心血管疾病的高死亡率疾病，全球癌癥患者和死亡病例都在不斷地增加。新增癌癥病例有近一半出現(xiàn)在亞洲，其中大部分在中國(guó)，中國(guó)新增癌癥病例高居世界第一位。尤其是在肝癌、食管癌、胃癌和肺癌等4種惡性腫瘤中，中國(guó)新增病例和死亡人數(shù)均居世界首位。這些癌癥的治療雖然以手術(shù)為主，但由于早期患者一般無明顯癥狀，在首次被確診的癌癥患者中，很多已為中晚期，失去了手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，故非手術(shù)治療(如化療)在腫瘤的綜合治療中有著十分重要的地位。目前已上市的抗腫瘤藥物較多，如烷化劑藥物、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、免疫調(diào)節(jié)劑等，但是大多藥物普遍存在毒性大，病人不耐受等缺點(diǎn)。因此，如何進(jìn)一步提高化療藥物的療效同時(shí)保持較低的毒性是目前臨床試驗(yàn)亟待研究解決的問題。Survivin是新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑基因家族成員，具有抑制凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙重功能。它除了表達(dá)于胚胎組織、少量表達(dá)于能自我更新的正常組織之外，在大多數(shù)惡性腫瘤組織中高表達(dá)。因此Survivin與腫瘤的關(guān)系密切。由于結(jié)構(gòu)和功能的特異性，Survivin作為一種潛在的腫瘤分子靶向治療的理想靶點(diǎn)受到越來越廣泛的關(guān)注。YM155，4,9-二氫-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(2-吡嗪甲基)-1H-萘并[2,3-D]咪唑溴化物，分子式為C20H19BrN4O3，分子量443.30，由Astellas制藥公司合成，水溶性，體內(nèi)外均可有效抑制凋亡抑制蛋白家族。其對(duì)癌細(xì)胞具有優(yōu)秀的殺傷力，但服用后對(duì)人體的毒副作用大。STF-083010，CAS號(hào)為307543-71-1，分子式為C15H11NO3S2，分子量為317.38，是一種特異性IRE1核酸內(nèi)切酶抑制劑。在細(xì)胞系中，STF-083010具有劑量和時(shí)間依賴性的細(xì)胞抑制能力和細(xì)胞毒性，STF-083010可抑制XBP1剪接，抑制IRE1α的核酸內(nèi)切酶活性，但不影響IRE1α的激酶活性。其對(duì)正常細(xì)胞毒性較小，但對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率較低。目前，YM155和STF-083010的聯(lián)合還未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含Survivin抑制劑和IRE1抑制劑的藥物及用途，YM155和STF-083010組合用藥后使藥效產(chǎn)生了協(xié)同增效的作用，同時(shí)降低了整體藥物對(duì)人體的毒副作用。本發(fā)明提供了含Survivin抑制劑和IRE1抑制劑的藥物，包含有效量的Survivin抑制劑、有效量的IRE1抑制劑以及藥物上可接受的載體。進(jìn)一步地，所述的Survivin抑制劑為YM155。進(jìn)一步地，所述的IRE1抑制劑選自STF-083010、APY29和4μ8C中的一種。進(jìn)一步地，所述的IRE1抑制劑為STF-083010。作為本發(fā)明最佳的實(shí)施方案。所述的Survivin抑制劑為YM155，所述的IRE1抑制劑為STF-083010。進(jìn)一步地，所述藥物中YM155和STF-083010的摩爾濃度比為0.01～0.5∶10～80。進(jìn)一步地，所述藥物中YM155和STF-083010的摩爾濃度比為0.05∶60。進(jìn)一步地，可將本發(fā)明中所述藥物組合物按照本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)制備成注射制劑或口服制劑，本發(fā)明優(yōu)選將本發(fā)明中所述藥物組合物制備成注射制劑，所述注射制劑優(yōu)選為靜脈注射制劑。根據(jù)制劑形式，本發(fā)明所述YM155和STF-083010在制劑中的含量可以以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)為0.01～90％，優(yōu)選為0.5～10％；制劑使用的輔料可采用本領(lǐng)域常規(guī)的輔料，以不和本發(fā)明藥物組合物發(fā)生反應(yīng)或不影響本發(fā)明藥物的療效為前提；制劑的制備方法可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的制備方法進(jìn)行制備。本發(fā)明中的藥物組合物的給藥劑量根據(jù)給藥對(duì)象、給藥途徑或藥物的制劑形式不同可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兓?，但以保證該藥物組合物在哺乳動(dòng)物體內(nèi)能夠達(dá)到有效的血藥濃度為前提。本發(fā)明另一個(gè)目的是提供上述藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的用途。進(jìn)一步地，上述藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的用途，所述腫瘤具體為但不限于食管癌、肺癌或肝癌。進(jìn)一步地，上述藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的用途，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明藥物具有以下優(yōu)勢(shì)：1)本發(fā)明藥物組合物組分簡(jiǎn)單，毒性低，療效確切，符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究理論。2)本發(fā)明含YM155和STF-083010的藥物能有效地改善YM155的毒副作用問題，同時(shí)YM155和STF-083010的聯(lián)用在治療肺癌、肝癌和食管癌上可使藥效產(chǎn)生協(xié)同增效的作用，明顯優(yōu)于單藥使用，這一點(diǎn)在本發(fā)明抗腫瘤作用和試驗(yàn)結(jié)果中得到證實(shí)，特別地，當(dāng)YM155和STF-083010的摩爾濃度比0.05∶60時(shí)，這種協(xié)同作用非常好，并且藥物對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用最小。附圖說明圖1顯示了YM155單獨(dú)用藥對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；圖2顯示了STF-083010單獨(dú)用藥對(duì)不同腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；圖3顯示了YM155和STF-083010聯(lián)合用藥對(duì)不同腫瘤細(xì)胞形態(tài)的影響；圖4顯示了YM155和STF-083010聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的影響；圖5顯示了YM155和STF-083010聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成的影響。具體實(shí)施方式：以下通過具體實(shí)施方式的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。實(shí)施例1、本發(fā)明藥物組合物的原料配方組合物1：YM155和STF-083010，YM155和STF-083010的摩爾濃度比為0.05:60。組合物2：YM155和STF-083010，YM155和STF-083010的摩爾濃度比為0.01:10。組合物3：YM155和STF-083010，YM155和STF-083010的摩爾濃度比為0.5:80。實(shí)施例2、抗腫瘤作用及實(shí)驗(yàn)研究1：YM155與STF-083010單獨(dú)用藥對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響檢測(cè)食管癌細(xì)胞Eca-109和Kyse140對(duì)YM155或STF-083010單獨(dú)用藥的藥物敏感性。1.1實(shí)驗(yàn)方法將腫瘤細(xì)胞以每孔4-6×103個(gè)細(xì)胞的數(shù)量接種到96孔板，待細(xì)胞貼壁(24h)后，將YM155與STF-083010藥物分別稀釋成一定的梯度濃度，每濃度設(shè)5復(fù)孔，分實(shí)驗(yàn)組及調(diào)零組加藥。48h后采用MTT法進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)，每孔加入10μlMTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，小心吸除孔內(nèi)液體，避免接觸孔內(nèi)結(jié)晶物，每孔加入100μl的DMSO，于恒速搖床上避光搖晃。待結(jié)晶物充分溶解后，在酶標(biāo)儀上讀取OD值(波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm)，測(cè)得吸光度A值。生長(zhǎng)抑制率的計(jì)算公式為：生長(zhǎng)抑制率＝(1－OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組)。根據(jù)各濃度的抑制率可作圖得到劑量反應(yīng)曲線，作圖軟件為Graphpad，采用Logit法精確計(jì)算藥物的IC50(halfmaximalinhibitoryconcentration)值，具體結(jié)果見圖1和圖2。從圖1可以看出，YM155對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的IC50值處在一個(gè)比較低的范圍內(nèi)，其中YM155對(duì)Eca-109腫瘤細(xì)胞的IC50為0.549μM，對(duì)Kyse140腫瘤細(xì)胞的IC50為0.057μM，YM155對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞都具有好的抑制增殖作用。從圖2可以看出，相對(duì)而言，STF-083010的毒性較小，IC50均大于60μM，但是單用STF-083010對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用較弱。研究2：YM155和STF-083010聯(lián)合用藥對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響將人腫瘤細(xì)胞Eca-109和Kyse140細(xì)胞以每孔4-6×103個(gè)細(xì)胞的數(shù)量接種到96孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入0.0125～0.25μM的YM155和60μM的STF-083010，培養(yǎng)48h后，每孔加入10μl濃度為5mg/ml的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后棄去培養(yǎng)液每孔加入100μl的DMSO，于恒速搖床上避光搖晃。待結(jié)晶物充分溶解后，在酶標(biāo)儀上讀取OD值(波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm)，讀取每孔的吸光值，計(jì)算兩藥合用后細(xì)胞存活率。采用金氏修正式評(píng)價(jià)兩種藥物聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的聯(lián)用效果，具體步驟為，按照生長(zhǎng)抑制率＝(1－OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組)的公式，計(jì)算出A藥在某種條件下對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率為EA，計(jì)算出B藥在某種條件下對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率為EB，再計(jì)算出兩者聯(lián)合給藥的抑制率為EC，通過以下公式計(jì)算聯(lián)合用藥指數(shù)q值，q＝EC/(EB+EA-EB*EA)，當(dāng)q值>1.15為協(xié)同效應(yīng)，0.85<q<1.15為相加效應(yīng)，q<0.85為拮抗效應(yīng)。通過上述聯(lián)合用藥指數(shù)的計(jì)算進(jìn)一步判斷兩種藥物聯(lián)合用藥的最終藥效。從表1和表2可以看出，YM155和STF-083010在選定濃度范圍內(nèi)的聯(lián)用指數(shù)q值在1-2.8之間，表明聯(lián)合使用具有相加或者協(xié)同的聯(lián)用效果。尤其是0.0125μMYM155和60μMSTF-083010聯(lián)用在抑制人腫瘤細(xì)胞Eca-109和Kyse140細(xì)胞取得了協(xié)同增效的作用。同時(shí)，從圖3可以看出，對(duì)經(jīng)YM155和STF-083010聯(lián)合作用后的腫瘤細(xì)胞用顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的皺縮變圓，且聯(lián)用后細(xì)胞數(shù)與單獨(dú)用藥相比明顯減少。表1YM155和STF兩者聯(lián)合給藥對(duì)Eca-109食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的q值計(jì)算指數(shù)表2YM155和STF兩者聯(lián)合給藥對(duì)Kyse140食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的q值計(jì)算指數(shù)配比q值相加/協(xié)同/拮抗YM155(0.125μM)+STF(60μM)1.47202協(xié)同YM155(0.05μM)+STF(60μM)1.56487相加YM155(0.025μM)+STF(60μM)1.52388協(xié)同YM155(0.0125μM)+STF(60μM)2.83256協(xié)同研究3：YM155、順鉑、5-氟尿嘧啶和STF-083010聯(lián)合作用對(duì)腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的影響(圖4)將Eca-109食管癌、Kyse140食管癌、A549肺癌、HepG2肝癌細(xì)胞和HUVEC正常血管內(nèi)皮細(xì)胞以每孔3000-6000個(gè)細(xì)胞的數(shù)量接種到96孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入對(duì)照組、0.05μMYM155、60μMSTF-083010及聯(lián)合用藥組；另鋪Eca-109細(xì)胞至96孔板中，細(xì)胞貼壁后，加入對(duì)照組、0.5μg/ml順鉑、60μMSTF-083010、順鉑+STF-083010、2μg/ml5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶+STF-083010，培養(yǎng)48h后，每孔加入10μl濃度為5mg/ml的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后棄去培養(yǎng)液每孔加入100μl的DMSO，于恒速搖床上避光搖晃。待結(jié)晶物充分溶解后，在酶標(biāo)儀上讀取OD值(波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm)，讀取每孔的吸光值，計(jì)算兩藥合用后的細(xì)胞存活及抑制率。采用金氏修正式評(píng)價(jià)兩種藥物聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的聯(lián)用效果，具體步驟為，按照生長(zhǎng)抑制率＝(1－OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組)的公式，計(jì)算出A藥在某種條件下對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率為EA，計(jì)算出B藥在某種條件下對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率為EB，再計(jì)算出兩者聯(lián)合給藥的抑制率為EC，通過以下公式計(jì)算聯(lián)合用藥指數(shù)q值，q＝EC/(EB+EA-EB*EA)，當(dāng)q值>1.15為協(xié)同效應(yīng)，0.85<q<1.15為相加效應(yīng)，q<0.85為拮抗效應(yīng)。通過上述聯(lián)合用藥指數(shù)的計(jì)算進(jìn)一步判斷兩種藥物聯(lián)合用藥的最終藥效。經(jīng)過計(jì)算0.05μMYM155和60μMSTF-083010聯(lián)合用藥在Eca-109、Kyse140、A549和HepG2腫瘤細(xì)胞中的q值分別為1.21，1.56，1.18，1.32；順鉑和STF-083010聯(lián)合用藥在Eca-109細(xì)胞中的q值為0.83；5-氟尿嘧啶和STF-083010聯(lián)合用藥在Eca-109細(xì)胞中的q值為0.79。這些表明YM155和STF-083010在腫瘤細(xì)胞中聯(lián)合使用具有很好的協(xié)同效果，而對(duì)正常HUVEC細(xì)胞的毒性較小，同時(shí)與順鉑和STF-083010聯(lián)合用藥組、5-氟尿嘧啶和STF-083010聯(lián)合用藥相比較，YM155和STF-083010在抑制食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)中具有較強(qiáng)優(yōu)勢(shì)。研究4：YM155和STF-083010聯(lián)合作用對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成的影響(圖5)將Eca-109和Kyse140細(xì)胞接種到6孔板，待細(xì)胞貼壁過夜后，加入對(duì)照組、0.05μMYM155、60μMSTF-083010及聯(lián)合用藥組藥物(0.05μMYM155+60μMSTF-083010)，孵育7天，檢測(cè)細(xì)胞平板克隆形成情況。結(jié)果如圖5所示。從圖5可以看出，與對(duì)照組以及單藥組相比，聯(lián)合用藥組對(duì)細(xì)胞克隆形成具有明顯的協(xié)同抑制作用，聯(lián)合用藥組細(xì)胞克隆數(shù)量以及克隆大小均為最小。當(dāng)前第1頁1 2 3