本發(fā)明涉及植物提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：鐵皮石斛(拉丁學名：DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)，是我國名貴中草藥，系蘭科石斛屬植物的干燥莖，因表皮呈鐵綠色而得名，具有生津滋陰、明目養(yǎng)胃、補腎強身等功效。據(jù)文獻報道，石斛屬植物中的主要藥效成分為多糖、生物堿、糖苷、菲類、聯(lián)芐類和氨基酸等。多糖在鐵皮石斛中的含量高，且具有良好的抗腫瘤、抗氧化和增強免疫力等作用。鐵皮石斛的鮮莖可直接食用，或燉湯，或泡茶，或浸酒，通常加工成干品，如鐵皮楓斗、鐵皮石斛功能性飲料等。近年來以鐵皮石斛為原料生產(chǎn)的高級保健品越來越多，暢銷歐美及東南亞沿海發(fā)達地區(qū)?，F(xiàn)有的鐵皮石斛提取方法大多采用有機溶劑作為提取液(例如：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等)，采用有機溶劑對鐵皮石斛進行提取對設(shè)備要求低，容易操作，成本低。但產(chǎn)品中有效成分的含量較低，分子量較大、且有機溶劑的殘留降低了產(chǎn)品的安全性。并且，現(xiàn)有的產(chǎn)品主要為烘干粉碎粉，水溶性較差，產(chǎn)品形態(tài)不好，影響了人體對活性物質(zhì)的吸收。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法，本發(fā)明提供的制備方法制得的鐵皮石斛提取物中多糖含量豐富，收率較高。制得的提取物不易結(jié)塊，形態(tài)較好。本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物的制備方法，包括：步驟1：鐵皮石斛與4倍～12倍質(zhì)量的水混合，過膠體磨后，加熱至95℃以上保持20min～60min，然后降溫至50℃～60℃，制得漿液；步驟2：所述漿液依次經(jīng)植物水解酶和堿性蛋白酶水解后，經(jīng)加熱滅酶、冷卻后進行超濾，取濾液；步驟3：所述濾液經(jīng)濃縮后與微晶纖維素、β-環(huán)糊精混合后，加熱至40℃保持30min，然后噴霧干燥，制得鐵皮石斛提取物；所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為(0.1～2.0)：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.0～4.0；55℃酶解50～150min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為(0.1～2.0)：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.0～8.5；50℃酶解50～150min；所述超濾的分子量為10kDa；所述濃縮至濃縮液中固形物質(zhì)量分數(shù)為25％～40％；所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為(0.2～1.0)：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為(0.4～0.8)：100。本發(fā)明采用的是鐵皮石斛干燥莖(或新鮮莖)進行提取，提取前經(jīng)洗凈、粉碎。粉碎至粒度為80～120目。一些實施例中，鐵皮石斛與4倍質(zhì)量的水混合，過膠體磨。另一些實施例中，鐵皮石斛與12倍質(zhì)量的水混合，過膠體磨。另一些實施例中，鐵皮石斛與10倍質(zhì)量的水混合，過膠體磨。本發(fā)明實施例中，所述膠體磨的功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細度為2μm。過膠體磨后，加熱至95℃～100℃。一些實施例中，保持60min后降溫至50℃；另一些實施例中，保持40min后降溫至60℃；另一些實施例中，保持20min后降溫至55℃。經(jīng)過膠體磨后，漿液中鐵皮石斛被粉碎，以便更好的進行酶解。植物水解酶是多種酶的混合物，含有很強的果膠裂解酶和各種碳水化合物酶，包括阿拉伯聚糖酶、纖維素酶、葡聚糖酶、半纖維素酶和木聚糖酶等。該酶還對支鏈型果膠類似物如在大豆細胞壁中發(fā)現(xiàn)的纖維素具有活性，常用的復合植物水解酶為經(jīng)選育的曲霉屬(Aspergillusaculeatus)菌株生產(chǎn)。本發(fā)明采用的植物水解酶的酶活力為140萬u/g。一些實施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.1：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.0；55℃酶解50min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.1：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.0；50℃酶解50min。另一些實施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為2：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值4.0；55℃酶解150min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為2：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.5；50℃酶解150min。另一些實施例中，所述植物水解酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.5：100；所述植物水解酶水解的條件為：pH值3.5；55℃酶解90min；所述堿性蛋白酶與鐵皮石斛的質(zhì)量比為0.5：100；所述堿性蛋白酶水解的條件為：pH值8.5；50℃酶解90min。所述滅酶的溫度為95℃以上5min～15min；一些實施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時間為5min。另一些實施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時間為15min。另一些實施例中，滅酶的溫度為95℃～100℃，時間為10min。所述濃縮采用真空濃縮，濃縮至固形物含量為25％～40％。一些實施例中，濃縮至固形物含量為30％；另一些實施例中，濃縮至固形物含量為40％。另一些實施例中，濃縮至固形物含量為35％。添加微晶纖維素是防止粉體結(jié)塊，添加環(huán)糊精是為了包埋，易于噴干。一些實施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.2：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.4：100。一些實施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為1：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.8：100。一些實施例中，所述微晶纖維素與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.5：100；所述β-環(huán)糊精與所述濃縮液的質(zhì)量比為0.5：100。本發(fā)明所述噴霧干燥的蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為180℃；排風溫度為90℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。噴干所得鐵皮石斛粉的收率為13.3％～18.8％；其中，鐵皮石斛多糖的質(zhì)量分數(shù)為為74.9％～78.1％，多肽的質(zhì)量分數(shù)為3.4％～4.2％。分子量小于10kDa；不含有有機溶劑的殘留，且噴干后性狀良好，容易溶解。本發(fā)明制備方法制得的鐵皮石斛提取物。本發(fā)明制備方法制得的鐵皮石斛提取物在制備調(diào)節(jié)血糖的產(chǎn)品中的應用。本發(fā)明中，所述鐵皮石斛提取物調(diào)節(jié)血糖的劑量為0.05～0.6g/kg/d。實驗表明，本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物能夠具有降低血糖的作用。本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)血糖的產(chǎn)品，其包括本發(fā)明所述制備方法制得的鐵皮石斛提取物與輔料。一些實施例中，其劑型為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、湯劑、膏劑、露劑、口服液劑、滴丸劑、糖漿劑。一些具體實施例中，其為片劑，其輔料為檸檬酸、三氯蔗糖、乳糖、聚乙二醇、硬脂酸鎂和二氧化硅。具體的，顆粒劑中，各組分的質(zhì)量份為：一些具體實施例中，其為顆粒劑，其輔料為檸檬酸和三氯蔗糖。具體的，片劑中，各組分的質(zhì)量份為：鐵皮石斛提取物20.0份；檸檬酸1.0份；白砂糖59.0份。本發(fā)明提供的鐵皮石斛提取物制備過程中不使用有機溶劑，而是采用酶解技術(shù)水提，通過優(yōu)化酶的種類和用量，達到提高收率、提高純度的目的。制得產(chǎn)物分子量較小，溶解性能較好。實驗表明，本發(fā)明提供方法提取鐵皮石斛的收率為13.3％～18.8％；其中，鐵皮石斛多糖的質(zhì)量分數(shù)為為74.9％～78.1％，多肽的質(zhì)量分數(shù)為3.4％～4.2％。具體實施方式本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛提取物及其制劑的制備方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明采用的試材皆為普通市售品，皆可于市場購得。下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明：實施例1取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入4倍量的水，過兩遍膠體磨(參數(shù):功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細度為2μm。)，備用,加熱至95℃20分鐘，降溫至50℃，得漿液36kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0，加入鐵皮石斛重量10g的植物水解酶，55℃酶解50min；用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入鐵皮石斛重量10g的堿性蛋白酶，50℃酶解50min,備用。加熱至95℃5min進行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進行過濾，得濾液31kg，濾液過10k道爾頓的超濾膜，得濾過液28kg，備用。取濾過液，真空濃縮至固形物為30％，得濃縮液5.2kg，備用。實施例2取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入12倍量的水，過兩遍膠體磨(參數(shù)：功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細度為2μm。)，備用。加熱至95℃以上60分鐘，降溫至60℃，得漿液106kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，加入200g植物水解酶，55℃酶解150min,用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.5，加入200g的堿性蛋白酶，50℃酶解150min,備用。加熱至95℃15min進行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進行過濾，得濾液98kg，濾液過10k道爾頓的超濾膜，得濾過液92kg，備用。取濾過液濃縮至固形物為40％，得濃縮液5.4kg，備用。實施例3取鐵皮石斛10kg，洗凈，粉碎，加入10倍量的水，過兩遍膠體磨(參數(shù)：功率為7.5KW，轉(zhuǎn)速為2900R/min，乳化細度為2μm。)，備用；加熱至95℃以上40分鐘，降溫至55℃，得漿液96kg，備用；取漿液，用20％的酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.5，加入50g的植物水解酶，55℃酶解90min,備用；用20％的堿溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，加入50g堿性蛋白酶，50℃酶解90min,備用。加熱至95℃以上10min進行酶滅活，降溫至室溫，備用。取酶解液進行過濾，得濾液90kg，濾液過10k道爾頓的超濾膜，得濾過液84kg，備用。取濾過液，濃縮至固形物為35％，得濃縮液6.2kg，備用；實施例4取實施例1濃縮液，加入10.4g的微晶纖維素及20.8g的β-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為180℃；排風溫度為90℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.33kg；實施例5取實施例2濃縮液，加入540g微晶纖維素43.2gβ-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為180℃；排風溫度為90℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.88kg。實施例6取實施例3濃縮液，加入31g的微晶纖維素及31g的β-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為180℃；排風溫度為90℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物1.86kg。對比例1取實施例2濃縮液，加入540g的微晶纖維素，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為150℃；排風溫度為75℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.36kg。對比例2取實施例2濃縮液，加入43.2gβ-環(huán)糊精，加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為200℃；排風溫度為110℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.58kg。對比例3取實施例2濃縮液，540g微晶纖維素43.2gβ-環(huán)糊精加熱至40度水浴30分鐘，噴霧干燥(參數(shù)：蒸汽壓力為0.8MPa；進風溫度為150℃；排風溫度為75℃；塔內(nèi)負壓為200KPa。)，得鐵皮石斛提取物0.89kg。實施例7取實施例4制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實施例8取實施例4制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機進行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實施例9取實施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實施例10取實施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機進行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實施例11取實施例5制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0g檸檬酸，59.0g白砂糖及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，分裝成8g/袋的顆粒劑。實施例12取實施例6制得鐵皮石斛提取物20.0g，加入1.0檸檬酸，30.0白砂糖，20.0乳糖，0.5聚乙二醇及10.0g75％乙醇進行濕法制粒，烘干，加入0.2g硬脂酸鎂及0.3g二氧化硅，壓片機進行壓片，得鐵皮石斛壓片糖。實施例13：鐵皮石斛提取物多糖及蛋白含量檢測：一、多糖檢測方法(蒽酮—硫酸法)：(1)實驗原理：多糖在硫酸作用下，先水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，與苯酚生成橙黃色溶液，在490nm處有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。(2)試劑：濃硫酸(分析純)、5％苯酚溶液(分析純)、標準葡萄糖。(3)操作步驟：①制作標準曲線：準確稱取105℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1mg/ml的標準溶液，用蒸餾水分別配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。1ml標準液分別加入5％苯酚溶液1ml，并迅速加入濃硫酸5ml，靜置10min。搖勻，30℃放置30min后于490nm測定OD值，以葡萄糖含量為橫坐標，OD值為縱坐標，制作得到標準曲線。②樣品含量測定：吸取1.0ml樣品液，按照上述步驟操作測定OD490，并代入標準曲線計算樣品的總糖含量。二、多肽檢測方法(參照GBT22492-2008)三、溶解度檢測(參照GB5413.29-2010)(4)檢測結(jié)果產(chǎn)品檢測結(jié)果見下表：表1：產(chǎn)品檢測結(jié)果多糖含量(％)多肽含量(％)溶解度(％)實施例475.33.498.2實施例578.13.699.0實施例674.94.298.7對比例154.62.878.6對比例250.52.678.5對比例351.02.579.0對比例1～3提取物中的多糖含量比實施例1～3低了20％左右，對比例1～3制得提取物的的溶解度比實施例低了20％左右，經(jīng)統(tǒng)計學分析，實施例1～3與對比例1～3之間，在多糖含量、多肽含量、溶解度水平上，都存在顯著性的差異(p<0.05)。表明本發(fā)明提供方法制備的提取物收率較高，多糖含量、多肽含量皆較高。說明在提取過程中，營養(yǎng)物質(zhì)沒有遭到破壞。所得產(chǎn)物溶解度良好，更加便于人們的食用。實施例14鐵皮石斛提取物功效驗證鐵皮石斛調(diào)節(jié)血糖試驗結(jié)果1樣品：采用上述各實施例4～6和度比例1～3所制備的鐵皮石斛水提粉樣品；2試驗動物：昆明種小鼠，由昆明醫(yī)學院試驗動物中心提供，體重18.0～22.0g。3試驗方法與結(jié)果：取昆明種小鼠若干，隨機分為6組，如表1。分別為空白組、陽性藥組(格列本脲片)、模型組、實施例1組、實施例2組及實施例3組。實驗前禁食12小時后，尾靜脈注射70mg/kg的四氧嘧啶。4小時后尾靜脈注射5％葡萄糖0.4ml。實驗的第3天待血糖升至高峰期的時候測血糖值，選血糖值＞16.6mmol/l的小鼠做為給藥對象。各組灌胃給予相應的提取物，每天一次，陽性藥早晚各一次，連續(xù)給藥7天。末次給藥2小時后測各組實驗小鼠的血糖值。表2鐵皮石斛調(diào)節(jié)血糖作用組別小鼠數(shù)(只)劑量(g/kg)血糖平均值(mmol/l)正常對照組10--8.23模型組10--22.19實施例4100.18.34實施例5100.18.37實施例6100.18.25對比例1100.19.20對比例2100.19.33對比例3100.19.56陽性對照100.18.02模型和空白比較有顯著性差異(P＜0.01)，此次實驗的造模成功。而給予各實施例提取物的模型的血糖與給予對比例提取物的模型的血糖存在顯著性的差異(p<0.05)。且各實施例制得提取物在調(diào)節(jié)血糖方面的效果與陽性藥物格列本脲的效果相似。以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。當前第1頁1 2 3