本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域:
,具體涉及一種具有抑制肺癌細(xì)胞增殖作用的中藥組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
:腫瘤(tumor)是在各種致癌因素作用下,機(jī)體局部組織細(xì)胞生長(zhǎng)失控而惡性化增殖的產(chǎn)物。腫瘤細(xì)胞向正常組織細(xì)胞的侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移最終導(dǎo)致了患者的死亡。近年來(lái)腫瘤性疾病已廣泛發(fā)生于人、禽、豬、牛、兔、魚(yú)類以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中。目前,隨著肺部腫瘤發(fā)病率的不斷升高,不僅對(duì)動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)造成嚴(yán)重影響,也威脅著畜禽的生命健康,給畜禽業(yè)造成嚴(yán)重危害。如何提高抗腫瘤藥物的臨床應(yīng)用效果,有效控制肺部腫瘤患者的病死率是廣大醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)探討的重要課題,而抗腫瘤藥物的治療效果主要取決于藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力以及藥物在腫瘤組織中存留時(shí)間。然而,在傳統(tǒng)肺臟腫瘤患者的臨床治療中,多采用西藥和放射性治療,雖暫時(shí)延緩病情,但對(duì)患者的正常組織細(xì)胞也造成一定損害,包括伴有白細(xì)胞下降、血紅蛋白下降、惡心嘔吐及體質(zhì)量下降等多種毒副作用。中草藥在抑制腫瘤生長(zhǎng)方面,有著獨(dú)到的優(yōu)勢(shì),而且中草藥價(jià)格低廉、毒副作用小、來(lái)源廣,選擇中草藥抑制腫瘤生長(zhǎng)不僅節(jié)約成本,而且能增強(qiáng)機(jī)體免疫力達(dá)到抑制腫瘤增長(zhǎng),控制病情,減少動(dòng)物死亡,進(jìn)而提高養(yǎng)殖效益。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供一種具有抑制肺癌細(xì)胞增殖作用的中藥組合物及其應(yīng)用,該中藥組合物具有抑制肺癌細(xì)胞增殖的功效,并且原料來(lái)源廣泛,成本低廉,且毒副作用小。為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:一種具有抑制肺癌細(xì)胞增殖作用的中藥組合物,所述中藥組合物由下述重量配比的原料制成:淫羊藿8~12份,博落回4~20份,厚樸7~11份,甘草6~10份。作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案,所述中藥組合物由下述重量配比的原料制成:淫羊藿9~11份,博落回8~14份,厚樸8~10份,甘草7~9份。作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案,所述中藥組合物由下述重量配比的原料制成:淫羊藿10份,博落回12份,厚樸9份,甘草8份。本發(fā)明的中藥組合物的各原料具有如下性質(zhì)和功效:淫羊藿為小檗科植物淫羊藿epimediumbrevicornumaxim.、箭葉淫羊藿epimediumsagittatum(sieb.etzucc.)maxim.、柔毛淫羊藿epimediumpubescensmaxim.或朝鮮淫羊藿epimediumkoreanumnakai的干燥葉;味微苦,性辛、甘,溫;歸肝、腎經(jīng);功能補(bǔ)腎經(jīng)。強(qiáng)筋骨,祛風(fēng)濕;主治腎陽(yáng)虛衰,陽(yáng)痿遺精,筋骨痿軟,風(fēng)濕痹痛,麻木拘攣。博落回為學(xué)名罌粟科植物博落回papaveraceaemacleayacordata的干燥根;味辛、苦,溫,有毒;功能消腫,解毒,殺蟲(chóng);主治指疔,膿腫,急性扁桃體炎,中耳炎,滴蟲(chóng)性陰道炎,下肢潰瘍,燙傷,頑癬。厚樸為木蘭科植物厚樸magnoliaofficinalisrehd.etwils或凹葉面厚樸magnoliaofficinalisrehd.etwils.var.bilobarehd.etwils.的干燥干皮、根皮及枝皮;味辛、苦,溫;歸脾、胃、肺、大腸經(jīng);功能燥濕消痰,下氣除滿;主治濕滯傷中,脘痞吐瀉,食積氣滯,腹脹便秘,痰飲喘咳。甘草為豆科植物甘草radixglycyrrhizauralensisfisch、脹果甘草glycyrrhizainflatabat.或光果甘草glycyrrhizaglabral.的干燥根及根莖;味甘、平;歸心、肺、脾、胃經(jīng);功能補(bǔ)脾益氣,清熱解毒,祛痰止咳、緩急止痛,調(diào)和諸藥;主治脾胃虛弱,倦怠乏力,脘腹等。上述具有抑制肺癌細(xì)胞增殖作用的中藥組合物在制備治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。上述具有抑制肺癌細(xì)胞增殖作用的中藥組合物制備的藥液,采用50%醇提取法提取淫羊藿、博落回、厚樸和甘草進(jìn)行藥液制備,并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成濃度為1×10-2g/ml至1×10-5g/ml的藥液。本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明的中藥組合物,具有通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞端粒酶活性、細(xì)胞毒性作用以及增加動(dòng)物機(jī)體免疫力而達(dá)到抑制肺癌細(xì)胞增殖的功效;藥物濃度在1×10-2g/ml至1×10-5g/ml均能夠抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)能力,并且毒副作用小,成本低廉。附圖說(shuō)明圖1為胎鼠肺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)情況圖;a為培養(yǎng)0h的胎鼠肺上皮細(xì)胞(10×),b為培養(yǎng)12h的胎鼠肺上皮細(xì)胞(10×),c為培養(yǎng)24h的胎鼠肺上皮細(xì)胞(10×)。圖2為小鼠肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況圖;a為正常小鼠肺癌細(xì)胞(10×),b為藥物作用后的小鼠肺癌細(xì)胞(10×)。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚,下面將對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例1中藥組合物中藥組合物配方1:淫羊藿8g,博落回4g,厚樸7g,甘草6g。中藥組合物配方2:淫羊藿9g,博落回8g,厚樸8g,甘草7g。中藥組合物配方3:淫羊藿10g,博落回12g,厚樸9g,甘草8g。中藥組合物配方4:淫羊藿11g,博落回16g,厚樸10g,甘草9g。中藥組合物配方5:淫羊藿12g,博落回20g,厚樸11g,甘草10g。實(shí)施例2中藥組合物制成藥液將實(shí)施例1的五種配方的中藥組合物制成藥液,其制備方法為:采用50%醇提取法提取淫羊藿、博落回、厚樸和甘草進(jìn)行藥液制備,并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成所需濃度的藥液,對(duì)應(yīng)配方1-5分別為配方1液、配方2液、配方3液、配方4液、配方5液。實(shí)施例3正常胎鼠肺上皮細(xì)胞的制備方法:選擇孕期滿19d的懷孕昆明母鼠,在無(wú)菌環(huán)境下,剖宮取出胎鼠,正常小鼠肺細(xì)胞再取出胎鼠的肺臟,除凈雜質(zhì),用胰酶和膠原纖維酶多次消化得到混合的小鼠肺細(xì)胞(由西南大學(xué)榮昌校區(qū)中獸藥研究與開(kāi)發(fā)室分離培養(yǎng)鑒定)懸液,接種于培養(yǎng)瓶中,于37℃、5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及其形態(tài)的變化。結(jié)果:經(jīng)剖腹產(chǎn)的胎鼠,在胰酶和膠原纖維酶消化分離都得到的肺細(xì)胞,呈均勻散在分布在細(xì)胞瓶中進(jìn)行培養(yǎng),如圖1,培養(yǎng)12h后,細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng),多個(gè)細(xì)胞聚在一起形成小集落,24h后,細(xì)胞伸展呈多邊形或立方形,聚集成島狀生長(zhǎng),細(xì)胞之間緊密連接。實(shí)施例4配方1-5的中藥組合物對(duì)正常胎鼠肺細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法:選擇生長(zhǎng)良好的、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的正常鼠肺細(xì)胞,加入0.25%的胰蛋白酶37℃消化,用含10%胎牛血清的培養(yǎng)液稀釋成1×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,每孔200μl接種于96孔板中,待長(zhǎng)滿單層后棄去培養(yǎng)液,用pbs洗滌2次,加入分別含有100,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5g/ml中藥的維持液,每孔200μl,每個(gè)濃度重復(fù)6孔,同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照組,置培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每日觀察細(xì)胞形態(tài)變化,24h后,在避光條件下每孔加20μl的mtt,37℃孵育4h,吸棄上清液,每孔加150μl的二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,dmso),充分震蕩混勻,于570nm處測(cè)定吸光值(od值)。結(jié)果:見(jiàn)表1,5個(gè)中藥配方濃度c均大于10-2g/ml時(shí),細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)圓縮,脫落,甚至死亡,且存活率顯著低于正常細(xì)胞對(duì)照組,且p<0.05。當(dāng)5個(gè)配方濃度c≤10-2g/ml時(shí),細(xì)胞存活率與空白組相比差異不顯著,p>0.05。配方1、配方2、配方3、配方4、配方5對(duì)小鼠正常胎鼠肺細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度分別為10-2、10-3、10-3、10-3、10-4g/ml。表1配方1-5的中藥組合物對(duì)正常胎鼠肺細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果注:與正常細(xì)胞對(duì)照組相比,*表示p<0.05,**表示p<0.01,下同實(shí)施例5配方1-5的中藥組合物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖抑制的藥效學(xué)試驗(yàn)方法:根據(jù)實(shí)施例4所述的各配方最大無(wú)毒濃度,將小鼠肺癌細(xì)胞懸液稀釋成1×105個(gè)/ml接入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔200μl,長(zhǎng)滿單層后,吸棄培養(yǎng)液,再分不同濃度藥物組,正常細(xì)胞對(duì)照組,正常細(xì)胞對(duì)照組只加細(xì)胞維持液,不同濃度藥物組分別加入含各配方最大無(wú)毒濃度的維持液,置培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每日觀察細(xì)胞形態(tài)變化,72h后,在避光條件下每孔加20μl的mtt,37℃孵育4h,吸棄上清液,每孔加150μl的二甲基亞砜(dmso),充分震蕩混勻,檢測(cè)490nm處的吸光值(od值)。細(xì)胞增殖抑制率(%)=(正常細(xì)胞對(duì)照組od值-藥物組od值)/正常細(xì)胞對(duì)照組od值×100%。結(jié)果:見(jiàn)表2,配方1、配方4和配方2、配方3對(duì)肺癌細(xì)胞增殖抑制率顯著或極顯著高于正常細(xì)胞對(duì)照組,且p<0.05或p<0.01,其配方3抑制效果最好。當(dāng)配方5濃度為10mg/l時(shí),肺癌細(xì)胞存活率與空白組相比差異不顯著,p>0.05。表2配方1-5的中藥組合物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖抑制的藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果組別藥液濃度(mg/l)od570細(xì)胞增殖抑制率(%)配方110000.521±0.139*24.27±1.28配方21000.253±0.109**63.23±1.32配方31000.202±0.049**70.64±0.62配方41000.519±0.087*24.56±0.78配方5100.578±0.19215.99±0.68正常細(xì)胞對(duì)照組—0.688±0.1300實(shí)施例6配方3的中藥組合物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖抑制的藥效學(xué)試驗(yàn)方法見(jiàn)實(shí)施例5,實(shí)例6所用藥為配方3。按reed-muench法計(jì)算中藥復(fù)方組合物對(duì)正常胎鼠肺細(xì)胞的半數(shù)細(xì)胞毒濃度(tc50)及半數(shù)抑制濃度(ic50)。并將結(jié)果tc50和ic50進(jìn)行分析,計(jì)算其治療指數(shù)(ti),ti=tc50/ic50。結(jié)果:見(jiàn)表3和表4,通過(guò)線性回歸計(jì)算得到配方3的tc50和ic50分別為269.51mg/l和30.01mg/l,該藥物的治療指數(shù)ti為8.9,說(shuō)明其對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞有一定的抑制效果。表3配方3的中藥組合物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖抑制的藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表4hbe抑制小鼠肺癌細(xì)胞增殖效果藥物tc50(mg/l)ic50(mg/l)ti配方3269.5130.018.98實(shí)施例7配方3的中藥組合物對(duì)鼠肺癌細(xì)胞形態(tài)作用研究方法:實(shí)施例7所用藥為配方3濃度為100mg/l,將小鼠肺癌細(xì)胞(llc,中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏中心昆明細(xì)胞所,編號(hào):kcb2078yj)接種于培養(yǎng)瓶中,于37℃、5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及其形態(tài)的變化。結(jié)果:如圖2所示,經(jīng)光鏡下觀察,正常小鼠肺癌細(xì)胞為半貼壁生長(zhǎng),貼壁細(xì)胞形態(tài)呈多邊形,未貼壁細(xì)胞散在分布在細(xì)胞底部;在藥物作用24h后,肺癌細(xì)胞間彼此分離,細(xì)胞間連接減少,體積縮小且凝聚,細(xì)胞形態(tài)極度不規(guī)則,且隨著作用時(shí)間的增長(zhǎng),細(xì)胞不斷死亡而漂浮至培養(yǎng)液中。本發(fā)明通過(guò)以上實(shí)施例研究了淫羊藿、博落回、厚樸、甘草組成的中藥組合物在體外對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用,結(jié)果表明:本發(fā)明的中藥組合物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞增殖有一定抑制效果,在試驗(yàn)中,藥物對(duì)正常胎鼠肺上皮細(xì)胞細(xì)胞毒性小,藥物對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞的tc50為269.51mg/l,對(duì)llc有一定的抑制增長(zhǎng)的效果,ic50為30.01mg/l。因此,本發(fā)明的中藥組合物毒副作用小,可有效抑制肺癌細(xì)胞增殖,并且能達(dá)到高效、安全、經(jīng)濟(jì)地治療肺癌病的目的。最后說(shuō)明的是,以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制,盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述,但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變,而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12