本發(fā)明主要涉及保健品領域，具體地說，本發(fā)明涉及一種增強免疫力的組合物
技術領域：
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背景技術：
：瑪咖(lepidiummeyeniiwalp.)為十字花科獨行菜屬一、二年生草本植物，是一種獨特的藥食兩用資源，原產(chǎn)于南美洲秘魯安地斯山區(qū)海拔3000米以上的高原?，斂У玫饺藗兊钠毡橹匾暿窃?0年代初，研究者在尋找“偉哥”替代品時發(fā)現(xiàn)了這種植物在提高性功能上的顯著功效，使瑪咖一舉成為國際保健品和藥品中的一顆新星；而在這之前，當西班牙人于1526年占領南美的時候，殖民者們就把瑪咖作為生息繁衍扎根安第斯山區(qū)的必備品用于解決人畜不育的難題，而且至今仍然作為具有提高精力、生殖力作用以及良好滋補作用的貢品，被西班牙皇室廣泛使用?，斂г谀厦赖氖秤脷v史已經(jīng)有5800多年，傳統(tǒng)上用于強壯身體、提高生育力、改善性功能、抗抑郁、抗貧血等。從20世紀60年代初期到80年代，關于瑪咖植物學和藥用價值的研究逐步系統(tǒng)化，瑪咖的一些傳統(tǒng)作用得到德國和北美植物學研究者的科學驗證，尤其是80年代以后，聯(lián)合國糧農(nóng)組織(fao)建議世界各國推廣對瑪咖的種植，瑪咖的化學成分鑒定、活性成分分離及其藥理作用等得到了進一步的探討，研究證實瑪咖在提高生育力、改善性功能、抗疲勞、抗壓力、緩解更年期綜合癥等方面具有突出的功效。然而，近幾年關于瑪咖生物活性的研究及應用主要集中在其粗提物，鮮見瑪咖中某一成分具有特定生物活性的報道。鑒于抗疲勞和增強免疫力的密切聯(lián)系，發(fā)明人前期對瑪咖及瑪咖組合物的增強免疫力功效進行了研究，發(fā)現(xiàn)瑪咖僅可提高小鼠細胞免疫，但不能提高小鼠體液免疫，不能提高小鼠nk細胞活性，即單獨使用瑪咖其增強免疫力功效并不顯著。人參(panaxginsengc.a.mey.)是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，具有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智等功效。根據(jù)現(xiàn)代藥理學研究，人參具有良好的免疫增強作用，在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(res)、特異性抗體形成、淋巴細胞和胸腺細胞增殖等多方面均有所體現(xiàn)。隨著現(xiàn)代分離分析技術的發(fā)展，已知人參中所含有的化學成分包括人參皂苷(gs)、糖類、蛋白質、氨基酸、揮發(fā)油等。人參與人參多糖對免疫器官、免疫細胞及免疫分子均有免疫調節(jié)作用。目前，一種藥食同源中藥酵素飲品及其制備方法發(fā)明專利專利(公開號cn105995329a)、調節(jié)人體亞健康的藥膳粉專利(公開號cn105995399a)、一種瑪咖復方口服液及其制備方法專利(公開號cn1042568218)等中將人參和瑪咖作為成分之一用于改善人體免疫力、亞健康等問題，但是都存在配伍藥材過多，作用機理不清楚的問題，采用原料過多，會直接導致生產(chǎn)成本的增加，不能確定那種藥材起主要作用，并且實際生產(chǎn)中因功能性原料的增多需要把控的技術關鍵點就隨之增加，存在生產(chǎn)把控難度加大或產(chǎn)品功效不易掌控的問題，十分不利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和產(chǎn)品質量控制?，斂藚⑵捌渲苽浞椒òl(fā)明專利(公開號cn103585261a)中采用了瑪咖以乙醇溶液進行超聲提取，人參、葛根分別經(jīng)水提取并過大孔樹脂，制備瑪咖人參片，但是免疫效果不理想，協(xié)同增效作用弱，工藝復雜、耗時較長、成本高。一種瑪咖粉人參組合物及其制備方法發(fā)明專利(公開號cn102613555b)采用不經(jīng)提取的瑪咖粉，與人參提取物、紅景天提取物、淫羊藿提取物、枸杞子提取物配伍，通過控制人參總皂苷、紅景天甙、淫羊藿苷、枸杞粗多糖等的含量來控制產(chǎn)品質量與功效，質量控制指標明顯增多，原料、中間產(chǎn)品、終產(chǎn)品的檢測工作量明顯加大，同樣也會增加質量控制成本。cn102613555b人參提取物重量配比按照人參總皂甙80％含量計算，并說明人參提取物按照人參總皂甙含量計有10-80％多種規(guī)格，80％外的其他規(guī)格所需份數(shù)可進行相應折算后，應用于該發(fā)明所述的組合物，也就是說人參皂苷含量低的其他規(guī)格提取物用量會增大，比如使用人參皂苷含量10％的提取物，則其使用量需加大到原來的8倍，原料用量大，不僅成本高，而且藥效較弱，服用量較大，不便服用。技術實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術現(xiàn)狀，特別是目前人參和瑪咖在適用于提高免疫力、抗疲勞等保健領域時采用原材料過多，有效成分含量低，免疫效果不理想，協(xié)同增效作用弱，工藝復雜、耗時較長、生產(chǎn)成本高，藥效較弱服用量大的問題,提供了一種顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物制備方法，使得人參和瑪咖適用于增強免疫力的食品、藥品中時加工工藝簡單，有效成分明確，原材料利用充分，生產(chǎn)成本低，在保健品領域具有廣泛的適用性。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術方案如下：本發(fā)明提供一種顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物，所述瑪咖組合物重量份數(shù)配比的原料：瑪咖提取物40份-60份、人參提取物20份-33份；瑪咖提取物中多糖含量≥22％，人參提取物中人參皂苷的含量≥8％。優(yōu)選的，本發(fā)明中，所述瑪咖組合物重量份數(shù)配比的原料：瑪咖提取物40份、人參提取物30份；瑪咖提取物中多糖含量23.1％，人參提取物中人參皂苷的含量8.7％。本發(fā)明中，所述瑪咖提取物中多糖相對分子量為5kda-8kda。更具體的，本發(fā)明中，所述瑪咖提取物的多糖中相對分子量6.6kda-6.8kda，糖環(huán)同時包含α型吡喃糖、β型吡喃糖的一種黏多糖占瑪咖提取物中多糖總量的25％以上。本發(fā)明中，所述瑪咖提取物的黏多糖中阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖的摩爾比1:1.3:36.8。本發(fā)明提供的一種具有增強免疫力功能的瑪咖組合物，制備方法由以下步驟構成：(1)瑪咖提取物制備：瑪咖干品粉碎至粒徑0.2cm-0.4cm，加入8倍-10倍量65％-68％乙醇溶液，45℃保溫浸泡2天，過濾，濾液用于下一批次瑪咖的浸泡，瑪咖于50℃烘干、粉碎；經(jīng)過乙醇溶液浸泡的瑪咖粉中加15倍量水提取2-3次，過濾，合并濾液，濃縮、干燥，得到瑪咖多糖提取物。(2)人參提取物制備：人參經(jīng)粉碎后加入10倍-12倍量60％-70％乙醇溶液，提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，60℃濃縮至相對密度1.05，噴霧干燥，進風溫度：150℃-170℃，排風溫度：75℃-85℃，噴霧壓力0.4mpa，干燥至水分低于5％，粉末過100目篩。(3)組合物的制備：稱取重量份數(shù)配比的原料瑪咖提取物40份-60份，人參提取物20份-33份充分混合，按照常規(guī)方法壓片。更加優(yōu)選的，本發(fā)明中瑪咖提取物制備：瑪咖干品粉碎至粒徑0.2cm-0.4cm，加入8倍量68％乙醇溶液，45℃保溫浸泡2天，過濾，濾液用于下一批次瑪咖的浸泡，瑪咖于50℃烘干、粉碎；經(jīng)過乙醇溶液浸泡的瑪咖粉中加15倍量水提取2次，過濾，合并濾液，濃縮、干燥，得到瑪咖多糖提取物。更加優(yōu)選的，本發(fā)明中人參提取物制備：人參經(jīng)粉碎后加入12倍量60％乙醇溶液，提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，60℃濃縮至相對密度1.05，噴霧干燥，進風溫度：160℃，排風溫度：80℃，噴霧壓力0.4mpa，干燥至水分低于5％，粉末過100目篩。本發(fā)明的有益效果:(1)本發(fā)明提供的一種顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物制備方法，使得人參和瑪咖適用于增強免疫力的食品、藥品中時有效成分含量較高，尤其通過工藝關鍵點的控制保證瑪咖提取物中總多糖含量及關鍵多糖含量，從而保證產(chǎn)品的增強免疫力活性。本發(fā)明工藝關鍵點在于瑪咖多糖提取物的制備，加工工藝在保證獲得較高含量多糖提取物的同時又簡單易控，原材料利用充分，生產(chǎn)成本低，在保健品領域具有廣泛的適用性。(2)本發(fā)明瑪咖提取物中多糖特點在于，相對分子量5-8kda，并且以相對分子量6.6kda-6.8kda，阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖的摩爾比1:1.3:36.8，糖環(huán)同時包含α型吡喃糖、β型吡喃糖的一種黏多糖為主，至少占提取物中多糖總量的25％以上。藥理試驗證明，瑪咖提取物中多糖相對分子量集中在5-8kda，并且上述黏多糖含量越高，則瑪咖提取物與人參提取物的組合物生物活性越強，因此，該類多糖是提高本發(fā)明組合物增強免疫力活性的關鍵組分。(3)關于瑪咖多糖的研究主要集中在中性多糖和酸性多糖，關于瑪咖黏多糖的研究報道相對比較少。在制備本發(fā)明組合物的過程中發(fā)現(xiàn)上述黏多糖對提升組合物的增強免疫力功效具有重要作用，這也是該種黏多糖研究中的首次發(fā)現(xiàn)，該發(fā)現(xiàn)使得人參和瑪咖適用于增強免疫力的食品、藥品中時加工工藝簡單，有效成分明確，原材料利用充分，生產(chǎn)成本低。(4)本發(fā)明組合物組具有很好的體液免疫功能(小鼠抗體生成細胞、小鼠半數(shù)溶血值)(p<0.05)，具有一定的細胞免疫功能(對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應能力的影響)(p<0.01)，并且能夠顯著提高nk細胞活性(p<0.01)，即本發(fā)明組合物具有增強免疫力功能，本發(fā)明通過特定方式的瑪咖提取物制備和與人參提取物的合理配伍實現(xiàn)了協(xié)同增效作用，組合物的增強免疫力功效顯著提高：研究證明，瑪咖僅可提高小鼠細胞免疫，但不能提高小鼠體液免疫，不能提高小鼠nk細胞活性，本發(fā)明通過高含量瑪咖多糖提取物的制備與合理配伍使組合物對小鼠體液免疫、細胞免疫、nk細胞活性均有積極影響，具有較高應用價值。附圖說明圖1顯示為本發(fā)明黏多糖hpic譜圖。圖2顯示為本發(fā)明黏多糖ft-ir譜圖。圖1中，1-阿拉伯糖、2-半乳糖、3-葡萄糖。具體實施方式下面對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細描述，但本發(fā)明的方法不限于下述實施例。本發(fā)明中，所用到人參、瑪咖、昆明種小鼠、spf健康雌性小鼠、多功能酶標儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、t1000型電子天平、ja2003型電子天平、jj-100電子天平、注射用環(huán)磷酰胺、rpmi1640、yac-1細胞、ldh基質液、sg-603生物安全柜、srbc、sa緩沖液、離心機、分光光度計、水浴鍋、旋渦混合器、無水乙醇、葡萄糖等均采用市場公共渠道購買獲得。實施例一：顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物本發(fā)明提供種具有增強免疫力功能的瑪咖組合物，所述瑪咖組合物重量份數(shù)配比的原料：瑪咖提取物40份-60份、人參提取物20份-33份；瑪咖提取物中多糖含量≥22％，人參提取物中人參皂苷的含量≥8％。實施例二：顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物本發(fā)明中，所述瑪咖組合物重量份數(shù)配比的原料：瑪咖提取物40份、人參提取物30份；瑪咖提取物中多糖含量23.1％，人參提取物中人參皂苷的含量8.7％。本發(fā)明中，所述瑪咖提取物中多糖相對分子量為5-8kda。更具體的，本發(fā)明中，所述瑪咖提取物的多糖中相對分子量6.6kda-6.8kda，糖環(huán)同時包含α型吡喃糖、β型吡喃糖的一種黏多糖占瑪咖提取物中多糖總量的25％以上。本發(fā)明中，所述瑪咖提取物的黏多糖中阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖的摩爾比1:1.3:36.8。實施例三：顯著增強免疫力功能的瑪咖組合物制備方法本發(fā)明提供了一種具有增強免疫力功能的瑪咖組合物制備方法，由以下步驟構成：(1)瑪咖提取物制備：瑪咖干品粉碎至粒徑0.2cm-0.4cm，加入8倍-10倍量65％-68％乙醇溶液，45℃保溫浸泡2天，過濾，濾液用于下一批次瑪咖的浸泡，瑪咖于50℃烘干、粉碎；經(jīng)過乙醇溶液浸泡的瑪咖粉中加15倍量水提取2-3次，過濾，合并濾液，濃縮、干燥，得到瑪咖多糖提取物。(2)人參提取物制備：人參經(jīng)粉碎后加入10倍-12倍量60％-70％乙醇溶液，提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，60℃濃縮至相對密度1.05，噴霧干燥，進風溫度：150℃-170℃，排風溫度：75℃-85℃，噴霧壓力0.4mpa，干燥至水分低于5％，粉末過100目篩。(3)組合物的制備：稱取重量份數(shù)配比的原料瑪咖提取物40-60份，人參提取物20-33份充分混合，壓片。實施例四：瑪咖提取物的制備瑪咖提取物的制備：瑪咖干品粉碎至粒徑0.2cm-0.4cm，加入8倍量68％乙醇溶液，45℃保溫浸泡2天，過濾，濾液用于下一批次瑪咖的浸泡，瑪咖于50℃烘干、粉碎；經(jīng)過乙醇溶液浸泡的瑪咖粉中加15倍量水按常規(guī)方法提取2次，過濾，合并濾液，濃縮、干燥，得到瑪咖多糖提取物。實施例五：瑪咖提取物中多糖含量檢測1方法1.1總多糖含量測定按《保健食品功效成分檢測方法》(白鴻主編)中“粗多糖的苯酚-硫酸分光光度測定法”中的方法檢測。1.2標志性多糖分析樣品處理：瑪咖多糖中加入2mtfa，110℃水解6h，真空濃縮、去酸。hpic條件：carbopacpa20柱(3×150mm)，0.5ml/min，水(a),250mmnaoh(b)，1mnaac(c)梯度洗脫。2結果2.1總多糖含量依照實施例四方法測得瑪咖提取物中多糖含量為25.9％。2.2標志性多糖分析hpic分析由瑪咖多糖提取物中得到的一種黏多糖，根據(jù)圖譜縱坐標豐度abundance可知該黏多糖阿拉伯糖(1)、半乳糖(2)和葡萄糖(3)的摩爾比為1:1.3:36.8，參見說明書附圖1，糖環(huán)同時包含α型吡喃糖、β型吡喃糖，參見說明書附圖2。實施例六：瑪咖提取物的制備瑪咖提取物的制備：瑪咖干品粉碎至粒徑0.2cm-0.4cm，加入10倍量65％乙醇溶液，45℃保溫浸泡2天，過濾，濾液用于下一批次瑪咖的浸泡，瑪咖于50℃烘干、粉碎；經(jīng)過乙醇溶液浸泡的瑪咖粉中加15倍量水按常規(guī)方法提取3次，過濾，合并濾液，濃縮、干燥，得到瑪咖多糖提取物。經(jīng)檢測，該提取物中多糖含量為22.2％。實施例七：人參提取物的制備本發(fā)明中人參經(jīng)粉碎后加入12倍量60％乙醇溶液，提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，60℃濃縮至相對密度1.05，噴霧干燥，進風溫度：160℃，排風溫度：80℃，噴霧壓力0.4mpa，干燥至水分低于5％，粉末過100目篩。經(jīng)檢測，人參皂苷含量為8.7％。實施例八：增強免疫力對照試驗1材料和方法1.1動物與分組昆明種小鼠70只，隨機分7組，每組10只，進行免疫抑制小鼠免疫臟器指數(shù)測定試驗。spf健康雌性小鼠60只，隨機分6組，每組10只，進行nk細胞活性試驗。1.2劑量選擇與受試物給予方式設組合物1組瑪咖提取物40份，人參提取物30份充分混合(本發(fā)明制備方法制備的組合物，瑪咖提取物多糖含量23.1％、人參提取物人參皂苷含量8.70％)。組合物2組瑪咖水提物(不經(jīng)過乙醇浸泡直接用水提取)40份，人參提取物30份充分混合(瑪咖水提物多糖含量10.3％、人參醇提物人參皂苷含量8.70％)。組合物3組瑪咖乙醇提取物40份，人參提取物30份充分混合(人參醇提物人參皂苷含量8.70％)?，斂崛∥锝M(瑪咖多糖含量23.1％)。人參提取物組(人參水提取物人參皂苷含量6.21％)。各組分試驗劑量均為0.60g/kg·bw/d，空白對照組以無菌水代替受試物。灌胃量0.2ml/10g·bw。1.3儀器與試劑電子天平、多功能酶標儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、jj-100電子天平。注射用環(huán)磷酰胺、rpmi1640、yac-1細胞、ldh基質液。1.4試驗方法1.4.1免疫抑制小鼠免疫臟器指數(shù)昆明種小鼠分組灌胃給藥，連續(xù)灌胃14d。試驗第11d，除空白對照組外，各組小鼠分別以50mg/kg腹腔注射環(huán)磷腺胺，連續(xù)3d，造成動物免疫抑制模型，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水。第14d給藥1h后，脫臼處死小鼠，稱體重，取脾臟、胸腺，稱濕重，計算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。脾指數(shù)＝脾重/體重(mg/g)；胸腺指數(shù)＝胸腺重/體重(mg/g)。1.4.2nk細胞活性的測定受試小鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，制成脾細胞懸液2×107個/ml此為效應細胞，取傳代后24h生長良好的yac-1細胞用rpmi1640完全培養(yǎng)液調整細胞濃度為4×105個/ml此為靶細胞；取靶細胞和效應細胞各100μl(效靶比50∶1)，加入u型96孔培養(yǎng)板中；靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100μl，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和2.5％triton各100μl；上述各項均設3個平行孔，于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入ldh基質液100μl，根據(jù)室溫反應3-10min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶標儀490nm處測定光密度(od)，計算nk細胞活性。nk細胞活性＝(反應孔od值-自然釋放孔od值)/(最大釋放孔od值-自然釋放孔od值)×100。2結果2.1對免疫抑制小鼠免疫臟器指數(shù)的影響腹腔注射50mg/kg環(huán)磷酰胺能顯著降低小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)；相比模型對照組，組合物1(本發(fā)明組合物)可顯著提高小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)(p<0.01)顯著提高(p<0.01)，組合物3(瑪咖乙醇提取物+人參提取物)明顯提高小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)(p<0.05)，組合物2(瑪咖水提物(直接提取)+人參提取物)僅提高小鼠胸腺指數(shù)(p<0.05)，瑪咖提取物僅提高小鼠脾臟指數(shù)(p<0.05)，而人參提取物對二者都沒有顯著作用(p>0.05)。組合物1(本發(fā)明組合物)對免疫抑制小鼠免疫臟器指數(shù)的影響最大。表1：樣品對免疫抑制小鼠免疫臟器指數(shù)的影響(n＝10)組別脾臟指數(shù)(mg/g)胸腺指數(shù)(mg/g)空白對照組5.1±0.34.2±0.4模型對照組1.8±0.21.2±0.4組合物1組2.7±0.3**1.8±0.4**組合物2組2.0±0.31.4±0.3*組合物3組2.1±0.3*1.4±0.3*瑪咖提取物組2.1±0.4*1.2±0.2人參提取物組1.9±0.31.2±0.52.2對小鼠nk細胞活性的影響組合物1(本發(fā)明組合物)顯著提高小鼠nk細胞活性(p<0.05)，組合物2、組合物3、瑪咖提取物、人參提取物對小鼠nk細胞活性均無顯著性影響(p>0.05)。表2：各組對小鼠nk細胞活性的影響(n＝10)組別nk細胞活性(％)空白對照組30.12±5.72組合物1組38.54±5.64*組合物2組33.21±5.37組合物3組34.14±4.27瑪咖提取物組34.97±5.42人參提取物組32.77±5.23組合物1(本發(fā)明組合物)能顯著提高免疫力低下小鼠免疫臟器(脾臟、胸腺)指數(shù)(p<0.01)，顯著提高nk細胞活性(p<0.05)，效果明顯優(yōu)于組合物2、組合物3、瑪咖提取物、人參提取物。本發(fā)明組合物通過高含量瑪咖多糖提取物的制備與人參提取物組合實現(xiàn)了組合物增強免疫力活性的明顯提高。實施例八：瑪咖組合物顯著增強免疫力功能評價1材料和方法1.1動物與分組spf健康雌性小鼠，按體重隨機分為三大組分別進行足跖腫脹試驗、nk細胞活性試驗、抗體生成細胞檢測和半數(shù)溶血值hc50測定試驗。1.2劑量選擇與受試物給予方式設本發(fā)明組合物低、中、高劑量組分別為0.30g/kg·bw/d、0.60g/kg·bw/d、1.80g/kg·bw/d，0g/kg·bw/d組以無菌水代替受試物，灌胃量0.2ml/10g·bw，連續(xù)灌胃30d。1.3儀器與試劑t1000型電子天平、ja2003型電子天平、sg-603生物安全柜、多功能酶標儀、二氧化碳培養(yǎng)箱。srbc、rpmi1640、sa緩沖液、yac-1細胞、ldh基質液等。1.4試驗方法1.4.1遲發(fā)型變態(tài)反應(dth)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射2％(v/v)綿羊紅細胞懸液致敏，測量左后足跖部厚度，在測量部位皮下注射20％(v/v)綿羊紅細胞懸液(20ul每鼠)，24h后測量左后足跖部厚度。注射后足跖腫脹度(mm)＝注射后足跖厚度(mm)-注射前足跖厚度(mm)。1.4.2抗體生成細胞檢測(jerne改良玻片法)每鼠腹腔注射0.2ml2％(v/v)綿羊紅細胞懸液。4d后處死小鼠，取脾，制成脾細胞懸液。按jerne改良玻片法計數(shù)溶血空斑數(shù)，溶血空斑數(shù)＝溶血空斑計數(shù)×320。1.4.3hc50測定每鼠腹腔注射0.2ml2％綿羊紅細胞懸液進行免疫。4d后摘除眼球取血，離心、收集血清。用sa緩沖液將血清稀釋200倍，按檢驗方法測定樣品管及srbc半數(shù)溶血時的od值，溶血素的量以半數(shù)溶血值(hc50)表示。hc50＝樣品光密度值/srbc半數(shù)溶血時的光密度值×稀釋倍數(shù)。1.4.4nk細胞活性的測定受試小鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，制成脾細胞懸液2×107個/ml此為效應細胞，取傳代后24h生長良好的yac-1細胞用rpmi1640完全培養(yǎng)液調整細胞濃度為4×105個/ml此為靶細胞；取靶細胞和效應細胞各100μl(效靶比50∶1)，加入u型96孔培養(yǎng)板中；靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100μl，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和2.5％triton各100μl；上述各項均設3個平行孔，于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入ldh基質液100μl，根據(jù)室溫反應3-10min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶標儀490nm處測定光密度(od)，計算nk細胞活性。nk細胞活性＝(反應孔od值-自然釋放孔od值)/(最大釋放孔od值-自然釋放孔od值)×100。2結果2.1對小鼠dth的影響低、中、高劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應能力與對照組比較均有提高，中劑量組提高具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，高劑量組則有顯著提高(p<0.01)。表3：各組對小鼠dth的影響(n＝10)組別足跖腫脹度(mm)溶劑對照組0.26±0.13低劑量組0.33±0.19中劑量組0.46±0.19高劑量組0.51±0.14**2.2對小鼠抗體生成細胞的影響低、中、高劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)均有提高，高劑量組與對照組比較顯著提高(p<0.05)。表4：各組對抗體細胞生成數(shù)的影響(n＝10)2.3對小鼠hc50的影響低、中、高劑量組半數(shù)溶血值均有提高，其中高劑量組半數(shù)溶血值與對照組比較顯著提高(p<0.05)。表5：各組對小鼠hc50的影響(n＝10)組別hc50溶劑對照組153.12±32.24低劑量組169.24±38.81中劑量組182.26±34.26高劑量組202.22±43.42*2.4對小鼠nk細胞活性的影響低、中、高劑量組nk細胞活性都有提高，其中高劑量組nk細胞活性明顯高于溶劑對照組(p<0.01)。表6：各組對小鼠nk細胞活性的影響(n＝10)本發(fā)明組合物組具有很好的體液免疫功能(小鼠抗體生成細胞、小鼠半數(shù)溶血值)(p<0.05)，具有一定的細胞免疫功能(對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應能力的影響)(p<0.01)，并且能夠顯著提高nk細胞活性(p<0.01)，即本發(fā)明組合物具有增強免疫力功能，本發(fā)明通過特定方式的瑪咖提取物制備和與人參提取物的合理配伍實現(xiàn)了協(xié)同增效作用，組合物的增強免疫力功效顯著提高：瑪咖僅可提高小鼠細胞免疫，但不能提高小鼠體液免疫，不能提高小鼠nk細胞活性，本發(fā)明通過高含量的相對分子量5-8kda的瑪咖多糖提取物的制備與合理配伍使組合物對小鼠體液免疫、細胞免疫、nk細胞活性均有積極影響，具有較高應用價值。尤其本發(fā)明瑪咖提取物中瑪咖多糖相對分子量6.6kda-6.8kda，阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖的摩爾比1:1.3:36.8，糖環(huán)同時包含α型吡喃糖、β型吡喃糖的一種黏多糖為主，至少占提取物中多糖總量的25％以上，則瑪咖提取物與人參提取物的組合物生物活性越強，因此，該類多糖是提高本發(fā)明組合物增強免疫力活性的關鍵組分。藥理試驗證明，瑪咖提取物中多糖相對分子量集中在5-8kda，并且上述黏多糖含量越高對小鼠體液免疫、細胞免疫、nk細胞活性提高越明顯。如上所述，即可較好地實現(xiàn)本發(fā)明,上述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設計精神的前提下，本領域普通技術人員對本發(fā)明的技術方案作出的各種變形和改進，均應落入本發(fā)明確定的保護范圍內(nèi)。當前第1頁12