本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種桑葚提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

桑葚又名桑椹，是?？浦参锷?shù)所結(jié)的果實(shí)，口感鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含粗蛋白、胡蘿卜素、維生素、氨基酸和礦物質(zhì)等成分。研究表明，桑葚中的物質(zhì)具有抗氧化的作用，能夠清除自由基，保護(hù)人體免受自由基的損傷。

自由基又稱游離基，是具有非偶電子的基團(tuán)或原子，自由基可通過(guò)電子轉(zhuǎn)移、加成、脫氫等多種方式與生物體內(nèi)的多糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、脂類等物質(zhì)相互作用，造成這些物質(zhì)氧化性損傷，進(jìn)一步使細(xì)胞壞死或突變。

如何提供一種可清除自由基的純天然物質(zhì)，是自由基清除領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題之一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種桑葚提取物及其制備方法和應(yīng)用，可制備出純天然的桑葚提取物，該提取物具有自由基清除功能。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種桑葚提取物的制備方法，包括以下步驟：將桑葚干燥，并粉碎至60-80目，獲得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，攪拌5-10min，混合均勻，其中，桑葚干粉與混和酶的質(zhì)量比為1g:2-3mg，桑葚干粉與蒸餾水的料液比為1g:20-30ml；在混合后的液體中加入乙酸，使液體的ph值為4-5，再置于50-60℃水浴中1-2h；對(duì)水浴后的液體進(jìn)行加熱，使其沸騰5-10min，靜置取上層液，對(duì)上層液進(jìn)行離心，取上清液，對(duì)該上清液進(jìn)行干燥，獲得桑葚提取物。

其中，混和酶按質(zhì)量百分比計(jì)，包括組分：70-80%纖維素酶、20-30%果膠酶。

其中，桑葚干粉為70目。

其中，桑葚干粉與混和酶的質(zhì)量比為1g:2.5mg，桑葚干粉與蒸餾水的料液比為1g:25ml。

其中，加入乙酸后，液體的ph值為4.5。

其中，混和酶按質(zhì)量百分比計(jì)，包括組分：75%纖維素酶、25%果膠酶。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種上述制備方法制備得到的桑葚提取物。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種桑葚提取物作為清除自由基藥物或保健品的應(yīng)用。具體地，桑葚提取物作為清除自由基藥物或保健品的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑。

本發(fā)明的有益效果是：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)的情況，本發(fā)明的桑葚提取物的制備方法，包括以下步驟：將桑葚干燥，并粉碎至60-80目，獲得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，攪拌5-10min，混合均勻，其中，桑葚干粉與混和酶的質(zhì)量比為1g:2-3mg，桑葚干粉與蒸餾水的料液比為1g:20-30ml；在混合后的液體中加入乙酸，使液體的ph值為4-5，再置于50-60℃水浴中1-2h；對(duì)水浴后的液體進(jìn)行加熱，使其沸騰5-10min，靜置取上層液，對(duì)上層液進(jìn)行離心，取上清液，對(duì)該上清液進(jìn)行干燥，獲得桑葚提取物。上述制備方法制備的桑葚提取物為純天然物質(zhì)，可對(duì)自由基進(jìn)行清除。上述制備方法具有以下特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、易操作；由于對(duì)桑葚細(xì)胞充分破碎，可更好地對(duì)桑葚中的物質(zhì)進(jìn)行提取；適宜的ph值可提高桑葚提取物的提取率；制備出的桑葚提取物具有較高的提取率，且無(wú)毒、無(wú)害。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

桑葚提取物的制備方法包括以下步驟：將桑葚干燥，并粉碎至70目，獲得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，攪拌8min，混合均勻，其中，桑葚干粉與混和酶的質(zhì)量比為1g:2.5mg，桑葚干粉與蒸餾水的料液比為1g:25ml；在混合后的液體中加入乙酸，使液體的ph值為4.5，再置于55℃水浴中1.5h；對(duì)水浴后的液體進(jìn)行加熱，使其沸騰8min，靜置取上層液，對(duì)上層液進(jìn)行離心，取上清液，對(duì)該上清液進(jìn)行干燥，獲得桑葚提取物。

在本實(shí)施例中，混和酶按質(zhì)量百分比計(jì)，包括組分：75%纖維素酶、25%果膠酶。

本實(shí)施例的桑葚提取物可對(duì)自由基進(jìn)行清除，由于其為純天然物質(zhì)，對(duì)人體無(wú)副作用。

實(shí)施例2

桑葚提取物的制備方法包括以下步驟：將桑葚干燥，并粉碎至70目，獲得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纖維素酶和果膠酶的混和酶，再加入蒸餾水，攪拌8min，混合均勻，其中，桑葚干粉與混和酶的質(zhì)量比為1g:2.2mg，桑葚干粉與蒸餾水的料液比為1g:22ml；在混合后的液體中加入乙酸，使液體的ph值為4.5，再置于50℃水浴中1.5h；對(duì)水浴后的液體進(jìn)行加熱，使其沸騰8min，靜置取上層液，對(duì)上層液進(jìn)行離心，取上清液，對(duì)該上清液進(jìn)行干燥，獲得桑葚提取物。

在本實(shí)施例中，混和酶按質(zhì)量百分比計(jì)，包括組分：70%纖維素酶、30%果膠酶。

本實(shí)施例的桑葚提取物可對(duì)自由基進(jìn)行清除，由于其為純天然物質(zhì)，對(duì)人體無(wú)副作用。

實(shí)施例3

桑葚提取物片劑的制備：將實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的桑葚提取物用單沖壓片機(jī)打成直徑為7mm，重量為350mg的片，即得桑葚提取物片劑。

實(shí)施例4

桑葚提取物膠囊劑的制備：將實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的桑葚提取物以350mg填充入1號(hào)腸溶膠囊，即得桑葚提取物膠囊劑。

實(shí)施例5

桑葚提取物顆粒劑的制備：將實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的桑葚提取物加水制成軟材，過(guò)15目篩進(jìn)行造粒，干燥后即得桑葚提取物顆粒劑。

實(shí)施例6

桑葚提取物散劑的制備：將實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的桑葚提取物過(guò)250目篩，即得桑葚提取物散劑。

下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明桑葚提取物的自由基清除效果。

dpph（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，其乙醇溶液呈紫色，在波長(zhǎng)517nm處有強(qiáng)烈吸收。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，dpph的孤對(duì)電子被配對(duì)，從而使其褪色，褪色程度與其接受電子呈定量關(guān)系，因此可用比色法進(jìn)行定量分析。下面以dpph來(lái)說(shuō)明桑葚提取物的自由基清除效果。

將實(shí)施例1制備的桑葚提取物、實(shí)施例2制備的桑葚提取物、vc用蒸餾水配制成溶液，濃度均為：10mg/l、20mg/l、30mg/l、40mg/l、50mg/l；dpph利用無(wú)水乙醇配制成2×10^-4mol/l的溶液；取相同體積的樣品待測(cè)溶液和dpph溶液，混合均勻，室溫下放置20min，于波長(zhǎng)517nm處測(cè)定吸光度ai；取相同體積的樣品待測(cè)溶液和無(wú)水乙醇，混合均勻，室溫下放置20min，于波長(zhǎng)517nm處測(cè)定吸光度aj；取相同體積的dpph溶液和無(wú)水乙醇，混合均勻，室溫下放置20min，于波長(zhǎng)517nm處測(cè)定吸光度ac；計(jì)算各待測(cè)樣品的自由基清除率，清除率=[1-（ai-aj）/ac]×100%。

以樣品待測(cè)溶液濃度為橫坐標(biāo)，清除率為縱坐標(biāo)繪制曲線，根據(jù)曲線的線性回歸方程，計(jì)算實(shí)施例1制備的桑葚提取物、實(shí)施例2制備的桑葚提取物清除自由基的半抑制濃度（ic50）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)施例1制備的桑葚提取物的ic50為7.80mg/l，實(shí)施例2制備的桑葚提取物的ic50為7.82mg/l。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以看出實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的桑葚提取物具有強(qiáng)的自由基清除能力。根據(jù)曲線走向，當(dāng)濃度為40-50mg/l時(shí)，曲線趨于平穩(wěn)且有向下的趨勢(shì)，當(dāng)濃度為45mg/l時(shí)，實(shí)施例1制備的桑葚提取物、實(shí)施例2制備的桑葚提取物、vc的自由基清除率達(dá)到最大，分別為98%、97.5%、85%，根據(jù)上述結(jié)果，可以看出實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的桑葚提取物的自由基最大清除率較vc大，即實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的桑葚提取物基本上能清除所有的自由基。

利用上述實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算桑葚花青素對(duì)自由基清除能力的ic50，通過(guò)計(jì)算，ic50值為12.33mg/l。根據(jù)計(jì)算結(jié)果，可以看出實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的桑葚提取物較桑葚花青素具有更好的自由基清除能力。

綜上所述，本發(fā)明的桑葚提取物可對(duì)自由基進(jìn)行清除，且其為純天然物質(zhì)，對(duì)人體無(wú)副作用。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。