本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥及材料科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種生物活性敷貼的制作方法。
背景技術(shù)：
目前行業(yè)內(nèi)膠原蛋白的提純大部分以物理的方法為主，其缺點(diǎn)是膠原蛋白的純度不高，且不利于大規(guī)模進(jìn)行生產(chǎn)；單一化學(xué)方法則又產(chǎn)生雜質(zhì)殘留的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種生物活性敷貼的制作方法，利用化學(xué)方法和物理方法相結(jié)合，取長補(bǔ)短，大大提高了膠原蛋白的純度，也解決了單一化學(xué)法殘留的問題，提高了產(chǎn)品的安全性和有效性，且可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
一種生物活性敷貼的制作方法，包括如下步驟：除脂：用生物酶脫脂,酶量與肌腱比為1:5-20，調(diào)ph為5-8之間，溫度為25-39℃，放置10-16小時，取出后用純化水洗凈；
碎末化：沿著肌腱纖維方向切成5mm以下的薄片；
取膠：將已切片的肌腱放入容器中，加入相應(yīng)量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的濃度為0.2-1mol/l，進(jìn)行水解，控制溫度0-10oc，攪拌20-50小時；離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取上清液，即可提得膠原蛋白原液；
鹽析：加入氯化鈉晶體，使氯化鈉濃度達(dá)到0.5-2mol/l,靜置10-16小時；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/l冰醋酸溶解；
調(diào)ph：用4mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至6-10，分別加入丙酮和丁二酸酐，比例為20:1，再用5mol/l鹽酸調(diào)ph至產(chǎn)生沉淀；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
調(diào)ph：用1mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至4-8；
超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純；
折膜：將非織造布和鋁箔袋放于折棉機(jī)上，進(jìn)行折膜；
配液：取濃縮液，用注射用水稀釋，按比例加入保濕劑和防腐劑；
灌裝：將配好的溶液和折膜后的鋁箔袋放置灌裝機(jī)上，進(jìn)行灌裝封口；滅菌：輻照滅菌，劑量15-25kgy。
所述配液包括膠原蛋白濃縮液1%-10%，保濕劑1%-10%，防腐劑0.01%-0.1%，余量為注射用水。
所述超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一種，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液。
所述保濕劑為丙三醇或丁二醇中的一種。
所述防腐劑為羥苯甲酯、山梨酸鉀、甘草酸二鉀中的一種。
所述配液包括膠原蛋白濃縮液5%，保濕劑6%，防腐劑0.08%，余量為注射用水。
本發(fā)明的有益效果是：利用化學(xué)方法和物理方法相結(jié)合，取長補(bǔ)短，大大提高了膠原蛋白的純度，也解決了單一化學(xué)法殘留的問題，提高了產(chǎn)品的安全性和有效性，且可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種生物活性敷貼的制作方法，包括如下步驟：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000u/g脫脂,酶量與肌腱比為1:5-20，調(diào)ph為5-8之間，溫度為25-39℃，放置10-16小時，取出后用純化水洗凈；
碎末化：沿著肌腱纖維方向切成5mm以下的薄片，，肌腱顆粒越小越有利于提取膠原蛋白；
取膠：將已切片的肌腱放入容器中，加入相應(yīng)量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的濃度為0.2-1mol/l，進(jìn)行水解，控制溫度0-10oc，攪拌20-50小時；離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取上清液，即可提得膠原蛋白原液；
鹽析：加入氯化鈉晶體，使氯化鈉濃度達(dá)到0.5-2mol/l,靜置10-16小時；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/l冰醋酸溶解；
調(diào)ph：用4mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至6-10，分別加入丙酮和丁二酸酐，比例為20:1，再用5mol/l鹽酸調(diào)ph至產(chǎn)生沉淀；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
調(diào)ph：用1mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至4-8；
超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，去除小分子鹽、雜蛋白、有機(jī)物等，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液，流量為250l/h；
折膜：將非織造布和鋁箔袋放于折棉機(jī)上，進(jìn)行折膜；
配液：取濃縮液，用注射用水稀釋，按比例加入保濕劑和防腐劑；
灌裝：將配好的溶液和折膜后的鋁箔袋放置灌裝機(jī)上，進(jìn)行灌裝封口；
滅菌：輻照滅菌，劑量15-25kgy。
所述配液包括膠原蛋白濃縮液10%，保濕劑10%，防腐劑0.1%，余量為注射用水。
所述超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一種，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液。
所述保濕劑為丙三醇或丁二醇中的一種。
所述防腐劑為羥苯甲酯、山梨酸鉀、甘草酸二鉀中的一種。
本實(shí)施例的一種生物活性敷貼的制作方法，利用化學(xué)方法和物理方法相結(jié)合，取長補(bǔ)短，大大提高了膠原蛋白的純度，也解決了單一化學(xué)法殘留的問題，提高了產(chǎn)品的安全性和有效性，且可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
實(shí)施例2
一種生物活性敷貼的制作方法，包括如下步驟：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000u/g脫脂,酶量與肌腱比為1:5-20，調(diào)ph為5-8之間，溫度為25-39℃，放置10-16小時，取出后用純化水洗凈；
碎末化：沿著肌腱纖維方向切成5mm以下的薄片，，肌腱顆粒越小越有利于提取膠原蛋白；
取膠：將已切片的肌腱放入容器中，加入相應(yīng)量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的濃度為0.2-1mol/l，進(jìn)行水解，控制溫度0-10oc，攪拌20-50小時；離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取上清液，即可提得膠原蛋白原液；
鹽析：加入氯化鈉晶體，使氯化鈉濃度達(dá)到0.5-2mol/l,靜置10-16小時；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/l冰醋酸溶解；
調(diào)ph：用4mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至6-10，分別加入丙酮和丁二酸酐，比例為20:1，再用5mol/l鹽酸調(diào)ph至產(chǎn)生沉淀；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
調(diào)ph：用1mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至4-8；
超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，去除小分子鹽、雜蛋白、有機(jī)物等，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液，流量為250l/h；
折膜：將非織造布和鋁箔袋放于折棉機(jī)上，進(jìn)行折膜；
配液：取濃縮液，用注射用水稀釋，按比例加入保濕劑和防腐劑；
灌裝：將配好的溶液和折膜后的鋁箔袋放置灌裝機(jī)上，進(jìn)行灌裝封口；
滅菌：輻照滅菌，劑量15-25kgy。
所述配液包括膠原蛋白濃縮液1%，保濕劑1%，防腐劑0.01%，余量為注射用水。
所述超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一種，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液。
所述保濕劑為丙三醇或丁二醇中的一種。
所述防腐劑為羥苯甲酯、山梨酸鉀、甘草酸二鉀中的一種。
本實(shí)施例的一種生物活性敷貼的制作方法，利用化學(xué)方法和物理方法相結(jié)合，取長補(bǔ)短，大大提高了膠原蛋白的純度，也解決了單一化學(xué)法殘留的問題，提高了產(chǎn)品的安全性和有效性，且可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
實(shí)施例3
一種生物活性敷貼的制作方法，包括如下步驟：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000u/g脫脂,酶量與肌腱比為1:5-20，調(diào)ph為5-8之間，溫度為25-39℃，放置10-16小時，取出后用純化水洗凈；
碎末化：沿著肌腱纖維方向切成5mm以下的薄片，，肌腱顆粒越小越有利于提取膠原蛋白；
取膠：將已切片的肌腱放入容器中，加入相應(yīng)量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的濃度為0.2-1mol/l，進(jìn)行水解，控制溫度0-10oc，攪拌20-50小時；離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取上清液，即可提得膠原蛋白原液；
鹽析：加入氯化鈉晶體，使氯化鈉濃度達(dá)到0.5-2mol/l,靜置10-16小時；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/l冰醋酸溶解；
調(diào)ph：用4mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至6-10，分別加入丙酮和丁二酸酐，比例為20:1，再用5mol/l鹽酸調(diào)ph至產(chǎn)生沉淀；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
離心：用高速冷凍離心機(jī)以5000r/min離心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
調(diào)ph：用1mol/l氫氧化鈉調(diào)ph至4-8；
超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，去除小分子鹽、雜蛋白、有機(jī)物等，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液，流量為250l/h；
折膜：將非織造布和鋁箔袋放于折棉機(jī)上，進(jìn)行折膜；
配液：取濃縮液，用注射用水稀釋，按比例加入保濕劑和防腐劑；
灌裝：將配好的溶液和折膜后的鋁箔袋放置灌裝機(jī)上，進(jìn)行灌裝封口；
滅菌：輻照滅菌，劑量15-25kgy。
所述配液包括膠原蛋白濃縮液5%，保濕劑6%，防腐劑0.08%，余量為注射用水。
所述超濾：用超濾設(shè)備進(jìn)行超濾濃縮提純，膜的材質(zhì)為纖維膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一種，膜的孔徑為10-200kda,取濃縮液。
所述保濕劑為丙三醇或丁二醇中的一種。
所述防腐劑為羥苯甲酯、山梨酸鉀、甘草酸二鉀中的一種。
本實(shí)施例的一種生物活性敷貼的制作方法，利用化學(xué)方法和物理方法相結(jié)合，取長補(bǔ)短，大大提高了膠原蛋白的純度，也解決了單一化學(xué)法殘留的問題，提高了產(chǎn)品的安全性和有效性，且可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。