本發(fā)明屬于天然提取物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雞血藤的提取物的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抑郁癥(depression)是一種情感性精神障礙類疾病，其主要臨床特征表現(xiàn)為顯著而持續(xù)的情緒消極、興趣缺失、無快感體驗(yàn)、睡眠障礙、反復(fù)自殺念頭等。并常伴隨認(rèn)知、精神和運(yùn)動(dòng)障礙。具有發(fā)病率高，致殘率高，復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類健康。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，近年來抑郁癥發(fā)病率逐年上升，大約五分之一的人存在不同程度的抑郁癥狀，其中約三分之一的人患有重癥抑郁，預(yù)計(jì)到2020年抑郁癥可能成為僅次于心臟病的人類第二大疾病。然而目前臨床應(yīng)用的抗抑郁藥多存在有效率低（約65%），起效延遲，不同程度毒副反應(yīng)，耐藥性且易復(fù)發(fā)等缺陷，因此更加安全有效的抗抑郁藥的研制己成為各國專家關(guān)注的熱點(diǎn)。
現(xiàn)有技術(shù)中，抑郁癥的治療主要是以西藥為主，治療藥物主要包括選擇性5-ht重?cái)z取抑制劑、選擇性ne重?cái)z取抑制劑、多巴胺和去甲腎上腺素重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺受體調(diào)節(jié)劑以及單胺氧化酶抑制劑、非選擇性重?cái)z取抑制劑等類型。其中，以帕羅西汀、氟西汀為代表的選擇性5-ht重?cái)z取抑制劑臨床應(yīng)用最為廣泛。但現(xiàn)有抗抑郁藥物尤其是西藥存在著毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性、依從性差、抗抑郁效果不理想等不足，再加上抗抑郁藥物治療成本昂貴，傳統(tǒng)的西藥治療方式已經(jīng)遭遇顯著瓶頸。從豐富的中草藥中尋找安全有效的抗抑郁藥可能是一個(gè)新的途徑。
雞血藤系豆科植物密花豆spatholobussuberectusdunn的干燥藤莖，其性溫，味苦、甘，歸肝、腎經(jīng)，具有活血補(bǔ)血，調(diào)經(jīng)止痛，舒筋活絡(luò)之功效。雞血藤中的化合物結(jié)構(gòu)類型主要有黃酮類、萜類、甾醇類、蒽醌類、內(nèi)酯類、苷類及其他類型化合物。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，雞血藤還具有抗腫瘤、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、對(duì)酪氨酸酶雙向調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)靜催眠等作用，同時(shí)，雞血藤還被拿來與其它中藥材配伍防治抑郁癥，其它配伍藥材常見有：將茯神、五味子、雞骨草、淡竹葉、洋槐花、龍膽、仙鶴草、紅花、甘草、杜仲、玫瑰花、白芍、黨參、龜甲、虎杖、當(dāng)歸、枸杞子、麥冬、黃芪、五味子、薏米、沙參、麥芽等等。但“是藥三分毒”，多種中藥材配伍制成抗抑郁藥物后，雖然解決了西藥治病的弊端，但中藥成分復(fù)雜，而且需要長期服用，對(duì)人體的副作用也不容忽視。因此研究中藥的抗抑郁機(jī)理，更合理、有效、更進(jìn)一步的開發(fā)中藥資源顯得尤為重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述技術(shù)不足，提供一種雞血藤的提取物的制備方法及應(yīng)用，以此探索雞血藤提取物在抗抑郁癥效果，為進(jìn)一步開發(fā)雞血藤的藥用價(jià)值、資源利用和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容是這樣實(shí)現(xiàn)的：
本發(fā)明雞血藤提取物的制備方法，具體為：取雞血藤粗粉，加入8-12倍重量的溶媒，加熱提取3次，合并提取液，減壓濃縮到一定濃度后；加入溶劑，置于4℃下沉淀12h；過濾，取濾液減壓濃縮，干燥即得雞血藤提取物。
進(jìn)一步的，所述溶媒為體積分?jǐn)?shù)50-100%的乙醇或溫度為60-90℃的水；所述溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇或溫度為60-90℃的水中的任意一種；所述加熱提取溫度為60-100℃。
本發(fā)明還公開了所述方法制備的雞血藤提取物。以及所述的雞血藤提取物在制備預(yù)防和治療抑郁及其相關(guān)疾病藥物中的用途。
所述的雞血藤提取物選擇性添加常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成的臨床可接受的用于預(yù)防和治療抑郁及其相關(guān)疾病的藥物制劑。
進(jìn)一步的，所述提取物經(jīng)過添加常規(guī)輔料，制成注射劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、滴丸或酊劑。
更進(jìn)一步的，所述常規(guī)輔料包括淀粉、乳糖、微晶纖維素、糊精、磷酸鈣、豆油、蜂膠、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纖維素鈉、羥丙纖維素或交聯(lián)聚維酮。
本發(fā)明的技術(shù)方案相對(duì)于傳統(tǒng)技術(shù)有如下明顯的進(jìn)步和優(yōu)點(diǎn)：
本技術(shù)方案發(fā)現(xiàn)雞血藤提取物具有明顯的抗抑郁活性，具有制備抗抑郁藥物或者具有抗抑郁功能的藥物的成藥潛力，為開發(fā)成為抗抑郁藥物創(chuàng)新藥物提供了新的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有潛在巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明的取藥資源豐富，提取制備方法簡單易行、原料來源方便易得、可用于雞血藤提取物的大量制備；成本低、污染小，利于節(jié)能減排條件下的大規(guī)模生產(chǎn)，產(chǎn)業(yè)化前景十分明確。
附圖說明
圖1為本發(fā)明給小鼠灌胃給藥實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1雞血藤提取物的制備
取雞血藤藥材粗粉1000g，加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇加熱提取3次，每次8l，合并提取液，減壓濃縮到一定濃度后；加入體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇，放置于4℃沉淀12h，過濾取濾液，經(jīng)減壓濃縮，低溫干燥即得所述提取物。
實(shí)施例2雞血藤提取物的制備
取雞血藤藥材粗粉1000g，加入體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇加熱提取3次，每次10l，合并提取液，減壓濃縮到一定濃度后，加入體積分?jǐn)?shù)為65%的乙醇，放置于4℃沉淀12h，過濾取濾液，經(jīng)減壓濃縮，干燥即得所述提取物。
實(shí)施例3雞血藤提取物的制備
取雞血藤藥材粗粉1000g，加入體積分?jǐn)?shù)為100%的乙醇加熱提取3次，每次12l，合并提取液，減壓濃縮到一定濃度后；加入乙酸乙酯，放置于4℃沉淀12h，過濾取濾液，經(jīng)減壓濃縮，干燥即得所述提取物。
實(shí)施例4雞血藤提取物的制備
取雞血藤藥材粗粉1000g，加入溫度60-90℃的去離子水，加熱提取3次，每次10l，合并提取液，減壓濃縮到一定濃度后；加入體積分?jǐn)?shù)正丁醇，放置于4℃沉淀12h，過濾取濾液，經(jīng)減壓濃縮，低溫干燥即得所述提取物。
實(shí)施例5雞血藤提取物片劑的制備
【處方】
實(shí)施例1方法所得的雞血藤提取物160g；
干淀粉210g；
羧甲基纖維素鈉5g；
滑石粉5g；
總計(jì)380g。
【制備方法】
將所得的雞血藤提取物160g、干淀粉混勻，制成顆粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣。所得的雞血藤提取物的糖衣片，每片重380mg，含所得的雞血藤提取物重160mg。
實(shí)施例6雞血藤提取物軟膠囊的制備
【處方】
實(shí)施例2方法所得的雞血藤提取物80g；
油440g；
蜂膠20g；
總計(jì)540g。
【制備方法】
取20g蜂膠加入到440g豆油中，加熱混勻，制得軟膠囊基質(zhì)，將60g所得的雞血藤提取物加入到基質(zhì)中，攪拌均勻，膠體磨研磨，制得軟膠囊內(nèi)容物，按明膠：甘油：水（1：0.4：1）制膠，采用軟膠囊機(jī)壓丸，制得1000粒軟膠囊，每粒含所得的雞血藤提取物重80mg。
實(shí)施例7雞血藤提取物滴丸的制備
【處方】
實(shí)施例3方法所得的雞血藤提取物32g；
聚乙二醇-40006g；
聚乙二醇-600042g；
總計(jì)80g。
【制備方法】
將所得的雞血藤提取物、聚乙二醇-4000攪拌均勻，再加入熔融的聚乙二醇-6000，置水浴上加熱至60~65℃,充分?jǐn)嚢柚脸赏该饕后w，傾入保溫滴制器中，保持溫度在65~70℃按每丸重80mg，選用適宜口徑的滴頭，以每分鐘60滴的滴速滴人用冰浴冷卻的液體石蠟中，制成1000丸，包糖衣，含所得的雞血藤提取物重32mg。
實(shí)施例8雞血藤提取物顆粒劑的制備
【處方】
實(shí)施例4方法所得的雞血藤提取物480g；
干淀粉2000g；
羧甲基纖維素鈉10g；
滑石粉10g；
總計(jì)2500g。
【制備方法】
將所得的雞血藤提取物480g、干淀粉混勻，制成顆粒，干燥，包薄膜衣，分裝1000包。所得的雞血藤提取物的顆粒，每包重2.5g，含所得的雞血藤提取物重480mg。
實(shí)施例9雞血藤提取物酊劑的制備
【處方】
實(shí)施例1方法所得的雞血藤提取物8g；
75%乙醇1000ml；
總計(jì)1000ml。
【制備方法】：將所得的雞血藤提取物8g，加75%乙醇,溶解或稀釋,靜置，濾過，即得。所得的雞血藤提取物酊劑，每ml含所得的雞血藤提取物重8mg。
實(shí)施例10雞血藤提取物注射劑的制備
【處方】
實(shí)施例2方法所得的雞血藤提取物10g；
75%乙醇200ml；
去離子水800ml；
總計(jì)1000ml。
【制備方法】：將所得的雞血藤提取物8g，加75%乙醇,溶解或稀釋,靜置，濾過，加去離子水補(bǔ)足1000ml即得。所得的雞血藤提取物注射劑，每ml含所得的雞血藤提取物重10mg。
實(shí)驗(yàn)例11雞血藤提取物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間的影響
1、供試品：本實(shí)驗(yàn)例中所述雞血藤提取物均由實(shí)施例1中所述方法提取得到。
2、方法：采用昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量18～22g，每組10只。分別分為對(duì)照組、陽性對(duì)照藥氟西汀組（3.6mg.kg-1）、雞血藤提取物高、中、低(8，4，2g藥材.kg-1)劑量組（由實(shí)施例1所述方法制得）。對(duì)照組給予同等體積的含0.3%吐溫-80的蒸餾水，各組均連續(xù)灌胃(ig)給藥10d，末次給藥1h后測試。測試方法如下：將單個(gè)小鼠尾端(在距尾尖部約2cm處)用醫(yī)用膠布粘于懸尾箱(30cm*30cm*25cm)上部支架上，使成倒掛狀態(tài)，頭部離箱底約5cm。懸掛時(shí)間為6min，統(tǒng)計(jì)后4min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(不動(dòng)狀態(tài)即小鼠停止掙扎不動(dòng)或無任何活動(dòng))。
3、結(jié)果：如表1所示，與對(duì)照組比較，雞血藤提取物(8，4,2g藥材.kg-1)連續(xù)ig給予小鼠10d，均可顯著縮短懸尾不動(dòng)時(shí)間，(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p<0.05)。
實(shí)驗(yàn)例12雞血藤提取物對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間的影響
1、供試品：本實(shí)驗(yàn)例中所述雞血藤提取物均由實(shí)施例1中所述方法制備而成。
2、方法：采用昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量18～22g，每組10只。分別分為對(duì)照組、陽性對(duì)照藥氟西汀組（3.6mg.kg-1）、雞血藤提取物高、中、低(8，4，2g藥材.kg-1)劑量組（由實(shí)施例1所述方法制得）。對(duì)照給予同等體積的含0.3%吐溫-80的蒸餾水，各組均連續(xù)灌胃(ig)給藥10d，末次給藥1h后測試。將小鼠單獨(dú)放人高20cm、直徑14cm的圓柱形玻璃缸中，缸內(nèi)水深10cm，水溫(25±2)℃，從小鼠入水后計(jì)時(shí)6min，記錄后4min內(nèi)游泳累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(指小鼠在水中停止掙扎，或顯示漂浮狀態(tài)，僅有微小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面)。
3、結(jié)果：如表2所示，與對(duì)照組比較，雞血藤提取物(8，4，2g藥材.kg-1)連續(xù)ig給予小鼠10d，均可顯著縮短游泳不動(dòng)時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)。
實(shí)驗(yàn)例13雞血藤提取物對(duì)去卵巢結(jié)合慢性不可預(yù)見性溫和刺激的雌性抑郁大鼠的影響
1、儀器與藥品：fa1004電子天平（上海精科天平儀器廠）；鹽酸氟西汀膠囊，禮來蘇州制藥有限公司，批號(hào)：5545aa；雞血藤提取物，由廣西中醫(yī)藥研究院藥理所提供。
2、動(dòng)物分組與處理：雌性sd大鼠60只（廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：scxk(桂)2014-0002），體重200±20g，喂養(yǎng)適應(yīng)1周后，按空腹體重分層隨機(jī)分為5組，每組12只，即：對(duì)照組、模型組、氟西汀（1.8mg.kg-1）、雞血藤提取物高劑量（4g生藥.kg-1）和低劑量（1g生藥.kg-1）（所述雞血藤提取物均由實(shí)施例1所述方法制得）。除對(duì)照組行假手術(shù)外，其余各組均通過手術(shù)摘除雙側(cè)卵巢。術(shù)后肌肉注射抗生素，連續(xù)3天。術(shù)后14天，各組開始給藥，對(duì)照組和模型組給等容量的雙蒸水。同時(shí)，除對(duì)照組外，其余各組均接受慢性不可預(yù)見性溫和刺激（cums）。刺激包括以下：
①禁食24h，②禁水24h，③噪音1h，④傾斜45°12h，⑤冰水游泳6min，⑥通宵照明12h，⑦夾尾1min，⑧擁擠12h，⑨束縛4h，⑩濕墊料12h。每天隨機(jī)選擇2種刺激，共28天。造模之后進(jìn)行行為學(xué)檢測，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如圖1所示。每隔7天早晨測動(dòng)物體重，并記錄結(jié)果。
3、雞血藤提取物對(duì)抑郁大鼠強(qiáng)迫游泳的影響
正式實(shí)驗(yàn)前24h進(jìn)行預(yù)游泳實(shí)驗(yàn)，將大鼠置于直徑50cm，水深30cm，水溫(25±2)℃的圓桶中游泳15min。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，給藥1h后，將大鼠放入與預(yù)實(shí)驗(yàn)環(huán)境相同的圓桶中，觀察5min，記錄各組在整個(gè)5min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)狀態(tài)為：大鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的狀態(tài)。
4、雞血藤提取物對(duì)抑郁大鼠體重、子宮重、及子宮系數(shù)的影響
給藥第30天，將所用動(dòng)物麻醉后，取子宮稱重。計(jì)算子宮系數(shù)[子宮系數(shù)(％)=子宮重量/大鼠體重x100]。
5、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（
6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
（1）雞血藤提取物對(duì)抑郁癥大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響
如表3所示，模型組大鼠游泳不動(dòng)時(shí)間明顯增加，而雞血藤提取物（4g藥材.kg-1）能顯著縮短游泳不動(dòng)時(shí)間,與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05或者p<0.01）。
（2）雞血藤提取物對(duì)抑郁癥大鼠體重、子宮重、及子宮系數(shù)的影響
如表4所示，各組大鼠體重在給藥前（0d）和給藥30天（30d）差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組子宮重和子宮系數(shù)均比對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05或者p<0.01）；各給藥組對(duì)子宮重和子宮系數(shù)都沒有明顯影響（p＞0.05）。