本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領域：
，尤其涉及一種中藥組合物及應用。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)是一種原因不明以認知功能減退為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為進行性智能障礙，記憶力減退，伴有人格和情感改變。隨著我國人口老齡化的日益嚴重，ad已越來越成為一個嚴重的社會問題。因此，尋找各種途徑去實現(xiàn)治療和緩解ad的研究工作都十分必要也具有十分重要的意義。目前ad的治療藥物主要為西藥，傳統(tǒng)治療ad的藥物主要是乙酰膽堿酯酶抑制劑，通過抑制乙酰膽堿酯酶減緩大腦皮層中樞神經(jīng)釋放乙酰膽堿的降解，從而增加乙酰膽堿的濃度，改善ad病人的認知功能和行為障礙，延緩疾病的發(fā)生，但臨床治療效果不佳，而使其臨床應用受到較大的限制。并且乙酰膽堿酯酶抑制劑僅僅解決了“標”的問題，沒有改變“本”，這些藥物僅能在短時期(6～12個月)內(nèi)改善ad患者的癥狀(如認知能力)，對患者的日常生活和神經(jīng)精神癥狀(如情感障礙、焦慮、精神變態(tài)等)沒有顯著的改善。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種具有治療阿爾茨海默病的中藥組合物及應用。本發(fā)明提供了一種中藥組合物，包括遠志皂苷與人參皂苷；所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比小于等于1。優(yōu)選的，所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比為1：(1～2)。優(yōu)選的，所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比為1：1。優(yōu)選的，所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比為1：2。本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備治療和/或改善阿爾茨海默病的藥物或保健食品中的應用。優(yōu)選的，所述治療和/或改善阿爾茨海默病為降低腦內(nèi)乙酰膽堿酶含量。優(yōu)選的，所述治療和/或改善阿爾茨海默病為降低腦內(nèi)p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平與aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。本發(fā)明還提供了一種藥物，包括上述的中藥組合物。本發(fā)明還提供了一種保健食品，包括上述的中藥組合物。本發(fā)明提供了一種中藥組合物，包括遠志皂苷與人參皂苷；所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比小于等于1。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過將遠志皂苷與人參皂苷兩種有效部位合用，顯著改善了阿爾茨海默病大鼠的行為學障礙，有明確的治療阿爾茨海默病作用，且藥效明顯優(yōu)于單用其中任何一種。附圖說明圖1為本發(fā)明實施例1中的各組大鼠的定位巡航紅外熱分布圖；圖2為本發(fā)明實施例1中的各組大鼠的空間探索紅外熱分布圖；圖3為本發(fā)明實施例2中的各組大鼠海馬組織he染色圖；圖4為本發(fā)明實施例3中的各組大鼠蛋白含量表達圖。具體實施方式下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。本發(fā)明提供了一種中藥組合物，包括遠志皂苷與人參皂苷；所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比小于等于1。中醫(yī)認為“腎主智，腎虛則智不足善忘其前言”，腎虛髓空、腦府失養(yǎng)、神機運行失常是阿爾茨海默病(ad)主要病機。人參，五加科人參屬植物，我國的名貴中藥，在中國、歐洲、東南亞、美洲應用廣泛?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載“人參，味甘微寒，主補五臟(肝、心、脾、肺、腎)，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目，開心益智”。遠志，遠志科遠志屬植物，主產(chǎn)與我國東北、華北、西北和華中以及四川等地?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載“遠志，味苦辛溫，安神益智，解郁，治驚悸，健忘，夢遺，失眠，咳嗽多痰，癰疽瘡腫”。本發(fā)明通過將遠志皂苷與人參皂苷兩種有效部位合用，顯著改善了阿爾茨海默病大鼠的行為學障礙，有明確的治療阿爾茨海默病作用，且藥效明顯優(yōu)于單用其中任何一種；經(jīng)本發(fā)明實驗驗證，其可降低腦內(nèi)乙酰膽堿酶含量或降低腦內(nèi)p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平與aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。按照本發(fā)明，所述遠志皂苷與人參皂苷的質(zhì)量比優(yōu)選為1：(1～10)，更優(yōu)選為1：(1～5)，再優(yōu)選為1：(1～2)，最優(yōu)選為1：1或1：2。本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備治療和/或改善阿爾茨海默病的藥物或保健食品中的應用。在本發(fā)明提供的實施例中，治療和/或改善阿爾茨海默病降低腦內(nèi)乙酰膽堿酶含量或降低腦內(nèi)p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平與aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。本發(fā)明還提供了一種藥物，包括上述的中藥組合物；作為優(yōu)選，該藥物還包括藥學上可接受的輔料；作為優(yōu)選，該藥物的劑型為膏劑、顆粒劑、丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、口服劑或糖漿劑。但藥物的劑型并非限定于此，本領域技術(shù)人員認為可行的劑型均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明還提供了一種保健食品，包括本發(fā)明提供的中藥組合物。作為優(yōu)選，該保健食品還包括食品上可接受的食品添加劑。作為優(yōu)選，該保健食品的劑型為顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、片劑、粉劑、軟糖、乳劑或口服液。但保健食品的劑型并非限定于此，本領域技術(shù)人員認為可行的劑型均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。為了進一步說明本發(fā)明，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的一種中藥組合物及應用進行詳細描述。以下實施例中所用的試劑均為市售。實施例1遠志皂苷和人參皂苷組合物改善ad行為學障礙的藥效學研究1.1實驗方法1.1.1實驗分組及給藥wistar大鼠，雄性，體重180～220g，購自吉林大學白求恩醫(yī)學院動物實驗中心，許可證號：scxk(吉)2015-0007。適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為7組，即：空白組，模型組，遠志皂苷組，人參皂苷組，遠志皂苷和人參皂苷組合1:1組，遠志皂苷和人參皂苷組合2:1組，遠志皂苷和人參皂苷組合1:2組。除空白組外，其余各組均腹腔注射d-半乳糖60mg/kg和灌胃alcl3200mg/kg造模，每天1次，連續(xù)60d。第30d開始空白組和模型組按10ml/kg給予雙蒸水，遠志皂苷和人參皂苷組合組分別按300mg遠志皂苷+300mg人參皂苷，400mg遠志皂苷+200mg人參皂苷，200mg遠志皂苷+400mg人參皂苷/kg給予組合物，遠志皂苷組600mg/kg給予遠志皂苷，人參皂苷組均按600mg/kg灌胃給予人參皂苷，每日一次，連續(xù)30d。遠志皂苷和人參皂苷均為總皂苷，質(zhì)量分數(shù)各達到50％以上。1.1.2跳臺行為學實驗末次給藥后，進行大鼠跳臺實驗。實驗時首先將大鼠放在sdt-8跳臺實驗視頻分析系統(tǒng)銅柵上適應5min，然后通以36v電流，以大鼠雙足同時接觸銅柵為觸電，視為錯誤反應，記錄大鼠的錯誤次數(shù)作為學習成績，訓練5min。24h后，重新再次進行實驗，將大鼠置于塑料跳臺上適應5min，然后通以36v電流，記錄第1次跳下平臺的潛伏期和5min內(nèi)的跳下平臺的錯誤次數(shù)，若大鼠停留在平臺上超過5min，其潛伏期以300s計。1.1.3morris行為學實驗分為適應性實驗、定位巡航實驗和空間搜索實驗。適應性實驗：實驗前一天，將大鼠面朝池壁放入水中游泳120s后除濕放回籠中，進行適應。定位航行實驗：在迷宮(直徑120cm，高50cm)內(nèi)注入一定量水，水溫控制在24±2℃。選取4個入水點，并將迷宮等分為4個象限。在其中任一象限正中放置透明塑料平臺(直徑10cm)，沒于水下2cm，并在實驗過程中保持其位置不變。水中加入脫脂奶粉使大鼠不能見到平臺。將大鼠分別從各象限入水點面朝池壁順次放入水中，記錄其在120s內(nèi)尋找并爬上平臺的時間，即為逃避潛伏期，爬上平臺后允許大鼠在平臺上停留20s，間隔60s后進行下一次測試。如果大鼠在120s內(nèi)未能找到平臺，則將其引上平臺并停留20s，記錄其潛伏期為120s。實驗連續(xù)進行5天?？臻g探索實驗：定位航行實驗結(jié)束24h后，取出平臺，在原平臺所在象限的相對象限入水點將大鼠放入水中，采集其120s內(nèi)穿越有效區(qū)域的次數(shù)及原平臺所在象限路程/總路程等實驗參數(shù)。1.1.4體內(nèi)乙酰膽堿酯酶活力的測定(1)樣品的處理行為學實驗結(jié)束后，麻醉動物，取血，冰臺快速取大腦，放入玻璃皿中，玻璃皿加入少量冰冷的生理鹽水漂洗，用干凈的濾紙吸去大腦組織表面的水分和血液。精密稱重，放入小燒杯中。加入少量冰冷的生理鹽水，用眼科剪盡快剪碎組織塊。將剪碎的組織倒入玻璃勻漿器中，再用少許冰冷生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿器中進行冰浴勻漿。然后再加入冷凍的生理鹽水，按腦組織重量與勻漿總體積1：10的比例，稀釋混勻。將制備好的10％腦勻漿以3000rpm/min離心15min，取上清待測。取出的血以2500rpm/min離心10min，取上層血清。測時將血清用生理鹽水按1：9稀釋。(2)腦組織蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍試劑盒測定腦組織蛋白含量。(3)ache活力的測定用改良ellman比色法測定ache的活力，按乙酰膽堿脂酶測定試劑盒的方法測定。設標準管組、不加藥測定管組、受試化合物測定管組(加藥組)，每組均設空白對照管和測定管，大鼠腦組織勻漿液和血清取樣量為每管30μl。反應體系混勻，37℃準確反應6min，然后終止反應，混勻放置15min，在412nm波長測定各管吸光度。血清中ache活力(u/ml)＝(a測定管-a對照管)/(a標準管-a空白管)×標準管濃度(1μmol/ml)/蛋白量(mg/ml)。1.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法采用spss10.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，student’st-test進行組間比較。p<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。1.3實驗結(jié)果1.3.1遠志皂苷和人參皂苷組合物對大鼠跳臺行為學障礙的藥效學研究與空白組比較，模型組大鼠的初次錯誤次數(shù)及24h錯誤次數(shù)均明顯增加，24h錯誤潛伏期縮短；與模型組比較，遠志皂苷和人參皂苷組合組大鼠初次錯誤次數(shù)及24h錯誤次數(shù)明顯減少，24h錯誤潛伏期延長，其中遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷，見表1。表1對ad大鼠記憶獲得和記憶鞏固障礙的影響(n＝10)與空白組比較，#p<0.05；與模型組比較，**p<0.01，*p<0.05。1.3.2遠志皂苷和人參皂苷組合物對大鼠morris水迷宮行為學障礙的藥效學研究1.3.2.1定位巡航實驗1.3.2.1.1各組動物熱紅外軌跡定位巡航紅外熱分布圖(圖1，其中a為空白組，b為模型組，c為遠志人參1:1組，d為遠志人參2:1組，e為遠志人參1:2組，f為遠志皂苷組，g為人參皂苷組)可以看出，空白組動物很快就可以找到目標所在位置(第三象限)，而模型組動物主要在外圍活動，活動區(qū)域在各象限分布無顯著差異，表明模型組大鼠學習記憶能力和記憶獲得能力受損。遠志皂苷和人參皂苷組合組動物可以很快找到目標所在區(qū)域，活動范圍較模型組相比顯著縮小，其中遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷改善ad大鼠學習記憶能力效果好。1.3.2.1.2ad大鼠逃避潛伏期與空白組比較，模型組大鼠5天內(nèi)潛伏期內(nèi)均增加，表明模型組大鼠學習記憶行為能力明顯受損。與模型組比較，遠志皂苷和人參皂苷組合組大鼠5天內(nèi)潛伏期內(nèi)均縮短，以前3天變化明顯，其中遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷，見表2。表2各組動物連續(xù)5天逃避潛伏期(s)第1天第2天第3天第4天第5天空白組36.56±7.7917.91±1.5515.56±3.1811.67±5.0910.41±8.10模型組51.04±3.44#36.54±3.29##29.53±7.35##25.36±7.57#22.78±7.48#遠志人參1：1組44.49±3.58*29.53±7.62*20.05±5.13*18.38±3.49#16.69±5.41遠志人參2：1組49.04±4.0734.04±3.9527.03±5.1523.36±7.5719.78±7.48遠志人參1：2組42.13±2.98**27.33±3.12**19.15±2.93**16.82±5.91**15.99±6.21*遠志皂苷組47.23±4.21*31.48±2.33*25.72±4.45*20.46±5.46*18.44±6.22人參皂苷組48.32±5.47*33.15±3.46*28.41±8.82*22.56±6.78*17.86±2.74與空白組比較，##p<0.01；與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。1.3.2.2空間搜索實驗1.3.2.2.1各組動物熱紅外軌跡空間探索紅外熱分布圖(圖2，其中a為空白組，b為模型組，c為遠志人參1:1組，d為遠志人參2:1組，e為遠志人參1:2組，f為遠志皂苷組，g為人參皂苷組)可以看出，空白組大鼠在原平臺所在第三象限(原象限)出現(xiàn)的頻率較多，而模型組動物主要在外圍活動，活動區(qū)域在各象限分布無顯著差異，上述結(jié)果表明模型組大鼠記憶鞏固能力受損。與模型組比較，其中遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷改善ad大鼠記憶鞏固能力效果好。1.3.2.1.2各組動物空間搜索區(qū)域運動情況與空白組比較，模型組大鼠在有效區(qū)域(第三象限)的運動時間、運動距離及進入有效區(qū)域的次數(shù)均減少，進入有效區(qū)域的百分比明顯減少。與模型組比較，其中遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，進入有效區(qū)域?qū)Φ倪\動時間、距離次數(shù)均有所增加，在第三象限的游泳時間和游泳路程，均有所增加，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷，見表3。表3各組動物空間搜索實驗數(shù)據(jù)與空白組比較，#p<0.05；與模型組比較，**p<0.01，*p<0.05。1.3.3遠志皂苷和人參皂苷組合物對ad大鼠腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量的影響與空白組比較，模型組大鼠的腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶水平明顯增加；與模型組比較，遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷，見表4。表4人參遠志配伍對ad大鼠腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶的影響(n＝10)組別ache活力(u/mg組織)空白組0.079±0.033模型組0.199±0.023##遠志人參1：1組0.123±0.021*遠志人參2：1組0.153±0.202*遠志人參1：2組0.119±0.123**遠志皂苷組0.144±0.011*人參皂苷組0.157±0.031*與空白組比較，##p<0.01；與模型組比較，**p<0.01，*p<0.05。1.4結(jié)論跳臺實驗和morris水迷宮實驗從行為學評價遠志皂苷、人參皂苷組合物以及單用遠志皂苷或人參皂苷的體內(nèi)抗ad作用，表明人參皂苷組合物能明顯增加ad大鼠記憶獲得、鞏固能力，改善認知障礙，降低腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶含量，效果優(yōu)于單用遠志皂苷或人參皂苷。實施例2遠志皂苷和人參皂苷組合物對ad大鼠腦海馬組織病理形態(tài)學研究2.1實驗方法大鼠斷頭，取大腦，分離海馬組織和皮層，海馬組織浸入4％多聚甲醛中固定，經(jīng)脫水、浸蠟、石蠟包埋制備石蠟切片，然后依次經(jīng)過二甲苯脫蠟、降梯度酒精水化、蘇木素及伊紅染色、升梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片的操作，制備he染色的心肌組織切片，于光學顯微鏡下觀察海馬組織的病理改變。2.2實驗結(jié)果取各組大鼠腦組織，進行海馬部位he染色，結(jié)果如下：空白組海馬區(qū)與皮層下神經(jīng)元完整，細胞核未見變性，細胞核內(nèi)紫色致密，神經(jīng)元排列緊密。模型組海馬區(qū)與皮層下神經(jīng)元發(fā)生變性，細胞核質(zhì)疏松，遠志人參1：1組和遠志人參1：2組，比單用遠志皂苷或人參皂苷任何一種效果明顯，神經(jīng)元排列松散神經(jīng)元變性程度較模型組輕，神經(jīng)元排列較模型組緊密，神經(jīng)元變性數(shù)量少于遠志皂苷組及人參皂苷組，遠志人參2：1組效果不如單用遠志皂苷或人參皂苷，見圖3，圖3為各組大鼠海馬組織he染色圖，其中a為空白組，b為模型組，c為遠志皂苷：人參皂苷1:1組，d為遠志皂苷：人參皂苷2:1組，e為遠志皂苷：人參皂苷1:2組，f為遠志皂苷組，g為人參皂苷組。實施例3遠志皂苷和人參皂苷組合物對ad大鼠腦內(nèi)相關蛋白表達的影響3.1實驗方法采用免疫蛋白印跡法對分別為空白組，模型組，遠志皂苷組，人參皂苷組，遠志皂苷和人參皂苷組合組，大鼠腦腦組織中與ad發(fā)生、發(fā)展相關的四種蛋白：p-tau、gsk3、aβ、pp2a水平進行表達，以gapdh作為內(nèi)參蛋白，使用imagej圖像處理軟件進行灰度分析。3.2實驗結(jié)果與空白組比較，模型組aβ水平及p-tau、gsk3水平增加；與模型組比較，遠志皂苷和人參皂苷組合物明顯能降低腦內(nèi)p-tau、gsk3、aβ三種蛋白水平，增加pp2a蛋白水平，改善ad大鼠的認知障礙，結(jié)果見圖4，圖4為各組大鼠蛋白含量表達圖，其中a為空白組，b為模型組，c為遠志皂苷和人參皂苷1:1組合組，d為遠志皂苷組，e為人參皂苷組。3.3結(jié)論采用免疫蛋白印跡法對ad大鼠腦內(nèi)與ad發(fā)生、發(fā)展相關的四種蛋白：p-tau、gsk3、aβ、pp2a水平進行表達，結(jié)果表明，人參皂苷組合物明顯能降低腦內(nèi)p-tau、gsk3、aβ三種蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。其抗ad機制可能與影響tau蛋白磷酸化和aβ聚集有關。當前第1頁12