本發(fā)明公開了一種促進骨再生天然骨修復(fù)材料的制備方法，屬于醫(yī)用材料制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

當(dāng)前世界上臨床用于骨修復(fù)的治療方法有自體骨移植、同種異體骨移植、人工骨替代物等。自體骨移植存在供區(qū)損傷、植骨量不足、不能制備特殊形狀等限制，同種異體骨易致排斥反應(yīng)，而人工合成骨有較好的骨傳導(dǎo)性與一定的機械強度，植入體內(nèi)主要起支架作用引導(dǎo)骨再生，以后慢慢被生物降解、清除，它的骨傳導(dǎo)性較好，因此，人工骨修復(fù)材料已逐漸成為國際上用于臨床骨缺損修復(fù)的主要材料。

目前，研究和已臨床應(yīng)用的人工骨修復(fù)材料的種類繁多，按其基質(zhì)材料的性質(zhì)可大致分為有機高分子材料、無機材料和復(fù)合材料。但是，現(xiàn)有的這些人工骨修復(fù)材料僅具有骨傳導(dǎo)性，缺乏骨誘導(dǎo)性，成骨量少，且人工骨修復(fù)材料在抗壓強度和彈性模量上與其周圍的正常組織尚有一定的差別，在受力和疲勞之后斷裂和界面有剝離現(xiàn)象，對于修復(fù)大段的骨缺損，由于其抗壓強度和抗彎強度與生物自體骨有一定的差別，受力后的形變常使植骨失敗。因此，尋求一種骨誘導(dǎo)性好、成骨速度快，且機械性能優(yōu)異的骨修復(fù)材料成為業(yè)內(nèi)亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對現(xiàn)有的骨修復(fù)材料僅具有骨傳導(dǎo)性，缺乏骨誘導(dǎo)性，成骨量少，且人工骨修復(fù)材料的抗壓強度和彈性模量不理想的缺陷，提供一種促進骨再生骨修復(fù)材料的制備方法。

為了解決技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

1.一種促進骨再生天然骨修復(fù)材料，包括支架材料和生長膜，其特征在于：在支架材料表面包裹一層生長膜。

所述的支架材料為雙相磷酸鈣與羧甲基纖維素按質(zhì)量比10：1～40：1的復(fù)合粉末，與去離子水混合后裝入模具中，在3～5mpa壓力下壓制成型后干燥制得。

所述的雙相磷酸鈣為動物骨經(jīng)脫脂脫油處理后裝入馬弗爐中，以5～10℃/min速率升溫至500～600℃，煅燒1～2h后，繼續(xù)升溫至1350～1400℃煅燒6～8h，再靜置降溫至1000～1100℃煅燒1～2h，冷卻至室溫后球磨過篩制得。

所述的動物骨為牛松質(zhì)骨、豬松質(zhì)骨、羊松質(zhì)骨中的一種。

所述的生長膜為骨形態(tài)發(fā)生蛋白與血小板衍生生長因子按質(zhì)量比1：1混合后培養(yǎng)活化，再在支架材料上培養(yǎng)生長5～10天后形成。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明將動物骨蒸煮除雜后干燥粉碎，過篩制得粗品磷酸鈣，再將粗品磷酸鈣煅燒，生成高強度的α-磷酸三鈣晶型和具有高降解性、高生物活性以及優(yōu)異骨誘導(dǎo)性的β-磷酸三鈣晶型，隨后經(jīng)球磨過篩后與羧甲基纖維素復(fù)配，利用纖維交織的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使纖維與其周圍雙相磷酸鈣晶體纏繞緊密，呈團聚簇?fù)頎顟B(tài)，強化制得的支架材料的機械性能，隨后利用骨形態(tài)發(fā)生蛋白、血小板衍生生長因子與磷酸鹽緩沖液混合制備磷酸鹽培養(yǎng)液，再將支架材料浸泡在磷酸鹽培養(yǎng)液中，通過支架材料中磷酸鈣的多孔結(jié)構(gòu)協(xié)同羧甲基纖維素表面的活性位點，培養(yǎng)生長膜，促進蛋白和生長因子的粘附，進而促進骨的再生，最后將支架材料取出晾干并滅菌，即可得促進骨再生天然骨修復(fù)材料，本發(fā)明制得的骨修復(fù)材料機械強度高，與人體的生物相容性好，同時具有很好的骨誘導(dǎo)活性，可以較快地完成骨缺損的修復(fù)，且生物降解性較好，具有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實施方式

為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。

稱取1～2kg新鮮牛骨，用去離子水洗滌牛骨3～5次，再將洗滌后的牛骨加入2～3l去離子水中，在95～100℃下蒸煮3～5h，冷卻至室溫后取出牛骨，并用刮刀去除牛骨表面軟組織，得預(yù)處理牛骨，將預(yù)處理牛骨浸泡在2～3l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%氫氧化鈉溶液中，在60～70℃下浸泡6～8h后，取出牛骨并轉(zhuǎn)入1～2l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%雙氧水中浸泡10～12h，取出牛骨，得除雜處理牛骨，再將除雜處理牛骨用1～2l無水乙醇浸泡清洗1～2h后轉(zhuǎn)入鼓風(fēng)干燥箱中，在105～110℃下干燥至恒重，再將干燥后的產(chǎn)物裝入粉碎機中粉碎，過20目篩，得粗品磷酸鈣，再將粗品磷酸鈣裝入馬弗爐中，以5～10℃/min速率升溫至500～600℃，煅燒1～2h后，繼續(xù)升溫至1350～1400℃煅燒6～8h，再靜置降溫至1000～1100℃煅燒1～2h，冷卻至室溫后，將煅燒產(chǎn)物轉(zhuǎn)入球磨機中，以300～400r/min轉(zhuǎn)速球磨30～40min，過200目篩，得雙相磷酸鈣粉末，稱取5～10g羧甲基纖維素，100～200g雙相磷酸鈣粉末，加入300～500ml無水乙醇中，以300w超聲波超聲分散20～30min后過濾，得濾渣，將濾渣置于干燥箱中，在35～40℃下干燥3～4h后轉(zhuǎn)入研缽中研磨，過200目篩，得復(fù)合粉末，再稱取80～100g復(fù)合粉末與30～40ml去離子水混合后裝入模具中，并以3～5mpa壓力壓制成型，再將模具置于干燥箱中，在105～110℃下干燥至恒重，冷卻至室溫后脫模，得支架材料，最后稱取3～5g骨形態(tài)發(fā)生蛋白、3～5g血小板衍生生長因子，加入到盛有200～300mlph為7.4磷酸鹽緩沖液的800ml燒杯中，在36～37℃下培養(yǎng)1～2天，得磷酸鹽培養(yǎng)液，再將支架材料浸泡在磷酸鹽培養(yǎng)液中，并將燒杯轉(zhuǎn)入恒溫恒濕箱中，在36～37℃下培養(yǎng)生長7～10天后，將支架材料取出晾干，滅菌，即可得促進骨再生天然骨修復(fù)材料。

實例1

稱取1kg新鮮牛骨，用去離子水洗滌牛骨3次，再將洗滌后的牛骨加入2l去離子水中，在95℃下蒸煮3h，冷卻至室溫后取出牛骨，并用刮刀去除牛骨表面軟組織，得預(yù)處理牛骨，將預(yù)處理牛骨浸泡在2l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%氫氧化鈉溶液中，在60℃下浸泡6h后，取出牛骨并轉(zhuǎn)入1l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%雙氧水中浸泡10h，取出牛骨，得除雜處理牛骨，再將除雜處理牛骨用1l無水乙醇浸泡清洗1h后轉(zhuǎn)入鼓風(fēng)干燥箱中，在105℃下干燥至恒重，再將干燥后的產(chǎn)物裝入粉碎機中粉碎，過20目篩，得粗品磷酸鈣，再將粗品磷酸鈣裝入馬弗爐中，以5℃/min速率升溫至500℃，煅燒1h后，繼續(xù)升溫至1350℃煅燒6h，再靜置降溫至1000℃煅燒1h，冷卻至室溫后，將煅燒產(chǎn)物轉(zhuǎn)入球磨機中，以300r/min轉(zhuǎn)速球磨30min，過200目篩，得雙相磷酸鈣粉末，稱取5g羧甲基纖維素，100g雙相磷酸鈣粉末，加入300ml無水乙醇中，以300w超聲波超聲分散20min后過濾，得濾渣，將濾渣置于干燥箱中，在35℃下干燥3h后轉(zhuǎn)入研缽中研磨，過200目篩，得復(fù)合粉末，再稱取80g復(fù)合粉末與30ml去離子水混合后裝入模具中，并以3mpa壓力壓制成型，再將模具置于干燥箱中，在105℃下干燥至恒重，冷卻至室溫后脫模，得支架材料，最后稱取3g骨形態(tài)發(fā)生蛋白、3g血小板衍生生長因子，加入到盛有200mlph為7.4磷酸鹽緩沖液的800ml燒杯中，在36℃下培養(yǎng)1天，得磷酸鹽培養(yǎng)液，再將支架材料浸泡在磷酸鹽培養(yǎng)液中，并將燒杯轉(zhuǎn)入恒溫恒濕箱中，在36℃下培養(yǎng)生長7天后，將支架材料取出晾干，滅菌，即可得促進骨再生天然骨修復(fù)材料。

實例2

稱取1kg新鮮牛骨，用去離子水洗滌牛骨4次，再將洗滌后的牛骨加入2l去離子水中，在98℃下蒸煮4h，冷卻至室溫后取出牛骨，并用刮刀去除牛骨表面軟組織，得預(yù)處理牛骨，將預(yù)處理牛骨浸泡在2l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%氫氧化鈉溶液中，在65℃下浸泡7h后，取出牛骨并轉(zhuǎn)入1l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%雙氧水中浸泡11h，取出牛骨，得除雜處理牛骨，再將除雜處理牛骨用1l無水乙醇浸泡清洗1h后轉(zhuǎn)入鼓風(fēng)干燥箱中，在108℃下干燥至恒重，再將干燥后的產(chǎn)物裝入粉碎機中粉碎，過20目篩，得粗品磷酸鈣，再將粗品磷酸鈣裝入馬弗爐中，以8℃/min速率升溫至550℃，煅燒1h后，繼續(xù)升溫至1375℃煅燒7h，再靜置降溫至1050℃煅燒1h，冷卻至室溫后，將煅燒產(chǎn)物轉(zhuǎn)入球磨機中，以350r/min轉(zhuǎn)速球磨35min，過200目篩，得雙相磷酸鈣粉末，稱取8g羧甲基纖維素，150g雙相磷酸鈣粉末，加入400ml無水乙醇中，以300w超聲波超聲分散25min后過濾，得濾渣，將濾渣置于干燥箱中，在38℃下干燥3h后轉(zhuǎn)入研缽中研磨，過200目篩，得復(fù)合粉末，再稱取90g復(fù)合粉末與35ml去離子水混合后裝入模具中，并以4mpa壓力壓制成型，再將模具置于干燥箱中，在108℃下干燥至恒重，冷卻至室溫后脫模，得支架材料，最后稱取4g骨形態(tài)發(fā)生蛋白、4g血小板衍生生長因子，加入到盛有250mlph為7.4磷酸鹽緩沖液的800ml燒杯中，在36℃下培養(yǎng)1天，得磷酸鹽培養(yǎng)液，再將支架材料浸泡在磷酸鹽培養(yǎng)液中，并將燒杯轉(zhuǎn)入恒溫恒濕箱中，在36℃下培養(yǎng)生長9天后，將支架材料取出晾干，滅菌，即可得促進骨再生天然骨修復(fù)材料。

實例3

稱取2kg新鮮牛骨，用去離子水洗滌牛骨5次，再將洗滌后的牛骨加入3l去離子水中，在100℃下蒸煮5h，冷卻至室溫后取出牛骨，并用刮刀去除牛骨表面軟組織，得預(yù)處理牛骨，將預(yù)處理牛骨浸泡在3l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%氫氧化鈉溶液中，在70℃下浸泡8h后，取出牛骨并轉(zhuǎn)入2l質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%雙氧水中浸泡12h，取出牛骨，得除雜處理牛骨，再將除雜處理牛骨用2l無水乙醇浸泡清洗2h后轉(zhuǎn)入鼓風(fēng)干燥箱中，在110℃下干燥至恒重，再將干燥后的產(chǎn)物裝入粉碎機中粉碎，過20目篩，得粗品磷酸鈣，再將粗品磷酸鈣裝入馬弗爐中，以10℃/min速率升溫至600℃，煅燒2h后，繼續(xù)升溫至1400℃煅燒8h，再靜置降溫至1100℃煅燒2h，冷卻至室溫后，將煅燒產(chǎn)物轉(zhuǎn)入球磨機中，以400r/min轉(zhuǎn)速球磨40min，過200目篩，得雙相磷酸鈣粉末，稱取10g羧甲基纖維素，200g雙相磷酸鈣粉末，加入500ml無水乙醇中，以300w超聲波超聲分散30min后過濾，得濾渣，將濾渣置于干燥箱中，在40℃下干燥4h后轉(zhuǎn)入研缽中研磨，過200目篩，得復(fù)合粉末，再稱取100g復(fù)合粉末與40ml去離子水混合后裝入模具中，并以5mpa壓力壓制成型，再將模具置于干燥箱中，在110℃下干燥至恒重，冷卻至室溫后脫模，得支架材料，最后稱取5g骨形態(tài)發(fā)生蛋白、5g血小板衍生生長因子，加入到盛有300mlph為7.4磷酸鹽緩沖液的800ml燒杯中，在37℃下培養(yǎng)2天，得磷酸鹽培養(yǎng)液，再將支架材料浸泡在磷酸鹽培養(yǎng)液中，并將燒杯轉(zhuǎn)入恒溫恒濕箱中，在37℃下培養(yǎng)生長10天后，將支架材料取出晾干，滅菌，即可得促進骨再生天然骨修復(fù)材料。

對實例1～3制得的促進骨再生天然骨修復(fù)材料和聚乳酸-磷酸鈣復(fù)合骨修復(fù)材料（對比例）進行性能測試，其檢測結(jié)果如下表：

從上表可以看出，本發(fā)明制得的促進骨再生天然骨修復(fù)材料具有較好的骨誘導(dǎo)性及生物相容性，可加速機體成骨時間，同時本發(fā)明骨修復(fù)材料機械強度高，受力后不易變形。