本發(fā)明屬于保健品領(lǐng)域，具體的涉及一種具有抗乳腺癌功能的含有米糠黃酮的保健品。

背景技術(shù)：

近年來(lái)女性惡性腫瘤乳腺癌的發(fā)病率持續(xù)上升,發(fā)病年輕化趨勢(shì)十分明顯，目前乳腺癌的主要治療手段有手術(shù)治療、放射治療、內(nèi)分泌治療、化學(xué)藥物治療等手段，如何更有效地治療乳腺癌是目前巫待解決的問題。中藥是祖國(guó)醫(yī)學(xué)用來(lái)防治疾病的有力武器，中藥治療腫瘤強(qiáng)調(diào)調(diào)節(jié)與平衡的原則，恢復(fù)和增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)部的抗病能力，從而達(dá)到陰陽(yáng)平衡治療腫瘤的目的。黃酮類化合物具有多種生物活性,包括心血管保健、抗病毒、抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、肝保健以及抗腫瘤等活性,是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。大量研究表明,黃酮類化合物用于腫瘤的預(yù)防及治療，具有天然、低毒、高效的特點(diǎn),具抗腫瘤機(jī)制涉及腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段。如槲皮素具抗氧化作用,可抑制相關(guān)酶的活性,降低腫瘤細(xì)胞耐藥性,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；水飛薊素也具抗氧化及抑制相關(guān)酶活性,可誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯；藤黃酸可抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤血管生成,抑制端粒酶活性,調(diào)控相關(guān)癌癥基因/抑癌基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄等。鑒于上述原因，人們把目光轉(zhuǎn)向天然抗腫瘤藥物的研發(fā)上。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是以我國(guó)廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產(chǎn)物米糠出發(fā)，制備米糠黃酮和其他中藥提取物混合，提供一種抗乳腺癌的天然保健品。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮50-70％，巴戟天提取物5-10％，青木香提取物5-10％，

豬苓提取物5-10％，淫羊藿提取物5-10％，柴胡提取物5-10％。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述米糠黃酮的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提?。毫弦罕劝促|(zhì)量比1:10-1:30，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為120-150u/g，進(jìn)行熱水浸提，控制溫度為50-60℃，ph范圍值4.0-5.0，酶解時(shí)間為2-3h，離心，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進(jìn)行乙醇輔助提?。?/p>

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝促|(zhì)量比1:20-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50-60％，提取時(shí)間為2-3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進(jìn)行超聲浸提；

3)超聲浸提：料液比按質(zhì)量比1:20-1:30，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50-60％，超聲波功率為160-200w，超聲時(shí)間為20-40min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進(jìn)行超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得到粗米糠黃酮干粉。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述巴戟天提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的巴戟天固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取巴戟天固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得巴戟天提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述青木香提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青木香固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取青木香固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得青木香提取物。

所述的含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述豬苓提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的豬苓固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取豬苓固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得豬苓提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述淫羊藿提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的淫羊藿固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取淫羊藿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得淫羊藿提取物。

所述含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，所述柴胡提取物的制備方法：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的柴胡固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取柴胡固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得柴胡提取物。

本發(fā)明的有益效果是：米糠粉末是稻谷脫殼后精碾米時(shí)的副產(chǎn)物，但因外觀差、有異味至今未得到充分利用，且大量的米糠堆積也造成了環(huán)境的污染，本發(fā)明以米糠中提取的黃酮作為活性物質(zhì)，制備抗乳腺癌保健品或藥品，提取方法簡(jiǎn)單，不存在合成藥劑的毒副作用，中間產(chǎn)物及終產(chǎn)物均無(wú)毒，安全性高，生產(chǎn)成本低，既有助于醫(yī)療衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，又能解決環(huán)境污染的問題，因此擁有十分廣闊市場(chǎng)前景，適合工業(yè)生產(chǎn)。

本發(fā)明以米糠中提取的黃酮作為抗乳腺癌的核心功能性原料，集多味抗乳腺癌類中藥為一體，解決了傳統(tǒng)中藥原料單一、療效差等缺點(diǎn)，是一味較為理想的治療乳腺癌的中藥制劑，既符合營(yíng)養(yǎng)學(xué)合理搭配規(guī)律，又使得所選原料之間能夠協(xié)同作用，形成具有抗乳腺癌的黃酮、中草藥混合保健品。本發(fā)明通過對(duì)人體外乳腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)米糠黃酮的組合物對(duì)體外腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制作用，對(duì)于乳腺癌的防治有著非常顯著的效果，可按常規(guī)制劑工藝制成各種劑型，治療乳腺癌療效顯著。

附圖說(shuō)明

圖1是米糠黃酮組合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7細(xì)胞生長(zhǎng)影響。

圖2是米糠黃酮組合物抑制mcf-7細(xì)胞集落形成的集落試驗(yàn)結(jié)果。

圖3是米糠黃酮組合物抑制mcf-7細(xì)胞遷移試驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

(一)米糠黃酮的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取米糠黃酮，步驟如下：

1)纖維素酶酶解：將米糠去除雜質(zhì)，干燥，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，制成米糠粉末。料液比按質(zhì)量比1:20，將米糠粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進(jìn)行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph4.5，酶解時(shí)間為2h，4000r/min進(jìn)行離心15min，過濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進(jìn)行乙醇輔助提??；

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝窗促|(zhì)量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％，提取時(shí)間為3h，離心，過濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進(jìn)行超聲提??；

3)超聲浸提：料液比按質(zhì)量比1:20，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％，超聲波功率為180w，超聲時(shí)間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濾紙初過濾后，用濾膜進(jìn)行超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得到粗米糠黃酮干粉。

(二)巴戟天提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的巴戟天固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取巴戟天固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得巴戟天提取物。

(三)青木香提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的青木香固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取青木香固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得青木香提取物。

(四)豬苓提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的豬苓固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取豬苓固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得豬苓提取物。

(五)淫羊藿提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的淫羊藿固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取淫羊藿固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得淫羊藿提取物。

(六)柴胡提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的柴胡固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取柴胡固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得柴胡提取物。

(七)含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品組合物(簡(jiǎn)稱米糠黃酮組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮60％，巴戟天提取物10％，青木香提取物5％，

豬苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物5％。

(八)mtt實(shí)驗(yàn)

本實(shí)施例使用人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7細(xì)胞，采用mtt法檢測(cè)米糠黃酮組合物體外抗癌活性，實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的乳腺癌癌細(xì)胞系(mcf-7)細(xì)胞接種于96孔板，過夜培養(yǎng)使其貼壁；

2)米糠黃酮組合物的濃度(12.5、25和50mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h；

5)處理結(jié)束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過測(cè)量每個(gè)孔在490nm處的吸光度值來(lái)評(píng)估m(xù)cf-7細(xì)胞的增值；結(jié)果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的米糠黃酮組合物(12.5、25和50mg/ml)分別孵育mcf-7細(xì)胞24h，然后利用mtt比色法檢測(cè)。結(jié)果顯示，處理乳腺癌細(xì)胞一段時(shí)間后，濃度為25和50mg/ml的米糠黃酮組合物均表現(xiàn)出顯著的抑制作用，濃度為50mg/ml組抑制率在24h后達(dá)到了71％，結(jié)果表明，米糠黃酮組合物在體外可抑制人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。

(九)集落形成實(shí)驗(yàn)

不同的處理組的乳腺癌細(xì)胞以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度接種于孔板上，培養(yǎng)過夜使其貼壁。分別加入25和50mg/ml的米糠黃酮組合物培養(yǎng)10d，吸出培養(yǎng)基，每孔用pbs仔細(xì)洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結(jié)晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結(jié)果如圖2所示。

如圖2所示，米糠黃酮組合物抑制乳腺癌細(xì)胞集落形成的集落試驗(yàn)結(jié)果。米糠黃酮組合物孵育mcf-7細(xì)胞一段時(shí)間后，集落數(shù)量與對(duì)照組相比明顯降低。24小時(shí)后濃度為25mg/ml時(shí)能夠顯著減少乳腺癌細(xì)胞形成的集落，濃度為50mg/ml時(shí)集落的減少極顯著。

(十)transwell實(shí)驗(yàn)

腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內(nèi)孔大小為8.0μm。將mcf-7細(xì)胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計(jì)數(shù)，并用無(wú)血清dmem培養(yǎng)基重懸。大約1×10⁵細(xì)胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基。細(xì)胞放在37℃培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后，上層小室內(nèi)表面的細(xì)胞被遷移。將穿過小室的細(xì)胞固定和染色并在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組做三個(gè)平行取其平均值，結(jié)果如圖3所示。

由圖3可見，腫瘤細(xì)胞的一個(gè)重要特點(diǎn)是他們具有入侵和遷移到遠(yuǎn)端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實(shí)驗(yàn)分析米糠黃酮組合物對(duì)mcf-7細(xì)胞的遷移影響。如圖3所示，與對(duì)照組相比，米糠黃酮組合物處理組mcf-7細(xì)胞跨膜遷移的數(shù)量大幅下降，結(jié)果顯示米糠黃酮組合物可以顯著抑制mcf-7細(xì)胞遷移。

實(shí)施例2含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮70％，巴戟天提取物5％，青木香提取物5％，

豬苓提取物5％，淫羊藿提取物5％，柴胡提取物10％。

實(shí)施例3含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品

含有米糠黃酮的抗乳腺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

米糠黃酮50％，巴戟天提取物10％，青木香提取物10％，

豬苓提取物10％，淫羊藿提取物10％，柴胡提取物10％。