本發(fā)明涉及一種治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物及其制備方法，屬于藥品技術(shù)的領(lǐng)域。

技術(shù)背景

糖尿病周圍神經(jīng)病變(dpn)是糖尿病三大并發(fā)癥之一，也是糖尿病最常見(jiàn)、最復(fù)雜、最容易忽視的并發(fā)癥。糖尿病患者終生dpn發(fā)生率超過(guò)60％，其中36％存在嚴(yán)重的難治性疼痛，出現(xiàn)dpn后，3年生存率約為53％。糖尿病周圍神經(jīng)病變不僅給患者帶來(lái)劇烈的疼痛，引起糖尿病患者高致殘率與致死率，還給患者帶來(lái)了極大的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)公布的《中國(guó)糖尿病及代謝綜合征流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告》顯示，我國(guó)糖尿病的發(fā)生率呈現(xiàn)快速增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，國(guó)內(nèi)大中城市成年人糖尿病的患病率已達(dá)到了11.66％，據(jù)此推算，我國(guó)城市糖尿病患者已超過(guò)了4100多萬(wàn)人，。

dpn的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多變，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于發(fā)病機(jī)制尚未明確，暫無(wú)可靠的治療藥物，臨床療效較為有限。而中醫(yī)在糖尿病(消渴癥)周圍神經(jīng)病變(痹證、血痹、痿證)積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)于早期診斷與治療有著非常顯著的優(yōu)勢(shì)。然而中醫(yī)藥治療dpn尚有不足之處:(1)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于中藥組方藥理的研究甚少，諸如中成藥、經(jīng)驗(yàn)方、經(jīng)方治療dpn僅局限于療效的分析，尚缺乏科學(xué)的依據(jù)來(lái)證明療效；(2)中藥治療往往比同類口服西藥價(jià)格高，而且療程越長(zhǎng)，價(jià)格的差異越明顯；(3)對(duì)于中醫(yī)藥治療dpn的副作用的研究甚少，機(jī)理不清。

中醫(yī)藥對(duì)于dpn的早期診斷與治療有著非常顯著的優(yōu)勢(shì)。經(jīng)絡(luò)舒寧膠囊在原方(丹參、三七、水飛薊素)的基礎(chǔ)上，將中藥復(fù)方制劑提升為有效部位組合藥物，以藥效為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行了有效部位拆方研究，確定了最佳有效部位組合的，不僅保留了原中藥的性味功能，而且有明確復(fù)方制劑的藥理、質(zhì)量可控的化學(xué)成分體系、規(guī)范的制劑工藝等，從而保證了安全性和穩(wěn)定性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的，是提供一種治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物及其制備方法。本發(fā)明在丹參、三七、水飛薊素的基礎(chǔ)上，將中藥復(fù)方制劑提升為有效部位組合藥物，以藥效為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行了有效部位拆方研究，確定了最佳有效部位組合的，不僅保留了原中藥的性味功能，而且有明確復(fù)方制劑的藥理、質(zhì)量可控的化學(xué)成分體系、規(guī)范的制劑工藝等，從而保證了安全性和穩(wěn)定性。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物，按照重量份計(jì)算，主要由丹參總酚酸提取物8-28份、丹參酮提取物90-110份、三七總皂苷8-28份、水飛薊素20-40份和微晶纖維素68-88份制備而成。

前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中，按照重量份計(jì)算，主要由丹參總酚酸提取物15-21份、丹參酮提取物95-105份、三七總皂苷15-21份、水飛薊素25-35份和微晶纖維素75-81份制備而成。

前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中，按照重量份計(jì)算，主要由丹參總酚酸提取物18份、丹參酮提取物100份、三七總皂苷18份、水飛薊素30份和微晶纖維素78份制備而成。

一種前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物的制備方法，取上述原料，可加入輔料，可以不加輔料，制成藥物制劑。

前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物的制備方法，制劑為口服制劑。

前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物的制備方法，所述口服制劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑或丸劑。

前述的治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物的制備方法，所述膠囊劑這樣制備：以上四味，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，配研混勻，加入微晶纖維素，混勻，裝入膠囊，即得。

實(shí)驗(yàn)例1工藝研究

1儀器與試藥

auy220電子分析天平(shimadzu)；lrh-150s恒溫恒濕培養(yǎng)箱(廣東醫(yī)療器械廠)；遠(yuǎn)紅外鼓風(fēng)干燥箱(上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；丹酚酸提取物(批號(hào)：20120801，貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院制劑實(shí)驗(yàn)室自制)；丹參酮提取物(批號(hào)：20121001，貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院制劑實(shí)驗(yàn)室自制)；三七總皂苷提取物(昆明雙星科技有限公司，批號(hào)：090910)；水飛薊素；乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纖維素、糊精均為藥用級(jí)；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1輔料種類的選擇

2.1.1混合粉的制備

分別以糊精、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纖維素、乳糖為輔料，設(shè)計(jì)全藥粉及藥粉與輔料的混合粉配伍的6個(gè)不同處方，按表1所示，稱取主藥與輔料(均過(guò)100目篩)，混勻，置干燥器內(nèi)備用。

表1不同輔料與主藥的配伍比例(g)

2.1.2休止角的測(cè)定

采用固定漏斗法，將3只漏斗串聯(lián)并放置于水平固定的繪圖紙上方1cm高度處，小心地將不同輔料制成的藥粉分別沿斗壁倒入最上方的漏斗中，一直到漏斗下形成的圓錐體的尖端接觸到最下面漏斗的下口為止，測(cè)出圓錐體底部的直徑，計(jì)算出休止角α。處方見(jiàn)表2。

表2主藥與輔料比例對(duì)堆密度及流動(dòng)性的影響

休止角越小，說(shuō)明流動(dòng)性越好。一般認(rèn)為α≤30°時(shí)流動(dòng)性好，α≤40°時(shí)可以滿足生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)流動(dòng)性的要求。由結(jié)果可知，除藥粉加入乳糖外，其余各處方可滿足生產(chǎn)要求，且藥粉加入微晶纖維素后，休止角最小，流動(dòng)性最好。

2.1.3堆密度的測(cè)定

采用量筒法，精密稱取2g左右的混合粉，置10ml量筒中，在距離木板5cm的高度使量筒垂直自由落下，反復(fù)5次振動(dòng)后，測(cè)定混合粉的體積，共測(cè)定5次，計(jì)算堆密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.4吸濕率的測(cè)定

取底部盛有nacl過(guò)飽和溶液的玻璃干燥器，放入25℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫24h，此時(shí)干燥器內(nèi)的相對(duì)濕度為75％。在已恒重的稱量瓶底部，放入厚約2mm的藥粉，準(zhǔn)確稱量后置于nacl過(guò)飽和溶液的玻璃干燥器內(nèi)(稱量瓶瓶蓋打開(kāi))，分別于2、4、6、8、10、12、24、48h后稱量(m)，計(jì)算吸濕率，結(jié)果見(jiàn)圖1。

注：吸濕率＝(m吸濕后－m吸濕前)/m吸濕前×100％

由圖1可知，藥粉加入微晶纖維素或可溶性淀粉后，吸濕率均有大幅度降低。而藥粉加入糊精、乳糖或甘露醇后，吸濕率反而升高；且不同輔料中以微晶纖維素防潮性能最佳，所以選擇微晶纖維素作為該藥粉的成型輔料。

2.2輔料用量的選擇

2.2.1混合粉的制備

分別以不同用量的微晶纖維素為輔料，設(shè)計(jì)藥粉與不同用量輔料的混合粉配伍的6個(gè)處方，按表3所示，稱取主藥與微晶纖維素(均過(guò)100目篩)，混勻，置干燥器內(nèi)備用。

表3不同用量的輔料與主藥的配伍比例(g)

2.2.2休止角與堆密度的測(cè)定

按2.1.2、2.1.3項(xiàng)下方法測(cè)定休止角與堆密度，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4主藥與不同用量的輔料對(duì)堆密度及流動(dòng)性的影響

主藥加入不同用量的微晶纖維素后，休止角α均≤40°，可以滿足生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)流動(dòng)性的要求。

2.2.3吸濕率的測(cè)定

按2.1.4項(xiàng)下方法測(cè)定吸濕率，結(jié)果見(jiàn)圖2。

主藥加入不同用量的微晶纖維素后，吸濕率均有不同程度的降低。且主藥與微晶纖維素的比例為1:0.5時(shí)，防潮性能最佳，所以選擇1:0.5為藥粉與微晶纖維素的最佳成型比例。

2.3堆密度及空囊殼的選擇

按照2.1.3項(xiàng)下方法測(cè)定膠囊內(nèi)容物的堆密度,以確定空囊殼的型號(hào)。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5膠囊內(nèi)容物堆密度的測(cè)定結(jié)果

由結(jié)果可知，5次測(cè)定結(jié)果的平均值為0.54g/ml。根據(jù)臨床及藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果已知每次服用生藥量為0.17g，算得微晶纖維素的用量為0.08g，藥粉總重0.25g。由堆密度和質(zhì)量求得近似容量為0.46ml。由膠囊號(hào)碼與近似容積的關(guān)系選擇1號(hào)空膠囊(0.48ml±10％)為宜，每粒膠囊裝量為0.25g。

2.4膠囊內(nèi)容物休止角的測(cè)定

按照2.1.2項(xiàng)下方法測(cè)定膠囊內(nèi)容物的休止角，5次測(cè)定結(jié)果休止角平均值為33.88°，表明本品流動(dòng)性好，易于分裝。

2.5臨界相對(duì)濕度(crh)的測(cè)定

將制備好的膠囊內(nèi)容物干燥至恒重后，平鋪在已恒重的稱量瓶底部(厚度約2mm)，精密稱定后分別置于盛有不同濃度硫酸和不同鹽過(guò)飽和溶液的干燥容器內(nèi)(稱量瓶瓶蓋打開(kāi))，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中保持7d后稱重，計(jì)算吸濕率，結(jié)果見(jiàn)表6、圖3。

表6臨界相對(duì)濕度的測(cè)定結(jié)果

由結(jié)果可知，膠囊內(nèi)容物在相對(duì)濕度57.7％以上其吸濕率迅速上升。以吸濕率為縱坐標(biāo)，相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)作圖，通過(guò)吸濕曲線的二次線性擬合，得曲線方程；通過(guò)吸濕曲線的切線作圖，得到該膠囊內(nèi)容物的臨界相對(duì)濕度(crh)為66％。

3結(jié)論

本處方由丹參總酚酸、總丹參酮、三七總皂苷和水飛薊素組成，比較容易吸濕。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)5種常用輔料的篩選，比較各輔料的吸濕性和流動(dòng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同輔料對(duì)處方均有不同程度的影響，其中以微晶纖維素降低吸濕性的效果最佳，流動(dòng)性最好，有助于控制裝量差異，增加穩(wěn)定性，且成本較低，有利于工業(yè)化大生產(chǎn)。

臨界相對(duì)濕度能反映藥物的吸濕情況，同時(shí)也以此來(lái)確定生產(chǎn)時(shí)的環(huán)境濕度。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，該膠囊內(nèi)容物的臨界相對(duì)濕度為66％，因此要求在生產(chǎn)中膠囊成型的環(huán)境濕度必須控制在66％以下，可以防止因藥粉的吸濕而結(jié)塊、潮解從而導(dǎo)致藥物降解，甚至變質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)例2藥效研究

一、經(jīng)絡(luò)舒寧對(duì)糖尿病動(dòng)物周圍神經(jīng)病變的保護(hù)作用

1.實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8周齡雄性sd大鼠，體重180～220g，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：scxk(湘)2015-0003。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：溫度25±2℃，濕度50±5％，光照周期12小時(shí)，自由飲食飲水，大鼠清晰盤(pán)每天同一時(shí)間清洗一次。

1.2動(dòng)物飼料

普通飼料采用清潔級(jí)維持飼料；高脂高糖飼料由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥劑實(shí)驗(yàn)室自制，配方為普通飼料：蛋黃：白砂糖：豬油＝55:15:15:15，為確保清潔，新配制的飼料在一周內(nèi)喂完。

1.3藥物及試劑

鏈脲佐菌素(streptozotocin，stz)，美國(guó)sigma公司；檸檬酸，上海化學(xué)試劑總廠(批號(hào)：20140209)；檸檬酸三鈉，重慶川東化工有限公司(批號(hào)：20110601；)鹽酸二甲雙胍腸溶片，貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司(批號(hào)：20150717)；

甘油三酯(tg)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)：20150720)；總膽固醇(t-cho)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)：20150715)；高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)：20150919)；低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)：20150919)；糖化血紅蛋白(ghb)測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào):20150928)。

1.4主要儀器

accu-chekperforma卓越型血糖儀，羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；phs-3b精密ph計(jì)，上海虹益儀器儀表有限公司；auy220型電子分析天平，日本島津公司；tu-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1stz溶液配制

2.10g檸檬酸、2.94g檸檬酸鈉分別溶于雙蒸水，定容至100ml。取上述檸檬酸液各50ml，充分混勻，調(diào)節(jié)使ph在4.2-4.5范圍內(nèi)，緩沖液4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

稱取100.0mgstz溶于5ml緩沖液中，在冰水浴中按25mg/kg腹腔注射，stz液臨用時(shí)配制且在30min內(nèi)注射完畢。

2.2模型建立及分組

120只清潔級(jí)sd雄性大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(15只)與造模組(105只)，正常對(duì)照組喂以普通飼料，造模組喂以高脂高糖飼料，每周記錄體重。8w時(shí)，將造模組在禁食不禁水12小時(shí)條件下腹腔注射預(yù)冷的stz液，注射完畢后的大鼠自由進(jìn)食、飲水，72h后采血測(cè)隨機(jī)血糖，選擇大于11.1mol/l的造模成功大鼠進(jìn)行分組，正常對(duì)照組注射等量檸檬酸緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)共分7組：正常對(duì)照組、模型組、彌可保組、經(jīng)絡(luò)舒(jls)低劑量組、經(jīng)絡(luò)舒(jls)高劑量組、經(jīng)絡(luò)舒寧(jlsn)低劑量組、經(jīng)絡(luò)舒寧(jlsn)高劑量組。

2.3指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.3.1坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定

以10％水合氯醛為麻醉劑，根據(jù)大鼠體質(zhì)量，按350mg/kg標(biāo)準(zhǔn)腹腔注射麻醉，麻醉后俯臥位固定。在右側(cè)坐骨切跡處插入刺激電極，記錄電極置于右足底第2趾間，參考電極在刺激電極與記錄電極中間。用單脈沖方波刺激，波寬0.1ms，刺激強(qiáng)度1.5倍閾值，每2個(gè)刺激之間間隔5s以上。計(jì)算機(jī)記錄從刺激神經(jīng)開(kāi)始到遠(yuǎn)端肌肉出現(xiàn)動(dòng)作電位的時(shí)間，即潛伏期。重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算平均值。將動(dòng)物后足以自然肢體狀態(tài)與脊柱成45°角向斜后方拉直，沿動(dòng)物體表準(zhǔn)確測(cè)定刺激電極到記錄電極之間的距離。代入公式：mncv(m/s)＝刺激電極與記錄電極間的距離/潛伏期，求算出坐骨結(jié)節(jié)到踝關(guān)節(jié)處的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度。

2.3.2各組大鼠血清sod、mda含量比較

大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定完成后，腹主動(dòng)脈取血，3000r/min離心10min分離血清，于-20℃保存待測(cè)，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.3.3光鏡觀察坐骨神經(jīng)形態(tài)的病理變化

處死大鼠后，取出右側(cè)坐骨切跡至遠(yuǎn)端的2cm坐骨神經(jīng)，冷生理鹽水沖洗，放入4％多聚甲醛中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，蘇木素-伊紅染色，光鏡下觀察經(jīng)絡(luò)舒寧膠囊對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。以坐骨神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)模糊、排列紊亂；軸索萎縮、變性、大小形態(tài)不規(guī)則；髓鞘結(jié)構(gòu)模糊、變性；雪旺細(xì)胞減少或變性等為陽(yáng)性。至給藥8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，正常對(duì)照組、模型組、彌可保組、jls低劑量組、jls高劑量組、jls低劑量組、jls高劑量組大鼠分別為9、7、8、7、7、7、7只。

2.3.4數(shù)據(jù)處理

采用spss16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析；方差不齊時(shí)，采用kruskal-wallish檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1各組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較

與正常組相比，模型組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯減慢，具有顯著性差異(p<0.01)，各治療組除經(jīng)絡(luò)舒低劑量組外均可延緩坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的減慢，其中經(jīng)絡(luò)舒高劑量組療效最優(yōu)，與正常組相比無(wú)顯著性差異(p>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表7與圖4。

表7各組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較(m/s)

注：與正常組比較，^*p<0.05，^**p<0.01；與模型組比較，^#p<0.05，^##p<0.01

3.2各組大鼠血清sod、mda含量比較

與正常組比較，模型組sod顯著下降，mda顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；經(jīng)絡(luò)舒與經(jīng)絡(luò)舒寧高劑量組血清sod活性顯著高于模型組(p<0.05)及低劑量組(p>0.05)；各給藥組除經(jīng)絡(luò)舒低劑量組外mda水均顯著低于模型組(p<0.05)，經(jīng)絡(luò)舒寧高劑量組mda降低效果最明顯，各組組間比較無(wú)顯著性差異(p>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8各組大鼠血清sod、mda含量比較(x±s，nmol/ml)

注：與正常組比較，^*p<0.05，^**p<0.01；與模型組比較，^#p<0.05，^##p<0.01

3.3光鏡觀察坐骨神經(jīng)形態(tài)的病理變化

正常組大鼠在給藥8周后坐骨神經(jīng)纖維排列規(guī)則，形態(tài)正常，神經(jīng)纖維軸突及其周圍髓鞘均染成紫紅色，神經(jīng)纖維中央可見(jiàn)一條線條被染成深紫色，即為軸索，軸突外圍有髓鞘包圍，片中可見(jiàn)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的神經(jīng)角質(zhì)網(wǎng)是因髓磷脂在制片過(guò)程中被溶解導(dǎo)致。在髓鞘邊緣緊貼髓鞘可見(jiàn)卵圓形的schwann細(xì)胞核。模型組大鼠給藥8周后坐骨神經(jīng)可見(jiàn)明顯的損傷變化，神經(jīng)纖維變細(xì)且排列紊亂，軸索萎縮甚至消失，髓鞘空泡變性，雪旺細(xì)胞減少。各給藥組大鼠給藥8周后坐骨神經(jīng)也出現(xiàn)類似于模型組的病理變化，但均有不同程度的減輕，其中陽(yáng)性彌可保組與經(jīng)絡(luò)舒寧高劑量組優(yōu)于其他組。各組大鼠坐骨神經(jīng)病理形態(tài)學(xué)改變見(jiàn)圖5和圖6。

二、對(duì)糖尿病動(dòng)物感覺(jué)神經(jīng)的影響

1.實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4周齡c57bl/j小鼠150只，雄性，體重18-22g，購(gòu)自長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(湘)2015-0007。8周齡雄性sd大鼠，體重180～220g，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：scxk(湘)2015-0003。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：溫度25±2℃，濕度50±5％，光照周期12小時(shí)，自由飲食飲水，動(dòng)物墊料每天同一時(shí)間清洗一次。

1.2動(dòng)物飼料

普通飼料采用清潔級(jí)維持飼料；高脂高糖飼料由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院藥劑實(shí)驗(yàn)室自制，配方為普通飼料：蛋黃：白砂糖：豬油＝55:15:15:15，為確保清潔，新配制的飼料在一周內(nèi)喂完。

1.3藥物及試劑

鏈脲佐菌素(streptozotocin，stz)，美國(guó)sigma公司；檸檬酸，上海化學(xué)試劑總廠(批號(hào)：20140209)；檸檬酸三鈉，重慶川東化工有限公司(批號(hào)：20110601；)甲鈷胺(彌可保)，衛(wèi)材(中國(guó))藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1411052。

1.4主要儀器

accu-chekperforma卓越型血糖儀，羅氏診斷產(chǎn)品有限公司；phs-3b精密ph計(jì)，上海虹益儀器儀表有限公司；auy220型電子分析天平，日本島津公司；恒溫水浴箱；yls-3e型電子壓痛儀，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1小鼠壓痛值的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)前將小鼠右后爪掌部做定點(diǎn)標(biāo)記，置于安靜環(huán)境中一段時(shí)間，將小鼠在壓痛儀上測(cè)定壓痛值，以小鼠出現(xiàn)嘶叫、后爪收縮等疼痛逃避反應(yīng)為判定指標(biāo)。

2.2大鼠甩尾溫度閾值的測(cè)定

將大鼠寬松限制在鼠籠內(nèi)，尾尖置于恒溫水浴箱內(nèi)入水2cm左右，初始水溫38℃，以每分鐘2℃加熱升高水溫，記錄大鼠因水溫升高甩尾而離開(kāi)水面時(shí)的溫度，即為甩尾溫度閾值。

2.3數(shù)據(jù)處理

采用spss16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析；方差不齊時(shí)，采用kruskal-wallish檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1小鼠壓痛值的測(cè)定

與正常組比較，其余各組小鼠壓痛閾值均明顯降低，差異具有顯著性(p<0.01或p<0.05)；與模型組相比，各給藥組小鼠痛閾值均有不同程度的升高，其中經(jīng)絡(luò)舒寧高劑量組效果最優(yōu)，與模型組相比具有顯著性差異(p<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表9和圖7。

表9各組小鼠壓痛閾值的比較(x±s，g)

注：與正常組比較，*p<0.05，**p<0.01與模型組比較，#p<0.05，##p<0.01

3.2大鼠甩尾溫度閾值的測(cè)定

由表可知，與正常組比較，其余各組甩尾溫度閾值均出現(xiàn)不同程度的上升，其中彌可保組升高幅度最小，且無(wú)顯著性差異(p>0.05)，說(shuō)明該藥對(duì)甩尾溫度有良好的改善作用；與模型組相比，除經(jīng)絡(luò)舒低劑量組外，其余各給藥組甩尾溫度閾值與模型組比較均有顯著性差異(p<0.01)，結(jié)果見(jiàn)表10和圖8。

表10各組大鼠甩尾溫度閾值的比較(x±s，℃)

注：與正常組比較，*p<0.05，**p<0.01與模型組比較，#p<0.05，##p<0.01

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明在丹參、三七、水飛薊素的基礎(chǔ)上，將中藥復(fù)方制劑提升為有效部位組合藥物，以藥效為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行了有效部位拆方研究，確定了最佳有效部位組合的，不僅保留了原中藥的性味功能，而且有明確復(fù)方制劑的藥理、質(zhì)量可控的化學(xué)成分體系、規(guī)范的制劑工藝等，從而保證了安全性和穩(wěn)定性。

附圖說(shuō)明

圖1是不同處方混合粉的吸濕率；

圖2是主藥與不同用量的輔料對(duì)吸濕率的影響；

圖3是臨界相對(duì)濕度圖；

圖4是各組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較；

圖5是各組大鼠血清sod含量比較；

圖6是各組大鼠血清mda含量比較；

圖7是各組小鼠壓痛閾值的比較；

圖8是各組大鼠甩尾溫度閾值的比較。

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明限制的依據(jù)。

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1

原料：丹參總酚酸提取物18g、丹參酮提取物100g、三七總皂苷18g、水飛薊素30g和微晶纖維素78g。

工藝：丹參總酚酸提取物、丹參酮提取物、三七總皂苷和水飛薊素，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，配研混勻，加入微晶纖維素，混勻，裝入膠囊，即得。

規(guī)格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益氣養(yǎng)陰，扶正和營(yíng)，行滯通脈，活絡(luò)止痛之功效，用于糖尿病外周神經(jīng)炎，糖尿病植物神經(jīng)功能紊亂。

實(shí)施例2

原料：丹參總酚酸提取物21g、丹參酮提取物105g、三七總皂苷21g、水飛薊素35g和微晶纖維素81g。

工藝：丹參總酚酸提取物、丹參酮提取物、三七總皂苷和水飛薊素，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，配研混勻，加入微晶纖維素，混勻，裝入膠囊，即得。

規(guī)格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益氣養(yǎng)陰，扶正和營(yíng)，行滯通脈，活絡(luò)止痛之功效，用于糖尿病外周神經(jīng)炎，糖尿病植物神經(jīng)功能紊亂。

實(shí)施例2

原料：丹參總酚酸提取物15g、丹參酮提取物95g、三七總皂苷15g、水飛薊素25g和微晶纖維素75g。

工藝：丹參總酚酸提取物、丹參酮提取物、三七總皂苷和水飛薊素，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，配研混勻，加入微晶纖維素，混勻，裝入膠囊，即得。

規(guī)格：0.5g/粒。

用法用量：每次2-3粒，每天2-3次。

功能主治：益氣養(yǎng)陰，扶正和營(yíng)，行滯通脈，活絡(luò)止痛之功效，用于糖尿病外周神經(jīng)炎，糖尿病植物神經(jīng)功能紊亂。