本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種具有降血糖作用的山核桃葉總黃酮的制備方法和用途。

背景技術(shù)：

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為慢性高血糖并伴有碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂等。其病程較長(zhǎng)，如果得不到及時(shí)有效的治療，很可能引起全身多器官損害，出現(xiàn)感染、失明、腎病等并發(fā)癥，嚴(yán)重危害人體健康。由于其廣泛的發(fā)病人群及近年來(lái)逐漸上升的發(fā)病率，糖尿病已經(jīng)成為繼心血管疾病及癌癥之后危害人類健康的第三大疾病。針對(duì)這種現(xiàn)狀，大量降血糖藥物隨之問(wèn)世，但目前臨床上常見(jiàn)糖尿病治療藥物多為化學(xué)合成類藥物，雖然療效確切，也同時(shí)存在較多不良反應(yīng)。天然藥物，特別是我國(guó)傳統(tǒng)中草藥，在這種背景下具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)條件，因此研究和開(kāi)發(fā)高效低毒的天然藥物，已成為預(yù)防和治療糖尿病及并發(fā)癥的熱點(diǎn)。

山核桃樹(shù)是胡桃科山核桃的葉子，具有清熱解毒、殺蟲(chóng)止癢之效，在民間經(jīng)常被于治療腳趾濕癢、皮膚癬證等。此外文獻(xiàn)研究表明山核桃葉提取物中含有大量的黃酮等抗氧化活性物質(zhì)，具有抗腫瘤、抗衰老、抗誘變、抗血管生成等作用。而山核桃樹(shù)本身是一類多年生落葉喬木，其葉在種植過(guò)程中常被丟棄，因此開(kāi)發(fā)山核桃葉具有很大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場(chǎng)潛力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種以黃酮類化合物為主要成分的山核桃葉總黃酮提取物；

本發(fā)明提供上述山核桃葉總黃酮提取物的制備方法；

本發(fā)明提供上述山核桃葉總黃酮提取物在預(yù)防或者治療血糖升高癥的藥物或者保健品制備中的用途。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種具有降血糖作用的山核桃葉總黃酮的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)取山核桃葉40℃烘箱干燥，過(guò)40目篩，用95％乙醇提取在80-100℃常壓提取30-90分鐘，重復(fù)1-3次，過(guò)濾，合并濾液；

(2)濾液減壓濃縮，離心取上清液，將此上清液過(guò)sd200大孔吸附樹(shù)脂柱，上樣速度為1bv/h-8bv/h，上樣體積為4-8bv；在20-35℃，常壓下，以1bv/h-8bv/h流速，用蒸餾水洗脫樹(shù)脂，洗脫體積為5-10bv；在20-35℃，常壓下，以1bv/h-8bv/h流速，用體積百分濃度為10-30％的乙醇水溶液洗脫樹(shù)脂，洗脫體積為8-12bv；在20-35℃，常壓下，以1bv/h-8bv/h流速，用體積百分濃度為40-90％的乙醇水溶液洗脫樹(shù)脂，洗脫體積為8-12bv；收集40-90％乙醇洗脫液，濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到山核桃葉提取物。

作為優(yōu)選，步驟(1)中70-95％乙醇水溶液用量為每1g山核桃葉粉碎物加10ml。

作為優(yōu)選，步驟(2)中離心參數(shù)為：2000-4000轉(zhuǎn)每分鐘，離心20分鐘。

作為優(yōu)選，步驟(2)中濃縮使濾液中乙醇濃度為45-65％。

一種具有降血糖作用的山核桃葉總黃酮的用途，將上述制備的山核桃葉總黃酮提取物可以與藥劑或者食品上認(rèn)可的輔料，采用現(xiàn)代制劑技術(shù)，制成以山核桃葉總黃酮為主的膠囊劑、片劑、散劑、口服液、軟膠囊、丸劑、凝膠劑、緩釋制劑等各種劑型；所述制劑用于臨床治療血糖升高以及制成含山核桃葉總黃酮的降血糖保健品。

本發(fā)明制備的山核桃葉總黃酮在降低血糖方面療效顯著，以四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，山核桃葉總黃酮具有顯著的降血糖作用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用方法簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，生產(chǎn)成本低，所得總黃酮含量較高且質(zhì)量穩(wěn)定。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說(shuō)明，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。

本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本領(lǐng)域常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。

實(shí)施例1

山核桃葉干燥后，機(jī)械粉碎，稱取山核桃葉粉末200g，加10倍量(g：ml)的體積百分比為95％的乙醇溶液，提取2次，每次30min，合并濾液，在300±100pa真空度下減壓濃縮，使濾液中乙醇濃度為65％，3000轉(zhuǎn)每分鐘，離心20分鐘，取上清。稱取sd200芳香族大孔吸附樹(shù)脂(浙江爭(zhēng)光實(shí)業(yè)股份有限公司)4.0g，放入層析柱(15mm×350mmi.d)中，以2bv/h的流速進(jìn)行上樣，上樣體積為6.5bv。先用10bv水洗脫，再用10bv體積百分比為20％的乙醇溶液洗脫，最后用10bv體積百分比為70％的乙醇溶液洗脫，洗脫速度為4bv/h，收集70％乙醇洗脫液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，獲得山核桃葉提取物總黃酮，其中球松素、球松素查爾酮、白楊素及小豆寇明的總含量在55.3％以上。

實(shí)施例2

山核桃葉干燥后，機(jī)械粉碎，稱取山核桃葉粉末400g，加10倍量體積百分比為95％的乙醇溶液，提取2次，每次30min，合并濾液，在300±100pa真空度下減壓濃縮，使濾液中乙醇濃度為55％，4000轉(zhuǎn)每分鐘，離心20分鐘，取上清。稱取sd200大孔吸附樹(shù)脂200.0g，放入層析柱(15mm×350mmi.d)中，依次用10bv水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇洗脫，并且收集70％乙醇洗脫液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，即得山核桃葉總黃酮提取物，其中球松素、球松素查爾酮、白楊素、小豆寇明的總含量在52.2％以上。

實(shí)施例3

山核桃葉干燥后，機(jī)械粉碎，稱取山核桃葉粉末200g，加10倍量(g：ml)的體積百分比為95％的乙醇溶液，提取3次，每次90min，合并濾液，在300±100pa真空度下減壓濃縮，使濾液中乙醇濃度為65％，2000轉(zhuǎn)每分鐘，離心20分鐘，取上清。稱取sd200芳香族大孔吸附樹(shù)脂(浙江爭(zhēng)光實(shí)業(yè)股份有限公司)4.0g，放入層析柱(15mm×350mmi.d)中，以8bv/h的流速進(jìn)行上樣，上樣體積為8bv。先用5bv水洗脫，再以1bv/h流速用12bv體積百分比為30％的乙醇溶液洗脫，最后以5bv/h流速用10bv體積百分比為90％的乙醇溶液洗脫，收集90％乙醇洗脫液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干燥，獲得山核桃葉提取物總黃酮，其中球松素、球松素查爾酮、白楊素及小豆寇明的總含量在54.3％以上。

球松素、球松素查爾酮、白楊素、小豆寇明的總含量測(cè)定方法參見(jiàn)沈勇等.高效液相色譜法測(cè)定山核桃葉中5個(gè)黃酮苷元含量[j].藥物分析雜志,2013年05期。

將上述實(shí)施例1所得山核桃葉總黃酮對(duì)四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型進(jìn)行降血糖實(shí)驗(yàn)研究。

實(shí)驗(yàn)方法如下：

1實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

18～22g健康清潔級(jí)雄性icr小鼠

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑

山核桃葉總黃酮，cmc-na、四氧嘧啶、二甲雙胍，葡萄糖測(cè)定試劑盒、血清果糖胺測(cè)定試劑盒等。

1.2.1儀器

半自動(dòng)生化儀；sencor-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；電子天平；離心機(jī)等。

2實(shí)驗(yàn)方法

將雄性icr小鼠50只，隨機(jī)分為6組，其中空白對(duì)照組10只，其余各組各8只，將40只模型小鼠禁食12h后尾靜脈注射四氧嘧啶溶液80mg/kg造摸(正常對(duì)照組注射等量生理鹽水)，5d后測(cè)血糖，當(dāng)血糖>11.1mmol/l時(shí)造模成功。然后將模型小鼠隨機(jī)分為5組，分別為高血糖模型組，山核桃葉總黃酮50mg/kg低劑量組、100mg/kg中劑量組、200mg/kg高劑量組，50mg/kg二甲雙胍陽(yáng)性藥組。實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組及模型組給予蒸餾水灌胃，其余各組按給藥劑量灌胃，1次/d，連續(xù)14d。14d后，測(cè)定各組小鼠血糖、體重及血清果糖胺，并記錄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均利用spss18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析，p＜0.05時(shí)認(rèn)為有顯著性差異。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1山核桃葉總黃酮對(duì)高血糖模型小鼠的影響

注：與正常組比較，^**p<0.01；與模型組比較，^#p<0.05，^##p<0.01。

表2山核桃葉總黃酮不同給藥劑量對(duì)高血糖小鼠體重的影響

注：與正常組比較，^**p<0.01；與模型組比較，^#p<0.05。

表3山核桃葉總黃酮對(duì)高血糖模型小鼠血清果糖胺含量的影響

注：與正常組比較^**p<0.01；與模型組比較^#p<0.05；^##p<0.01。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：本研究表明陽(yáng)性藥組、山核桃葉總黃酮低中高劑量組高血糖模型組小鼠相比，血糖水平均有顯著下降，且血清果糖胺水平也顯著降低并存在劑量依賴性，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明山核桃葉總黃酮對(duì)四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型具有顯著降血糖作用。

以上所述的實(shí)施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。