本發(fā)明涉及川牛膝多糖在制備痛風(fēng)的藥物中的用途，屬藥物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

川牛膝，中藥名。為莧科植物川牛膝cyathulaofficinaliskuan的干燥根，具有引火下行、補肝腎、活血通經(jīng)、強筋骨、利尿通淋等功效。多糖類化合物廣泛參與了細胞的各種生命活動和生理過程的調(diào)節(jié)，是生命物質(zhì)的重要組成成分之一，廣泛存在于動植物和微生物中。牛膝多糖具有增強免疫力、抗腫瘤、抗凝血等作用。

目前，未見川牛膝多糖治療痛風(fēng)或者高尿酸血癥的報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了川牛膝多糖的新用途。

本發(fā)明提供了川牛膝多糖在制備痛風(fēng)和/或高尿酸血癥中的藥物用途。

其中，所述藥物是具有降血尿酸、抗氧化作用的藥物。

其中，所處川牛膝是莧科植物川牛膝cyathulaofficinaliskuan的干燥根。

其中，所述藥物是由有效量的川牛膝多糖，加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成。

其中，所述川牛膝多糖中多糖含量不低于90％。

其中，所述川牛膝多糖按照如下方法制備：取川牛膝，粉碎，加水煎煮提取，合并濾液，濃縮，乙醇醇沉，加水復(fù)溶，采用sevage試劑去除蛋白，取上清液，冷凍干燥，即可。

優(yōu)選地，粉碎至過40目篩；

或，加水煎煮的工藝是加10倍量水，煎煮提取2次，每次2h；

或，濃縮是濃縮至原體積的10％；

或，乙醇醇沉的方法是加乙醇至乙醇濃度為80％；

或，加水復(fù)溶至體積與初始粉末的質(zhì)量份數(shù)相同；質(zhì)量與體積的比值為g:ml，如，初始粉末為10g，此處的體積為10ml。

或，采用sevage試劑去除蛋白的方法是：往水溶液中，加入1/2體積的sevage試劑，離心，取上清，重復(fù)；離心的方式為4000r·min^-1離心10min；重復(fù)的次數(shù)為5～6次。

本發(fā)明還提供了一種治療痛風(fēng)和/或高尿酸血癥中的藥物，它是以川牛膝多糖為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或者輔助性成分制備而成。

其中，所述川牛膝多糖按照如下方法制備：取川牛膝，粉碎，加水煎煮提取，合并濾液，濃縮，乙醇醇沉，加水復(fù)溶，采用sevage試劑去除蛋白，取上清液，冷凍干燥，即可。

其中，粉碎至過40目篩；

或，加水煎煮的工藝是加10倍量水，煎煮提取2次，每次2h；

或，濃縮是濃縮至原體積的10％；

或，乙醇醇沉的方法是加乙醇至乙醇濃度為80％；

或，加水復(fù)溶至體積與初始粉末的質(zhì)量份數(shù)相同；

或，采用sevage試劑去除蛋白的方法是：往水溶液中，加入1/2體積的sevage試劑，離心，取上清，重復(fù)；離心的方式為4000r·min^-1離心10min；重復(fù)的次數(shù)為5～6次。

本發(fā)明川牛膝多糖具有良好的降血尿酸和抗氧化作用，對痛風(fēng)和高尿酸血癥的治療作用明確，為臨床提供了一種新的選擇。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

具體實施方式

附圖說明

圖1空白組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，無明顯病變；

圖2左圖顯示模型組1腎小管管腔內(nèi)有草綠色針晶樣球形團塊，并以球形團塊為中心形成肉芽腫結(jié)構(gòu)(黑色箭頭所示)，可見多核巨細胞(綠色箭頭所示)；右圖顯示模型組2腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，部分腎小管腔內(nèi)可見大量中性粒細胞(黃色箭頭所示)；

圖3川牛膝高糖組腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，部分腎小管結(jié)構(gòu)破壞(右圖黃色箭頭所示)；部分腎小管內(nèi)可見中性粒細胞(右圖黃色箭頭所示)，腎小管出現(xiàn)擴張(右圖綠色箭頭所示)；局部腎間質(zhì)可見結(jié)締組織增生(下圖黃色箭頭所示)；

圖4川牛膝中糖組腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫(左圖綠色及右圖黑色箭頭所示)，結(jié)晶物周圍可見中性粒細胞(左圖黃色箭頭所示)，腎小管管腔中可見較多中性粒細胞(左圖黑色箭頭所示)，局部腎小管結(jié)構(gòu)破壞，上皮細胞壞死或脫落，間質(zhì)伴結(jié)締組織增生(右圖黃色箭頭所示)；

圖5作圖為川牛膝低糖組大鼠腎組織的部分腎小管擴張(綠色箭頭所示)，右圖為腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黃色箭頭所示)；

圖6別嘌醇組的腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，腎小管管腔和間質(zhì)中均可見中性粒細胞浸潤(綠色箭頭所示)。

具體實施方式

實驗例1川牛膝多糖的抗痛風(fēng)作用研究

痛風(fēng)是由于嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄障礙所致血尿酸增高的一組代謝性疾病，痛風(fēng)伴有高尿酸血癥，故在其防治上，高尿酸血癥與痛風(fēng)常一起討論。因此，本部分通過建立高尿酸血癥模型對川牛膝多糖的抗痛風(fēng)作用進行探討。

2.2.1動物

雄性wistar大鼠(200g左右)，簡陽達碩動物科技有限公司提供。成都中醫(yī)藥大學(xué)科技樓七樓動物飼養(yǎng)中心適應(yīng)性飼養(yǎng)3d，飼養(yǎng)期間自由飲水、進食，定時清潔，適當(dāng)控制和記錄溫度及濕度等。

2.2.2藥物與試劑

造模藥的制備：取適量腺嘌呤(上海麥克林生化有限公司，貨號：73-24-5，含量98％)、鹽酸乙胺丁醇(大連美侖生物科技有限公司，批號：a0116a，含量>99％)，按1：2.5質(zhì)量比以生理鹽水溶解，制成含腺嘌呤2％與含鹽酸乙胺丁醇5％的混懸液，4℃保存。

別嘌醇的制備：將別嘌醇(上海麥克林生化有限公司，貨號：315-30-0，含量98％)溶解于生理鹽水中，配制成1mg/ml的混懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

川牛膝多糖的制備：分別精確稱取川牛膝多糖(水提醇沉、sevag法除蛋白制得，苯酚-硫酸法測得多糖含量90.95％，)適量，使之溶于生理鹽水中，配成終濃度為750mg/ml(高糖組)、350mg/ml(中糖組)、200mg/ml(低糖組)的溶液，4℃保存。

川牛膝多糖的具體制備方法：

將川牛膝飲片于60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干后粉碎，過40目篩。稱取粉末加入10倍量水，煎煮提取2次，每次2h。每次煎煮后趁熱紗布過濾，合并濾液，減壓濃縮至原體積的10％。濃縮液加4倍無水乙醇至終濃度為80％，室溫靜置24h，沉淀加少量無水乙醇洗滌2次,然后加水復(fù)溶至與初始粉末質(zhì)量的相同體積(比如，初始粉末為10g，此處的體積為10ml)，分裝至ep管中，每管加入1/2體積的sevage試劑(三氯甲烷：正丁醇＝4:1)，4000r·min^-1離心10min,取上清液，反復(fù)離心5～6次，直至無肉眼可見沉淀。合并上清液，分裝至培養(yǎng)皿，-20℃預(yù)冷過夜，冷凍干燥。

ua、bun、cre、ada、gpt、sod、t-sod、gpx、t-aoc等試劑盒，購自蘇州科銘生物技術(shù)有限公司與南京建成生物技術(shù)研究所。

2.2.3方法

2.2.3.1動物分組及給藥

雄性wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后隨機分組，每組10只，每籠6只，以3％-5％苦味酸溶液標(biāo)。前兩周各組上午按5ml/kg體重劑量對大鼠定時灌胃造模(空白組灌胃生理鹽水)，造模第7、14d尾靜脈取血測ua，與空白組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義即為造模成功；否則繼續(xù)造模。

造模成功后每天上午繼續(xù)造模、下午按5ml/kg體重劑量對大鼠灌胃給藥，連續(xù)14d，并于給藥第7d尾靜脈取血、第14d以20％烏來糖麻醉后腹主動脈取血并摘取心、肝、腎。給藥時，空白組及模型組以生理鹽水灌胃，陽性對照組以別嘌醇灌胃，川牛膝多糖組分別以高、中、低劑量灌胃。

2.2.3.2測定指標(biāo)

2.2.3.2.1體重及臟器系數(shù)測定

試驗開始后每周計量1次體重，結(jié)束時處死動物，生理鹽水沖洗，濾紙吸干后，稱取臟器(肝、腎、心臟)重量，計算臟器系數(shù)。–70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3.2.2血液生化指標(biāo)的測定

每周尾靜脈采血1次(每只1ml)，采血前禁食12h，常溫靜置30min后，3500r·min^-1離心15min,重復(fù)2次，取血清–70℃保存或直接測定。末次給藥2h后，水合氯醛麻醉后腹主動脈取血，同法分離血清保存?zhèn)溆?。按試劑盒說明書方法測ua、bun、cre、ada、gpt、sod、gpx、t-aoc等。

2.2.3.2.3肝、腎指標(biāo)的測定

取肝、腎，稱重后，按1:9加入生理鹽水，4℃研磨得勻漿，離心后取上清，-20℃冰箱分裝保存或直接按試劑盒說明書方法檢測上述相關(guān)指標(biāo)。

2.2.3.2.4腎組織病理學(xué)觀察

處死大鼠，取雙腎,稱重后，4％多聚甲醛固定,脫鈣液(edta)脫鈣,梯度酒精脫水,常規(guī)石蠟包埋,5um縱向切片,he(蘇木精-伊紅)染色,光鏡下觀察。

2.2.3.3數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用spss統(tǒng)計軟件。計量資料以表示。均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-wayanova),p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2.4結(jié)果

2.2.4.1由表1可見，造模前各組大鼠體重均無顯著差異。造模后，與空白組相比，各組體重均出現(xiàn)不同程度降低，且差異多有統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組相比，除中糖組的體重于造模第14d起，顯著升高外，高、低糖組及別嘌醇組體重均較低，且以高糖組差異較為顯著。

表1體重測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表2可知，各組心、肝、腎指數(shù)均普遍高于空白組而低于模型組。

與空白組相比，模型組、高糖組、別嘌醇組的心指數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，應(yīng)與三組的體重直接相關(guān)(體重由高至低：空白組>中糖組>低糖組>模型組>別嘌醇組>高糖組)；模型組及高、低糖組的肝指數(shù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，各組腎指數(shù)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

與模型組相比，中糖組及別嘌醇組的肝指數(shù)差異顯著；心、腎指數(shù)差異無統(tǒng)計意義。此外，結(jié)合體重可知，多糖組腎腫脹程度由高至低為：中糖組>低糖組>高糖組。

表2臟器指數(shù)測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

2.2.4.2由表3可知，造模第14d，模型組血清中的尿酸(ua)含量顯著高于空白組，差異有統(tǒng)計意義，提示造模成功。

與空白組相比，各組血清中的ua含量均有所升高，其中，造模第28d(給藥14d)時，模型組、中糖組血清中的ua含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組相比，造模第21d(給藥7d)時，多糖組ua含量均相對較高，第28d時，僅中糖組ua含量相對較高，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，別嘌醇組ua含量均相對較低，尤以第28d時的差異顯著。

與空白組相比，腎組織中僅別嘌醇組ua含量稍高，與模型組相比，各組ua含量均顯著升高。

此外，血清中ua含量順序為：高糖組<低糖組<中糖組，腎中以低糖組的ua含量較高，但三組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

表3ua測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表4尿素氮(bun)測定結(jié)果可知，與空白組相比，各組血清中及腎組織中的bun含量均較低，其中，造模第21d時，模型組、高糖組、別嘌醇組的差異顯著，第28d及腎組織中的各組差異較空白組均有統(tǒng)計學(xué)意義。

·與模型組相比，第21d時，中、低糖組bun含量較高，高糖組與別嘌醇組含量較低，且中糖組的差異顯著；第28d時，中糖組bun含量稍高，差異已無統(tǒng)計學(xué)意義，其他三組bun含量均較低；腎組織多糖組及別嘌醇組bun含量均較低。

此外，血清中bun含量順序為：高糖組<低糖組<中糖組，腎中為：高糖組<中糖組<低糖組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表4bun測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表5測定可知，與空白組相比，除21d時的模型組cre含量較低外，其余各組均較高(以21d時的低糖組及28d時的中、低糖組差異顯著)。

與模型組相比，21d時，各組含量均較高，其中，各多糖組的差異顯著；第28d時，中、低糖組cre含量較高，高糖組與別嘌醇組較低，但均無顯著差異。

總體而言，多糖組中，中、低糖組cre含量差異不大，高糖組含量較低。

表5cre測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表6可知，與空白相比，各組血清中的腺苷脫氨酶(ada)活力均較高，其中，以第21d時的川牛膝高糖組及28d時的模型組、別嘌醇組的差異顯著；肝組織中，低糖組的含量較低，其他各組均較高，且以模型組、高糖組及別嘌醇組的差異顯著。

與模型組相比，第21d時，高糖組的ada含量稍高，其余各組較低，但差異無統(tǒng)計意義；造模第28d時，各組均較低，且低糖組的差異顯著；肝組織中，別嘌醇組的含量稍高，其余各組均較低，且中、低糖組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

多糖組的ada活性在血清及肝組織中的順序為：低糖組<中糖組<高糖組。

表6ada測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表7可知，與空白相比，除第21d時的中糖組與別嘌醇組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(gpt)活力稍高外，其余各組血清及肝組織中的gpt活力均較低；其中，以第28d時的各多糖組及肝組織的各組(除高糖組)的差異較為顯著。

與模型組相比，第21d時，各組(除高糖組)gpt活力均稍高，28d時，各給藥組均稍低；肝組織中，高糖組、別嘌醇組gpt活力稍高，中、低糖組稍低。

各多糖組第21d的gpt活性順序為：高糖組<低糖組<中糖組，第28d及肝組織中的順序為：低糖組<中糖組<高糖組。

表7gpt測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表8可知，與空白組相比，第21d時，除模型組血清中的超氧化物歧化酶(sod)活性稍高外，其余各組均較低(以高糖組的差異顯著)，第28d時，各組sod活性均較高(以中、低糖組及別嘌醇組的差異顯著)；肝組織中，多糖組t-sod活性稍高，模型組及別嘌醇組稍低；腎組織中，各組t-sod活性均較低，且以模型組、低糖組及別嘌醇組的差異顯著。

與模型組相比，造模第21d，各給藥組sod活性均較低(以高糖組的差異顯著)，第28d，各給藥組sod活性均較高(以中、低糖組及別嘌醇組的差異顯著)；肝組織中的各多糖組及腎組織中的高、中糖組sod活性均較高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

各多糖組血清中的sod活性順序為：低糖組>中糖組>高糖組，肝組織中的t-sod活性順序：中糖組>低糖組>高糖組，腎組織中為：中糖組>高糖組>低糖組。

表8sod測定結(jié)果

(注：與空白組比較，*表示p<0.05，**表示p<0.01；與模型組比較，#表示p<0.05，##表示p<0.01)

由表9可知，與空白組相比，肝組織中，高、中糖組的谷胱甘肽過氧化物酶(gpx)活力稍高，模型組、低糖組及別嘌醇組gpx活力均顯著降低；腎組織中，中糖組gpx活力稍高，其余各組較低(以模型組、高糖組及別嘌醇組差異顯著)。

與模型組相比，肝中的各組活力均較高，且差異顯著；腎組織中，高糖組活力稍低，其余各組較高(以中、低糖組差異顯著)。

多糖組在肝組織中的gpx活力順序為：中糖組>高糖組>低糖組，腎組織中為：中糖組>低糖組>高糖組。

表9gpx測定結(jié)果

由表10可知，與空白組相比，第21d時的各組(除模型組)總抗氧化能力(t-aoc)相對較強，第28d及肝(除高糖組)、腎組織的各組t-aoc普遍較弱；其中，第28d時的模型組、中糖組、低糖組、別嘌醇組，肝組織的低糖組及腎組織的各組(除高糖組)的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

與模型組相比，各組血清的t-aoc均較強，尤以第21d的中糖組及第28d的高糖組差異顯著；肝組織中的各組(低糖組稍弱)及腎組織中的各組(中糖組稍弱)t-aoc亦均較強，且均以高糖組的差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

多糖組第21dt-aoc順序為：中糖組>低糖組>高糖組，第28d及肝中：高糖組>中糖組>低糖組，腎中：高糖組>低糖組>中糖組。

表10t-aoc測定結(jié)果

2.2.4.3由圖1可見，空白組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，無明顯病變。

由圖2左圖可見，模型組1腎小管管腔內(nèi)有草綠色針晶樣球形團塊，并以球形團塊為中心形成肉芽腫結(jié)構(gòu)(黑色箭頭所示)，可見多核巨細胞(綠色箭頭所示)；圖2右圖顯示，模型組2腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，部分腎小管腔內(nèi)可見大量中性粒細胞(黃色箭頭所示)。

川牛膝高糖組腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，部分腎小管結(jié)構(gòu)破壞(圖3左上圖黃色箭頭所示)；部分腎小管內(nèi)可見中性粒細胞(圖3右上圖黃色箭頭所示)，腎小管出現(xiàn)擴張(圖3右上圖綠色箭頭所示)；局部腎間質(zhì)可見結(jié)締組織增生(圖3下圖黃色箭頭所示)。

川牛膝中糖組腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫(圖4左圖綠色及圖4右圖黑色箭頭所示)，結(jié)晶物周圍可見中性粒細胞(圖4左圖黃色箭頭所示)，腎小管管腔中可見較多中性粒細胞(圖4左圖黑色箭頭所示)，局部腎小管結(jié)構(gòu)破壞，上皮細胞壞死或脫落，間質(zhì)伴結(jié)締組織增生(圖4右圖黃色箭頭所示)。

川牛膝低糖組大鼠腎組織的部分腎小管擴張(圖5左圖綠色箭頭所示)，腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(圖5左圖黑色及圖5右圖黃色箭頭所示)，局部腎間質(zhì)有結(jié)締組織增生(圖5左圖黃色箭頭所示)，可見中性粒細胞浸潤(圖5右圖黑色箭頭所示)。

圖6顯示，別嘌醇組的腎小管管腔內(nèi)可見結(jié)晶物及肉芽腫形成(黑色箭頭所示)，腎小管管腔和間質(zhì)中均可見中性粒細胞浸潤(綠色箭頭所示)。

由各組整體情況評分表(表11)可見，空白組各項指標(biāo)得分均為零，腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，基本無炎癥反應(yīng)、結(jié)晶、腎小管擴張及結(jié)締組織的增生等。模型組得分均較高，腎組織病變最嚴重，可見大量炎性細胞(中性粒細胞、多核巨細胞等)及草綠色結(jié)晶及肉芽結(jié)構(gòu)，腎小管擴張嚴重，皮質(zhì)和髓質(zhì)均可見大量結(jié)締組織增生。川牛膝高、中、低三個多糖組相比，中性粒細胞浸潤、結(jié)晶及肉芽組織數(shù)量、結(jié)締組織增生等腎損害以高糖組較輕，腎小管擴張則以中糖組相對較輕；與模型組相比，多糖組總分(高糖組<中糖組<低糖組)均較低。別嘌醇組除腎小管擴張程度與中糖組相當(dāng)外，其余各指標(biāo)得分均較空白組高而較模型組與多糖組低。

表11各組評分結(jié)果

(注:1.炎癥程度：0分，無炎性細胞浸潤；1分，少量炎性細胞浸潤；2分，中量炎性細胞浸潤；3分，大量炎性細胞浸潤。2.草綠色結(jié)晶數(shù)量：0分，無草綠色結(jié)晶；1分，少量草綠色結(jié)晶；2分，中量草綠色結(jié)晶；3分，大量草綠色結(jié)晶。3.腎小管擴張數(shù)量：0分，無腎小管擴張；1分，少量腎小管擴張；2分，中量腎小管擴張；3分，大量腎小管擴張。4.結(jié)締組織增生程度：0分，無明顯結(jié)締組織增生；1分，增生部位主要在皮質(zhì)區(qū)，增生面積≤皮質(zhì)面積的50％；2分，增生部位主要在皮質(zhì)區(qū)，增生面積≥皮質(zhì)面積的50％；3分，皮質(zhì)和髓質(zhì)均可見大量結(jié)締組織增生。)

2.2.5小結(jié)

川牛膝多糖抗高尿酸血癥研究結(jié)果顯示，造模后的各組體重普遍顯著降低，說明造模藥可抑制大鼠進食及吸收；與模型組相比，川牛膝高糖組體重較輕，中糖組較重，提示，高糖組可能黏度較大不利于吸收或同時具有促進排泄的作用，而中劑量組可能促吸收作用強于其促排泄作用。

心、肝、腎指數(shù)測定結(jié)果表明，各給藥組的指數(shù)普遍高于空白組而低于模型組，分析發(fā)現(xiàn)，各指數(shù)變化與體重直接相關(guān)。其中，腎指數(shù)顯著升高，與剖檢時的造模各組腎腫大現(xiàn)象一致，多糖組腎腫脹程度為：高糖組<低糖組<中糖組。

正常人體中含少量尿酸(ua)，血中ua升高會引起痛風(fēng)、腎功能損害和動脈硬化等。本研究采用含腺嘌呤2％與鹽酸乙胺丁醇5％的混懸液造模，第14d模型構(gòu)建成功；造模成功后，分別測定第21d、28d血清及肝、腎中ua、bun、cre、ada、gpt、sod、t-sod、gpx、t-aoc等指標(biāo)。

ua測定結(jié)果表明，各給藥組可不同程度促進血中尿酸經(jīng)腎排泄，且血清中的ua含量順序為：高糖組<低糖組<中糖組，腎組織中，低糖組的ua含量相對較高，高、中糖組的含量稍低，三者之間差異較小。尿素氮(bun)為蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，其測定結(jié)果顯示，空白組和中糖組的含量較高，推測與其進食較多有關(guān)，各多糖組血清與腎中的bun含量順序與ua血清中的含量一致。肌酐(cre)基本上通過腎排出體外，慢性腎衰時可見血中含量增高，測定可知，各組含量均較空白組高，且中、低糖組差異顯著；與模型組相比，初始時多糖組含量顯著升高，但隨著給藥時間的延長，其差異縮小；多糖組中，以高糖組cre含量較低，中、低糖組差異不大。綜上，在反映腎功的三個主要指標(biāo)中，整體以高糖組的各指標(biāo)含量較低，中、低糖組差異不明顯。

肝臟疾病時，腺苷脫氨酶(ada)活性有所升高；其測定結(jié)果表明，模型組、川牛膝高糖組、別嘌醇組ada活力較高，中、低糖組相對較低，表明造模藥對大鼠肝臟具有一定的損害，且中、低糖組能緩解其損害，高糖組及別嘌醇組作用尚不明確。肝實質(zhì)性損傷時，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(gpt)活性有所升高，但在慢性肝損傷時，其陽性率較低；測定結(jié)果表明，與空白組相比，各組gpt活力普遍較低，提示，該模型下，大鼠的肝臟可能無損傷或為慢性損傷；此外，多糖組血清及肝組織中g(shù)pt整體活性順序為：低糖組<中糖組<高糖組。綜上，在反映肝損害的指標(biāo)方面，中、低糖組呈現(xiàn)一定的對抗ada、gpt含量升高的作用，提示，中、低糖組可能有一定的保肝作用，高糖組可能因其黏度過大而對肝有一定的刺激；且gpt能否作為反映慢性肝損傷的指標(biāo)尚待商榷。

超氧化物歧化酶(sod)在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用，測定結(jié)果表明，多糖組sod活性普遍高于模型組，其中，血清中sod活性順序為：低糖組>中糖組>高糖組，肝、腎組織中則以中糖組sod活性為高；此外，與空白組相比，各組活性在造模21d(給藥第7d)時相對較低，28d時不同程度升高，表明sod活性與給藥時間有關(guān)。谷胱甘肽過氧化物酶(gpx)具有保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用，結(jié)果表明，肝、腎組織中的各多糖組gpx活力(肝中的順序：中糖組>高糖組>低糖組，腎中：中糖組>低糖組>高糖組)均較高。總抗氧化能力(t-aoc)測定結(jié)果表明，與空白組相比，各組t-aoc總體較弱；與模型組相比，高、中糖組t-aoc較強，多糖組t-aoc整體順序為：高糖組>中糖組>低糖組。綜上，多糖組均呈現(xiàn)出抗氧化能力，且以高、中糖組作用較強。

此外，作為陽性對照組，與模型組相比，別嘌醇組血清(第28d)中的ua含量最低，腎組織中的含量最高，體現(xiàn)了其強大的促ua排泄作用；第28d時血清中的sod活性及肝組織中g(shù)px活性均較高，表現(xiàn)出一定的抗氧化作用。但本研究僅給藥14d，在實際應(yīng)用中，別嘌醇的長期使用往往導(dǎo)致系列不良反應(yīng)^[8]。

雙腎病理切片顯示，空白組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，其余各組腎小管均可見炎癥反應(yīng)、腎小管擴張、結(jié)締組織增生等，與剖檢中的造模各組出現(xiàn)腎腫大、蒼白、外觀呈現(xiàn)典型的“花斑”現(xiàn)象一致。結(jié)合整體評分及上述各指標(biāo)結(jié)果，可認為各組腎損傷程度為：空白組<別嘌醇組<高糖組<中糖組<低糖組<模型組。

綜上所述，腺嘌呤合鹽酸乙胺丁醇構(gòu)建高尿酸血癥大鼠模型的方法可行，14d即可成功。相比模型組，各給藥組表現(xiàn)出不同程度的抗高尿酸血癥作用，尤以別嘌醇和高、中糖組的作用較為突出，該作用與促進尿酸代謝及抗氧化能力有關(guān)。本實驗為進一步了解川牛膝等的抗痛風(fēng)作用物質(zhì)基礎(chǔ)及機制提供了一定的依據(jù)。

綜上，本發(fā)明川牛膝多糖用于痛風(fēng)和高尿酸血癥的藥效明確、可控，為臨床提供了一種新的選擇，且制備方法簡單，成本低廉，工業(yè)應(yīng)用前景良好。