本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，尤其涉及一種可防控高脂血癥及其所致心腦血管或神經元損傷的組合物與相應制備及使用方法。
背景技術：
：血脂異常通常指血清中膽固醇(tc)和(或)甘油三酯(tg)水平升高，俗稱高脂血癥(hyperlipidemia)。實際上血脂異常也泛指包括低高密度脂蛋白血癥在內的各種血脂異常。高脂血癥可導致脂質代謝紊亂損傷腦組織，與腦部慢性代謝性疾病，史-倫-奧三氏綜合征(smith–lemli–opitzsyndrome)，亨廷頓舞蹈癥(huntington’s)，阿爾茨海默氏病(alzheimer’s)，尼曼-皮克c型疾病(niemann–picktypecdiseases)等疾病的發(fā)生相關，亦是中風，冠心病，心肌梗塞，高血壓，糖尿病的危險因素。高脂血癥血液膽固醇(tc)升高，一方面可引起腦動脈和毛細血管內皮細胞功能受損，加速動脈粥樣硬化進程，降低腦血流，使腦代謝受損，從而增加認知功能障礙和癡呆的危險性；另一方面，血液tc升高也可直接影響與認知功能有關的神經元變性。有研究報道血清膽固醇水平與顱內動脈粥樣硬化正相關，lesser等報道患認知功能障礙的老年人血膽固醇和腦脊液膽固醇水平與非患病的對照老人相比明顯增高。而服用他汀類降膽固醇藥物人群認知功能障礙發(fā)病率降低70％，為膽固醇代謝異常導致認知功能障礙提供了一個非常有力的證據?；诙囗椦C醫(yī)學證據，降脂治療在冠心病的一級預防和二級預防的重要性得到廣大學者的認同。目前降脂藥物種類繁多，他汀類藥物因其降脂幅度大、作用速度快、耐受性良好而被廣泛應用，是國內外調脂藥中的首選藥物之一。然而他汀類藥物帶來的副作用也不容忽視，長期大劑量服用時可能會引起肌病、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)，轉氨酶升高等不良反應，其安全性引起了廣大關注。除此之外，從食物或植物提取物中尋找具有防治高脂血癥的物質具有極其重要的意義。番茄紅素(lycopene)屬于類胡蘿卜素的一種紅色色素，由11個共軛雙鍵和2個非共軛雙鍵構成的40碳直鏈烴化合物；分子式為c40h56，分子量為536.85；因缺少β-芷香酮環(huán)結構而不具有維生素a原活性。番茄紅素在人體內分布廣泛，是人體血清中一種主要的類胡蘿卜素。大量的研究表明，番茄紅素有提高機體免疫力、抗炎、抗癌、抗腫瘤等重要作用，其抗氧化活性強，安全性高，是類胡蘿卜素中最有效的、具有生物學活性的單線態(tài)氧自由基捕獲劑，且來源廣泛。我們的長期前期研究顯示，番茄紅素具有較強的抗氧化能力，可以對心腦血管、神經元、肝臟發(fā)揮積極的保護作用，但對人體來說，若要實現理想的效果則需要攝入大劑量的番茄紅素，該劑量超過了《中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(2013版)》中建議的可耐受最高攝入量，而且番茄紅素價格較貴，若長期較高劑量純服用番茄紅素可能會給使用者帶來較重的經濟負擔。因此，尋求一種既能減少現有藥物的副作用和用藥成本，又能預防、控制、改善高脂血癥引起的心腦血管、神經元病變的降脂替代品，能帶來一定的經濟和社會效應。技術實現要素：本發(fā)明所要解決的技術問題是，克服以上
背景技術：
中提到的不足和缺陷，提供一種既能減少現有藥物的副作用和用藥成本，又能預防、控制、改善高脂血癥引起的心腦血管、神經元病變的降脂替代品。據調查發(fā)現，絕大多數人對他汀的耐受性良好，其不良反應多見于接受大劑量他汀治療者，如肝功能異常、肌痛、橫紋肌溶解等。通過進一步研究發(fā)現，他汀類的藥物劑量與其調脂療效密切相關，但隨著劑量的升高，藥物不良反應也會呈幾何倍數增長。改善他汀類藥物的生物利用度，在減少應用劑量的前提下提高降低低密度脂蛋白(ldl-c)膽固醇效能，有望為降低其臨床不良反應提供有利條件。然而人體是一個復雜的網絡系統(tǒng)，疾病往往是多個因素綜合作用的結果，其發(fā)病機制可理解為多途徑、多靶點的網絡變化，單一靶點的藥物治療模式已不能滿足復雜疾病的治療要求。組合藥物具有多成分、多靶點、抗耐藥性和不良反應低以及較小劑量等特點，對治療多基因調控的復雜疾病和需要長期用藥的慢性疾病有著獨到的優(yōu)勢，是新藥研發(fā)的重要領域。因此，本發(fā)明通過將天然植物化學物、維生素和他汀藥物進行組合，減少他汀類藥物的使用劑量，同時發(fā)揮協(xié)同降血脂、降低藥物副作用的效果，可有效防控高脂血癥的形成和發(fā)展。目前，由于我國多數居民沒有長期和有規(guī)律地攝入富含番茄紅素食品的習慣，其平均攝入量普遍較低。根據中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(dietaryreferenceintakes,dris)，我國普通成年人的番茄紅素特定建議值(specificproposedlevels,spl)為18mg/d，可耐受最高攝入量(tolerableupperintakelevel,ul)為70mg/d?！吨袊扇搜惓７乐沃改?2016年修訂版)》中推薦將中等強度的他汀作為中國血脂異常人群的常用藥物，并指出中等強度的氟伐他汀鈉為80mg/天。維生素c是人體膳食供應量最大的一種維生素，1982年我國的第二次全國營養(yǎng)調查顯示，全國城鄉(xiāng)居民vc的平均攝入量約為129mg/d；1992年我國的第三次全國營養(yǎng)調查顯示，全國城鄉(xiāng)居民vc的平均攝入量約為100mg/d；而2002年我國的第四次全國營養(yǎng)調查顯示，全國城鄉(xiāng)居民vc的平均攝入量約為90mg/d，由此可見，我國城鄉(xiāng)居民的vc的膳食攝入量呈下降趨勢。中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(dris)，我國普通成年人的推薦攝入量(recommendednutrientintake,rni)為100mg/d；預防非傳染性慢性病的建議攝入量(proposedintakesforpreventingnon-communicablechronicdiseases,pi-ncd，簡稱建議攝入量，pi)為200mg/d?；谏鲜龇治?，本發(fā)明提出的技術方案為提供一種可防控高脂血癥及其所致心腦血管或神經元損傷的組合物，所述組合物主要包括以下質量份數的各組分：番茄紅素10-40份、維生素c100份和氟伐他汀鈉5-20份?？梢灶A防控制高脂飲食導致的血脂異常帶來的損傷，同時可以預防其他慢性病。上述的組合物，優(yōu)選的，所述組合物主要包括以下質量份數的各組分：番茄紅素10-40份、維生素c100份和氟伐他汀鈉10-20份。優(yōu)選的，所述組合物主要包括以下質量份數的各組分：番茄紅素10-40份、維生素c100份和氟伐他汀鈉5-10份。優(yōu)選的，所述組合物主要包括以下質量份數的各組分：番茄紅素10份、維生素c100份和氟伐他汀鈉10份。優(yōu)選的，所述組合物中還包括以下質量份數的輔料：預膠化淀粉30-50份、交聯(lián)聚維酮1-3份和微粉硅膠0.1-0.3份。預膠化淀粉可作為賦形劑，增加組合物的流動性；交聯(lián)聚維酮可作為填充劑，具有吸濕性/引濕性；微粉硅膠可作為助流劑，改善組合物的流動性和吸濕性。以上輔料具有防潮的作用。優(yōu)選的，所述組合物中番茄紅素、維生素和氟伐他汀鈉均為10-100目的粉末狀。優(yōu)選的，所述組合物為膠囊制劑。優(yōu)選的，所述膠囊制劑為遮光型腸溶空心膠囊?；谝粋€總的技術構思，本發(fā)明還提供了一種組合物的制備方法，包括如下步驟：在避光條件下，按配比準確稱取干燥的各組分粉末，充分混勻后填充入遮光型腸溶空心膠囊中封存。本發(fā)明還相應提供一種上述組合物的使用方法，所述組合物的使用方法為用水送服，每日服用一次，用于預防時服用一次包括番茄紅素10-40mg、維生素c100mg和氟伐他汀鈉5-10mg，用于控制時服用一次包括番茄紅素10-40mg、維生素c100mg和氟伐他汀鈉10-20mg。我們的大量研究成果顯示，高脂血癥形成和加重的過程中，番茄紅素對實驗對象心血管、肝臟、腦血管、神經元均有保護作用，且血液中番茄紅素的含量與抗高脂血癥損傷效果呈現劑量效應關系。此外，人群案例提示與其它他汀類藥物相比，氟伐他汀鈉較少引發(fā)橫紋肌溶解，作為常用調脂藥物其安全性相對較高、嚴重不良反應發(fā)生率低，因此本發(fā)明選擇氟伐他汀鈉作為本組合的他汀類組分。同時，鑒于維生素c具有多種對人體有利的生理功能且價格低廉，所以，我們將依據中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(dris)，將番茄紅素、維生素c和氟伐他汀鈉在最佳劑量下進行配伍，使三者可以發(fā)揮出比兩兩組合更佳的協(xié)同抗高脂血癥損傷心腦血管、神經元的作用，并預防慢性病，還可以降低番茄紅素的使用劑量和藥物的經濟成本。本組合物的劑量選擇充分考慮了中國居民的膳食特點，并參考借鑒了中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量(dris)，旨在將番茄紅素的使用量接近特定建議值(spl)18mg/天，并低于可耐受最高攝入量(ul)70mg/天；并使人體維生素c攝入總量達到預防非傳染性慢性病的建議攝入量(pi-ncd)200mg/天；同時降低他汀類藥物的使用劑量，降低藥物副作用。本組合物的主要功效在于降低血脂、防控高脂血癥導致的心腦血管、神經元損傷，而現有的關于防治心腦血管系統(tǒng)疾病的制品并沒有提及對神經元的作用，而本組合的優(yōu)異之處在于，對高脂血癥導致的神經元損傷具有顯著的保護作用。與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的組合物，基于番茄紅素本身具有高效的抗高脂血癥損傷心、腦血管及神經元的作用，借助系統(tǒng)生物學的思想，首次將低劑量的番茄紅素、低劑量的氟伐他汀鈉和一定劑量的維生素c組合在一起，既發(fā)揮了協(xié)同降血脂、保護心腦血管、神經元及預防非傳染性慢性病的效果，又同時降低了他汀類藥物和番茄紅素的劑量，從而降低了藥物毒副作用，減輕了藥物成本，具有良好的經濟、社會效益。此外，本發(fā)明的制備方法簡單易操作，省時省力，實用性強；使用方法便于日常服用，且針對不同的需求制定了不同的使用劑量，使本組合物的效果利用實現最大化。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1是各組大鼠腦海馬ca1區(qū)尼氏染色檢測結果，n＝10，(10*20)。圖2是各組大鼠腦海馬ca3區(qū)尼氏染色檢測結果，n＝10，(10*20)。具體實施方式為了便于理解本發(fā)明，下文將結合說明書附圖和較佳的實施例對本發(fā)明做更全面、細致地描述，但本發(fā)明的保護范圍并不限于以下具體實施例。除非另有定義，下文中所使用的所有專業(yè)術語與本領域技術人員通常理解含義相同。本文中所使用的專業(yè)術語只是為了描述具體實施例的目的，并不是旨在限制本發(fā)明的保護范圍。除非另有特別說明，本發(fā)明中用到的各種原材料、試劑、儀器和設備等均可通過市場購買得到或者可通過現有方法制備得到。實施例：一種本發(fā)明的可防控高脂血癥及其所致心腦血管或神經元損傷的組合物，包括以下質量份數的主要組分：番茄紅素10-40份、維生素c100份和氟伐他汀鈉5-20份，還包括以下質量份數的輔料：預膠化淀粉30-50份、交聯(lián)聚維酮1-3份和微粉硅膠0.1-0.3份。所述組合物中番茄紅素、維生素和氟伐他汀鈉均為10-100目的粉末狀；所述組合物可制為膠囊制劑，所述膠囊制劑采用的膠囊殼為遮光型腸溶空心膠囊殼。其制備方法為：在避光條件下，按配比準確稱取干燥的氟伐他汀鈉粉末、維生素c粉末(未被氧化的潔白色粉末)、番茄紅素粉末和上述輔料置于多維混合機中混合10-20min以充分混勻為準，然后填充入遮光型腸溶空心膠囊中封存，即制得本發(fā)明的組合物膠囊制劑。本組合物的使用方法為含水吞服，每日服用一次，服用一次包括番茄紅素10-40mg、維生素c100mg和氟伐他汀鈉5-20mg(5-10mg可作為預防劑量，10-20mg可作為控制劑量，10mg為常規(guī)情況下的最佳使用劑量)。為證明本組合物的效果，以大鼠進行如下實驗：1.試驗材料純種健康sprague-dawley大鼠80只，雌雄各半(體重：222.67±8.51g)，購自中南大學湘雅醫(yī)學院實驗動物學部。2.試驗設計基礎飼料適應性飼養(yǎng)1周，空腹稱重，取尾血測定血清tc，根據體重和tc水平將大鼠隨機分為8組(n＝10)：a組：正常對照組；b組：高脂模型組；c組：陽性對照組(番茄紅素65mg·kg·bw-1·d-1)；d組：維生素c組(維生素c100mg·kg·bw-1·d-1)；e組：氟伐他汀鈉組(氟伐他汀鈉5mg·kg·bw-1·d-1)；f組：組合1組(番茄紅素5mg·kg·bw-1·d-1+維生素c100mg·kg·bw-1·d-1+氟伐他汀鈉5mg·kg·bw-1·d-1)；g組：組合2組(番茄紅素10mg·kg·bw-1·d-1+維生素c100mg·kg·bw-1·d-1+氟伐他汀鈉5mg·kg·bw-1·d-1)；h組：組合3組(番茄紅素20mg·kg·bw-1·d-1+維生素c100mg·kg·bw-1·d-1+氟伐他汀鈉5mg·kg·bw-1·d-1)。a組給予基礎飼料，其余各組以高脂飼料飼養(yǎng)；a、b組每日以1％的羧甲基纖維素鈉(cmc-na)灌胃，c-h組以1％的羧甲基纖維素鈉為溶劑進行確定劑量灌胃，灌胃劑量均為1ml/次。大鼠單籠飼養(yǎng)，自然光照，自由飲水，溫度和濕度分別控制在(24±2)℃和65％～70％。以戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，腹主動脈采血；取主動脈弓進行形態(tài)學檢測；取腦，矢狀位分開，右半球用于形態(tài)學檢測，左半球用于生化指標測定。腦組織稱重并根據特定溶劑進行勻漿(按重量(g):體積(ml)＝1:9的比例以磷酸鹽緩沖液、乙醇、生理鹽水為溶劑分別用于elisa及脂質、蛋白檢測)，2500r/分，4℃離心收集上清液待測。實驗過程均按照中國動物實驗倫理委員會標準進行?；A飼料(按質量百分比)：20％小麥，20％大米，10％玉米，24％豆餅，10％魚粉，10％麥麩，1％食鹽，2％骨粉，2％奶粉，1％多種維生素。高脂飼料：94.5％基礎飼料、4％膽固醇、1％膽酸、0.5％丙基硫氧嘧啶。購自中南大學湘雅醫(yī)學院實驗動物學部。3.檢測方法大鼠血清及腦tc、tg、ldl-c和hdl-c分別采用chod-pap法、gpo-pap法、pvs法和pta-mg2+法進行檢測；大鼠血、腦氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，ox-ldl)、血管內皮生長因子及其受體(vegf、vegfr)、血管細胞黏附分子1(vcam-1)、β樣淀粉蛋白(aβ)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)進行檢測；大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶采用酶偶聯(lián)法(微板法)進行檢測；采用尼氏染色觀察海馬神經元形態(tài)學改變并進行計數。4.質量控制實驗所用的器材均先洗凈、消毒，儀器使用前均調試、校準，實驗前先用蒸餾水等進行操作練習。檢測嚴格按照說明書操作。番茄紅素灌胃溶液現用現配。5.統(tǒng)計學分析采用spss18.0統(tǒng)計軟件建立數據庫，實驗數據雙人雙份記錄、錄入和核對。結果以均數±標準差表示；對樣本均數進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，多樣本比較采用方差分析或kruskal-wallosh檢驗，組間兩兩比較用snk-q檢驗或dunnett’st3校正的正太近似法進行分析；檢驗水準α＝0.05。相關分析采用person相關或spearman秩相關分析；不同實驗期間各組比較采用重復測量資料的方差分析。檢驗水準α＝0.05。6.結果實驗期間，大鼠飲食、飲水正常，排泄良好，活動未見異常，皮毛光滑。6.1血脂檢測結果實驗期間各組大鼠血清tc、tg、ldl-c、hdl-c水平檢測結果見表1-4。表1各組大鼠實驗期間血清tc檢測結果(n＝10，mmol/l)表2各組大鼠實驗期間血清tg檢測結果(n＝10，mmol/l)表3各組大鼠實驗期間血清ldl-c檢測結果(n＝10，mmol/l)表4各組大鼠實驗期間血清hdl-c檢測結果(n＝10，mmol/l)注:同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。ftc-時間＝1087.887，p＝0.000；ftc-時間·分組＝54.076，p＝0.000；ftc-分組＝435.956，p＝0.000；ftg-時間＝1735.928，p＝0.000；ftg-時間·分組＝64.654，p＝0.000；ftg-分組＝543.900，p＝0.000；fldl-c-時間＝9495.294，p＝0.000；fldl-c-時間·分組＝269.537，p＝0.000；fldl-c-分組＝2025.400，p＝0.000；fhdl-c-時間＝356.810，p＝0.000；fhdl-c-時間·分組＝7.990，p＝0.000；fhdl-c-分組＝63.759，p＝0.000。表1-4結果顯示，0周，各組血清tc、tg、ldl-c、hdl-c水平無顯著性差異(p>0.05)，重復測量方差分析結果顯示，隨飼養(yǎng)時間延長，高脂飼料飼養(yǎng)大鼠血清tc、tg、ldl-c水平逐漸升高(p<0.05)，hdl-c水平逐漸降低(p<0.05)，血脂異常隨時間逐漸加重。第4周時，高脂組大鼠血清tc、tg、ldl-c分別為實驗開始時13.17、5.63、10.32倍，hdl-c水平為實驗開始時的39.45％，表明高脂飼料喂養(yǎng)4周后大鼠已經形成明顯高脂血癥。實驗末期，各組大鼠血清tc、tg、ldl水平差異有統(tǒng)計學意義：a組低于其余各組(p<0.05)，b高于其他組(p<0.05)；c、e、f、g、h組低于b組(p<0.05)。組合1、2、3組(f-g)降脂效果優(yōu)于陽性藥物對照組(c)、維生素c組(d)、氟伐他汀鈉組(e)。各組大鼠血清hdl-c水平差異有統(tǒng)計學意義，a組高于其他組(p<0.05)。6.2腦脂檢測結果各組大鼠腦脂檢測結果見表5。表5各組大鼠實驗期間腦脂檢測結果(n＝10，mmol/gprot)注：同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。ftc＝8.138，p＝0.000；ftg＝66.299，p＝0.000；fldl-c＝121.917，p＝0.000；fhdl-c＝8.163，p＝0.000表5結果顯示，b組大鼠腦tc、tg、ldl-c水平分別為a組大鼠的2.13、3.04、3.17倍，hdl-c水平為a組0.78倍，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。c-h組與b組相比，可不同程度降低高脂血癥大鼠腦tc、tg、ldl-c，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。6.3各組大鼠血、腦其他生化指標檢測結果各組大鼠血、腦vegf、vegfr、vcam-1、aβ、ox-ldl檢測結果見表6-9。表6各組大鼠血vegf、vegfr、vcam-1檢測結果(n＝10，)注：同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。fvegf＝25.521，p＝0.000；fvcam-1＝33.902，p＝0.000。表6結果顯示，各組大鼠血清vegfr水平差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。各組大鼠血清vegf水平差異有統(tǒng)計學意義(fvegf＝25.521，p＝0.000)；a組低于其他組(p<0.05)；b組高于其他組(p<0.05)；c-h組差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，其中組合組1、2、3均低于其他組(p<0.05)。各組大鼠血清vcam-1水平差異差異有統(tǒng)計學意義(fvcam-1＝39.902，p＝0.000)；a組低于其他組(p<0.05)；b組最高(p<0.05)；c-h高于a組(p<0.05)，低于b組(p<0.05)；組合組1、2、3低于氟伐他汀鈉組(e)(p<0.05)。表7各組大鼠腦vegf、vegfr、vcam-1檢測結果(n＝10，)注：同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。fvegf＝22.683，p＝0.000；fvegfr＝18.357，p＝0.000；fvcam-1＝27.321，p＝0.000。表7結果顯示，各組大鼠腦vegf水平差異有統(tǒng)計學意義(fvegf＝22.683，p＝0.000)；b組高于其他組(p<0.05)；組合組(f、g、h)可有效控制腦vegf升高水平(p<0.05)。各組大鼠腦vegfr水平差異有統(tǒng)計學意義(fvegfr＝18.357，p＝0.000)；b組高于其他組(p<0.05)；陽性組(c)、組合組(f、g、h)可有效控制腦vegf升高水平(p<0.05)。各組大鼠腦vcam-1水平差異有統(tǒng)計學意義(fvcam-1＝28.474，p＝0.000)；b高于其他組(p<0.05)；與高脂模型組(b)相比，組合組(f、g、h)可控制腦vegf升高水平(p<0.05)。表8各組大鼠血aβ、ox-ldl檢測結果(n＝10，)組別數量大鼠血aβ(μg/l)大鼠血ox-ldl(μg/l)a101316.45±207.1734.18±6.81ab101493.18±226.6967.11±11.09bc101448.53±228.8336.54±10.72ad101494.22±249.949.25±11.08ce101221.30±208.0244.97±6.43cf101382.29±200.2133.29±5.57ag101445.20±208.3332.46±8.48ah101378.22±222.3830.15±5.49a注：同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。fox-ldl＝21.256，p＝0.000。表8結果顯示，各組大鼠血清aβ水平差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。各組大鼠血清ox-ldl水平差異有統(tǒng)計學意義(f＝21.256，p＝0.000)。b高于其他組(p<0.05)；c-h組均低于b組(p<0.05)。表9各組大鼠腦aβ、ox-ldl檢測結果(n＝10，)組別數量大鼠腦aβ(μg/l)大鼠腦ox-ldl(μg/l)a101371.20±102.98a45.14±9.48acb101951.28±77.92b65.43±8.87bc101394.65±135.22a42.92±8.60acd101603.37±86.94c37.46±5.69ce101611.64±75.42c48.36±5.60af101406.99±91.34a44.38±7.81acg101398.00±79.94a46.18±5.96ach101368.56±68.91a41.77±8.40ac注：同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。faβ＝60.712，p＝0.000；fox-ldl＝11.905，p＝0.000。表9結果顯示，各組大鼠腦aβ水平差異有統(tǒng)計學意義(f＝60.712，p＝0.000)。b組高于其他組(p<0.05)；c-h組均能抑制腦aβ的升高水平，均低于b組(p<0.05)。各組大鼠腦ox-ldl水平差異有統(tǒng)計學意義(f＝11.905，p＝0.000)。b組高于其他組(p<0.05)；c-h組均能抑制腦ox-ldl的升高水平，均低于b組(p<0.05)。6.4肝功能檢測結果表10各組大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶檢測結果注:同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05。falt＝88.251，p＝0.000；fast＝33.684，p＝0.000。表10結果顯示，各組大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶水平差異有統(tǒng)計學意義。氟伐他汀鈉e組高于其他組(p<0.05)；組合組f-h組均能有效降低由于服用氟伐他汀鈉引起的血清轉氨酶升高水平，均低于e組(p<0.05)。提升組合物可有效降低服用他汀類藥物的副作用，起到保護肝功能的作用。6.5大鼠腦海馬神經元形態(tài)學改變和計數結果如圖1是海馬ca1區(qū)尼氏染色檢測結果，n＝10，(10*20)；如圖2是海馬ca3區(qū)尼氏染色檢測結果，n＝10，(10*20)，大鼠腦海馬神經元計數如表11。如圖1和2可知，圖a：大鼠神經細胞排列緊密，細胞結構正常，無變性、壞死現象，胞漿內nissel體豐富，染色較深。圖b：大鼠神經細胞核固縮，染色加深，細胞結構不清，出現嚴重變性、壞死，胞漿內nissel體消失，細胞數目減少。圖c：大鼠神經細胞細胞結構正常，胞漿內nissel體較a組減少，染色變淡。圖d：大鼠神經細胞分布稀疏，細胞層次減少，細胞結構正常，胞漿內nissel體較a組減少，染色變淡。圖e：大鼠神經細胞分布稀疏，細胞層次減少，細胞結構正常，胞漿內nissel體較a組減少，染色變淡。圖f：大鼠神經細胞結構正常，胞漿內nissel體數目較a組減少、染色變淡，無細胞變性、壞死現象。圖g：大鼠神經細胞結構正常，胞漿內nissel體較a組減少，染色變淡，無細胞變性、壞死現象。圖h：大鼠神經細胞細胞結構正常，胞漿內nissel體較a組減少，染色變淡，無細胞變性、壞死現象。表11各組大鼠腦海馬神經元計數結果組別數量ca1ca3a10124.8±7.9a130.4±14.9ab1059±10.2b63.3±14.7bc10107.1±10.7c111.3±18.4cd1092.8±7.8d92.5±14.9de1078.2±8.4e81.1±10.7df10113.6±13.3c109.6±11.8cg10111.1±8.1c117.3±16.2ach10111.7±8.2c113.7±18.6c注:同列數據上標字母不同表示組間差異有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；字母相同表示差異無顯著性，p＞0.05；fca1＝52.451，p＝0.000；fca3＝20.532，p＝0.000。表11結果顯示，各組大鼠腦ca1、ca3區(qū)神經元計數差異有統(tǒng)計學意義(fca1＝52.451，p＝0.000；fca3＝20.532，p＝0.000)；干預組c-h腦ca1、ca3區(qū)神經元計數均高于高脂組b(p<0.05)；陽性藥物組(c)及組合1、2、3組(f-g)腦ca1、ca3區(qū)神經元計數高于維生素c組(d)、氟伐他汀鈉組(e)(p<0.05)，能更有效防止高脂血癥導致的腦神經元丟失。7.組合物對心腦血管、肝功能及神經元的影響機體內的膽固醇，除從外界獲取外，還來自于自身合成。機體合成膽固醇的限速酶是hmgcoa還原酶，他汀類亦稱3-羥基3-甲基戊二酰輔酶a還原酶抑制劑，能夠抑制膽固醇合成限速酶hmg-coa還原酶，減少膽固醇合成，繼而上調細胞表面ldl受體，加速血清ldl分解代謝，此外還可抑制vldl合成。本實驗參照deepa等在實驗中的造模方法建立高脂血癥模型(94.5％基礎飼料、4.0％膽固醇、1.0％膽酸、0.5％丙基硫氧嘧啶，cct模型)，高脂模型組(b組)血清tc、tg、ldl-c含量持續(xù)升高，第4周時，各指標值分別是b組實驗開始的13.17、5.63、10.32倍，hdl-c含量為實驗開始時的39.45％，表明高脂飼料喂養(yǎng)4周后大鼠已經形成明顯高脂血癥。重復測量方差分析結果顯示，cct飼料飼養(yǎng)大鼠血脂異常嚴重程度隨飼養(yǎng)時間延長而加重。前期研究結果顯示，番茄紅素可明顯降低家兔和高脂血癥大鼠血清tc、tg、ldl-c水平。本實驗結果顯示，隨高脂飼養(yǎng)時間延長，大鼠血清tc、tg、ldl-c水平逐漸升高(p<0.05)；與b組相比，c-h組均可有效降低高脂血癥大鼠血清tc，組合組1、2、3(f-h)降tc效果優(yōu)于c-e組(p<0.05)；與b組相比，c-h組均可有效降低高脂血癥大鼠血清tg，組合組1、2、3(f-h)降tg效果優(yōu)于d、e組(p<0.05)；與b組相比，c、e-h組均可有效降低高脂血癥大鼠血清ldl-c，組合組1、2、3(f-h)降ldl-c效果優(yōu)于d、e組(p<0.05)。腦是膽固醇含量豐富的器官之一，占人體總膽固醇的25％，在腦中主要分布在髓鞘和神經細胞胞膜。膽固醇在神經系統(tǒng)發(fā)育和生理活動中具有重要作用，主要參與髓鞘的形成、神經元樹突和軸突的形成發(fā)育、神經元存活、星形膠質細胞增生、神經修復重塑等，因此，如果腦膽固醇代謝紊亂將會導致神經系統(tǒng)疾病。本研究腦脂結果顯示高脂飼料飼養(yǎng)4周組大鼠腦tc、tg、ldl水平高于其它組(p<0.05)；組合組1、2、3均可有效降低大鼠腦tc、tg、ldl-c水平；其中降腦tc水平與65mg番茄紅素相當(p>0.05)，提示組合物可有效控制高脂血癥大鼠腦總膽固醇升高，維護腦脂正常代謝。vegf(血管內皮生長因子)是血管再生數量和速度的決定因素，具有多種生物學功能，包括調節(jié)內皮細胞的分裂增生，胚胎細胞血管生成，成熟血管重塑等；在中樞神經系統(tǒng)，主要由星形膠質細胞產生和分泌，與其特異性受體作用于血管內皮細胞，共同參與正?；虿±頎顟B(tài)下血管的生長、內皮細胞存活和增殖過程。vegf與腦血管相關疾病關系密切，vegf也在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中有重要影響，與粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性密切相關。vegf通過激發(fā)和促進血管生成在血管病理生理過程中占據重要地位，其表達與新生血管的生成成正相關，而由于這些新生血管脆弱、通透性高易滲漏，破裂出血時會形成小血栓導致管腔狹窄，也會使血液中的白蛋白等蛋白滲漏促進斑塊生長、發(fā)生炎癥反應。有研究顯示，腦缺血狀態(tài)下vegf高度表達。本研究結果顯示，高脂組大鼠血清和腦vegf表達高于正常組(p<0.05)。各干預組血清、腦vegf表達與高脂組差異有統(tǒng)計學意義，其中組合組較陽性對照組控制血清、腦vegf升高效果更佳。vcam-1屬于誘導性細胞粘附分子，正常情況下，血管內皮細胞表面僅有少量表達，而在病理情況下(il-1、tnf-α等細胞因子活化下)，vcam-1數量和功能可明顯上調，并高表達于血管內皮細胞，參與組織損傷；主要表達于as形成早期，促進單核細胞向內皮粘附和遷移，損傷血管內皮；在腦缺血大鼠腦內表達水平也提高。細胞實驗結果顯示，番茄紅素可通過抑制nf-kb信號通路，進而降低由tnf-α誘導的icam-1的表達，保護內皮細胞。本實驗結果顯示，高脂組大鼠血清和腦vcam-1表達高于正常組(p<0.05)。各干預組血清、腦vcam-1表達與高脂組差異有統(tǒng)計學意義，其中組合組較陽性對照組控制血清、腦vcam-1升高效果相當。氧化型低密度脂蛋白(ox-ldl)由體內氧化應激對ldl進行氧化修飾形成，是不穩(wěn)定斑塊形成的關鍵因子，當細胞內ox-ldl水平升高后，細胞內ros水平增加，刺激細胞產生各種細胞因子(vcam-1、icam-1、vegf)和炎癥因子，促進動脈粥樣硬化形成并是主要危險因素；ox-ldl亦可刺激細胞產生特定趨化劑如單核細胞趨化劑-1(mcp-1)，促進單核細胞趨化成為巨噬細胞，隨著脂質堆積巨噬細胞轉變?yōu)榕菽毎龠Mas的形成。研究顯示番茄紅素可能通過降低體內氧化應激反應，減少ldl氧化，發(fā)揮保護作用。本實驗結果顯示高脂血癥組血清、腦ox-ldl較正常組升高。各干預組均能一定程度降低ox-ldl表達水平，其中組合組1-3(f-h)降低ox-ldl水平與陽性對照組相當。β淀粉樣蛋白(βamyloidpeptide，aβ)是老年斑(senileplaques)的核心成分，老年斑老年斑是ad(阿爾茨海默病)的主要病理變化。已有研究顯示高脂血癥會導致雄性大鼠海馬app(βamyloidprecursorprotein，aβ前體蛋白)表達增加。腦內β淀粉樣蛋白的聚集還可引起一系列神經元變化，包括神經元的凋亡，神經突觸的破損以及激活神經膠質細胞。被激活的小膠質細胞以及星形膠質細胞可導致促炎因子以及炎癥因子的分泌，如il-1、tnf-α等，并可提高機體活性氧水平以及脂質過氧化。研究表明，番茄紅素可減緩由aβ引起的神經元損傷，通過抑制app的降解以及減輕aβ的沉積對神經元的直接損傷作用。他汀類藥物可通過維持神經系統(tǒng)膽固醇平衡、抑制膽固醇的合成，從而抑制app的β代謝，減少大鼠大腦原代皮層細胞中aβ的沉積。本實本次結果顯示高脂飼料飼養(yǎng)組大鼠腦aβ水平高于基礎飼料飼養(yǎng)組，說明高脂血癥可致大鼠腦血管發(fā)生淀粉樣病變。本實驗結果顯示高脂血癥組腦aβ較正常組升高。各干預組均能一定程度降低腦aβ表達水平，其中組合組1-3(f-h)降低aβ水平與陽性對照組相當。越來越多的研究表明，高強度他汀治療伴隨著更高的肌病以及肝酶上升風險，而這在中國人群中更為突出。絕大多數人對他汀的耐受性良好，其不良反應多見于接受大劑量他汀治療者，常見表現如下：肝功能異常：主要表現為轉氨酶升高，發(fā)生率約0.5％～3.0％，呈劑量依賴性。血清丙氨酸氨基轉移酶(alanineaminotransferase，alt)和(或)天(門)冬氨酸氨基轉移酶(aspartateaminotransferase，ast)升高達正常值上限3倍以上及合并總膽紅素升高患者，應減量或停藥。alt和ast水平一般可反映肝細胞損傷程度。alt主要存在于肝細胞漿中，當肝細胞損傷時，細胞內轉氨酶可進入血中，引起血清中alt的水平升高。ast存在于心臟、骨骼肌、腦和腎臟及肝臟；20％的ast存在于胞漿內，而有80％的ast存在于線粒體中，當肝細胞嚴重損傷時，ast從線粒體內釋放入血，使血清ast水平升高。ast和alt是比較敏感的反應肝細胞損傷的檢測項目。本實驗中，氟伐他汀鈉組(e)血清alt、ast高于其他組(p<0.05)；組合組1-3(f-h)均能有效降低由于服用氟伐他汀鈉引起的血清轉氨酶升高水平，均低于e組(p<0.05)。提示組合物可有效降低服用他汀類藥物的副作用，起到保護肝功能的作用。在本發(fā)明大鼠實驗中采用番茄紅素5、10、20mg·kgbw-1·d-1的劑量，分別與100mg·kgbw-1·d-1維生素c、5mg·kgbw-1·d-1氟伐他汀鈉(相當于人體10-20mg/天)進行配伍，動物實驗結果提示本組合物劑量反推人體為：番茄紅素10-40mg/天+維生素c100mg/天+氟伐他汀鈉10-20mg/天。在此劑量下，可有效控制高脂血癥患者血脂異常、保護心腦血管、神經元。此外，番茄紅素可降血脂，同時是強抗氧化劑，對低密度脂蛋白(ldl)氧化有抑制作用，因而具有降低氧化型低密度脂蛋白(ox-ldl)致動脈粥樣硬化和保護心血管內膜及消除膽固醇沉積的作用；維生素c具有抗炎、抗氧化作用；氟伐他汀鈉是膽固醇合成限速酶抑制劑，效果溫和；考慮到動物實驗高脂模型大鼠在灌胃期間仍以持續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，結合人體實際飲食情況及上述三種物質特性，可將番茄紅素10-40mg·d-1、維生素c100mg·d-1和氟伐他汀鈉5-10mg·d-1作為預防高脂血癥的使用劑量，既能達到預防效果，又能適當減少氟伐他汀鈉的使用量；綜合考慮預防和控制效果，并適當降低使用劑量，推出一般情況下人體的最佳使用劑量為：番茄紅素10mg/天+維生素c100mg/天+氟伐他汀鈉10mg/天?！吨袊扇搜惓７乐沃改?2016年修訂版)》指出中等強度的氟伐他汀鈉為80mg/天，本組合中使用的大鼠5mg·kgbw-1·d-1的實驗劑量相當于人體10-20mg/天(臨床上氟伐他汀鈉的使用劑量為20mg-80mg/天)，該劑量低于患者最低服用劑量，降低藥物劑量從而降低了藥物副作用。通過組合，降低了由于服用氟伐他汀鈉引起的丙氨酸氨基轉移酶(alt)及天(門)冬氨酸氨基轉移酶(ast)升高的癥狀，說明組合物有效控制了藥物副作用并起到保護作用。同時，基于番茄紅素本身具有高效的抗高脂血癥損傷心、腦血管及神經元的作用，借助系統(tǒng)生物學的思想，本發(fā)明首次將番茄紅素、維生素c、氟伐他汀鈉進行配伍，既能在上述劑量下協(xié)同番茄紅素發(fā)揮抗高脂血癥心腦血管、神經元損傷的作用，又能降低番茄紅素的使用劑量，使其反推人體時符合普通成年人番茄紅素的中國居民膳食營養(yǎng)素參考攝入量；通過配伍補充一定量的維生素c，加上人體每日通過膳食攝入的維生素c，使其總攝入量達到200mg/d的pi-ncd以實現同時預防慢性非傳染病的效果；通過降低氟伐他汀鈉的服用劑量來降低藥物副作用，借助番茄紅素和維生素c的協(xié)同作用有效降脂，并保護機體穩(wěn)態(tài)。最終，達到降低經濟成本的目的，提高經濟效應，并為后期的臨床應用提供相關依據，帶來良好的社會效應。當前第1頁12