本發(fā)明屬于植物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種馬黛茶提取物的制備工藝及其在皮膚外用劑或化妝品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

皮膚是指身體表面包在肌肉外面的組織，是人體最大的器官，主要承擔(dān)著保護(hù)身體、排汗、感覺冷熱和壓力等功能。皮膚覆蓋全身，保護(hù)著人體內(nèi)各組織和器官免受病原微生物等外界物質(zhì)以及物理等機(jī)械損傷的侵襲，有效地抵御外界刺激；皮膚還保持著人體的水分、電解質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì)等的流失，有效地維持了人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，是保護(hù)人體的天然屏障。

皮膚由表皮、真皮和皮下組織三部分構(gòu)成的，不同皮膚在結(jié)構(gòu)上的差異會(huì)對(duì)膚色具有一定的影響。表皮層又由角質(zhì)層、透明層、顆粒層、棘層及基底層組成，其中角質(zhì)層是位于體表5～20層死亡的扁平細(xì)胞，當(dāng)角質(zhì)層過厚或含水量低時(shí)，皮膚反射光線的能力降低，從而呈現(xiàn)黯淡的膚色；黑色素主要分布在表皮的基底層中，黑色素對(duì)光線的吸收能力最強(qiáng)，黑色素含量越多，則呈現(xiàn)的膚色越深。真皮位于表皮深層，是有致密結(jié)締組織組成，其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維、彈性纖維。真皮中的膠原纖維賦予皮膚張力和韌性，其分布不均勻或結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致光線不能被均勻的反射，使得膚色不均勻且沒有光澤；此外，如果真皮中的血管充盈度不夠或血液循環(huán)不暢，則血色素凝聚或者色素含量會(huì)下降，從而導(dǎo)致膚色暗紅或蒼白。

雖然皮膚結(jié)構(gòu)對(duì)膚色有一定的影響，但膚色主要取決于皮膚所含各種色素的含量及類型。人類皮膚主要含有褐黑色的黑色素、紅色的氧化血紅蛋白、藍(lán)色的還原血紅蛋白和黃色的胡蘿卜素等4種生物色素，其中胡蘿卜素為外源性色素，主要通過飲食攝取，其余3種為內(nèi)源性色素，由機(jī)體自身合成。研究發(fā)現(xiàn)，黑種人、黃種人及白種人的皮膚的黑色素含量和形態(tài)存在顯著性的差異：黑種人黑色素顆粒最大，呈棕色、棕黑或黑色；黃種人黑色素顆粒較黑種人小，較白種人略大，呈淺棕色、棕色或棕黑色；白種人黑素顆粒較細(xì)小，呈淡紅色，黃紅色或紅棕色。因此，皮膚中黑色素的含量和形態(tài)是決定膚色深淺的主要因素。

色素是生物為了對(duì)抗紫外線而產(chǎn)生的，黑色素是所有色素中最強(qiáng)大的色素。黑色素是動(dòng)物皮膚或者毛發(fā)中存在的一種黑褐色的色素，由生物體內(nèi)一種特殊的細(xì)胞即黑色素細(xì)胞以酪氨酸為底物進(jìn)行合成，其合成過程受酪氨酸酶(tyrosinase，tyr)、多巴色素互變酶(dopaehrometautomerase)、5,6-二羥基吲哚-2-羧酸氧化酶(dhicaoxidase)和促黑細(xì)胞激素(melanocytestimulatinghormone，msh)等多種酶或激素的調(diào)控，其中酪氨酸酶在黑色素的生物合成中起決定性作用。黑色素細(xì)胞在酪氨酸酶的作用下，將酪氨酸轉(zhuǎn)化為多巴，再經(jīng)一系列復(fù)雜的生化過程而轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏?。因此，酪氨酸酶的活性越高，即與酪氨酸作用產(chǎn)生的黑色素就會(huì)增多，表現(xiàn)于面部皮膚上產(chǎn)生各種黑斑或雀斑等。因此，抑制酪氨酸酶活性是有效減少黑色素生成的一種重要途徑，國內(nèi)外學(xué)者常利用抑制酪氨酸酶活性試驗(yàn)研究篩選治療皮膚色素沉著過多癥的藥物，并將一些可作為酪氨酸酶抑制劑的物質(zhì)應(yīng)用到美白美容化妝品中。

隨著人們生活水平和自我養(yǎng)護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，除了美白、保濕等對(duì)皮膚的基礎(chǔ)護(hù)理作用外，敏感性肌膚帶來的各種皮膚問題也引起了人們的廣泛關(guān)注。尤其近年來，氣候變化異常、空氣污染嚴(yán)重、層出不窮的化妝品種類以及復(fù)雜的化妝品成分，提高了敏感皮膚出現(xiàn)以及接受外界刺激的可能性，也加據(jù)了各種皮膚炎癥和過敏癥狀發(fā)生的可能性，人們皮膚健康的意識(shí)和敏感皮膚的認(rèn)知也在逐步提高。

皮膚敏感是指對(duì)多種因素易感而誘發(fā)的主觀感覺癥狀的皮膚狀態(tài)，即皮膚反應(yīng)性高、耐受性差甚至易過敏。敏感皮膚主要發(fā)生于面部，還有手腳、頭皮等其他部位。敏感肌膚的主要特點(diǎn)是更為干燥、容易緊繃和發(fā)紅，受到輕微刺激，即可產(chǎn)生瘙癢、脫屑甚至燒灼和刺痛等感覺，嚴(yán)重者可產(chǎn)生不良情緒或者精神癥狀。因此，針對(duì)敏感皮膚的修護(hù)作用，包括對(duì)敏感皮膚進(jìn)行的日常護(hù)理和改善，抑制皮膚刺激反應(yīng)，舒緩炎癥和過敏，對(duì)提高皮膚自我屏障功能，抵抗外界對(duì)皮膚的刺激，改善肌膚狀態(tài)具有重要的意義。

敏感皮膚的成因有多種，主要包括屏障功能缺陷、神經(jīng)反應(yīng)性過強(qiáng)或炎癥反應(yīng)的惡性循環(huán)，在此基礎(chǔ)上將抗敏活性分為屏障功能修護(hù)、神經(jīng)鎮(zhèn)靜及抑制炎癥3種類型。其中，由于皮膚屏障功能缺陷導(dǎo)致的外界有害因素入侵和體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的流失，是誘發(fā)各種炎癥和皮膚敏感的重要原因。因此，加強(qiáng)對(duì)皮膚屏障功能的維護(hù)和修復(fù)，可有效地改善皮膚狀態(tài)，提高皮膚對(duì)外界刺激或過敏性因子的抵抗能力。

透明質(zhì)酸(hyaluronicacid，ha)是細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)中含量最多、所占比例最大的成分，具有很強(qiáng)的水結(jié)合能力和粘滯性，可維持細(xì)胞外間質(zhì)體積，調(diào)控細(xì)胞生長因子和細(xì)胞因子的分泌，影響細(xì)胞的黏附、生長、增殖和分化，因而在維持皮膚水分和彈性、創(chuàng)傷愈合和血管形成等過程中起主要的作用。透明質(zhì)酸酶(hyaluronidase,haase)是透明質(zhì)酸的特異性裂解酶，它能夠使透明質(zhì)酸低分子化，從而降低體內(nèi)透明質(zhì)酸的活性，抑制透明質(zhì)酸酶的活性可保證透明質(zhì)酸的含量和正常功能。因此，透明質(zhì)酸酶抑制試驗(yàn)是最典型的抗敏活性體外評(píng)價(jià)方法，以透明質(zhì)酸酶抑制率為指標(biāo)評(píng)價(jià)物質(zhì)的抗過敏活性，透明質(zhì)酸酶抑制率越大，則物質(zhì)的抗過敏活性就越強(qiáng)。

與正常皮膚相比，敏感皮膚存在屏障功能損傷或神經(jīng)功能異常的特點(diǎn)，更難于抵御外界刺激物與過敏原的侵襲，容易發(fā)生一系列刺激或過敏導(dǎo)致的皮膚炎癥反應(yīng)，然后進(jìn)一步損害皮膚屏障結(jié)構(gòu)與神經(jīng)末梢，導(dǎo)致惡性循環(huán)。因此，炎癥反應(yīng)是敏感皮膚的另一重要因素，通過對(duì)受試物質(zhì)抑制炎癥功效的評(píng)價(jià)，可以反映其對(duì)敏感皮膚接觸外界物質(zhì)(刺激物或過敏原)時(shí)引起的不良反應(yīng)的抑制作用強(qiáng)弱。

巨噬細(xì)胞是一種位于組織內(nèi)的白血球，屬于免疫細(xì)胞，在機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中具有重要作用。炎癥反應(yīng)時(shí)，巨噬細(xì)胞在細(xì)菌及其內(nèi)毒素的刺激下，會(huì)分泌大量的具有致炎作用的內(nèi)源性化學(xué)物質(zhì)——炎癥因子，如一氧化氮(no)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和白細(xì)胞介素1β(ll-1β)等，這些炎癥因子又可以進(jìn)一步活化巨噬細(xì)胞，活化后的巨噬細(xì)胞會(huì)釋放大量no，會(huì)造成細(xì)胞的傷害與血管過度的舒張，最后造成嚴(yán)重的發(fā)炎反應(yīng)以及并發(fā)癥。no作為一種炎癥介質(zhì)，在炎癥和免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，抑制巨噬細(xì)胞活化引起的no的釋放，能夠一定程度上減輕炎癥。此外，no能與超氧化陰離子形成過氧化亞硝基離子而分解為具有強(qiáng)毒性的·oh，一旦進(jìn)入靶細(xì)胞或臨近細(xì)胞將引起細(xì)胞毒性作用甚至損傷組織。因此，減少活化巨噬細(xì)胞過量釋放no具有一定的抗炎意義。對(duì)巨噬細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)的抑制作用研究是檢測(cè)物質(zhì)對(duì)抗遲發(fā)型過敏作用的常用方法。

馬黛茶(yerbamatetea)，又作巴拉圭茶，是冬青科(aquifoliaceae)冬青屬(ilex)多年生木本植物巴拉圭茶樹(ilexparaguarensis)的干燥葉片，是熱帶或亞熱帶多年生常綠灌木。野生巴拉圭茶樹原產(chǎn)于南美地區(qū)，廣泛分布于阿根廷、智利、秘魯和巴西，目前被廣泛種植于許多熱帶國家；作為一種傳統(tǒng)飲品，巴拉圭茶在一些拉丁美洲國家如巴西、阿根廷、烏拉圭、巴拉圭等廣為流行，被譽(yù)為阿根廷的國茶。

有文獻(xiàn)報(bào)道，馬黛茶中含有豐富的多酚類物質(zhì)，但其多酚成分與普通茶有顯著不同，巴拉圭茶中含大量普通茶中含極少或根本不含有綠原酸，而茶中豐富的兒茶素類物質(zhì)在巴拉圭茶中卻不含有，此外，還含有少量的山奈酚、蘆丁、槲皮素等類黃酮類物質(zhì)。馬黛茶中還含有一定量的嘌呤生物堿(咖啡堿等)和皂苷(馬黛皂苷等)等類物質(zhì)。藥理研究表明，馬黛茶具有抗氧化、降血糖、抗菌、抗病毒、利膽、助消化、減肥、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗心腦血管疾病、抗腫瘤、興奮神經(jīng)系統(tǒng)等多種作用。

本發(fā)明的發(fā)明人在經(jīng)過了廣泛而深入的研究之后發(fā)現(xiàn)：馬黛茶提取物同時(shí)具有抑制體外酪氨酸酶和透明質(zhì)酸酶活性的作用，還具有抑制或減少巨噬細(xì)胞的no釋放量的作用。因此，馬黛茶可作為功效添加劑加入到皮膚外用劑，尤其化妝品中，用于美白皮膚、抗過敏和抗炎等功效作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)馬黛茶提取物具有酪氨酸酶抑制作用，透明質(zhì)酸酶抑制作用以及抑制和減少no釋放的作用。

一方面，本發(fā)明提供了一種馬黛茶提取物的制備方法，所述制備方法選自：煎煮提取、溶劑浸提、超聲提取。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，馬黛茶提取物的制備方法采用煎煮提取，煎煮提取過程還包括以下步驟：

b)過濾，濾液醇沉，離心，取上清液，得到馬黛茶提取物。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，馬黛茶提取物的制備方法采用溶劑浸提，溶劑浸提過程采用的溶劑選自：去離子水、甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇、丁二醇、甘油或其組合。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，馬黛茶提取物的制備方法采用超聲提取，超聲提取過程還包括以下步驟：

b)過濾，濾液醇沉，過濾，得到馬黛茶提取物。

另一方面，本發(fā)明提供了通過本發(fā)明所述方法提取得到的馬黛茶提取物。

又一方面，本發(fā)明還涉及馬黛茶提取物在皮膚美白、皮膚抗過敏、皮膚抗炎中的應(yīng)用。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明主要涉及馬黛茶提取物的皮膚美白應(yīng)用，所述皮膚美白作用通過抑制酪氨酸酶實(shí)現(xiàn)。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明主要涉及馬黛茶提取物的皮膚抗過敏應(yīng)用，所述皮膚抗過敏作用通過抑制透明質(zhì)酸酶實(shí)現(xiàn)。

在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明主要涉及馬黛茶提取物的皮膚抗炎應(yīng)用，所述皮膚抗炎作用通過抑制巨噬細(xì)胞釋放no實(shí)現(xiàn)。

發(fā)明詳述

本發(fā)明公開了一種馬黛茶提取物的制備方法。其具體提取工藝包括：浸提、煎煮、回流提取、超聲提取、微波提取、動(dòng)態(tài)提取等。

在一些實(shí)施方式中，馬黛茶原料在提取之前可以進(jìn)行預(yù)處理。例如，預(yù)處理方式可以包括粉碎、脫脂等。

一般而言，馬黛茶的提取過程如下：將馬黛茶(例如，福建亞通綠園茶業(yè)有限公司的馬黛茶)預(yù)處理(如果有的話)后，加入適量溶劑，進(jìn)行提取，去渣取提取液，濃縮，制成一定生藥濃度的馬黛茶濃縮液。

在一些具體的實(shí)施方式中，采用溶劑浸提法來制備馬黛茶提取物。例如，可以采用的溶劑包括去離子水、甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇、丁二醇、甘油等親水性溶劑及其混合溶劑等。

在一些具體的實(shí)施方式中，采用去離子水通過煎煮提取法來制備馬黛茶提取物。在煎煮提取之后，過濾，然后用乙醇進(jìn)行醇沉。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用70％的乙醇進(jìn)行醇沉。然后離心，取上清液減壓濃縮后即可得到馬黛茶提取物。

在一些具體的實(shí)施方式中，采用溶劑浸提法來制備馬黛茶提取物。例如，可以采用乙醇進(jìn)行浸提。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用70％的乙醇進(jìn)行浸提。然后，進(jìn)行過濾，濾液減壓濃縮后，離心。之后取上清液，過濾后即可得到馬黛茶提取物。

在一些具體的實(shí)施方式中，采用超聲提取法來制備馬黛茶提取物。例如，可以采用去離子水在50℃的條件下進(jìn)行超聲。然后，進(jìn)行過濾，濾液減壓濃縮后。然后，用乙醇進(jìn)行醇沉。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用70％的乙醇進(jìn)行醇沉。然后過濾，濾液減壓濃縮后，過濾即可得到馬黛茶提取物。

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)馬黛茶提取物具有抑制酪氨酸酶活性的作用。因此，馬黛茶提取物可以作為具有美白功效的添加劑加入化妝品中，有效抑制黑色素的增加，起到美白皮膚或淡化雀斑等作用。

在一些實(shí)施方式中，采用濃度為1-1000ug/ml的馬黛茶提取物來抑制酪氨酸酶活性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用1-100ug/ml的馬黛茶提取物來抑制酪氨酸酶活性。在另一些更優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用50-60ug/ml的馬黛茶提取物來抑制酪氨酸酶活性。

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)馬黛茶提取物具有抑制透明質(zhì)酸酶活性的作用。因此，馬黛茶提取物可以作用具有抗敏作用的添加劑加入化妝品中，維持細(xì)胞或組織中透明質(zhì)酸的含量和正常功能，保持表皮細(xì)胞彈性和正常功能，對(duì)皮膚起到保濕和抗敏的作用。

在一些實(shí)施方式中，采用濃度為0.1-1000mg/ml的馬黛茶提取物來抑制透明質(zhì)酸酶活性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用0.1-100mg/ml的馬黛茶提取物來抑制透明質(zhì)酸酶活性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用1-100mg/ml的馬黛茶提取物來抑制透明質(zhì)酸酶活性。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用10-100mg/ml的馬黛茶提取物來抑制透明質(zhì)酸酶活性。

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)馬黛茶提取物能夠減少或抑制脂多糖刺激巨噬細(xì)胞釋放一氧化氮。因此，馬黛茶提取物可以作為具有抗炎作用的添加劑加入化妝品中，顯著地抑制lps刺激后巨噬細(xì)胞對(duì)no的大量釋放，從而抑制或減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生，起到抗炎的作用。

在一些實(shí)施方式中，采用濃度為1-1000μg/ml的馬黛茶提取物來抑制一氧化氮釋放。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用10-500μg/ml的馬黛茶提取物來抑制一氧化氮釋放。在一些優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用100-500μg/ml的馬黛茶提取物來抑制一氧化氮釋放。在一些最優(yōu)選的實(shí)施方式中，采用400μg/ml的馬黛茶提取物來抑制一氧化氮釋放。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種皮膚外用劑，所述皮膚外用劑包含按照本發(fā)明方法制備得到的包含馬黛茶提取物及化妝品領(lǐng)域可接受的賦形劑。

所述皮膚外用劑是通常用于皮膚外部的所有成分的統(tǒng)稱概念，例如可以是化妝料組合物或藥學(xué)組合物。所述化妝料組合物中可以是基礎(chǔ)化妝料、面部妝容化妝料、身體用化妝料、頭發(fā)護(hù)理用化妝料等，對(duì)其劑型無特殊限制，根據(jù)不同目的可合理選擇。

所述化妝料組合物中根據(jù)劑型和目的的不同還含有不同的化妝品學(xué)層面允許的介質(zhì)或基質(zhì)賦形劑。

可以用于本發(fā)明皮膚外用劑組合物的化妝品、皮膚病學(xué)或藥學(xué)上可接受的賦形劑為水相、油相、凝膠、水包蠟型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。水相為一種或多種水溶性或分散性組分的混合物，其在室溫(25℃)下可以為液體、半固體或固體。賦形劑包括或可以為在水或水-醇賦形劑中的混懸液、分散液或溶液的形式，其可以含有增稠劑或凝膠劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于本領(lǐng)域技術(shù)人員掌握的知識(shí)選擇合適的產(chǎn)品形式，其中包含的組分。

所述的組合物可以包括水相，該水相可以含有水或水與至少一種親水性有機(jī)溶劑的混合物，所述的親水性有機(jī)溶劑諸如醇，尤其是含有2-5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈低級(jí)一元醇，如乙醇或丙醇；多元醇，如丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。

當(dāng)發(fā)明的組合物為乳液形式時(shí)，該組合物還可以任選包含表面活性劑。

所述的組合物還可以包含成膜聚合物，如聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烴的樹脂和/或硅氧烷樹脂?？梢詫⒕酆衔锶苡诨蚍稚⒂诨瘖y品可接受的賦形劑中并且任選與增塑劑合并。

本發(fā)明的組合物還可以包含油相，所述的油相含有在室溫(25℃)下為液體的油溶性或油分散性組分和/或在室溫下為油狀或蠟狀的物質(zhì)，如蠟、半固體、樹膠及其混合物。該油相還可以含有有機(jī)溶劑。

通常在室溫下為液體，合適的油性物質(zhì)包括：來源于動(dòng)物的基于烴的油，如全氫化角鯊烯；基于烴的植物油，如液體的c4-10脂肪酸的甘油三酯類，例如庚酸或辛酸甘油三酯類，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鱷梨油、辛酸/癸酸甘油三酯類、霍霍巴油；礦物或合成來源的直鏈或支鏈烴類，例如液體石蠟及其衍生物、凡士林；合成酯類和醚類，特別是脂肪醇的酯類，例如肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、異硬脂酸異硬脂醇酯；羥基化酯類，例如乳酸異硬脂醇酯、羥基硬脂酸辛酯、羥基硬脂酸辛酯、羥基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯類、辛酸酯類和癸酸脂類；多元醇酯類，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二異壬酸酯和季戊四醇酯類；含有c12-26的脂肪醇類，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇、油醇；基于部分烴的氟油和/或氟硅油，硅油，在室溫下為液體或半固體的揮發(fā)性或非揮發(fā)性的直鏈或環(huán)狀聚甲基硅氧烷，例如環(huán)狀聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任選包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。

本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含常用于化妝品領(lǐng)域中的任何組分。這些組分包括防腐劑、水相增稠劑(提取物生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠劑、芳香劑、親水性和親脂性活性劑及其混合物。

本發(fā)明的組合物還可以包含另外的顆粒相，所述的顆粒相可以為化妝品組合物中使用的顏料和/或珠光劑和/或填充劑。

顏料可以存在于組合物中，合適的無機(jī)顏料包括氧化鈦、氧化鋯和氧化鈰以及氧化鋅、氧化鐵和鐵藍(lán)；合適的有機(jī)顏料包括鋇、鍶、鈣和鋁色淀和碳黑。

珠光劑可以存在于組合物中，合適的珠光劑包括涂覆了氧化鈦、氧化鐵或天然顏料的云母。

填充劑可以存在于組合物中，合適的填充劑包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鋅、云母、高嶺土、尼龍粉末、聚乙烯粉末、特氟龍、淀粉、一氮化硼、共聚物微球，例如硅氧烷樹脂微珠。

本發(fā)明組合物的油相可以包含一種或多種蠟、樹膠或其混合物。蠟包括基于烴的蠟、氟蠟和/或硅氧烷蠟，并且可以來源于植物、礦物、動(dòng)物和/或合成來源。合適的蠟包括蜂蠟、巴西棕櫚蠟、小燭樹蠟、石蠟、微晶蠟、地蠟；合成蠟包括聚乙烯蠟、含有c16-45的硅氧烷蠟。樹膠一般為聚二甲基硅氧烷或羧甲基纖維素鈉或提取物類，并且半固體物質(zhì)一般為基于烴的化合物，如羊毛脂及其衍生物。

可以將本發(fā)明的組合物配制成任何合適的產(chǎn)品形式。這類產(chǎn)品形式包括，但不限于氣溶膠型噴霧劑、霜?jiǎng)?、乳液、固體、液體、分散體、泡沫、凝膠、化妝水、摩絲、軟膏、粉劑、貼劑、潤發(fā)油、溶液、手按泵型噴霧劑、棒狀物、面膜和濕紙巾?？梢詫⒈景l(fā)明的組合物通過本領(lǐng)域眾所周知的各種方法便利地用于制備或作為化妝品、皮膚病學(xué)或藥物局部施用產(chǎn)品。

本發(fā)明的皮膚外用劑組合物可以包括一種或多種下列成分：抗過敏劑、抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、著色劑去色素劑、潤膚劑、乳化劑、表皮脫落劑、成膜劑、香料、保濕劑、昆蟲驅(qū)避劑、潤滑劑、藥物活性劑、增濕劑、耐光劑、防腐劑、護(hù)膚劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、防曬劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度調(diào)節(jié)劑、維生素或其任意組合。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)：馬黛茶提取物可以有效地抑制酪氨酸酶的活性，從而可以有效抑制黑色素的增加，起到美白皮膚或淡化雀斑等作用；馬黛茶提取物還可以有效地抑制透明質(zhì)酸酶的活性，從而維持細(xì)胞或組織中透明質(zhì)酸的含量和正常功能，保持表皮細(xì)胞彈性和正常功能，對(duì)皮膚起到保濕和抗敏的作用；馬黛茶提取物可以顯著地抑制lps刺激后巨噬細(xì)胞對(duì)no的大量釋放，從而抑制或減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生，起到抗炎的作用。

下面結(jié)合具體的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。但是，應(yīng)該明白，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另有說明，所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。

實(shí)施例1：馬黛茶提取物的制備

稱取馬黛茶適量，分別用15和10倍量去離子水煎煮提取2次，過濾，濾液煎煮濃縮至1倍生藥量，70％乙醇醇沉，高速離心，取上清液減壓濃縮，即得馬黛茶提取物，生藥濃度：1.0g/g，固體含量：20.65％。

實(shí)施例2：馬黛茶提取物的制備

稱取馬黛茶適量，用10倍量70％乙醇常溫浸提，過濾，濾液減壓濃縮至1倍生藥量，高速離心，取上清，過濾，即得馬黛茶提取物，生藥濃度：1.0g/g，固體含量：18.51％。

實(shí)施例3：馬黛茶提取物的制備

馬黛茶粉碎，過篩，用10倍量去離子水50℃超聲提取2次，每次30min(弘祥隆循環(huán)超聲提取機(jī)，型號(hào)：tgcxn-2b，功率900w，變幅桿參數(shù)φ＝10)，過濾，濾液煎煮濃縮至約1倍生藥量，70％乙醇醇沉，過濾，濾液減壓濃縮，過濾，即得馬黛茶提取物，生藥濃度：1.0g/g，固體含量：19.48％。

取實(shí)施例1-3所得馬黛茶提取濃縮液作為體外功效測(cè)試樣品，小體積分裝后于-20℃保存。

實(shí)施例4：對(duì)酪氨酸酶活性的影響

儀器與試劑：

1、ph6.8的磷酸緩沖液

①0.2m磷酸氫二鈉(分析純)：71.63g溶于1000ml蒸餾水搖勻靜置待用；

②0.1m檸檬酸(分析純)：21.04g溶于1000ml蒸餾水搖勻靜置待用；

③ph6.8磷酸緩沖液的配制：取0.2m磷酸氫二鈉154.5ml，加入0.1m檸檬酸45.5ml，混勻，配制成200ml的磷酸緩沖液。

2、酪氨酸酶溶液(sigma)：用ph6.8磷酸緩沖液配制成濃度為1mg/50ml的溶液。

3、l-dopa溶液(sigma)：用ph6.8磷酸緩沖液配制成濃度為1g/100ml的溶液。

4、紫外分光光度計(jì)。

5、比色皿：10mm。

本實(shí)驗(yàn)分別設(shè)立樣品管(t)、樣品對(duì)照管(t0)、陽性對(duì)照管(c)和陰性對(duì)照管(c0)。在樣品管和樣品對(duì)照管中各加入1.0ml對(duì)應(yīng)濃度的樣品溶液，陽性對(duì)照管和陰性對(duì)照管則分別加入1.0mlph6.8的磷酸緩沖液；在樣品管和陽性對(duì)照管中各加入0.5ml濃度為1mg/50ml的酪氨酸酶溶液(以緩沖液配制)，樣品對(duì)照管與陰性對(duì)照管以0.5mlph6.8的磷酸緩沖液代替。振搖所有反應(yīng)管，使各反應(yīng)溶液充分混勻，分別在各反應(yīng)管中加入2.0ml的1％的l-dopa(以緩沖液配制)，于30℃條件下反應(yīng)10分鐘，在475nm處測(cè)定各反應(yīng)管的光密度值(od)。

表1：不同實(shí)施例樣品在不同濃度下對(duì)酪氨酸酶活性的影響

注：酪氨酸酶活性抑制率(％)＝(1﹣(t﹣t0)/(c﹣c0))×100％

式中：t：樣品管od；t0：樣品對(duì)照管od；c：陽性對(duì)照管od；c0：陰性對(duì)照管od。

酪氨酸酶活性體外抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(表1)，實(shí)施例1-3的樣品均在不同濃度下對(duì)酪氨酸酶活性有不同程度的抑制作用，其中實(shí)施例1樣品在作用濃度為57ug/ml時(shí)對(duì)酪氨酸酶的活性抑制率最高，達(dá)到67.70％。說明實(shí)施例1-3樣品酪氨酸酶活性具有一定的抑制作用。

實(shí)施例5：對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的影響

儀器與試劑：

1、0.1m乙酸緩沖溶液(ph3.5)：0.1n乙酸(分析純)16ml+0.1m乙酸鈉(分析純)1ml。

2、透明質(zhì)酸酶(sigma)溶液：6000u/ml牛透明質(zhì)酸酶的0.1m乙酸緩沖液(ph3.5)。

3、透明質(zhì)酸鈉(化妝品級(jí))溶液：0.24g溶于100mlph3.5的乙酸緩沖液中。

4、0.4n氫氧化鈉(分析純)溶液：0.4g氫氧化鈉溶于25ml水中。

5、0.4m硼酸鉀(分析純)溶液：30.55g硼酸鉀/250ml。

6、二甲基氨基苯甲醛(分析純)溶液：1g二甲基氨基苯甲醛/350ml乙酸緩沖液

7、紫外分光光度計(jì)。

8、比色皿：10mm。

本實(shí)驗(yàn)分別設(shè)立樣品管(t)、樣品對(duì)照管(t0)、陽性對(duì)照管(c)和陰性對(duì)照管(c0)。在樣品管(t)和樣品對(duì)照管(t0)中各加入400ul對(duì)應(yīng)濃度的樣品溶液，陽性對(duì)照管(c)和陰性對(duì)照管(c0)中以等量的緩沖液代替；樣品管和陽性對(duì)照管內(nèi)加入50ul透明質(zhì)酸酶溶液混勻，樣品對(duì)照管和陰性對(duì)照管加入50ulph3.5的乙酸緩沖液混勻，37℃水浴20分鐘；各反應(yīng)管分別加入透明質(zhì)酸鈉溶液350ul，37℃水浴40分鐘；各反應(yīng)管再分別加入0.4n氫氧化鈉100ul和0.4m硼酸鉀100ul，沸水加熱3分鐘，冷卻至室溫；分別加入二甲基氨基苯甲醛溶液3ml，37℃水浴20分鐘。將各反應(yīng)溶液移入比色皿中，在分光光度計(jì)585nm波長處比色測(cè)定光密度值(od)。

表2：不同實(shí)施例樣品在不同濃度下對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的影響

注：透明質(zhì)酸酶抑制率(％)＝(1﹣(t﹣t0)/(c﹣c0))×100％

式中：t：樣品管od；t0：樣品對(duì)照管od；c：陽性對(duì)照管od；c0：陰性對(duì)照管od。

透明質(zhì)酸酶活性體外抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(表2)，實(shí)施例1-3樣品在不同濃度下對(duì)透明質(zhì)酸酶均有不同程度的抑制作用，其中實(shí)施例1樣品對(duì)透明質(zhì)酸酶的抑制作用具有一定的濃度依賴性關(guān)系；實(shí)施例1樣品在濃度為100mg/ml時(shí)對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用最高，達(dá)到69.5％。說明實(shí)施例1-3樣品對(duì)透明質(zhì)酸酶活性具有較好的抑制作用。

實(shí)施例6：對(duì)脂多糖刺激巨噬細(xì)胞釋放一氧化氮(no)的影響

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠raw264.7單核巨噬細(xì)胞株(atcc)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，采用含10％滅活胎牛血清(fbs，hyclone)，100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的dmem培養(yǎng)液(hyclone)，在37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3天傳代1次。采用cck-8法檢測(cè)不同濃度的受試樣品對(duì)巨噬細(xì)胞的生存率影響，結(jié)果表明：各受試樣品在實(shí)驗(yàn)濃度下對(duì)巨噬細(xì)胞無毒性作用。

raw264.7細(xì)胞接種于96孔板，放入培養(yǎng)箱中貼壁4h，加入不同濃度受試樣品，加入細(xì)菌脂多糖(lps，sigma)(終濃度10μg/ml)，另設(shè)相應(yīng)的細(xì)胞對(duì)照組及刺激對(duì)照組(raw264.7細(xì)胞加入上述濃度lps)，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，將上清液離心后，取上清凍存，待檢測(cè)。

采用griess法檢測(cè)no的釋放量。取50μmnano2標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)半稀釋共計(jì)7個(gè)濃度，各孔中加入分別稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液或待測(cè)樣品各50μl，向各孔中加入50μlgriess試劑a(85％濃磷酸6ml、去離子水10ml、無水對(duì)氨基苯磺酸1.0g，充分溶解并定容至100ml)，于37℃孵箱中反應(yīng)10分鐘，向各孔中加入50μl試劑b(0.1mg/ml的n-1-萘乙二胺鹽酸鹽水溶液)，于37℃孵箱中反應(yīng)10分鐘。將96孔板輕輕振蕩數(shù)次，待各孔反應(yīng)液完全混勻后，于540nm波長檢測(cè)各孔的od值，根據(jù)所得od值，擬合no反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各待測(cè)樣品組中的no含量。

表3：不同實(shí)施例樣品在不同濃度下對(duì)raw264.7細(xì)胞釋放no的影響

由不同實(shí)施例樣品在不同濃度下對(duì)raw264.7細(xì)胞釋放no的影響結(jié)果可知，不同實(shí)施例樣品在不同濃度下對(duì)lps刺激的巨噬細(xì)胞raw264.7釋放no具有不同程度的抑制作用，其中實(shí)施例1樣品在濃度為400μg/ml時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞釋放no的抑制率最大，達(dá)到82.6％。說明實(shí)施例1-3樣品可以有效地抑制巨噬細(xì)胞釋放no，具有一定的抗炎作用。

實(shí)施例4-6的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，馬黛茶提取物可以有效地抑制酪氨酸酶的活性，從而可以有效抑制黑色素的增加，起到美白皮膚或淡化雀斑等作用；馬黛茶提取物還可以有效地抑制透明質(zhì)酸酶的活性，從而維持細(xì)胞或組織中透明質(zhì)酸的含量和正常功能，保持表皮細(xì)胞彈性和正常功能，對(duì)皮膚起到保濕和抗敏的作用；馬黛茶提取物可以顯著地抑制lps刺激后巨噬細(xì)胞對(duì)no的大量釋放，從而抑制或減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生，起到抗炎的作用。

取實(shí)施例1-3中配制的馬黛茶提取物，用于皮膚外用劑的制備。所述皮膚外用劑優(yōu)選為化妝品組合物，例如化妝水、精華液、乳霜等。所述馬黛茶提取物的用量為0.001％-20％(w/w)。優(yōu)選的重量百分比為0.01％-20％(w/w)。更優(yōu)選的重量百分比為0.01％-10％(w/w)。最優(yōu)選的重量百分比為0.1％-5％(w/w)。

以下是含有馬黛茶提取物的皮膚外用劑中的具體應(yīng)用的實(shí)施例，及其這些劑型的配方和制備方法。以下各表中“-”表示無添加。

實(shí)施例7：面霜的制備

實(shí)施例8：乳液的制備

實(shí)施例9：啫喱的制備

實(shí)施例10：化妝水的制備

實(shí)施例11：精華液的制備

實(shí)施例12：面膜的制備

實(shí)施例13：眼霜的制備

實(shí)施例14：氣霧(清潔泡)的制備

實(shí)施例15：噴霧的制備

實(shí)施例16：沐浴露的制備

實(shí)施例17：洗面奶的制備