本發(fā)明涉及一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料的制備方法，屬于醫(yī)用材料制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

周圍神經(jīng)損傷是臨床常見的致殘性疾病，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相比，周圍神經(jīng)結(jié)構(gòu)較簡單，也比較容易再生，隨著顯微外科設(shè)備和技術(shù)的發(fā)展，周圍神經(jīng)損傷的臨床治療效果不斷提高。對缺損間隙較短者，可直接精細(xì)縫合或小間隙套管修復(fù)；缺損距離較長時，則需采用神經(jīng)組織移植或神經(jīng)導(dǎo)管橋接，用導(dǎo)管修復(fù)神經(jīng)缺損的優(yōu)點：①管徑可調(diào)節(jié)，適應(yīng)不同直徑的神經(jīng)；②長度可調(diào)節(jié)，吻合口無張力縫合；③防止周圍纖維瘢痕組織侵入，引導(dǎo)軸突定向生長；④利于內(nèi)源性神經(jīng)活性分子聚集，同時隔離周圍的神經(jīng)生長抑制分子；⑤避免自體神經(jīng)、脈管等移植帶來的新痛苦和風(fēng)險；⑥手術(shù)操作簡化省時。

設(shè)計外周神經(jīng)修復(fù)導(dǎo)管，要達(dá)到最佳的促進(jìn)再生效果，需要考慮許多重要因素：首先，管道必須與自然神經(jīng)的尺寸和機械剛性相匹配，具有良好的生物相容性，異物反應(yīng)輕微，以及可以被吸收；其次，使用合成材料作為神經(jīng)導(dǎo)管往往導(dǎo)致種植體周圍慢性異物反應(yīng)，而有天然存在的細(xì)胞外基質(zhì)的生物導(dǎo)管，提供重要的再生信號，利于細(xì)胞遷移和神經(jīng)修復(fù)；最后，該材料必須允許足夠的營養(yǎng)物運輸，提供神經(jīng)營養(yǎng)因子，內(nèi)部構(gòu)造能促進(jìn)軸突再生。但是現(xiàn)有的神經(jīng)導(dǎo)管孔隙率較差，且降解速率較慢，無法滿足現(xiàn)有治療中高效快速的治療目的，所以制備一種孔隙連通率較高，降解速率較快的神經(jīng)導(dǎo)管很有必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對現(xiàn)有神經(jīng)導(dǎo)管孔隙率較差，且降解速率較慢的問題，提供了一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料的制備方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是：

（1）按質(zhì)量比1:50，將干燥銀耳與幾丁質(zhì)酶溶液攪拌混合，調(diào)節(jié)ph至5.0，油浴加熱后升溫滅酶處理，靜置冷卻至室溫，離心分離收集上層清液，按體積比1:8，將上層清液與正丁醇攪拌混合，冰水浴處理并過濾得濾餅，干燥并碾磨過篩，得銀耳提取粉末；

（2）按重量份數(shù)計，分別稱量5～8份銀耳提取粉末、45～50份質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％乙酸溶液、5～10份殼聚糖和45～50份去離子水?dāng)嚢杌旌系没旌弦海瑢⒒旌弦哼^濾得濾液并置于噴霧干燥器中，噴霧干燥制備得包覆改性粉末；

（3）按質(zhì)量比1:15，將脫膠蠶絲與10mol/l溴化鋰溶液攪拌混合，水浴加熱得蠶絲混合液，透析處理收集截留液得絲素蛋白溶液，按質(zhì)量比1:8，將明膠添加至絲素蛋白溶液中，攪拌混合并水浴加熱得凝膠混合液；

（4）按質(zhì)量比1:10，將包覆改性粉末與凝膠混合液混合，超聲分得分散液，將分散液澆注至模具中，冷凍干燥并紫外滅菌輻照處理，即可制備得一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料。

步驟（1）所述的幾丁質(zhì)酶溶液酶活性為25u/ml。

步驟（2）所述的過濾采用的是孔徑為0.35μm的微孔濾膜。

步驟（2）所述的噴霧干燥進(jìn)口溫度為110～115℃，出口溫度為55～65℃，進(jìn)料速度為2ml/min，空氣流量為350l/h。

步驟（4）所述的冷凍干燥溫度為-80～-75℃。

步驟（4）所述的紫外滅菌輻照量為500μw/m²。

本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：

（1）本發(fā)明以銀耳為原料，通過提取銀耳多糖并負(fù)載至殼聚糖內(nèi)部形成微球，再經(jīng)包覆改性后分散制備神經(jīng)導(dǎo)管，在包覆外殼殼聚糖材料自我降解被人體吸收后，內(nèi)部銀耳多糖進(jìn)行釋放清除神經(jīng)導(dǎo)管中游離的自由基，提高抗脂質(zhì)過氧化作用，同時負(fù)載固定至材料表面，修復(fù)損傷的神經(jīng)因子，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生活性引導(dǎo)神經(jīng)再生，有效提高神經(jīng)導(dǎo)管對神經(jīng)細(xì)胞的促再生功能，縮短神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)時間。

（2）本發(fā)明制備的銀耳改性微球，表面包覆的殼聚糖經(jīng)分解后將內(nèi)部材料釋放，使神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)部形成均勻連通的孔隙結(jié)構(gòu)，構(gòu)造與神經(jīng)組織內(nèi)部環(huán)境相似的結(jié)構(gòu)，有效提高神經(jīng)細(xì)胞的富集和再生，提高材料移至后活性和恢復(fù)性能。

具體實施方式

取銀耳并置于75～80℃下干燥2～3h得干燥銀耳，將干燥銀耳碾磨過100目篩，按質(zhì)量比1:50，將干燥銀耳與酶活性為25u/ml的幾丁質(zhì)酶溶液攪拌混合，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至5.0后，再在40～45℃下油浴加熱1～2h，隨后升溫加熱至95～105℃，保溫滅酶處理45～60min，待保溫滅酶完成后，靜置冷卻至室溫，在6500～7000r/min下離心分離10～15min，收集上層清液，按體積比1:8，將上層清液與正丁醇攪拌混合，在0～5℃下冰水浴處理2～3h，過濾得濾餅，真空冷凍干燥并碾磨過100目篩，得銀耳提取粉末；按重量份數(shù)計，分別稱量5～8份銀耳提取粉末、45～50份質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％乙酸溶液、5～10份殼聚糖和45～50份去離子水置于燒杯中，攪拌混合得混合液，將混合液經(jīng)孔徑為0.35μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾處理，得濾液并置于噴霧干燥器中，控制噴霧干燥進(jìn)口溫度為110～115℃，出口溫度為55～65℃，進(jìn)料速度為2ml/min，空氣流量為350l/h，經(jīng)噴霧干燥制備得包覆改性粉末；按質(zhì)量比1:15，將脫膠蠶絲與10mol/l溴化鋰溶液攪拌混合，在45～50℃下水浴加熱45～60min后，得蠶絲混合液，隨后將蠶絲混合液置于截留分子量為14000的透析袋中透析處理48h，隨后收集截留液制備得絲素蛋白溶液；按質(zhì)量比1:8，將明膠添加至絲素蛋白溶液中，攪拌混合并置于55～60℃下水浴加熱1～2h，得凝膠混合液，再按質(zhì)量比1:10，將包覆改性粉末與凝膠混合液混合，在200～300w下超聲分散10～15min，得分散液，隨后將分散液澆注至模具中，在-80～-75℃下冷凍干燥20～24h，待冷凍干燥完成后，再在500μw/m²下輻照滅菌處理6～8h后，即可制備得一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料。

實例1

取銀耳并置于75℃下干燥2h得干燥銀耳，將干燥銀耳碾磨過100目篩，按質(zhì)量比1:50，將干燥銀耳與酶活性為25u/ml的幾丁質(zhì)酶溶液攪拌混合，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至5.0后，再在40℃下油浴加熱1h，隨后升溫加熱至95℃，保溫滅酶處理45min，待保溫滅酶完成后，靜置冷卻至室溫，在6500r/min下離心分離10min，收集上層清液，按體積比1:8，將上層清液與正丁醇攪拌混合，在0℃下冰水浴處理2h，過濾得濾餅，真空冷凍干燥并碾磨過100目篩，得銀耳提取粉末；按重量份數(shù)計，分別稱量5份銀耳提取粉末、45份質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％乙酸溶液、5份殼聚糖和45份去離子水置于燒杯中，攪拌混合得混合液，將混合液經(jīng)孔徑為0.35μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾處理，得濾液并置于噴霧干燥器中，控制噴霧干燥進(jìn)口溫度為110℃，出口溫度為55℃，進(jìn)料速度為2ml/min，空氣流量為350l/h，經(jīng)噴霧干燥制備得包覆改性粉末；按質(zhì)量比1:15，將脫膠蠶絲與10mol/l溴化鋰溶液攪拌混合，在45℃下水浴加熱45min后，得蠶絲混合液，隨后將蠶絲混合液置于截留分子量為14000的透析袋中透析處理48h，隨后收集截留液制備得絲素蛋白溶液；按質(zhì)量比1:8，將明膠添加至絲素蛋白溶液中，攪拌混合并置于55℃下水浴加熱1h，得凝膠混合液，再按質(zhì)量比1:10，將包覆改性粉末與凝膠混合液混合，在200w下超聲分散10min，得分散液，隨后將分散液澆注至模具中，在-80℃下冷凍干燥20h，待冷凍干燥完成后，再在500μw/m²下輻照滅菌處理6h后，即可制備得一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料。

實例2

取銀耳并置于77℃下干燥3h得干燥銀耳，將干燥銀耳碾磨過100目篩，按質(zhì)量比1:50，將干燥銀耳與酶活性為25u/ml的幾丁質(zhì)酶溶液攪拌混合，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至5.0后，再在42℃下油浴加熱1h，隨后升溫加熱至97℃，保溫滅酶處理52min，待保溫滅酶完成后，靜置冷卻至室溫，在6750r/min下離心分離12min，收集上層清液，按體積比1:8，將上層清液與正丁醇攪拌混合，在4℃下冰水浴處理3h，過濾得濾餅，真空冷凍干燥并碾磨過100目篩，得銀耳提取粉末；按重量份數(shù)計，分別稱量6份銀耳提取粉末、47份質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％乙酸溶液、8份殼聚糖和47份去離子水置于燒杯中，攪拌混合得混合液，將混合液經(jīng)孔徑為0.35μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾處理，得濾液并置于噴霧干燥器中，控制噴霧干燥進(jìn)口溫度為112℃，出口溫度為57℃，進(jìn)料速度為2ml/min，空氣流量為350l/h，經(jīng)噴霧干燥制備得包覆改性粉末；按質(zhì)量比1:15，將脫膠蠶絲與10mol/l溴化鋰溶液攪拌混合，在47℃下水浴加熱47min后，得蠶絲混合液，隨后將蠶絲混合液置于截留分子量為14000的透析袋中透析處理48h，隨后收集截留液制備得絲素蛋白溶液；按質(zhì)量比1:8，將明膠添加至絲素蛋白溶液中，攪拌混合并置于57℃下水浴加熱2h，得凝膠混合液，再按質(zhì)量比1:10，將包覆改性粉末與凝膠混合液混合，在250w下超聲分散12min，得分散液，隨后將分散液澆注至模具中，在-77℃下冷凍干燥22h，待冷凍干燥完成后，再在500μw/m²下輻照滅菌處理7h后，即可制備得一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料。

實例3

取銀耳并置于80℃下干燥3h得干燥銀耳，將干燥銀耳碾磨過100目篩，按質(zhì)量比1:50，將干燥銀耳與酶活性為25u/ml的幾丁質(zhì)酶溶液攪拌混合，用冰醋酸調(diào)節(jié)ph至5.0后，再在45℃下油浴加熱2h，隨后升溫加熱至105℃，保溫滅酶處理60min，待保溫滅酶完成后，靜置冷卻至室溫，在7000r/min下離心分離15min，收集上層清液，按體積比1:8，將上層清液與正丁醇攪拌混合，在5℃下冰水浴處理3h，過濾得濾餅，真空冷凍干燥并碾磨過100目篩，得銀耳提取粉末；按重量份數(shù)計，分別稱量8份銀耳提取粉末、50份質(zhì)量分?jǐn)?shù)10％乙酸溶液、10份殼聚糖和50份去離子水置于燒杯中，攪拌混合得混合液，將混合液經(jīng)孔徑為0.35μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾處理，得濾液并置于噴霧干燥器中，控制噴霧干燥進(jìn)口溫度為115℃，出口溫度為65℃，進(jìn)料速度為2ml/min，空氣流量為350l/h，經(jīng)噴霧干燥制備得包覆改性粉末；按質(zhì)量比1:15，將脫膠蠶絲與10mol/l溴化鋰溶液攪拌混合，在50℃下水浴加熱60min后，得蠶絲混合液，隨后將蠶絲混合液置于截留分子量為14000的透析袋中透析處理48h，隨后收集截留液制備得絲素蛋白溶液；按質(zhì)量比1:8，將明膠添加至絲素蛋白溶液中，攪拌混合并置于60℃下水浴加熱2h，得凝膠混合液，再按質(zhì)量比1:10，將包覆改性粉末與凝膠混合液混合，在300w下超聲分散15min，得分散液，隨后將分散液澆注至模具中，在-75℃下冷凍干燥24h，待冷凍干燥完成后，再在500μw/m²下輻照滅菌處理8h后，即可制備得一種高孔隙率神經(jīng)導(dǎo)管材料。