本發(fā)明涉及生物材料領域，特別是涉及一種大鯢分泌物粘性生物膜及其制備方法和應用。
背景技術：
：大鯢，也被稱為“中國大蠑螈”，屬于大鯢科，是最大的現(xiàn)存兩棲動物物種之一。它在生物多樣性，遺傳進化和生物化學領域顯示了巨大的研究進展和寶貴的潛力。大鯢粘液是大鯢體表受刺激后的一種大鯢分泌物，前期的研究發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物具有粘合性能好、生物相容性好且可降解等優(yōu)點，可開發(fā)成為止血材料、粘合劑及軟組織填充材料等。然而，傳統(tǒng)的大鯢分泌物應用形式大多為粉末狀或凝膠狀。在臨床上，需要使用膜狀材料對創(chuàng)面覆蓋或包裹，粉末和凝膠均無法滿足上述臨床需求。因此急需開發(fā)大鯢分泌物粘性生物膜。但是由于大鯢分泌物的難溶性，研究人員不斷嘗試將大鯢分泌物制備成膜，但都難以在不破壞大鯢分泌物本身粘合性、生物相容性等原有性能的前提下形成大鯢分泌物粘性生物膜。技術實現(xiàn)要素：基于此，有必要提供一種能夠在不破壞大鯢分泌物原有性能的基礎上形成大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法。此外，還提供一種大鯢分泌物粘性生物膜及其應用。一種大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，包括如下步驟：將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，其中，所述酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種；及將所述大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到所述大鯢分泌物粘性生物膜。在一個實施方式中，所述酸性溶液為維生素c溶液，所述維生素c溶液中維生素c的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為鹽酸溶液，所述鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為醋酸溶液，所述醋酸溶液中醋酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為硫酸溶液，所述硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為磷酸溶液，所述磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l；及/或，所述酸性溶液為硝酸溶液，所述硝酸溶液中硝酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。在一個實施方式中，將所述大鯢分泌物溶液凍干成膜，所述凍干成膜的步驟具體包括：將大鯢分泌物-溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃冷凍0.5h～4h；及將冷凍后的所述大鯢分泌物溶液置于絕對壓強為1pa～10pa的條件下放置12h～48h。在一個實施方式中，所述大鯢分泌物為大鯢粘液的干燥粉。在一個實施方式中，所述大鯢分泌物溶液中所述大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml。在一個實施方式中，所述大鯢分泌物通過如下方法制備：從大鯢的外表面刮取大鯢粘液；將所述大鯢粘液置于溫度為-30℃～-10℃的條件下冷凍0.5h～2h；及將冷凍后的所述大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對壓強為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥，得到所述大鯢分泌物。在一個實施方式中，所述大鯢分泌物的粒徑為1μm～100μm。在一個實施方式中，所述將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，所述溶解的操作為在溫度為10℃～35℃條件下攪拌處理4h～8h。一種大鯢分泌物粘性生物膜，通過上述任一項所述的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法制備得到。上述的大鯢分泌物粘性生物膜在制備止血膜、組織粘合膜或繃帶中的應用。上述大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，先將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。發(fā)明人經(jīng)過大量的探索研究，預料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠將大鯢分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。這種制備方法不破壞大鯢分泌物的原有結構，形成的大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點，且該大鯢分泌物粘性生物膜質地均勻、韌性和強度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對創(chuàng)面進行覆蓋或包裹，具有廣闊的應用前景。附圖說明圖1為一實施方式的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法的流程圖；圖2為實施例1中制備的大鯢分泌物粘性生物膜的示意圖；圖3為測試四中對照組和用實施例2制備的大鯢分泌物粘性生物膜處理傷口的結果比對圖；圖4為測試五中用實施例3制備的大鯢分泌物粘性生物膜植入到小鼠皮下囊后隨時間變化的結果比對圖。具體實施方式為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結合具體實施例及附圖對本發(fā)明的具體實施方式做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發(fā)明內涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發(fā)明的
技術領域：
的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。請參閱圖1，一實施方式的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法包括如下步驟s110～s150。s110、從大鯢的外表面刮取大鯢粘液。具體地，將鮮活大鯢用清水清洗體表并去除蛻皮等雜質，然后用扁平物如勺子來回刮擦大鯢體表，待大鯢體表分泌大量乳白色粘液時，刮取收集大鯢粘液。一般每次可從5kg左右的成年大鯢上收集約5g大鯢粘液。本實施方式中，總共刮取獲得30g大鯢粘液。s120、將s110中收集的大鯢粘液置于溫度為-30℃～-10℃的條件下冷凍0.5h～2h。具體地，將收集的大鯢粘液置于-20℃冰箱中冷凍1h。s130、將s120中冷凍后的大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對壓強為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥，得到大鯢分泌物。具體地，將冷凍后的大鯢粘液置于溫度為-50℃～-30℃、絕對壓強為5pa～20pa的條件下真空冷凍干燥的操作中，真空冷凍干燥的時間為12h～48h。具體地，絕對壓強為5pa～20pa表示實際壓強低于大氣壓的真空條件下去除大鯢粘液內部的水分，獲得大鯢粘液的干燥粉。本實施方式中，將冷凍后的大鯢粘液置于凍干機中，在溫度為-40℃、絕對壓強為10pa的條件下，干燥48h，使得大鯢粘液干燥形成粉末狀。具體地，s120中的冷凍溫度高于s130中真空冷凍干燥的溫度，使得大鯢粘液逐步冷卻，避免驟冷破壞大鯢粘液內部結構。在一個實施方式中，真空冷凍干燥得到大鯢粘液的干燥粉后，還包括將大鯢粘液的干燥粉粉碎形成微小顆粒。具體地，用低溫超微粉碎機粉碎大鯢粘液的干燥粉，邊粉碎邊加液氮，使溫度保持低溫，粉碎后得到微小顆粒狀的大鯢分泌物，促進大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，從而制備大鯢分泌物粘性生物膜。在一個實施方式中，大鯢分泌物的粒徑為1μm～100μm。在一個實施方式中，大鯢分泌物的粒徑為20μm～60μm。本實施方式中，大鯢分泌物的粒徑為50μm。s140、將s130中得到的大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，其中酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種。具體地，大鯢分泌物為大鯢粘液的干燥粉。其中酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中的至少一種。在一個實施方式中，酸性溶液為維生素c溶液，維生素c溶液中維生素c的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，維生素c溶液的溶劑為水。在一個實施方式中，酸性溶液為鹽酸溶液，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，鹽酸溶液的溶劑為水。在一個實施方式中，酸性溶液為醋酸溶液，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，醋酸溶液的溶劑為水。在一個實施方式中，酸性溶液為硫酸溶液，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l～0.5mol/l。具體地，硫酸溶液的溶劑為水。在一個實施方式中，酸性溶液為磷酸溶液，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，磷酸溶液的溶劑為水。在一個實施方式中，酸性溶液為硝酸溶液，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.1mol/l～1mol/l。具體地，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l～1mol/l。具體地，硝酸溶液的溶劑為水。發(fā)明人經(jīng)過大量的探索研究，預料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠將大鯢分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。雖然上述酸性溶液為什么能夠溶解大鯢分泌物的機制尚不明確，可能是跟酸性溶液中的h離子能夠與大鯢分泌物形成離子鍵有關。經(jīng)過實驗研究證實，大鯢分泌物在上述酸性溶液中具有較高的溶解度，在常溫下能夠達到1g/ml。因而能夠在上述酸性溶液中溶解較高劑量的大鯢分泌物，進而冷凍干燥成膜，制備大鯢分泌物粘性生物膜。在一個實施方式中，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml。具體地，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.1g/ml～1g/ml。優(yōu)選地，大鯢分泌物溶液中大鯢分泌物的濃度為0.005g/ml～0.5g/ml。如大鯢分泌物的濃度過高，不易溶解，較難形成混合均勻的大鯢分泌物溶液。如大鯢分泌物的濃度過低，難以凍干形成膜狀生物材料。本實施方式的大鯢分泌物的濃度為0.001g/ml～1g/ml，濃度適宜，能夠制備形成韌性和強度較好大鯢分泌物粘性生物膜。在一個實施方式中，將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，溶解的操作為在溫度為10℃～35℃條件下攪拌處理4h～8h。具體地，將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中的步驟中，溶解的操作為在溫度為15℃～25℃條件下攪拌處理5h～7h。溶解大鯢分泌物時的溫度條件適宜，使得大鯢分泌物能夠在酸性溶液中溶解，且同時避免溫度過高破壞大鯢粘液的內部結構。通過攪拌處理，加速大鯢分泌物的溶解，從而形成混合均勻的溶液。s150、將s140中得到的大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。大鯢分泌物溶液中溶解了大鯢分泌物，凍干時，酸性溶液溶劑被揮發(fā)，形成膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。在一個實施方式中，將大鯢分泌物溶液凍干成膜的步驟具體包括以下步驟s151～s152。s151、將大鯢分泌物-溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃冷凍0.5h～4h。一般在室溫下例如10℃～35℃條件下溶解大鯢分泌物，大鯢分泌物溶液以恒定的速率降溫至-50℃～-30℃，逐步冷卻，避免驟冷破壞大鯢分泌物內部結構。在一個實施方式中，將大鯢分泌物-溶液加入成型模具中，其中大鯢分泌物溶液在成型模具中的液體厚度為0.5cm～10cm。然后將裝載有大鯢分泌物-溶液的成型模具放入凍干機中，以0.5℃/min～2℃/min的速率降溫至-50℃～-30℃，冷凍0.5h～4h。具體地，成型模具的大小以及形狀可以根據(jù)實際需要調整。在-50℃～-30℃低溫條件下保持一段時間有利于提高大鯢分泌物的韌性以及強度。s152、將s151中冷凍后的大鯢分泌物溶液置于絕對壓強為1pa～10pa的條件下放置12h～48h。在絕對壓強為1pa～10pa的條件下，大鯢分泌物溶液中的溶劑被揮發(fā)，得到膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。具體地，絕對壓強為1pa～10pa的條件下放置12h～48h后，得到膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜具有微小地孔隙，從而能夠為營養(yǎng)物質運輸提供通道，提高膜的生物相容性。在另一個實施方式中，也可以將大鯢分泌物溶液真空干燥成膜。即將大鯢分泌物溶液置于真空條件(低于大氣壓即可)的條件下，大鯢分泌物溶液中的溶劑揮發(fā)，形成大鯢分泌物粘性生物膜。具體地，真空干燥成膜的溫度一般不超過37℃。上述大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法，先將大鯢分泌物溶解在酸性溶液中，得到大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物溶液凍干成膜或真空干燥成膜，得到大鯢分泌物粘性生物膜。發(fā)明人經(jīng)過大量的探索研究，預料不到地發(fā)現(xiàn)，大鯢分泌物在酸性溶液選自維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有較高的溶解度，因此能夠將大鯢分泌物溶解在上述酸性溶液中形成大鯢分泌物溶液，然后將大鯢分泌物-溶液凍干成膜獲得大鯢分泌物粘性生物膜。這種制備方法不破壞大鯢分泌物的原有結構，形成的大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點，且該大鯢分泌物粘性生物膜質地均勻、韌性和強度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對創(chuàng)面進行覆蓋或包裹，具有廣闊的應用前景。需要說明的是，實際應用中，大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法不局限于上述步驟s110～s150的順序。本領域技術人員可以根據(jù)需要進行調整。如當預先已經(jīng)提取大鯢粘液干燥形成大鯢分泌物或者直接從市場購買獲得大鯢分泌物時，步驟s110～s130可以省略。一實施方式的大鯢分泌物粘性生物膜，通過上述的大鯢分泌物粘性生物膜的制備方法制備得到。上述大鯢分泌物粘性生物膜作為止血膜、組織粘合膜或繃帶的應用。該大鯢分泌物粘性生物膜保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點，且生物膜的質地均勻、韌性和強度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對創(chuàng)面進行覆蓋或包裹，具有廣闊的應用前景。下面為具體實施例(以下實施例如無特殊說明，則不含有除不可避免的雜質以外的其他未明確指出的組分)實施例中采用試劑和儀器如非特別說明，均為本領域常規(guī)選擇。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如文獻、書本中所述的條件或者試劑盒生產(chǎn)廠家推薦的方法實現(xiàn)。實施例1將鮮活大鯢用清水清洗體表并去除蛻皮等雜質，然后用勺子來回刮擦大鯢體表，待大鯢體表分泌大量乳白色粘液時，刮取收集大鯢粘液。一般每次可從5kg左右的成年大鯢上收集約5g大鯢粘液，總共刮取獲得30g大鯢粘液。將收集的大鯢粘液置于-20℃冰箱中冷凍2h。將冷凍后的大鯢粘液置于凍干機中，在溫度為-40℃、絕對壓強為10pa的條件下真空冷凍干燥48h，得到大鯢粘液的干燥粉。用低溫超微粉碎機粉碎大鯢粘液的干燥粉，邊粉碎邊加液氮，使溫度保持低溫，粉碎后得到平均粒徑為50μm的大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml維生素c溶液中，其中維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理6h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對壓強為5pa的條件下放置24h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。制備的大鯢分泌物粘性生物膜如圖2(玻璃皿中白色塊狀物)所示。實施例2按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取0.5g大鯢分泌物加入到20ml的鹽酸溶液中，其中鹽酸溶液中氯化氫的濃度為1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取5ml大鯢分泌物溶液注入長×寬為1cm×6cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以0.5℃/min的速率降溫至-30℃，并在-30℃溫度條件下冷凍放置0.5h。隨后將成型模具置于絕對壓強為10pa的條件下放置12h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實施例3按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取0.1g大鯢分泌物加入到20ml的醋酸溶液中，其中醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l。在25℃下攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入直徑為0.6cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置0.5h。隨后將成型模具置于絕對壓強為8pa的條件下放置12h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實施例4取1g按實施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的硫酸溶液中，其中硫酸溶液中硫酸的濃度為0.1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理8h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長×寬為10cm×2cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以2℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對壓強為10pa的條件下放置15h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實施例5取0.02g按實施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的磷酸溶液中，其中磷酸溶液中磷酸的濃度為0.1mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理4h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長×寬為2cm×2cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以2℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置4h。隨后將成型模具置于絕對壓強為10pa的條件下放置48h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。實施例6取20g按實施例1的方法制備保存的大鯢分泌物加入到20ml的硝酸溶液中，其中硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l。在常溫下(20℃)攪拌處理8h，形成均一的大鯢分泌物溶液。取20ml大鯢分泌物溶液注入長×寬為3cm×3cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以2℃/min的速率降溫至-50℃，并在-50℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對壓強為5pa的條件下放置24h，得到質地均一、具有微孔狀的膜狀的大鯢分泌物粘性生物膜。對比例1按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的水中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在水中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例2按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的丙酮中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在丙酮中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例3按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的乙醇中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在乙醇中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例4按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的乙腈中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在乙腈中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例5按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的二氯甲烷中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在二氯甲烷中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例6按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的二甲亞砜中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在二甲亞砜中基本不溶解，因而無法制備大鯢分泌物粘性生物膜。對比例7按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的三氟乙酸中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在三氟乙酸中部分溶解。取20ml上述方法形成的大鯢分泌物-三氟乙酸溶液，按實施例1的方法注入長×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對壓強為5pa的條件下放置24h。結果發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物-三氟乙酸溶液形成的膜狀材料均一性和粘性均比實施例1制備的生物膜差。對比例8按實施例1的方法制備大鯢分泌物。取1g上述方法制備的大鯢分泌物加入到20ml的三氟乙醇中，在常溫下(20℃)攪拌處理6h，大鯢分泌物在三氟乙酸中部分溶解。取20ml上述方法形成的大鯢分泌物-三氟乙醇溶液，按實施例1的方法注入長×寬為4cm×4cm的成型模具中，然后將成型模具放入凍干機中，以1℃/min的速率降溫至-40℃，并在-40℃溫度條件下冷凍放置2h。隨后將成型模具置于絕對壓強為5pa的條件下放置24h。結果發(fā)現(xiàn)大鯢分泌物-三氟乙醇溶液形成的膜狀材料均一性和粘性均比實施例1制備的生物膜差。測試一在20℃條件下，取實施例1的方法制備的大鯢分泌物分別加入到10ml的維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中。維生素c溶液中維生素c的濃度為0.5mol/l，鹽酸溶液中氯化氫的濃度為0.5mol/l，醋酸溶液中醋酸的濃度為0.5mol/l，硫酸溶液中硫酸的濃度為0.5mol/l，磷酸溶液中磷酸的濃度為0.5mol/l，硝酸溶液中硝酸的濃度為0.5mol/l。加入過程中不斷攪拌，直至出現(xiàn)沉降的現(xiàn)象，則停止加入大鯢分泌物，記錄每種溶液中的總加入量，結果如表1所示。表1：20℃條件下大鯢分泌物在各酸性溶液中的溶解度溶液(10ml)最高溶解大鯢分泌物的量(g)溶解度(g/ml)維生素c溶液15.21.52g/ml鹽酸溶液12.51.25g/ml醋酸溶液5.60.56g/ml硫酸溶液10.40.104g/ml磷酸溶液4.10.41g/ml硝酸溶液13.11.31g/ml以上結果表明大鯢分泌物在維生素c溶液、鹽酸溶液、醋酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液和硝酸溶液中具有非常好的溶解性。特別是在維生素c溶液溶解度可達1.52g/ml。因此，將大鯢分泌物溶解在上述酸性溶液中形成均一的大鯢分泌物溶液，從而用于制備大鯢分泌物粘性生物膜。而采用其它溶劑時，如對比例1～6中的水、丙酮、乙醇、乙腈、二氯甲烷和二甲亞砜等，相同的方法測試大鯢分泌物基本不溶解。另外，對比例7和對比例8在三氟乙酸和三氟乙醇中，雖然大鯢分泌物能夠部分溶解，但是最后形成的膜狀材料均一性相對較差。測試二將一塊實施例1制備的大鯢分泌物粘性生物膜正反兩面分別粘合在兩塊pdms膜上，然后用萬能拉力機上下夾頭分別夾住兩塊pdms膜，用萬能拉力機拉伸測試大鯢分泌物粘性生物膜剪切粘附應力。采用相同的方法測試實施例2～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜的剪切粘附應力，結果如下表2所示。表2：大鯢分泌物粘性生物膜的剪切粘附應力實施例剪切粘附應力(kpa)實施例136.1kpa實施例230.1kpa實施例324.5kpa實施例425.4kpa實施例520.3kpa實施例634.1kpa從表2中的數(shù)據(jù)可以看出實施例1～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜粘合力較好，且膜狀材料本身具有韌性和強度較好，能夠作為止血膜、組織粘合膜或繃帶等對創(chuàng)面進行覆蓋或包裹，具有廣闊的應用前景。測試三止血實驗：取wistar大鼠10只，雌雄各半，體重250g±20g，分別將每只大鼠的2條后腿分為實驗組和對照組。實驗前，將大鼠按30mg/kg腹腔注射2％戊巴比妥鈉水溶液麻醉，大鼠仰臥位固定，用電推理發(fā)器將大鼠后腿內側剃毛，8％硫化鈉脫毛，碘伏、體積分數(shù)為75％的乙醇消毒。然后用手術刀在大鼠的兩后腿內側部位切口，長30mm，深3mm，有血液流出。切開后在實驗組切口部位分別用實施例1～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜包扎，粘合牢固。對照組在切口部位用紗布包扎，并按壓止血。用實施例1～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜包扎實驗組的大鼠后腿在1min內停止出血，大鯢分泌物粘性生物膜的表面無血液滲出。而對照組按壓3min后才停止出血，紗布表面有明顯的血液滲出。說明大鯢分泌物粘性生物膜止血效果明顯。測試四傷口愈合試驗：取balb/c小鼠12只，雌雄各半，八個月大。在小鼠背部，劃出兩條平行整齊全層的皮膚切口，實驗組：分別用實施例1～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜粘合在傷口處；對照組：用手術縫合線間斷縫合處理。3天后，撕開實驗組的粘性生物膜以及拆除對照組的縫線。實驗組和對照組的切口都愈合，但對照組有更明顯皮膚發(fā)紅和切口邊緣浮腫，而實驗組的傷口愈合的更好。其中一個實施例的結果如圖3所示(圖3中用的粘性生物膜具體為實施例2制備的大鯢分泌物粘性生物膜)。測試五降解試驗：取balb/c小鼠6只，雌雄各半，八個月大。分別用實施例3制備的直徑0.6cm大鯢分泌物粘性生物膜植入到皮下囊。部分小鼠在植入后第1周和第3周制備組織切片并用he染色檢測。結果如圖4所示，c1表示大鯢分泌物粘性生物膜皮下植入試驗，c2表示植入1一周后he染色顯微圖，c3表示植入3周后he染色顯微圖，c4表示植入9周后大鯢粘液膜部分降解圖。從圖中可以看出，植入大鯢分泌物粘性生物膜后未有可見的紅斑、腫脹、潰瘍和出血或擴散。圖c2顯示植入1周后組織切片，在植入膜附近用眼睛觀察沒有可見腫脹/充血區(qū)域。在植入膜表面沒有任何明顯炎癥細胞滲透現(xiàn)象出現(xiàn)，也沒有發(fā)現(xiàn)成纖維細胞。如圖c3，3周后，沒有任何炎癥細胞滲透現(xiàn)象，同時在植入膜上發(fā)現(xiàn)許多孔并帶有細胞生長，表明大鯢分泌物粘性生物膜在體內逐漸降解和其與組織良好的生物相容性。如圖c4，9周后，大鯢分泌物粘性生物膜逐漸降解而且剩余物保持可見，然而依然沒有任何肉眼可見紅斑和腫脹。所以，皮下植入試驗表明大鯢分泌物粘性生物膜在小鼠體內良好的組織相容性，不會刺激明顯炎癥，可以自然降解。以上實驗結果表明實施例1～實施例6制備的大鯢分泌物粘性生物膜，具有膜狀材料的韌性和強度，且粘合性較好，制備成膜后大鯢分泌物原有性能沒有被破壞，保留了大鯢分泌物較好的粘合性、生物相容性等優(yōu)點。以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。當前第1頁12