重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白在nmosd中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
1.本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體 －抗體融合蛋白在nmosd中的應(yīng)用。


背景技術(shù)：

2.視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrumdisorders，nmosd)是一種主要由b細(xì)胞和aqp4抗體介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系 統(tǒng)炎性疾病，特征為免疫介導(dǎo)的嚴(yán)重脫髓鞘及軸突損傷，主要累及視神經(jīng) 和脊髓。nmosd在人群中的患病率高達(dá)十萬分之十，主要影響年輕女性， 復(fù)發(fā)性和致殘性是nmosd患者病情逐步惡化的棘手問題。超過60％的 nmosd患者在首次癥狀出現(xiàn)的第一年內(nèi)復(fù)發(fā)，超過90％的患者在三年內(nèi)復(fù) 發(fā)。在反復(fù)發(fā)作的疾病過程中，部分患者散失行動(dòng)能力或發(fā)生失明等嚴(yán)重 結(jié)局。有超過1/3的患者處于長期失業(yè)，大部分患者日常生活無法完全自 理。因此，減少nmosd復(fù)發(fā)同時(shí)減少治療方案帶來的副作用是目前nmosd 治療的重中之重。
3.現(xiàn)有nmosd的治療根據(jù)疾病的階段而有所不同。在復(fù)發(fā)急性期，初始 治療包括大劑量靜脈注射甲強(qiáng)龍和血漿置換。緩解期治療包括硫唑嘌呤和 嗎替麥考酚酯等免疫抑制劑以減少復(fù)發(fā)。但現(xiàn)有的糖皮質(zhì)激素和免疫抑制 劑存在較為明顯的副作用，如股骨頭壞死、血糖升高、白細(xì)胞減少等，導(dǎo) 致患者使用依從性欠佳、疾病預(yù)后不佳。血漿置換雖能過濾致病抗體，但 無法抑制新的致病抗體的產(chǎn)生。
4.綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：
5.1)現(xiàn)有nmosd患者治療方案未能靶向針對(duì)性治療，缺乏對(duì)有效治療 靶點(diǎn)的精確干預(yù)，仍有較高的復(fù)發(fā)率。
6.2)現(xiàn)有nmosd患者治療方案存在較為明顯的副作用，導(dǎo)致患者不能 使用依從性欠佳，影響治療效果。
7.因此，針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明旨在提供重組人b淋巴細(xì)胞刺激因 子受體－抗體融合蛋白在nmosd中的應(yīng)用，以解決上述問題。


技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

8.本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，提供重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子 受體－抗體融合蛋白在nmosd中的應(yīng)用，本發(fā)明將重組人b淋巴細(xì)胞刺激 因子受體－抗體融合蛋白應(yīng)用于血漿置換過濾去致病抗體后的視神經(jīng)脊髓 炎譜系疾病的治療，具有能夠中和阻斷blys和april的作用，從而抑制 自身免疫反應(yīng)、延長nmosd復(fù)發(fā)間隔，能夠克服現(xiàn)有的視神經(jīng)脊髓炎譜 系疾病的治療缺乏有效靶點(diǎn)干預(yù)、高復(fù)發(fā)率、明顯副作用的問題，同時(shí)增 加了重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白的疾病適應(yīng)癥。
9.為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：重組人b淋巴細(xì)胞刺激 因子受體－抗體融合蛋白在nmosd中的應(yīng)用，將所述的重組人b淋巴細(xì)胞 刺激因子受體－抗體融合蛋
白用于視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的治療。
10.進(jìn)一步地，所述重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白用于 制備注射用的泰它西普藥物。
11.進(jìn)一步地，所述重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白通過 阻斷b淋巴細(xì)胞的增生，實(shí)現(xiàn)抑制自身免疫疾病的作用。
12.作用機(jī)制：
13.b淋巴細(xì)胞刺激因子(b lymphocyte stimulator，blys)，也稱作b 細(xì)胞活化因子(b.cell.activating factor，baff)，是促進(jìn)b細(xì)胞成熟 分化、免疫類型轉(zhuǎn)化等過程中重要的調(diào)控因子。b細(xì)胞自原始骨髓造血干 細(xì)胞開始，發(fā)育分化過程包括始祖b細(xì)胞、前體b細(xì)胞、過渡階段b細(xì) 胞、成熟b細(xì)胞等，在機(jī)體內(nèi)遇到外界抗原后活化成為效應(yīng)b細(xì)胞，分泌 抗體，參與機(jī)體體液免疫。在這個(gè)過程中，b細(xì)胞分化的調(diào)控直接關(guān)系到 機(jī)體自身免疫的平衡狀態(tài)。blys是tnf超家族成員，由285個(gè)氨基酸組 成，為ii型跨膜蛋白，受體包括bcma(b cell maturation antigen)、 baff—r(baff receptor，br3)以及taci(transmembrane activator andcalcium-modulator and cyclophilin ligand interactor)。blys和另 一個(gè)tnf家族蛋白增殖誘導(dǎo)配體(a proliferation.inducing ligand， april)同源性很強(qiáng)，其中blys的三個(gè)受體中的bcma和taci均可與兩種 蛋白相結(jié)合。blys受體主要表達(dá)在大部分淋巴細(xì)胞表面，blys和受體結(jié) 合后，一方面促進(jìn)b細(xì)胞自身的成熟和分化，也會(huì)調(diào)控b細(xì)胞轉(zhuǎn)化分泌抗 體的類型，一方面還可通過自身抗原提呈作用，調(diào)節(jié)t細(xì)胞免疫應(yīng)答。在 很多自身免疫患者體內(nèi)可測(cè)得blys水平升高，如sle和nmosd中。因b 細(xì)胞在nmosd發(fā)病機(jī)制中的作用逐漸得到了重視，故在有明確靶點(diǎn)的情況 下，其臨床應(yīng)用的推動(dòng)僅僅是時(shí)間問題而己。針對(duì)b細(xì)胞異常增殖為治療 靶點(diǎn)的治療手段己逐步在nmosd治療中得到重視。但同時(shí)以blys和 april為靶點(diǎn)的治療方案尚缺乏在nmosd中運(yùn)用，本技術(shù)發(fā)明人檢測(cè)了多 個(gè)nmosd患者外周血清水平中blys和arpil表達(dá)水平的變化，發(fā)現(xiàn)兩者 在患者病情急性期表達(dá)水平皆明顯升高。而其中blys相比april在整個(gè) 病程中都處于較高水平，而april在病情進(jìn)入緩解期后則逐漸降低，這提 示雖然april與blys共受體，但blys在體內(nèi)存在的時(shí)間和程度都較強(qiáng)， 與疾病的發(fā)生關(guān)聯(lián)性更強(qiáng)(圖1)。本技術(shù)發(fā)明人檢測(cè)到的數(shù)據(jù)也與既往 文獻(xiàn)中報(bào)道的一致。
14.本發(fā)明的重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白(泰它西 普)是通過生物工程人工融合taci受體胞外段和人igg fc片段的可溶性 蛋白，可特異性地結(jié)合blys和april共同受體taci，也是近年來新開發(fā) 的人工合成蛋白類免疫抑制劑。是針對(duì)b細(xì)胞和t細(xì)胞的新型靶向治療藥 物。其作用機(jī)制是試驗(yàn)藥的taci胞外可溶性部分能中和淋巴細(xì)胞發(fā)育成 熟的兩個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子blys(b淋巴細(xì)胞刺激因子)和april(增殖誘導(dǎo)配 體)，高效阻斷blys和april與其受體之間的相互作用，taci受體位于 cd27+記憶b細(xì)胞和漿細(xì)胞，因此能有效阻斷b淋巴細(xì)胞的增生和，具有 抑制自身免疫疾病的作用。本技術(shù)發(fā)明人通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，泰它西普可 顯著降低實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(eae)小鼠臨床評(píng)分，減輕中樞神 經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤和髓鞘脫失，同時(shí)抑制eae小鼠體內(nèi)活化b細(xì)胞增生(圖 2-圖4)。因其可同時(shí)抑制blys和april的誘導(dǎo)增殖作用，目前己在系 統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他自身免疫性疾病中證實(shí)有療效。然而在nmosd這一類 明確與b細(xì)胞異常增生有關(guān)系的自身免疫性疾病中卻未見相關(guān)研究報(bào)道。 血漿置換已被證明對(duì)急性期nmosd的治療有效，它能過濾主要的
致病因 子，如aqp4抗體?？上貉h(huán)中已有的自身免疫抗體，隨后再聯(lián)用 泰它西普靶向藥物，可抑制抗體產(chǎn)生，從而延長血漿置換治療效果，治療 并有效預(yù)防nmosd復(fù)發(fā)。
15.與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方案的有益效果：本發(fā)明中通過將重組人b淋巴 細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白應(yīng)用于血漿置換過濾去致病抗體后的視 神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的治療，具有能夠中和阻斷blys和april的作用， 從而抑制自身免疫反應(yīng)、延長nmosd復(fù)發(fā)間隔，能夠克服現(xiàn)有的視神經(jīng)脊 髓炎譜系疾病的治療缺乏有效靶點(diǎn)干預(yù)、高復(fù)發(fā)率、明顯副作用的問題， 同時(shí)增加了重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白的疾病適應(yīng) 癥。
附圖說明
16.圖1是本發(fā)明實(shí)施例中blys和april在不同組別中的表達(dá)水平圖；
17.圖2是本發(fā)明實(shí)施例中不同組別eae臨床評(píng)分圖(**p《0.01，mann— whitney u test檢驗(yàn))；
18.圖3是本發(fā)明實(shí)施例中泰它西普顯著減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤和髓 鞘脫失；
19.圖4是本發(fā)明實(shí)施例中泰它西普顯著抑制外周免疫系統(tǒng)中活化b細(xì)胞 增生；
20.圖5是本發(fā)明實(shí)施例中nmosd患者入組和隨訪情況；
21.圖6是本發(fā)明實(shí)施例中nmosd患者入組前后發(fā)作次數(shù)；
22.圖7是本發(fā)明實(shí)施例中nmosd患者入組后復(fù)發(fā)可能性；
23.圖8是本發(fā)明實(shí)施例中重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋 白應(yīng)用機(jī)制圖。
具體實(shí)施方式
24.為了使本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好地理解本發(fā)明方案，下面將結(jié)合本發(fā) 明的實(shí)施例及附圖，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)地描述，顯然， 所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分的實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基 于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下 所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
25.需要說明的是，在不沖突的情況下，本發(fā)明中的實(shí)施例及實(shí)施例中的 特征可以相互組合。下面將結(jié)合實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。
26.實(shí)施例：
27.本發(fā)明將重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白用于視神經(jīng) 脊髓炎譜系疾病的治療。
28.其中，本發(fā)明中的重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白用 于制備注射用的泰它西普藥物。
29.其中，本發(fā)明中的重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子受體－抗體融合蛋白通 過阻斷b淋巴細(xì)胞的增生，實(shí)現(xiàn)抑制自身免疫疾病的作用。
30.以下為本發(fā)明實(shí)施例的試驗(yàn)的具體內(nèi)容：
31.1、臨床前試驗(yàn)
32.1)blys和april在nmosd急性期與慢性期的表達(dá)水平
33.nmosd診斷均符合2015年視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(nmosd)國際共識(shí) 診斷標(biāo)準(zhǔn)，納入患者年齡在18～75周歲。nmosd病情急性期，即在篩選前 30天內(nèi)有新發(fā)神經(jīng)功能缺損癥
狀，或原有癥狀加重，癥狀至少持續(xù)24小 時(shí)，無伴隨的發(fā)熱現(xiàn)象。nmosd病情慢性期，在篩選前12個(gè)月出現(xiàn)≥2次 復(fù)發(fā)，在篩選前30天內(nèi)無新發(fā)神經(jīng)功能缺損癥狀，無原有癥狀加重，無 發(fā)熱現(xiàn)象。正常對(duì)照組，不具有nmosd及與nmosd不相關(guān)的進(jìn)行性神經(jīng)系 統(tǒng)病變，且在篩選前30天內(nèi)無新發(fā)神經(jīng)功能缺損癥狀，無原有癥狀加 重，無發(fā)熱現(xiàn)象。受試者基線信息如下表1所示。
34.表1.受試者基線信息
[0035][0036]
通過提取三組受試者外周血清blys和april檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)，blys在急 性期患者和緩解期患者中較正常組都明顯升高。急性期組blys平均濃度 為101.1
±
12.67pg/ml；緩解期組blys平均濃度為98.59
±
9.66 pg/ml；健康對(duì)照組濃度為86.31
±
9.39pg/ml(圖1a)。april在急性 期患者血清中濃度最高，而緩解期患者和健康組之間則無明顯差異。急性 期
中濃度為104.5
±
12.16ng/ml；緩解期中濃度為85.11
±
24.12 ng/ml；健康對(duì)照中為83.38
±
19.48ng/ml(圖1b)。
[0037]
相較于正常對(duì)照組，blys和april在nmosd急性期均有明顯升高。而 blys和april為泰它西普的作用靶點(diǎn)，因而泰它西普在nmosd急性期具 有可發(fā)揮靶向作用的治療靶點(diǎn)。
[0038]
2)泰它西普緩解nmosd模型動(dòng)物的臨床癥狀
[0039]
通過mog
35-55
誘導(dǎo)小鼠nmosd模型。經(jīng)過mog
35-55 mog經(jīng)mog35_55免疫 后，小鼠普遍在第8-10天開始發(fā)病，第14-20天進(jìn)入發(fā)病高峰期。分組 后在炎癥高峰期第16天按不同劑量對(duì)小鼠進(jìn)行治療，隔天腹腔注射，陰 性對(duì)照組注射生理鹽水進(jìn)行對(duì)照，陽性對(duì)照組腹腔注射fty-720進(jìn)行對(duì) 照，每日進(jìn)行eae癥狀評(píng)分，持續(xù)至免疫后第35天。經(jīng)治療后，泰它西 普組可明顯降低臨床評(píng)分(圖2)和陽性對(duì)照組fty-720療效接近，結(jié)果如 圖2所示。其中可注意到給藥后每個(gè)實(shí)驗(yàn)組臨床評(píng)分都開始下降，后續(xù)臨 床評(píng)分時(shí)有波動(dòng)，較高劑量組(10mg/kg，3.33mg/kg)臨床評(píng)分下降速度 較低劑量組(0.35mg/kg，1.105mg/kg)緩慢，但最終均在慢性期到達(dá) 0.5-1分左右。結(jié)果表明，泰它西普在體內(nèi)水平可明顯改善eae臨床評(píng) 分，減輕eae后肢無力癥狀。
[0040]
3)泰它西普顯著減輕nmosd模型動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤
[0041]
在免疫的第35天eae小鼠進(jìn)入炎癥消退期，處死小鼠后取脊髓腰膨大 節(jié)段固定包埋，切片后進(jìn)行he染色，在光鏡四倍鏡下隨機(jī)取白質(zhì)區(qū)域10 處1mm2的區(qū)域進(jìn)行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)(單位為：個(gè)/mm2)，計(jì)算每平方毫米的炎 癥細(xì)胞平均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。經(jīng)泰它西普治療后，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤 明顯下降(圖3a，b)。從圖3中也可看出，模型組小鼠脊髓外周白質(zhì)有較 多炎性細(xì)胞浸潤，相比之下經(jīng)過泰它西普治療后脊髓外周炎癥細(xì)胞明顯消 退，實(shí)驗(yàn)組炎性浸潤量化評(píng)分降低。
[0042]
在免疫的第35天eae小鼠進(jìn)入炎癥消退期，處死小鼠后取脊髓腰膨大 節(jié)段固定包埋，切片后進(jìn)行l(wèi)fb染色，在典型的模型動(dòng)物組中，小鼠脊髓 外周白質(zhì)區(qū)域大面積髓鞘脫失，這也是與小鼠行為學(xué)上觀察到的后肢無力 等癥狀直接相關(guān)的病理學(xué)基礎(chǔ)。經(jīng)過治療后，小鼠髓鞘脫失情況明顯好 轉(zhuǎn)，僅剩余周圍白質(zhì)層少許斑片狀小型脫失，量化分析后(量化后為比 值，故無單位)發(fā)現(xiàn)藥物治療組均可不同程度改善髓鞘脫失情況，其中以 3.33mg/kg改善效果最為顯著(圖3c，d)。
[0043]
結(jié)果表明，泰它西普顯著減輕nmosd模型動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸 潤。
[0044]
4)泰它西普顯著抑制nmosd模型動(dòng)物外周免疫系統(tǒng)中活化b細(xì)胞增生
[0045]
取免疫后第25天的小鼠脾臟，制備單細(xì)胞懸液，孵育相應(yīng)流式抗 體后以流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)分析后發(fā)現(xiàn)，與模型動(dòng)物
[0046]
2、臨床試驗(yàn)
[0047]
1)研究設(shè)計(jì)
[0048]
這是一項(xiàng)評(píng)價(jià)血漿置換聯(lián)合泰它西普在治療nmosd患者中的安全性和 有效性的單中心、單臂、開放標(biāo)簽的研究
[0049]
2)研究對(duì)象
[0050]
nmosd診斷均符合2015年視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(nmosd)國際共識(shí) 診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入患者年齡在18～75周歲；在篩選前12個(gè)月出現(xiàn)≥2次復(fù) 發(fā)(含本次急性期復(fù)發(fā))，病情處于急性期，即在篩選前30天內(nèi)有新發(fā) 神經(jīng)功能缺損癥狀，或原有癥狀加重，癥狀至少持續(xù)
24小時(shí)，無伴隨的 發(fā)熱現(xiàn)象。若受試者有以下情況，則不能入組：(1)具有與nmosd不相關(guān) 的進(jìn)行性惡化的神經(jīng)系統(tǒng)病變；(2)目前患有活動(dòng)性肝炎或患有肝臟嚴(yán)重 病變及病史者(肝功能檢查＞2倍正常上值)；hbsag-表面抗原陽性者不 準(zhǔn)入選，但僅抗hbc單項(xiàng)陽性的患者加做hbv-dna定量檢測(cè)，如果hbv
??
dna定量為陰性可不被視為排除；(3)目前患有腎功能不全(包括急性腎 損傷和慢性腎臟疾病，根據(jù)cockcroft-gault方程式計(jì)算出的血肌酐清 除率估計(jì)值＜60ml/min)的患者；(4)孕婦、哺乳期婦女及近48周有生育 計(jì)劃的患者；(5)入組前28天或試驗(yàn)藥物的5倍半衰期(取時(shí)間較短者)內(nèi) 給予過任何臨床試驗(yàn)藥物的患者；(6)脾切除術(shù)后；(7)過敏反應(yīng)：對(duì)胃腸 外給藥的造影劑、人源性生物制品有過敏史的患者；(8)有嚴(yán)重精神疾病 癥狀，臨床不能配合的患者；(9)無法進(jìn)行磁共振成像檢查的患者；(10) 入組前3個(gè)月使用過美羅華或米托蒽醌的患者。
[0051]
3)研究方法
[0052]
所有患者均接受3次血漿置換治療。然后在入組后14天給予皮下注 射泰它西普藥物，劑量為240mg，每周一次(至少間隔48小時(shí))，共46 次。研究期間不允許靜脈使用糖皮質(zhì)激素；禁用雷公藤、環(huán)孢素、甲氨蝶 呤、米托蒽醌、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、他克莫司、來氟米特、嗎替麥考酚 酯、特立氟胺等其他的免疫抑制劑；禁用美羅華等其他生物免疫抑制劑； 禁止造血干細(xì)胞移植、淋巴照射、注射免疫球蛋白。
[0053]
在研究過程中，受試者需在入組后第4、12、24、48周進(jìn)行訪視，由 2名專業(yè)神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師進(jìn)行edss評(píng)分，osis評(píng)分，hauser步行指數(shù)， 記錄癥狀變化、合并用藥以及不良事件，評(píng)估是否有復(fù)發(fā)。如果受試者在 試驗(yàn)期間復(fù)發(fā)則記錄后退出試驗(yàn)。復(fù)發(fā)的定義必須符合以下4個(gè)條件：
①?
新的神經(jīng)系統(tǒng)異常癥狀出現(xiàn)，或原有癥狀出現(xiàn)惡化；
②
癥狀至少持續(xù)24 小時(shí)；
③
距離上次復(fù)發(fā)30天以上；
④
無伴隨的發(fā)熱現(xiàn)象，體溫＜ 37.5℃，或無已知的感染。在基線期、入組后第4、12、24、48周或復(fù)發(fā) 時(shí)會(huì)進(jìn)行血液尿液檢查，包括病毒學(xué)檢查、血常規(guī)、血生化、女性的妊娠 試驗(yàn)和免疫球蛋白、補(bǔ)體、淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)和尿常規(guī)等。
[0054]
視覺誘發(fā)電位(vep)記錄誘發(fā)電位p100的潛伏期和波幅。在基線期、 入組后第24、48周會(huì)進(jìn)行血aqp4抗體和blys、april檢測(cè)。aqp4抗體 是由細(xì)胞基轉(zhuǎn)染免疫熒光法(cba)方法檢測(cè)滴度，blys、april由酶聯(lián) 免疫吸附法(elisa)方法檢測(cè)。在基線期、入組后第48周或復(fù)發(fā)時(shí)會(huì)進(jìn) 行頭、眼、脊髓磁共振成像，使用3t磁共振記錄t1加權(quán)像(t1wi)上的 低信號(hào)病灶數(shù)量、t2加權(quán)像(t2wi)高信號(hào)病灶數(shù)量、釓增強(qiáng)t1wi病灶 數(shù)量等。磁共振報(bào)告由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院影像科專業(yè)醫(yī)師 判讀。
[0055]
在基線、第4、12、24和48周或復(fù)發(fā)時(shí)進(jìn)行安全性評(píng)估，包括病毒 學(xué)檢查、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清生化、尿液常規(guī)和心電圖。在入組后第24 周和第48周進(jìn)行胸部計(jì)算機(jī)斷層掃描(x射線)掃描。其他安全性評(píng)估 包括體格檢查、每次研究訪問時(shí)的不良事件(ae)記錄等。
[0056]
本研究的主要終點(diǎn)是入組后首次復(fù)發(fā)的時(shí)間。次要終點(diǎn)包括：入組前 后一年發(fā)作次數(shù)變化，edss評(píng)分，osis評(píng)分，hauser步行指數(shù)評(píng)分， 磁共振成像病灶數(shù)量，光學(xué)相干斷層掃描技術(shù)(oct)檢查視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維 層厚度變化，視覺誘發(fā)電位(vep)p100的潛伏期和波幅，aqp4抗體滴 度，igg，igm，iga，補(bǔ)體c3,c4，淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值，blys、april等 免疫指標(biāo)。同時(shí)記錄不良事件進(jìn)行安全性評(píng)估。根據(jù)不良事件常用術(shù)語評(píng) 定標(biāo)準(zhǔn)(ctcae 4.03)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0057]
4)研究結(jié)果一：受試者基本特征
[0058]
本研究共篩選10例nmosd受試者，有8例符合入排標(biāo)準(zhǔn)予以入組 (如圖5所示)。一名患者因撤回知情同意而剔除，另一名患者因有嚴(yán)重 肝病史(肝功能檢查正常值的兩倍以上)而剔除。在8例患者中，女性占 87.5％(n＝7)，男性占12.5％(n＝1)。入組受試者的年齡由24至66 歲不等，中位年齡為53歲。所有患者均血清抗aqp4抗體陽性?；颊咛?征列于表1中。三名患者在入組前尚未接受或不能耐受預(yù)防復(fù)發(fā)治療。五 名患者在入組前接受過免疫抑制劑治療。所有8名患者在接受治療前均有 高復(fù)發(fā)率，入組前復(fù)發(fā)次數(shù)為3(2-7)次，病程為1.20(0.14，18.43) 年(如下表2所示)。
[0059]
表2.既往治療方案和入組前后發(fā)作次數(shù)
[0060][0061][0062]
aza,azathioprine硫唑嘌呤；mmf,mycophenolate mofetil嗎替麥考酚 酯；pdn,prednisone強(qiáng)的松，*入組前后發(fā)作次數(shù)差異。
[0063]
5)研究結(jié)果二：受試者復(fù)發(fā)次數(shù)減少
[0064]
五名受試者在48周治療期間沒有發(fā)作。4號(hào)受試者在入組后234天 復(fù)發(fā)，9號(hào)受試者在入組后第45天復(fù)發(fā)。與入組前相比，入組后首次復(fù) 發(fā)的時(shí)間比以前的復(fù)發(fā)間隔長，年復(fù)發(fā)次數(shù)減少(p《0.001，power oftest＝1)。(如表2、圖6、圖7)。治療48周后，edss評(píng)分從3.5 (2.5-4.5)改善到3(1-4)分。osis評(píng)分的運(yùn)動(dòng)和感覺評(píng)分也有所改 善。在1例視力正?；颊咴诘?次訪視后退出前，視力的中位評(píng)分保持穩(wěn) 定。hauser步行指數(shù)評(píng)分從1.0(0.0-3.0)下降到0.0(0.0-1.0)分。
[0065]
6)研究結(jié)果三：受試者神經(jīng)影像及功能改善
[0066]
8例受試者在基線期間接受了mri檢查。5例無復(fù)發(fā)患者在第48周完 成mri檢查：1)腦部：8例受試者均無頭顱高信號(hào)病灶。2)視神經(jīng)：6 例受試者在基線期有視神經(jīng)增強(qiáng)高信號(hào)病灶，5例受試者在臨床試驗(yàn)結(jié)束 時(shí)無nmosd急性改變，且無視力癥狀加重。3)脊髓：脊髓t1增強(qiáng)病灶 在第48周消退，t2wi高信號(hào)強(qiáng)度的數(shù)量也從基線時(shí)的1.5(0，3)下降 到第48周的1(0，2)。t2wi高信號(hào)病灶累及脊髓節(jié)段數(shù)保持不變。視 神經(jīng)功能方面，oct中視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層的厚度與vep p100波的潛伏期 和振幅趨于穩(wěn)定。
[0067]
7)研究結(jié)論：
[0068]
本研究首次將血漿置換聯(lián)合泰它西普應(yīng)用于復(fù)發(fā)性nmosd急性復(fù)發(fā) 期。血漿置換過濾去除致病因子，泰它西普在血漿置換過濾去致病抗體后 使用，中和阻斷blys和april
的作用，從而抑制自身免疫反應(yīng)、延長 nmosd復(fù)發(fā)間隔。在我們的研究中，nmosd患者首次復(fù)發(fā)的時(shí)間延長，殘 疾功能評(píng)分降低，表明血漿置換聯(lián)合泰它西普在預(yù)防nmosd復(fù)發(fā)方面可能 具有一定作用，同時(shí)避免了大劑量使用糖皮質(zhì)激素的副作用。本研究期間 發(fā)生的不良事件程度較輕，很快緩解，未發(fā)生嚴(yán)重不良事件，表明血漿置 換聯(lián)合泰它西普的安全性尚可。該研究表明，血漿置換聯(lián)合泰它西普可能 是復(fù)發(fā)性nmosd患者的有效治療選擇。
[0069]
總之，這是血漿置換聯(lián)合泰它西普在復(fù)發(fā)性nmosd中首次應(yīng)用研究， 是一種全新的治療方法，同時(shí)拓寬了泰它西普的適應(yīng)病癥。這項(xiàng)探索性研 究表明，血漿置換聯(lián)合泰它西普在nmosd患者中具有良好的耐受性，在延 長nmosd患者的復(fù)發(fā)間隔并減少年復(fù)發(fā)次數(shù)上顯示出一定趨勢(shì)。
[0070]
在本實(shí)施例中，圖1為blys和april在不同組別中的表達(dá)水平。圖 1中的(a)為blys在急性期、緩解期、健康對(duì)照組中表達(dá)水平；(b) 為april在急性期、緩解期、健康對(duì)照組中表達(dá)水平。數(shù)據(jù)顯示為平均值
?±
sd,*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001，mann-whitney u檢驗(yàn)。
[0071]
圖3為泰它西普顯著減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤和髓鞘脫失。nmosd 模型小鼠在免疫后第35天處死后，(a)取腰膨大處脊髓組織行he染 色，典型的he染色結(jié)果(四倍鏡，二十倍鏡)，比例尺＝100μm；(b)he 染色量化分析。(c)取腰膨大處脊髓組織行l(wèi)fb染色，典型的lfb染色 結(jié)果(四倍鏡，二十倍鏡)，比例尺＝100μm；(d)lfb染色量化分析。數(shù) 據(jù)顯示為平均值
±
sd，**p《0.01,***p《0.001，****p《o.0001；one-wayanova with dunnett’s post hoc檢驗(yàn)。
[0072]
圖4為泰它西普顯著抑制外周免疫系統(tǒng)中活化b細(xì)胞增生。其中， (a、b)cd19+cd23+b細(xì)胞典型流式圖及量化分析；(c、d) cd19+cd21/35+b細(xì)胞典型流式圖及量化分析。數(shù)據(jù)顯示為平均值
±
sd， **p《0.01,***p《0.001，****p《o.0001；one-way anova with dunnett’spost hoc檢驗(yàn)。
[0073]
以上具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的解釋，其并不是對(duì)本發(fā)明的限制， 本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完本說明書后可以根據(jù)需要對(duì)本實(shí)施例做出沒有創(chuàng) 造性貢獻(xiàn)的修改，但只要在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)都受到專利法的保 護(hù)。