1.本發(fā)明屬于化妝品領(lǐng)域，具體涉及具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物及其在化妝品中的應(yīng)用。


背景技術(shù)：

2.皮膚是人體重要的屏障，能夠保護(hù)人體免受環(huán)境傷害和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。研究表明，許多皮膚疾病都與皮膚屏障功能受損密切相關(guān)，比如銀屑病、特應(yīng)性皮炎、痤瘡等。紫外線和可見(jiàn)光的照射、空氣污染、氣候因素、化學(xué)刺激和衰老等都會(huì)影響皮膚屏障功能。因此，健康的皮膚屏障對(duì)維護(hù)皮膚健康的生理狀態(tài)必不可少。狹義的皮膚屏障通常指角質(zhì)層的物理性或機(jī)械性屏障結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)性脂類(lèi)是構(gòu)成皮膚物理性屏障結(jié)構(gòu)的重要組分。結(jié)構(gòu)性脂類(lèi)主要由神經(jīng)酰胺、脂肪酸和膽固醇構(gòu)成。結(jié)構(gòu)性脂質(zhì)的任何變化均會(huì)直接影響皮膚屏障結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致透皮水分丟失增加，皮膚干燥、脫屑等。


技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

3.本發(fā)明的目的在于提供一種具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物。
4.為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
5.一種具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物，該組合物由印加果籽油和神經(jīng)酰胺組成，兩種成分的重量份比為：1～20:0.5～1。
6.進(jìn)一步的，該組合物由印加果籽油和神經(jīng)酰胺組成，兩種成分的重量份比為：1～10:1。
7.更進(jìn)一步的，所述印加果籽油和神經(jīng)酰胺的重量份比為：5:1。
8.進(jìn)一步的，所述神經(jīng)酰胺是指神經(jīng)酰胺2、神經(jīng)酰胺3中的一種或兩種組合。
9.具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物在制備修復(fù)皮膚化妝品中的應(yīng)用，采用任一所述的組合物。
10.一種皮膚屏障修護(hù)精華霜，其特征在于包括所述的具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物。
11.所述的精華霜，包括以下重量百分比的組分：任一所述的具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物1～20重量份，辛酸/癸酸甘油三酯2～20重量份，氫化椰油甘油酯類(lèi)1～10重量份，碳酸二辛酯1～10重量份，1,2-戊二醇1～15重量份，山崳醇1～15重量份，生育酚乙酸酯0.1～5重量份，1,2-己二醇0.1～5重量份，尿囊素0.1～5重量份，edta二鈉0.01～0.9重量份，甘油硬脂酸酯檸檬酸酯1～15重量份，牛油果樹(shù)果脂1～15重量份，甘油硬脂酸酯1～15重量份，對(duì)羥基苯乙酮0.1～1重量份，甘油3～25重量份，1,3-丙二醇3～35重量份，皺波角叉菜提取物0.05～2重量份，聚丙烯酸鈉0.05～2重量份，水30-45重量份。
12.進(jìn)一步的，所述的精華霜，其特征在于，包括以下重量百分比的組分：權(quán)利要求1或2所述的具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物1～10重量份，辛酸/癸酸甘油三酯2～10重量份，氫化椰油甘油酯類(lèi)2～8重量份，碳酸二辛酯1～5重量份，1,2-戊二醇2～10重量份，
山崳醇1～5重量份，生育酚乙酸酯0.1～1重量份，1,2-己二醇0.1～1重量份，尿囊素0.1～1重量份，edta二鈉0.01～0.1重量份，甘油硬脂酸酯檸檬酸酯1～5重量份，牛油果樹(shù)果脂1～5重量份，甘油硬脂酸酯1～5重量份，對(duì)羥基苯乙酮0.1～0.5重量份，甘油5～15重量份，1,3-丙二醇5～15重量份，皺波角叉菜提取物0.1～0.5重量份，聚丙烯酸鈉0.1～1重量份，水30-45重量份。
13.所述精華霜的制備方法，包括如下步驟：
14.s1：按協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障組合物的成分配比，稱(chēng)量原料，混合均勻，得到協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障的組合物；
15.s2：按精華霜的原料配比備料，將1,3-丙二醇、甘油硬脂酸酯、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和部分水依次加入主鍋中，加熱至55-75℃，混合，攪拌分散；
16.s3：將辛酸/癸酸甘油三酯、氫化椰油甘油酯類(lèi)、碳酸二辛酯、山崳醇、甘油硬脂酸酯檸檬酸酯、牛油果樹(shù)果脂和生育酚乙酸酯依次加入油鍋中，加熱至50-85℃，混合均勻，攪拌溶解，然后投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻；
17.s4：將對(duì)羥基苯乙酮、皺波角叉菜提取物、尿囊素、edta二鈉和剩余水依次加入水鍋中，加熱至50～80℃，充分混合均勻，攪拌溶解，然后投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻；
18.s5：將協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障組合物投入至乳化鍋中，均質(zhì)攪拌；
19.s6：攪拌冷卻至33～60℃，將混合分散好的甘油和聚丙烯酸鈉投入至主鍋，攪拌混合均勻，攪拌冷卻至20～40℃，脫泡過(guò)濾，制得皮膚屏障修護(hù)精華霜。
20.進(jìn)一步的，所述精華霜的制備方法，包括如下步驟：
21.s1：按協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障組合物的成分配比，稱(chēng)量原料，混合均勻，得到協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障的組合物；
22.s2：按精華霜的原料配比備料，將1,3-丙二醇、甘油硬脂酸酯、1,2-己二醇、1,2-戊二醇和部分水依次加入主鍋中，加熱至63-67℃，充分混合均勻，攪拌分散；
23.s3：將辛酸/癸酸甘油三酯、氫化椰油甘油酯類(lèi)、碳酸二辛酯、山崳醇、甘油硬脂酸酯檸檬酸酯、牛油果樹(shù)果脂和生育酚乙酸酯依次加入油鍋中，加熱至70-75℃，充分混合均勻，攪拌溶解，然后投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻；
24.s4：將對(duì)羥基苯乙酮、皺波角叉菜提取物、尿囊素、edta二鈉和剩余水依次加入水鍋中，加熱至63～67℃，充分混合均勻，攪拌溶解，然后投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻；
25.s5：將協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障組合物投入至乳化鍋中，均質(zhì)攪拌；
26.s6：攪拌冷卻至43～47℃，將混合分散好的甘油和聚丙烯酸鈉投入至主鍋，攪拌混合均勻，攪拌冷卻至28～32℃，脫泡過(guò)濾，制得皮膚屏障修護(hù)精華霜。
27.神經(jīng)酰胺是皮膚中一種重要的生理性脂質(zhì)，由長(zhǎng)鏈鞘氨醇?jí)A基和脂肪酸組成。神經(jīng)酰胺不僅參與組成皮膚屏障的構(gòu)成，也產(chǎn)于信號(hào)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)皮膚免疫及細(xì)胞周期、分化與凋亡等過(guò)程。神經(jīng)酰胺合成與代謝異常與多種皮膚病密切相關(guān)，添加了神經(jīng)酰胺的護(hù)膚品已被用于多種皮膚疾病的輔助治療。構(gòu)建皮膚屏障的結(jié)構(gòu)性脂質(zhì)中，不飽和脂肪酸有別于其他脂質(zhì)成分，人體不能自然合成。印加果籽油是主要由棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸和亞麻酸4種脂肪酸組成，不飽和脂肪酸含量為81.18-92.46％，且亞油酸和亞麻酸的總含量占80％以
上。
28.本發(fā)明的有益效果如下：
29.1、本發(fā)明制得的一種具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物，能夠與皮膚屏障相關(guān)蛋白的基因表達(dá)水平和經(jīng)皮電阻，顯示出修復(fù)皮膚屏障的效果。
30.2、本發(fā)明的一種具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物中含有印加果籽油和神經(jīng)酰胺兩種成分，能夠協(xié)同增效改善皮膚屏障，優(yōu)于單一使用印加果籽油或神經(jīng)酰胺的效果。
31.3、應(yīng)用一種具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物在化妝品中，能夠有效改善皮膚的經(jīng)皮水分流失，具有修復(fù)皮膚屏障的效果。
附圖說(shuō)明：
32.圖1：不同組合物對(duì)表皮屏障功能基因mrna表達(dá)的影響；
33.圖2：不同組合物處理后的相對(duì)經(jīng)皮電阻提升率。
具體實(shí)施方式
34.為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說(shuō)明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
35.本發(fā)明所述的技術(shù)方案，如未特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方案；所述試劑或材料，如未特別說(shuō)明，均來(lái)源于商業(yè)渠道。
36.本發(fā)明實(shí)施例所用的神經(jīng)酰胺2購(gòu)自日本takasago公司，神經(jīng)酰胺3購(gòu)自贏創(chuàng)特種化學(xué)(上海)有限公司，印加果籽油購(gòu)自法國(guó)greentech公司，乳木果油購(gòu)自aak集團(tuán)。
37.實(shí)施例1
38.將印加果籽油和神經(jīng)酰胺按照質(zhì)量比為5:1混合均勻。
39.對(duì)比例1
40.僅含有印加果籽油。
41.對(duì)比例2
42.僅含有神經(jīng)酰胺。
43.對(duì)比例3
44.將乳木果油和神經(jīng)酰胺按照質(zhì)量比為5:1混合均勻。
45.實(shí)施例2：2rt-qpcr基因測(cè)定屏障相關(guān)蛋白mrna相對(duì)表達(dá)量
46.將空白對(duì)照組、實(shí)施例1、對(duì)比例1、對(duì)比例2和對(duì)比例3分別用表皮模型(批號(hào)：es220607，廣東博溪生物科技有限公司)進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試采用液下全局培養(yǎng)的方式。
47.1實(shí)驗(yàn)方法
48.1)總rna提?。号囵B(yǎng)24小時(shí)后，收皮，在1ml trizol溶液中粉碎均質(zhì)，轉(zhuǎn)移至無(wú)雜核酸和核酸酶的1.5ml的離心管中，加入200μl的氯仿，渦旋，靜置1-2min。12000g，4℃，離心10min。吸取上清至新的離心管中，加入等體積的異丙醇。渦旋，12000g，4℃，10min，抽掉上清，加入1ml的75％depc(焦碳酸二乙酯)乙醇。9000g，4℃，離心5min。抽掉乙醇，加入50μl的無(wú)酶水，用qubit 3.0進(jìn)行rna定量。
49.2)反轉(zhuǎn)錄：rna調(diào)整濃度后，使用反轉(zhuǎn)錄試劑與poly(a)引物反轉(zhuǎn)錄為cdna。根據(jù)實(shí)際要求，將cdna濃度調(diào)整至25ng/μl，取50ng混合所需引物，并進(jìn)行熒光定量pcr。
50.3)rt-qpcr測(cè)試：以gapdh作為內(nèi)參基因進(jìn)行矯正加樣誤差，計(jì)算絲聚合蛋白(flg)、水閘蛋白1(cld)、水通道蛋白3(aqp3)、透明質(zhì)酸合成酶1(has1)、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1(tgm1)mrna的表達(dá)量(具體方法請(qǐng)參見(jiàn)roche的faststart essential dna green master，第6版，其可從羅氏診斷的官方網(wǎng)站下載獲得)。
51.表1目的基因的pcr引物序列
[0052][0053][0054]
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0055]
采用rt-qrcr檢測(cè)不同組合物對(duì)表皮模型中皮膚屏障功能基因的表達(dá)變化，結(jié)果顯示，與空白組相比，單獨(dú)使用印加果籽油或神經(jīng)酰胺對(duì)表皮模型的aqp3、flg和has1沒(méi)有顯著性的促進(jìn)作用(p＞0.05)，然而單獨(dú)使用印加果籽油對(duì)tgm1的表達(dá)有顯著促進(jìn)作用(p＜0.01)，單獨(dú)使用印加果籽油或者神經(jīng)酰胺能夠顯著促進(jìn)cld的表達(dá)(p＜0.05)。將印加果籽油或乳木果油與神經(jīng)酰胺復(fù)配后，經(jīng)過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，組合物對(duì)皮膚屏障功能基因flg、aqp3、tgm1和has1的表達(dá)均有促進(jìn)作用，且優(yōu)于單獨(dú)使用神經(jīng)酰胺。更進(jìn)一步，印加果籽油與神經(jīng)酰胺的復(fù)配優(yōu)于乳木果油與神經(jīng)酰胺的復(fù)配?？傊〖庸延团c神經(jīng)酰胺復(fù)配優(yōu)于單獨(dú)使用印加果籽油或神經(jīng)酰胺，表現(xiàn)出了一定的協(xié)同作用。且印加果籽油與神經(jīng)酰胺復(fù)配優(yōu)于乳木果油與神經(jīng)酰胺復(fù)配。
[0056]
實(shí)施例3：評(píng)估不同組合物對(duì)經(jīng)皮電阻的影響
[0057]
1實(shí)驗(yàn)方法
[0058]
經(jīng)皮電阻(teer)是一種無(wú)創(chuàng)測(cè)量可用于評(píng)估表皮電阻的方法。使用市售的evom儀器測(cè)試實(shí)施例和對(duì)比例的經(jīng)皮電阻。
[0059]
1)將stx2電極浸入70％乙醇中15分鐘進(jìn)行消毒并用pbs洗滌。
[0060]
2)將transwell小室去除培養(yǎng)基并放置在24孔板中內(nèi)外添加0.5mlpbs。
[0061]
3)將stx2電極置于transwell小室內(nèi)部和外部隔間。
[0062]
4)每個(gè)樣品從不同的位置測(cè)量3次電阻并獲得平均經(jīng)皮電阻(ohms)。
[0063]
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0064]
不同組合物處理后的相對(duì)經(jīng)皮電阻值提升率如圖2所示。與空白對(duì)照相比，實(shí)施例1和對(duì)比例3的相對(duì)經(jīng)皮電阻值提升率較高，分別為2.86％和1.47％。說(shuō)明實(shí)施例1和對(duì)比例3的皮膚厚度相對(duì)較高，皮膚屏障較強(qiáng)，優(yōu)于單獨(dú)使用神經(jīng)酰胺或印加果籽油。且實(shí)施例1優(yōu)于對(duì)比例3，可見(jiàn)在改善皮膚屏障方面，印加果籽油與神經(jīng)酰胺復(fù)配優(yōu)于乳木果油與神經(jīng)酰胺復(fù)配。
[0065]
實(shí)施例4：為了更好的說(shuō)明本發(fā)明的適用性，將本發(fā)明實(shí)施例1制備的具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用的組合物以5％的添加量添加到面霜中。面霜的制備過(guò)程為：
[0066]
將62g1,3-丙二醇、10g甘油硬脂酸酯、4g1,2-己二醇、40g1,2-戊二醇和150g水依次加入主鍋中，加熱至63-67℃，充分混合均勻，攪拌分散；
[0067]
將50g辛酸/癸酸甘油三酯、40g氫化椰油甘油酯類(lèi)、20g碳酸二辛酯、20g山崳醇、20g甘油硬脂酸酯檸檬酸酯、20g牛油果樹(shù)果脂和8g生育酚乙酸酯依次加入油鍋中，加熱至70-75℃，充分混合均勻，攪拌溶解，然后緩慢投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻；
[0068]
將4g對(duì)羥基苯乙酮、11g皺波角叉菜提取物、11g尿囊素、0.5gedta二鈉和41.83g水依次加入水鍋中，加熱至63～67℃，充分混合均勻，攪拌溶解，然后緩慢投入至乳化鍋中，均質(zhì)乳化，混合均勻
[0069]
s5：將50g協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障組合物緩慢投入至乳化鍋中，均質(zhì)攪拌；
[0070]
s6：攪拌冷卻至43～47℃，將混合分散好的75g甘油和6g聚丙烯酸鈉投入至主鍋，攪拌混合均勻，攪拌冷卻至28～32℃，脫泡過(guò)濾，制得皮膚屏障修護(hù)精華霜。
[0071]
一般貯存穩(wěn)定性依據(jù)gb/t29665-2013進(jìn)行評(píng)價(jià)；防腐效力測(cè)試，采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)iso11930：2012(化妝品-微生物學(xué)-化妝品產(chǎn)品抗菌防護(hù)評(píng)定)方法；安全性測(cè)試依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)的要求采用相應(yīng)的技術(shù)手段，對(duì)精華霜中重金屬(鉛、汞、砷、鎘)、風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)(二甘醇、二惡烷)及微生物安全性實(shí)施檢測(cè)。
[0072]
一般貯存穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2，該精華霜在凍融循環(huán)、耐熱/耐寒試驗(yàn)中外觀、氣味、ph值均無(wú)明顯變化，具有貯存穩(wěn)定性。
[0073]
表2精華霜貯存穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
[0074][0075]
精華霜防腐功效測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3，結(jié)果顯示通過(guò)iso11930-2012附錄b中表b.1中a標(biāo)準(zhǔn)。
[0076]
表3防腐功效測(cè)試結(jié)果
[0077][0078][0079]
精華霜中重金屬(鉛、汞、砷、鎘)、風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)(二甘醇、二惡烷)及微生物安全性檢測(cè)
結(jié)果見(jiàn)表4、表5。鉛、汞、砷及鎘均未檢出，微生物指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)。
[0080]
表4精華霜重金屬及風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果
[0081][0082]
表5精華霜微生物檢測(cè)結(jié)果
[0083][0084]
最后說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管申請(qǐng)人參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍的，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
[0085]
實(shí)施例5：屏障修復(fù)效果檢測(cè)
[0086]
招募35名志愿者(年齡18到65歲的女性；前臂內(nèi)側(cè)皮膚表面水分流失值＞7g/(m2h))對(duì)精華霜的使用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。利用皮膚貼片黏貼建立皮膚屏障受損模型評(píng)價(jià)測(cè)試樣品(實(shí)施例4)使用4h后的修護(hù)效果。雙前臂內(nèi)側(cè)兩個(gè)測(cè)試區(qū)域(4.0cm
×
4.0cm)隨機(jī)設(shè)置為測(cè)試樣品區(qū)和空白對(duì)照區(qū)。測(cè)試樣品使用前對(duì)兩個(gè)區(qū)進(jìn)行皮膚水分流失量測(cè)試(vapometer，swl4001，delfin，芬蘭)，之后用皮膚貼片(d-squame，d100，cuderm，美國(guó))分別進(jìn)行黏貼至水分流失量在15-20g/(m2h)之間，然后現(xiàn)場(chǎng)由技術(shù)人員單次為受試者使用測(cè)試樣品，在黏貼后立即、產(chǎn)品使用后1h和4h分別進(jìn)行皮膚水分流失量測(cè)試。皮膚水分流失量越
小，皮膚屏障功能越好。
[0087]
共有31名志愿者完成了測(cè)試。在測(cè)試樣品使用前、黏貼后立即、測(cè)試樣品使用后1h和4h，對(duì)前臂內(nèi)側(cè)2個(gè)測(cè)試區(qū)進(jìn)行皮膚水分流失量測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表6。
[0088]
表6不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)試樣品對(duì)志愿者皮膚水分流失量的測(cè)試結(jié)果
[0089]
[0090][0091]
應(yīng)用dunnett-t檢驗(yàn)的方法分析測(cè)試樣品使用前后的變化，應(yīng)用t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行區(qū)域間比較。與黏貼后立即相比，測(cè)試樣品使用1h和4h后，測(cè)試樣品區(qū)皮膚水分流失量均有顯著性改善，分別顯著性降低了5.29和5.16(p＜0.05)，同時(shí)，空白對(duì)照區(qū)皮膚水分流失量均有顯著性改善，分別顯著性降低了3.35和3.47(p＜0.05)。與空白對(duì)照區(qū)相比，測(cè)試樣品使用1h和4h后，測(cè)試樣品區(qū)皮膚水分流失量均顯著由于空白對(duì)照區(qū)，可見(jiàn)，含具有協(xié)同增效修復(fù)皮膚屏障作用組合物的精華霜單次使用4h內(nèi)就能夠修護(hù)皮膚屏障功能。
[0092]
以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0093]
另外需要說(shuō)明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過(guò)任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說(shuō)明。