在一個(gè)方面，本發(fā)明的領(lǐng)域涉及通過酶療法治療和/或改善dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的問題。序列表該命名為“047162-7377wo1(01806)序列表.xml”的xml文件，創(chuàng)建于2022年9月29日，大小為149kb，現(xiàn)通過引用以其全部內(nèi)容并入本文。

背景技術(shù)：

0、技術(shù)背景

1、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(enp1)是一種2型跨膜蛋白，其細(xì)胞外活性水解細(xì)胞外核苷酸，如三磷酸腺苷(atp)的磷酸二酯鍵，以生成單磷酸腺苷(amp)和無機(jī)焦磷酸鹽(ppi)。由于ppi是羥基磷灰石沉積的主要生理性抑制劑，雙等位基因的enpp1缺陷導(dǎo)致生命早期的異位礦化，在嬰兒期因動脈鈣化和管腔變窄而導(dǎo)致高死亡率(ziegler等，generalized?arterial?calcification?of?infancy.in:adam?mp,ardinger?hh,pagonra,et?al.,(eds).gene?reviews?2014)。存活下來的患者，以及沒有表現(xiàn)出新生兒鈣化的enpp1缺陷個(gè)體，在以后的生活中可出現(xiàn)成纖維細(xì)胞生長因子23(fgf23)介導(dǎo)的低血磷酸鹽性佝僂病(ferreira等人，prospective?phenotyping?of?long-term?survivors?ofgeneralized?arterial?calcification?of?infancy(gaci),genet?med.2020；23:396-407)。

2、wo2014126965涉及在包括enpp1缺陷的疾病中病理性鈣化和病理性骨化的治療。三種蛋白質(zhì)——enpp1、組織非特異性堿性磷酸酶(tnap)和進(jìn)行性關(guān)節(jié)強(qiáng)直蛋白或錨蛋白(ank)——在調(diào)節(jié)無機(jī)焦磷酸鹽(ppi)和磷酸鹽(pi)的細(xì)胞外平衡中發(fā)揮作用。無機(jī)焦磷酸鹽(ppi)是由enpp1裂解細(xì)胞外核苷酸三磷酸酯(ntps)或由ank將ppi從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外空間而生成。tnap降解ppi以生成pi。

3、“enpp1缺陷”的特征在于受試者血清和/或血漿中的enpp1酶活性水平降低。enpp1缺陷是由編碼enpp1酶的enpp1基因的失活突變引起的罕見的遺傳性障礙。如本文其他部分所述，enpp1是整合跨膜蛋白，其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域具有焦磷酸酶和磷酸二酯酶活性。因此，enpp1將細(xì)胞外atp轉(zhuǎn)化為無機(jī)焦磷酸鹽(ppi)和amp。

4、生物系統(tǒng)中的鈣化是一個(gè)復(fù)雜的過程，鈣鹽在非循環(huán)基質(zhì)中維持的濃度高于區(qū)域循環(huán)體液或其他流動液體中的濃度。正常鈣化的主要結(jié)果是鈣和相關(guān)的無機(jī)鹽在專門的細(xì)胞間基質(zhì)中以類似的排列和化學(xué)組成的結(jié)晶模式的積累，所有這些可能在不同的物種中有所不同。另一方面，病理性鈣化的凈效應(yīng)是鈣和相關(guān)無機(jī)鹽的積累，其化學(xué)組成或模式多樣性大于正常范圍，這不僅在這些專門的基質(zhì)中，而且在其他細(xì)胞間、細(xì)胞外和細(xì)胞物質(zhì)中，從而導(dǎo)致了幾種疾病狀態(tài)。

5、彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)是以不尋常的新骨形成為特征的骨骼障礙(resnick等，diffuse?idiopathic?skeletal?hyperostosis(dish):forestier's?diseasewith?extraspinal?manifestations,radiology.1975；115:513-524)。新骨的形成最常見于韌帶和腱與骨結(jié)合處(肌腱末端區(qū)(entheseal?area))，但也有普遍的骨骼硬化和骨骼過度生長(骨肥厚)(pillai&littlejohn,metabolic?factors?in?diffuse?idiopathicskeletal?hyperostosis–a?review?of?clinical?data.the?open?rheumatologyjournal.2014；8:116-128)。enpp1、tnap和ank各自與dish相關(guān)的作用還不清楚。此外，也不知道這些酶中的一種或多種的缺陷是否是dish表型的一部分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
提供了治療、改善和/或防止有需要的患者中的彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的方法。在某些實(shí)施方式中，方法包括向患者施用治療有效量的式(i)的化合物，或其鹽或溶劑化物，

2、蛋白質(zhì)-z-結(jié)構(gòu)域-x-y(i)，

3、其中在(i)中：

4、蛋白質(zhì)包括enpp1的催化區(qū)；

5、結(jié)構(gòu)域不存在或?yàn)檫x自人igg?fc結(jié)構(gòu)域(fc)、人血清白蛋白(alb)和其片段的至少一個(gè)；

6、x和z獨(dú)立地不存在或?yàn)榘?-20個(gè)氨基酸的多肽，

7、y不存在或?yàn)閹ж?fù)電荷的骨靶向序列，

8、從而治療、改善和/或防止患者的dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎。

9、在某些實(shí)施方式中，化合物缺乏帶負(fù)電荷的骨靶向序列。

10、在某些實(shí)施方式中，y不存在。

11、在某些實(shí)施方式中，化合物包括帶負(fù)電荷的骨靶向序列。

12、在某些實(shí)施方式中，患者具有enpp1單倍性不足。

13、在某些實(shí)施方式中，患者沒有enpp1單倍性不足。

14、在某些實(shí)施方式中，患者不是enpp1缺陷的。

15、在某些實(shí)施方式中，患者是enpp1缺陷的。

16、在某些實(shí)施方式中，患者通過至少一種選自以下的途徑施用化合物：口服、氣溶膠、吸入、直腸、陰道、透皮、皮下、鼻內(nèi)、頰、舌下、腸胃外、鞘內(nèi)、胃內(nèi)、眼科、肺部和局部。

17、在某些實(shí)施方式中，化合物被靜脈內(nèi)或皮下施用至患者。

18、在某些實(shí)施方式中，向患者施用化合物增加患者的細(xì)胞外焦磷酸鹽濃度或防止其進(jìn)一步降低。

19、在某些實(shí)施方式中，向患者施用化合物降低患者的跟腱鈣化、脊柱鈣化、髖關(guān)節(jié)鈣化和雙側(cè)鈣化中的一種或多種或防止其進(jìn)一步增加。

20、在某些實(shí)施方式中，結(jié)構(gòu)域包括白蛋白。

21、在某些實(shí)施方式中，結(jié)構(gòu)域包括igg?fc結(jié)構(gòu)域。

22、在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)缺乏enpp1跨膜結(jié)構(gòu)域。

23、在某些實(shí)施方式中，化合物作為藥物組合物施用至患者，該藥物組合物進(jìn)一步包括至少一種藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體。

24、在某些實(shí)施方式中，患者是哺乳動物。

25、在某些實(shí)施方式中，哺乳動物是人類。

26、在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)包括seq?id?no:1的氨基酸殘基99(pscake……)至925(……qed)。

27、在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)包括seq?id?no:3的氨基酸殘基1至833。

28、在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)包括seq?id?no:2中描繪的氨基酸序列。

29、在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)包括seq?id?no:3或4或5中描繪的氨基酸序列。

30、在某些實(shí)施方式中，相對于缺乏結(jié)構(gòu)域的化合物的循環(huán)半衰期，該結(jié)構(gòu)域增加了化合物的循環(huán)半衰期。

31、在某些實(shí)施方式中，患者還被診斷出患有選自以下的疾病或病癥：早發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、與年齡有關(guān)的骨質(zhì)減少、opll、遺傳性低血磷酸鹽性佝僂病、x連鎖低磷酸鹽血癥、常染色體隱性低血磷酸鹽性佝僂病2型、常染色體顯性低血磷酸鹽性佝僂病和低血磷酸鹽性佝僂病。

32、在某些實(shí)施方式中，患者沒有被診斷出患有選自以下的疾病或病癥：早發(fā)性骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、與年齡有關(guān)的骨質(zhì)減少、opll、遺傳性低血磷酸鹽性佝僂病、x連鎖低磷酸鹽血癥、常染色體隱性低血磷酸鹽性佝僂病2型、常染色體顯性低血磷酸鹽性佝僂病和低血磷酸鹽性佝僂病。

33、描述

34、在某些實(shí)施方式中，本文所考慮的疾病或障礙是彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)。在某些實(shí)施方式中，本文所考慮的疾病或障礙是強(qiáng)直性脊柱炎。在某些實(shí)施方式中，本文所考慮的疾病或障礙是脊關(guān)節(jié)炎。在某些實(shí)施方式中，本文考慮的疾病或障礙是彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)和/或強(qiáng)直性脊柱炎。在某些實(shí)施方式中，本文所考慮的疾病或障礙是dish和/或脊關(guān)節(jié)炎。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明所考慮的疾病或障礙是強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎。

35、本發(fā)明提供了治療、改善、防止有需要的患者中的彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的進(jìn)一步發(fā)展或進(jìn)展和/或防止有需要的患者中的彌漫性特發(fā)性骨肥厚癥(dish)、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎。本發(fā)明進(jìn)一步提供了治療和/或改善有需要的患者中的dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的方法。

36、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及通過向患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者施用治療有效量的enpp1劑來治療、改善、防止dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的進(jìn)一步發(fā)展和/或進(jìn)展，和/或防止dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎。

37、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及通過向受試者施用治療有效量的enpp1劑來治療、改善、防止受試者中的enpp1缺陷的進(jìn)一步發(fā)展和/或進(jìn)展，和/或防止受試者中的enpp1缺陷。

38、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及通過向受試者施用治療有效量的enpp1劑來治療、改善、防止受試者中的enpp1單倍性不足的一種或多種癥狀的進(jìn)一步發(fā)展和/或進(jìn)展，和/或防止受試者中的enpp1單倍性不足的一種或多種癥狀。

39、治療dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎包括施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而治療、減少和/或改善dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎疾病的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中受試者沒有enpp1缺陷。

40、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及向患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，其從而治療、減少和/或改善dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎疾病的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中受試者具有enpp1缺陷。

41、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及向患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而治療、減少和/或改善dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎疾病的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中受試者沒有enpp1單倍性不足。

42、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及向患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而治療、減少和/或改善dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎疾病的一個(gè)或多個(gè)癥狀，其中受試者具有enpp1單倍性不足。

43、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及向患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，以恢復(fù)受試者血漿和/或組織中的enpp1蛋白和/或活性的生理水平。本文所用的血漿和/或組織中的enpp1蛋白和/或活性的生理水平，是指足以實(shí)現(xiàn)和維持人類血清中ppi生理水平的enpp1劑的量或濃度。在某些實(shí)施方式中，enpp1劑是enpp1和/或包含enpp1活性的enpp1構(gòu)建體。

44、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及向患有enpp1單倍性不足的受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，以恢復(fù)受試者血漿和/或組織中的enpp1蛋白和/或活性的生理水平。本文所用的血漿和/或組織中的enpp1蛋白和/或活性的生理水平，是指足以實(shí)現(xiàn)和維持人類血清中ppi生理水平的enpp1劑的量或濃度。在某些實(shí)施方式中，enpp1劑是enpp1和/或包含enpp1活性的enpp1構(gòu)建體。

45、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及增加患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者中的循環(huán)焦磷酸鹽(ppi)的方法，該方法包括向受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而增加受試者中的循環(huán)ppi。

46、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及增加患有enpp1單倍性不足的受試者中的循環(huán)焦磷酸鹽(ppi)的方法，該方法包括向受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而增加受試者中的循環(huán)ppi。

47、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及改善受試者中的enpp1單倍性不足的一個(gè)或多個(gè)癥狀的方法，該方法包括向受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而改善受試者中的enpp1缺陷的一種或多種癥狀或enpp1單倍性不足的一種或多種癥狀。

48、在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容涉及防止和/或逆轉(zhuǎn)患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者中存在的病理性鈣化和/或骨化塊的進(jìn)展，或最小化和/或減少患有dish、強(qiáng)直性脊柱炎和/或脊關(guān)節(jié)炎的受試者中存在的病理性鈣化和/或骨化塊，該方法包括向受試者施用劑量為每千克約0.1mg、每千克的受試者約0.2mg、每千克的受試者約0.3mg、每千克的受試者約0.4mg、每千克的受試者約0.5mg、每千克的受試者約0.6mg、每千克的受試者約0.7mg、每千克的受試者約0.8mg、每千克的受試者約0.9mg、每千克的受試者約1.0mg、每千克的受試者約1.1mg、每千克的受試者約1.2mg、每千克的受試者約1.3mg、每千克的受試者約1.4mg、每千克的受試者約1.5mg、每千克的受試者約1.6mg、每千克的受試者約1.7mg、每千克的受試者約1.8mg、每千克的受試者約1.9mg、或每千克的受試者約2.0mg的enpp1劑，從而防止和/或逆轉(zhuǎn)受試者中的病理性鈣化和/或骨化的骨骼塊的進(jìn)展，或最小化和/或減少受試者中的病理性鈣化和/或骨化的骨骼塊。

49、在上述任何方法的一些實(shí)施方式中，方法包括向患者施用治療有效量的enpp1劑。

50、在一些實(shí)施方式中，enpp1劑是式(i)的化合物，或其鹽或溶劑化物。

51、w-蛋白質(zhì)-z-結(jié)構(gòu)域-x-y

52、(i),

53、其中在(i)中：

54、w不存在或包括允許將化合物輸出到細(xì)胞外空間中的信號序列；

55、蛋白質(zhì)包括enpp1的催化區(qū)；

56、結(jié)構(gòu)域不存在或?yàn)檫x自人igg?fc結(jié)構(gòu)域(fc)、人血清白蛋白(alb)和其生物活性片段的至少一個(gè)。

57、x和z獨(dú)立地不存在，或?yàn)榘?-20個(gè)氨基酸的多肽；和

58、y不存在或是“骨靶向”序列基團(tuán)

59、其中m獨(dú)立地是從1到15的整數(shù)，和

60、其中n獨(dú)立地是從1到10的整數(shù)。

61、在一些實(shí)施方式中，w不存在。在一些實(shí)施方式中，w包括允許將化合物輸出到細(xì)胞外空間中的信號序列。

62、在一些實(shí)施方式中，y是選由以下的“骨靶向”序列基團(tuán)：dm(seq?id?no:11)、(dss)n(seq?id?no:12)、(ess)n(seq?id?no:13)、(rqq)n(seq?id?no:14)、(kr)n(seq?id?no:15)、rm(seq?id?no:16)、dssseekflrrigrfg(seq?id?no:17)、eeeeeeeprgdt(seq?id?no:18)、apwhlssqysrt(seq?id?no:19)、stlpiphefsre(seq?id?no:20)、vtkhlnqisqsy(seq?id?no:116)和em(seq?id?no:117)。