本發(fā)明涉及β欖香烯治療癌癥的聯(lián)用藥物，涉及醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、癌癥是目前威脅人類健康的主要疾病，我國每年大約180萬患者發(fā)病且發(fā)病率逐年上升。目前癌癥治療主要以手術(shù)、化療和放療為主。然而，現(xiàn)階段臨床使用的大量化療藥物仍存在全身毒副作用大、耐藥且選擇不強(qiáng)的問題，近年來，大量的臨床和實(shí)驗研究證明，中醫(yī)藥和聯(lián)合藥物療法在腫瘤的防治和康復(fù)方面有特效，已漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。

2、β欖香烯是莪術(shù)油、香茅草油的主要成分，現(xiàn)已被廣泛地用于治療癌癥?，F(xiàn)已報道欖香烯可以同吉非替尼、塞來昔布等抗腫瘤藥物合用，以提高上述物質(zhì)的對腫瘤細(xì)胞生長抑制活性的效果。

3、為了盡快滿足癌癥患者的治療需求，亟待開發(fā)更多具有臨床價值的聯(lián)合用藥劑型和給藥方式。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種治療癌癥的聯(lián)合用藥物，所述聯(lián)合用藥物包含β欖香烯和第二種藥物，所述聯(lián)合用藥物為單一的復(fù)方制劑或兩種單獨(dú)的制劑的組合，所述第二種藥物選自于培美曲塞二鈉、澤布替尼和維奈托克。

2、進(jìn)一步的，所述第二種藥物為培美曲塞二鈉，所述的培美曲塞二鈉和β欖香烯的摩爾比為1:165-1:82，優(yōu)選1:165-1:41，優(yōu)選1:165-1:30，優(yōu)選1:165-1:20，1:165-1:10，優(yōu)選1:165-1:5，優(yōu)選1:165-1:3，優(yōu)選1:165-1:2，優(yōu)選1:165-1:1，優(yōu)選1:165-1:0.5，優(yōu)選1:165-1:0.3，優(yōu)選1:165-1:0.1，優(yōu)選1:150-1:20，優(yōu)選1:150-1:30，優(yōu)選1:150-1:41，優(yōu)選1:150-1:82，優(yōu)選1:140-1:20，優(yōu)選1:140-1:30，優(yōu)選1:140-1:41，優(yōu)選1:140-1:82，優(yōu)選1:120-1:20，優(yōu)選1:120-1:30，優(yōu)選1:120-1:41，優(yōu)選1:120-1:82，優(yōu)選1:100-1:20，優(yōu)選1:100-1:30，優(yōu)選1:100-1:41，優(yōu)選1:100-1:82，

3、優(yōu)選1:82-1:20，優(yōu)選1:82-1:30，優(yōu)選1:82-1:41，優(yōu)選1:41-1:20，優(yōu)選1:41-1:30。

4、進(jìn)一步的，所述的培美曲塞二鈉和β欖香烯的摩爾比為1:165、1:160、1:155、1:150、1:145、1:140、1:135、1:130、1:125、1:120、1:115、1:110、1:105、1:100、1:95、1:90、1:85、1:82、1:80、1:75、1:70、1:65、1:60、1:55、1:50、1:45、1:41、1:35、1:30、1:25、1:20、1:15、1:10、1:5、1:3、1:2、1:1、1:0.5、1:0.3、1:0.2、1:0.1。

5、進(jìn)一步的，所述第二種藥物為澤布替尼，所述的澤布替尼和β欖香烯的摩爾比1:1041666-1:50000，優(yōu)選為1:1041666-1:100000，優(yōu)選為1:1041666-1:130208，優(yōu)選為1:1041666-1:260416，優(yōu)選為1:1041666-1:502833，優(yōu)選為1:502833-1:50000，優(yōu)選為1:502833-1:100000，優(yōu)選為1:502833-1:130208，優(yōu)選為1:502833-1:260416，優(yōu)選為1:260416-1:50000，優(yōu)選為1:260416-1:100000，優(yōu)選為1:260416-1:130208。

6、進(jìn)一步的，所述的澤布替尼和β欖香烯的摩爾比為1:1041666、1:502833、1:260416、1:130208、1:100000、1:50000。

7、進(jìn)一步的，所述第二種藥物為維奈多克，所述的維奈多克和β欖香烯的摩爾比為1:3333-1:0.3，優(yōu)選1:3333-1:3，優(yōu)選1:3333-1:17，優(yōu)選1:3333-1:33，優(yōu)選1:3333-1:104，優(yōu)選1:3333-1:208，優(yōu)選1:3333-1:417，優(yōu)選1:3333-1:833，優(yōu)選1:3333-1:1667，優(yōu)選1:3333-1:2000，優(yōu)選1:3333-1:2333，優(yōu)選1:3333-1:2667，優(yōu)選1:3333-1:3000，優(yōu)選1:3000-1:0.3，優(yōu)選1:3000-1:3，優(yōu)選1:3000-1:17，優(yōu)選1:3000-1:33，優(yōu)選1:3000-1:104，優(yōu)選1:3000-1:208，優(yōu)選1:3000-1:417，優(yōu)選1:3000-1:833，優(yōu)選1:3000-1:1667，優(yōu)選1:3000-1:2000，優(yōu)選1:3000-1:2333，優(yōu)選1:3000-1:2667，優(yōu)選1:2667-1:0.3，優(yōu)選1:2667-1:3，優(yōu)選1:2667-1:17，優(yōu)選1:2667-1:33，優(yōu)選1:2667-1:104，優(yōu)選1:2667-1:208，優(yōu)選1:2667-1:417，優(yōu)選1:2667-1:833，優(yōu)選1:2667-1:1667，優(yōu)選1:2667-1:2000，優(yōu)選1:2667-1:2333，優(yōu)選1:2333-1:0.3，優(yōu)選1:2333-1:3，優(yōu)選1:2333-1:17，優(yōu)選1:2333-1:33，優(yōu)選1:2333-1:104，優(yōu)選1:2333-1:208，優(yōu)選1:2333-1:417，優(yōu)選1:2333-1:833，優(yōu)選1:2333-1:1667，優(yōu)選1:2333-1:2000，優(yōu)選1:2000-1:0.3，優(yōu)選1:2000-1:3，優(yōu)選1:2000-1:17，優(yōu)選1:2000-1:33，優(yōu)選1:2000-1:104，優(yōu)選1:2000-1:208，優(yōu)選1:2000-1:417，優(yōu)選1:2000-1:833，優(yōu)選1:2000-1:1667，優(yōu)選1:1667-1:0.3，優(yōu)選1:1667-1:3，優(yōu)選1:1667-1:17，優(yōu)選1:1667-1:33，優(yōu)選1:1667-1:104，優(yōu)選1:1667-1:208，優(yōu)選1:1667-1:417，優(yōu)選1:1667-1:833，優(yōu)選1:833-1:0.3，優(yōu)選1:833-1:3，優(yōu)選1:833-1:17，優(yōu)選1:833-1:33，優(yōu)選1:833-1:104，優(yōu)選1:833-1:208，優(yōu)選1:833-1:417，優(yōu)選1:417-1:0.3，優(yōu)選1:417-1:3，優(yōu)選1:417-1:17，優(yōu)選1:417-1:33，優(yōu)選1:417-1:104，優(yōu)選1:417-1:208，優(yōu)選1:208-1:0.3，優(yōu)選1:208-1:3，優(yōu)選1:208-1:17，優(yōu)選1:208-1:33，優(yōu)選1:208-1:104，優(yōu)選1:104-1:0.3，優(yōu)選1:104-1:3，優(yōu)選1:104-1:17，優(yōu)選1:104-1:33，優(yōu)選1:33-1:0.3，優(yōu)選1:33-1:3，優(yōu)選1:33-1:17，優(yōu)選1:17-1:0.3，優(yōu)選1:17-1:3，優(yōu)選1:3-1:0.3。

8、進(jìn)一步的，所述的維奈托克和β欖香烯的摩爾比為1:3333、1:3000、1:2667、1:2333、1:2000、1:1667、1:833、1:417、1:208、1:104、1:33、1:17、1:3、1:0.3。

9、本發(fā)明提供了一種治療癌癥的藥物組合物，所述藥物組合物的活性成分包含β欖香烯和第二種藥物，所述第二種藥物選自于培美曲塞二鈉、澤布替尼和維奈多克。

10、進(jìn)一步的，所述藥物組合物的活性成分由β欖香烯和培美曲塞二鈉組成。

11、進(jìn)一步的，所述的培美曲塞二鈉和β欖香烯的摩爾比為1:165-1:82，優(yōu)選1:165-1:41，優(yōu)選1:165-1:30，優(yōu)選1:165-1:20，1:165-1:10，優(yōu)選1:165-1:5，優(yōu)選1:165-1:3，優(yōu)選1:165-1:2，優(yōu)選1:165-1:1，優(yōu)選1:165-1:0.5，優(yōu)選1:165-1:0.3，優(yōu)選1:165-1:0.1，優(yōu)選1:150-1:20，優(yōu)選1:150-1:30，優(yōu)選1:150-1:41，優(yōu)選1:150-1:82，優(yōu)選1:140-1:20，優(yōu)選1:140-1:30，優(yōu)選1:140-1:41，優(yōu)選1:140-1:82，優(yōu)選1:120-1:20，優(yōu)選1:120-1:30，優(yōu)選1:120-1:41，優(yōu)選1:120-1:82，優(yōu)選1:100-1:20，優(yōu)選1:100-1:30，優(yōu)選1:100-1:41，優(yōu)選1:100-1:82，優(yōu)選1:82-1:20，優(yōu)選1:82-1:30，優(yōu)選1:82-1:41，優(yōu)選1:41-1:20，優(yōu)選1:41-1:30。

12、進(jìn)一步的，所述的培美曲塞二鈉和β欖香烯的摩爾比為1:165、1:160、1:155、1:150、1:145、1:140、1:135、1:130、1:125、1:120、1:115、1:110、1:105、1:100、1:95、1:90、1:85、1:82、1:80、1:75、1:70、1:65、1:60、1:55、1:50、1:45、1:41、1:35、1:30、1:25、1:20、1:15、1:10、1:5、1:3、1:2、1:1、1:0.5、1:0.3、1:0.2、1:0.1。

13、進(jìn)一步的，所述藥物組合物的活性成分由β欖香烯和澤布替尼組成。

14、進(jìn)一步的，所述的澤布替尼和β欖香烯的摩爾比1:1041666-1:50000，優(yōu)選為1:1041666-1:100000，優(yōu)選為1:1041666-1:130208，優(yōu)選為1:1041666-1:260416，優(yōu)選為1:1041666-1:502833，優(yōu)選為1:502833-1:50000，優(yōu)選為1:502833-1:100000，優(yōu)選為1:502833-1:130208，優(yōu)選為1:502833-1:260416，優(yōu)選為1:260416-1:50000，優(yōu)選為1:260416-1:100000，優(yōu)選為1:260416-1:130208。

15、進(jìn)一步的，所述的澤布替尼和β欖香烯的摩爾比為1:1041666、1:502833、1:260416、1:130208、1:100000、1:50000。

16、進(jìn)一步的，所述藥物組合物的活性成分由β欖香烯和維奈托克組成。

17、進(jìn)一步的，所述的維奈托克和β欖香烯的摩爾比為1:3333-1:0.3，優(yōu)選1:3333-1:3，優(yōu)選1:3333-1:17，優(yōu)選1:3333-1:33，優(yōu)選1:3333-1:104，優(yōu)選1:3333-1:208，優(yōu)選1:3333-1:417，優(yōu)選1:3333-1:833，優(yōu)選1:3333-1:1667，優(yōu)選1:3333-1:2000，優(yōu)選1:3333-1:2333，優(yōu)選1:3333-1:2667，優(yōu)選1:3333-1:3000，優(yōu)選1:3000-1:0.3，優(yōu)選1:3000-1:3，優(yōu)選1:3000-1:17，優(yōu)選1:3000-1:33，優(yōu)選1:3000-1:104，優(yōu)選1:3000-1:208，優(yōu)選1:3000-1:417，優(yōu)選1:3000-1:833，優(yōu)選1:3000-1:1667，優(yōu)選1:3000-1:2000，優(yōu)選1:3000-1:2333，優(yōu)選1:3000-1:2667，優(yōu)選1:2667-1:0.3，優(yōu)選1:2667-1:3，優(yōu)選1:2667-1:17，優(yōu)選1:2667-1:33，優(yōu)選1:2667-1:104，優(yōu)選1:2667-1:208，優(yōu)選1:2667-1:417，優(yōu)選1:2667-1:833，優(yōu)選1:2667-1:1667，優(yōu)選1:2667-1:2000，優(yōu)選1:2667-1:2333，優(yōu)選1:2333-1:0.3，優(yōu)選1:2333-1:3，優(yōu)選1:2333-1:17，優(yōu)選1:2333-1:33，優(yōu)選1:2333-1:104，優(yōu)選1:2333-1:208，優(yōu)選1:2333-1:417，優(yōu)選1:2333-1:833，優(yōu)選1:2333-1:1667，優(yōu)選1:2333-1:2000，優(yōu)選1:2000-1:0.3，優(yōu)選1:2000-1:3，優(yōu)選1:2000-1:17，優(yōu)選1:2000-1:33，優(yōu)選1:2000-1:104，優(yōu)選1:2000-1:208，優(yōu)選1:2000-1:417，優(yōu)選1:2000-1:833，優(yōu)選1:2000-1:1667，優(yōu)選1:1667-1:0.3，優(yōu)選1:1667-1:3，優(yōu)選1:1667-1:17，優(yōu)選1:1667-1:33，優(yōu)選1:1667-1:104，優(yōu)選1:1667-1:208，優(yōu)選1:1667-1:417，優(yōu)選1:1667-1:833，優(yōu)選1:833-1:0.3，優(yōu)選1:833-1:3，優(yōu)選1:833-1:17，優(yōu)選1:833-1:33，優(yōu)選1:833-1:104，優(yōu)選1:833-1:208，優(yōu)選1:833-1:417，優(yōu)選1:417-1:0.3，優(yōu)選1:417-1:3，優(yōu)選1:417-1:17，優(yōu)選1:417-1:33，優(yōu)選1:417-1:104，優(yōu)選1:417-1:208，優(yōu)選1:208-1:0.3，優(yōu)選1:208-1:3，優(yōu)選1:208-1:17，優(yōu)選1:208-1:33，優(yōu)選1:208-1:104，優(yōu)選1:104-1:0.3，優(yōu)選1:104-1:3，優(yōu)選1:104-1:17，優(yōu)選1:104-1:33，優(yōu)選1:33-1:0.3，優(yōu)選1:33-1:3，優(yōu)選1:33-1:17，優(yōu)選1:17-1:0.3，優(yōu)選1:17-1:3，優(yōu)選1:3-1:0.3。

18、進(jìn)一步的，所述的維奈托克和β欖香烯的摩爾比為1:3333、1:3000、1:2667、1:2333、1:2000、1:1667、1:833、1:417、1:208、1:104、1:33、1:17、1:3、1:0.3。

19、進(jìn)一步的，本發(fā)明提供了一種包含上述藥物的治療癌癥的藥物組合物，所述藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的藥用輔料，所述輔料包括但不限于注射用油、載體、填充劑、崩解劑、粘合劑、凍干保護(hù)劑、ph調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧劑、潤濕劑等。所述藥物組合物可以制備成制劑，所述制劑可以為片劑、膠囊劑、丸劑、合劑、凝膠劑、軟膏劑、顆粒劑、散劑、膏劑、沖劑、丹劑、口服液劑、滴丸劑、針劑或注射劑中的一種或多種，或者任何其他劑型。

20、進(jìn)一步的，本發(fā)明提供了一種上述組合物或藥物在制備治療癌癥的藥物中的用途。

21、進(jìn)一步的，所述癌癥為白血病(包括早幼粒白血病等)、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、惡性黑素瘤、b淋巴細(xì)胞腫瘤(包括慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤，套細(xì)胞淋巴瘤，華氏巨球蛋白血癥，濾泡性淋巴瘤，非生發(fā)中心亞型彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤等)、結(jié)直腸癌、惡性胸膜間皮瘤、胰腺癌、頭頸癌、胃癌、膀胱癌、骨癌、食道癌、腦瘤、肝癌、宮頸癌、癌性胸、腹水，優(yōu)選所述癌癥為肺癌、乳腺癌、卵巢癌、b淋巴細(xì)胞腫瘤、白血病，更優(yōu)選肺癌、b淋巴細(xì)胞腫瘤、白血病。

22、具體實(shí)施實(shí)例

23、下面結(jié)合說明書和具體實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)闡述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的描述對本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行的等同替換、組合、改良或修飾均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍中。

24、除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。除非特別說明，以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市售品。

25、以下實(shí)施例通過以下方式計算：

26、1)計算腫瘤生長抑制率

27、腫瘤細(xì)胞生長抑制率ir(％)＝(1-(rlu化合物–rlu空白對照)/(rlu溶媒對照–rlu空白對照))*100％

28、2)雙藥聯(lián)合用藥效果的判定：

29、采用金正均q值法進(jìn)行判定(參見非專利文獻(xiàn)：戴體俊.合并用藥的定量分析[j].中國藥理學(xué)通報,1998(5):479-480.)。q＝p(a+b)/(pa+pb-pa×pb)。式中pa、pb和p(a+b)分別為β欖香烯藥組、第二種藥物組和兩藥聯(lián)用組抑制率。q＜1說明兩藥合用后產(chǎn)生拮抗作用；q＞1，說明兩藥合用后產(chǎn)生協(xié)同作用，q＝1說明兩藥合用后產(chǎn)生相加作用。

30、實(shí)施例1

31、將β欖香烯和培美曲塞二鈉分為：

32、組一：300umβ欖香烯，組二：150umβ欖香烯，組三：75umβ欖香烯，組四：37.5umβ欖香烯，組五：1.82um培美曲塞二鈉；

33、組六：300umβ欖香烯+1.82um培美曲塞二鈉，組七：150umβ欖香烯+1.82um培美曲塞二鈉，組八：75umβ欖香烯+1.82um培美曲塞二鈉，組九：37.5umβ欖香烯+1.82um培美曲塞二鈉。

34、上述組別均采用0.5％dmso作為溶媒。

35、細(xì)胞培養(yǎng)：a549接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量的f-12k+10％fbs培養(yǎng)基，于37℃，5％co2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長，每2～3天傳代1次。傳代時用0.25％胰蛋白酶+0.02％edta消化培養(yǎng)細(xì)胞2～4min，用吸管吸取培養(yǎng)液吹打使細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，然后按照需要的濃度接種。取對數(shù)生長期的a549細(xì)胞，按傳代方法制成單細(xì)胞懸液，計數(shù)，調(diào)細(xì)胞濃度為：4.45*10^4個/ml。將上述細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液：90μl。取不含細(xì)胞培養(yǎng)液的孔作為空白調(diào)零。將培養(yǎng)板置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)12小時后，組六-組九分別加入10μl(5μl不同濃度的β欖香烯+5μl培美曲塞二鈉)，組一-四分別加入5μl不同濃度的β欖香烯+5μl?5％dmso培養(yǎng)基。組五加入5μl?36.4um培美曲塞二鈉+5μl?5％dmso培養(yǎng)基，溶媒對照為加入10μl?5％dmso培養(yǎng)基。每組設(shè)置復(fù)孔，分別培養(yǎng)72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm試劑，在振蕩器上，避光，300rpm/min，3min，靜置10min，然后使用全自動酶標(biāo)儀上測定每孔熒光信號值。

36、實(shí)驗結(jié)果如表1：

37、表1

38、 q值 摩爾比(培美曲塞二鈉：β欖香烯) 組6 0.98 1:165 組7 1.32 1:82 組8 1.10 1:41 組9 0.87 1:20

39、實(shí)施例2

40、將β欖香烯和澤布替尼分為：組1：250umβ欖香烯，組2：125umβ欖香烯，組3：62.5umβ欖香烯，組4：31.25umβ欖香烯，組5：24umβ欖香烯，組6:12umβ欖香烯，組7：0.24nm澤布替尼。

41、組8：250umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼，組9：125umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼，組10：62.5umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼，組11：31.25umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼，組12：24umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼，組13：12umβ欖香烯+0.24nm澤布替尼。

42、上述組別均采用0.5％dmso作為溶媒。

43、細(xì)胞培養(yǎng)：人淋巴瘤細(xì)胞tmd8接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量的rpmi1640+10％fbs培養(yǎng)基，于37℃，5％co2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長，每2～3天傳代1次。傳代時用0.25％胰蛋白酶+0.02％edta消化培養(yǎng)細(xì)胞2～4min，用吸管吸取培養(yǎng)液吹打使細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，然后按照需要的濃度接種。

44、方法：取對數(shù)生長期的tmd8細(xì)胞，按傳代方法制成單細(xì)胞懸液，計數(shù)，調(diào)細(xì)胞濃度為：8.89*10^4個/ml。將上述細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液：90μl。取不含細(xì)胞培養(yǎng)液的孔作為空白調(diào)零。將培養(yǎng)板置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)12小時后，組8-13分別加入10μl(5μl不同濃度的β欖香烯和5μl澤布替尼)，組1-6分別加入5μl不同濃度的β欖香烯+5μl?5％dmso培養(yǎng)基，組7分別加入5μl澤布替尼+5μl?5％dmso培養(yǎng)基，溶媒對照為加入10μl?5％dmso培養(yǎng)基。每組設(shè)置復(fù)孔，分別培養(yǎng)72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm試劑，在振蕩器上，在振蕩器上，避光，300rpm/min，3min，靜置10min，然后使用全自動酶標(biāo)儀上測定每孔熒光信號值。

45、實(shí)驗結(jié)果如表2所示：

46、表2

47、 q值 摩爾比(澤布替尼：β欖香烯) 組8 1.02 1:1041666 組9 1.01 1:520833 組10 3.50 1:260416 組11 1.74 1:130208 組12 0.89 1:100000 組13 0.91 1:50000

48、實(shí)施例3

49、將β欖香烯和維奈托克分為：

50、組一：500umβ欖香烯，組二：125umβ欖香烯，組三：31.25umβ欖香烯，組四：0.3um維奈托克；

51、組五：500umβ欖香烯+0.3um維奈托克，組六：125umβ欖香烯+0.3um維奈托克，組七：31.25umβ欖香烯+0.3um維奈托克。

52、上述組別均采用0.5％dmso作為溶媒。

53、細(xì)胞培養(yǎng)：hl60接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量的imdm+20％fbs培養(yǎng)基，于37℃，5％co2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長，每2～3天傳代1次。傳代時用0.25％胰蛋白酶+0.02％edta消化培養(yǎng)細(xì)胞2～4min，用吸管吸取培養(yǎng)液吹打使細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，然后按照需要的濃度接種。取對數(shù)生長期的hl60細(xì)胞，按傳代方法制成單細(xì)胞懸液，計數(shù)，調(diào)細(xì)胞濃度為：5.56*10^4個/ml。將上述細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加細(xì)胞懸液：90μl。取不含細(xì)胞培養(yǎng)液的孔作為空白調(diào)零。將培養(yǎng)板置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)12小時后，組五-組七分別加入10μl(5μl不同濃度的β欖香烯+5μl?6um維奈托克)，組一-三分別加入5μl不同濃度的β欖香烯+5μl?5％dmso培養(yǎng)基，組四加入5μl?6um維奈托克+5μl?5％dmso培養(yǎng)基，溶媒對照為加入10μl?5％dmso培養(yǎng)基。每組設(shè)置復(fù)孔，分別培養(yǎng)72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm試劑，在振蕩器上，避光，300rpm/min，3min，靜置10min，然后使用全自動酶標(biāo)儀上測定每孔熒光信號值。

54、實(shí)驗結(jié)果如表3：

55、表3

56、 q值 摩爾比(維奈托克：β欖香烯) 組5 1.12 1:1667 組6 1.12 1:417 組7 1.07 1:104