本發(fā)明涉及病毒學領域。更具體地，本發(fā)明涉及靶向如由人巨細胞病毒(hcmv)編碼的us28蛋白的特定區(qū)的治療劑和診斷劑，和與其相關的療法，包括但不限于hcmv感染癌癥和與潛伏或裂解hcmv感染相關的其他病癥。參考文獻在本說明書中對明顯先前已出版的文獻的列舉或論述不必被視為承認該文獻為目前先進技術的一部分或為公共常識。所公開的參考文獻以引用的方式特此并入本文中，以便其對本文所述內容提供示例性程序化或其他細節(jié)補充。

背景技術：

1、人巨細胞病毒(hcmv)，也稱為人皰疹病毒5(hhv-5)，為由全球56-94％人口攜帶的普遍機會性dna病毒(geisler等人,《癌癥(cancers)》,2019,11:1842；zuhair等人,《醫(yī)學與病毒學評論(rev?med?virol)》,2019.29(3):第e2034頁)。

2、在大部分免疫活性個體中，hcmv感染無癥狀、未確診且被視為無害的，因為宿主免疫系統(tǒng)能很好地控制病毒復制(boeckh和geballe,《《臨床研究雜志》(j?clin?invest)》,2011.121(5):第1673-80頁)。

3、與所有皰疹病毒類似，hcmv在初次感染之后建立終生持久性潛伏感染。潛伏感染的特征在于低水平病毒復制或不存在病毒復制，其中病毒基因組主要駐存于cd34+造血祖細胞群中，該造血祖細胞群駐存于骨髓中(collins-mcmillen等人,《病毒(viruses)》,2018.10(8))。

4、假定，潛伏hcmv除非被宿主免疫系統(tǒng)持續(xù)控制，否則可以隨機方式間歇地再活化。出于此原因，該病毒可在某些情況下引起并發(fā)癥，例如在免疫功能不全患者中，在所述患者中不僅初級hcmv感染而且再感染或再活化還可引起危及生命的疾病，侵襲許多器官，導致相當大發(fā)病率和死亡率(boeckh和geballe,同上；griffiths等人,《病理學雜志(jpathol)》,2015.235(2):第288-97頁)。

5、hcmv為最常見先天性病毒感染之一和出生缺陷的最重要原因(davis等人,《出生缺陷研究(birth?defects?res)》,2017.109(5):第336-346頁)。愈來愈清楚的是，在生命過程中hcmv感染還可能在動脈粥樣硬化、自體免疫疾病和數種惡性病(特別是多形性膠質母細胞瘤)的發(fā)病機制方面發(fā)揮作用(soderberg-naucler,《《內科醫(yī)學雜志》(j?internmed)》,2006,259(3):第219-46頁；cobbs,《病毒學新觀點(curr?opin?virol)》,2019.39:第49-59頁)。另外，hcmv血清狀態(tài)可能影響燒傷、創(chuàng)傷和敗血癥的臨床病程(soderberg-naucler,2006,同上；limaye等人,jama,2008.300(4):第413-22頁；osawa和singh,《重癥監(jiān)護(crit?care)》,2009.13(3):第r68頁)。

6、潛伏hcmv感染可能在發(fā)炎過程期間在祖細胞分化成單核細胞/浸潤巨噬細胞或樹突狀細胞(dc)時經再活化，且這些細胞可將病毒散播至周邊器官(soderberg-naucler等人,《細胞(cell)》,1997,91:119-126)。由此類發(fā)炎細胞攜帶的再活化hcmv可到達所有身體組織，且感染廣泛數目的細胞類型并在其中復制(ljungman等人,《北美傳染病診所(infect.dis.clin.north.am.)》,2010,24:319-337)。由所有體液，包括唾液和母乳進一步傳播該感染(hamprecht等人,《柳葉刀(lancet)》,2001,357:513-518)。百分之九十的來自hcmv血清反應呈陽性的女性的母乳樣品含有該病毒，且在一歲兒童中導致約30％?hcmv患病率。因此，哺乳和親代接觸構成嬰兒早期或兒童期獲hcmv感染的重要途徑(hamprecht等人,2001,同上)。

7、巨細胞病毒基因組和遺傳多樣性：

8、如berg等人,2019,《公共科學圖書館：綜合(plos?one)》14(9):e0222053中所論述，cmv基因組由單一線性雙鏈dna組成且尺寸大約為235kb。其含有超過750個經翻譯orf(stern-ginossar等人,《科學(science)》,2012,338(6110):1088-93)，所述orf可被分成兩個區(qū)：獨特長(ul)區(qū)和獨特短(us)區(qū)，所述區(qū)側接有末端和內部反向重復序列。

9、巨細胞病毒已調適多種策略以避開免疫檢測且促進感染散播。這些策略基于在感染期間對宿主免疫反應的操控和調節(jié)，其例如通過表達對人免疫系統(tǒng)正常功能重要的受體和配體的經病毒編碼同源物而實現。cmv通過編碼比其他人皰疹病毒多2至3倍數目的基因產物(許多所述基因產物已展示與人免疫系統(tǒng)的相互作用且操控人免疫系統(tǒng)(mocarski,《微生物學趨勢(trends?microbiol.)》,2002；10(7):332-9))，具有可供用于調節(jié)宿主的免疫反應的前所未有的工具數目。

10、流行cmv病毒株之間的遺傳變異較大，且近期研究報導75％病毒株在數個基因中含有斷裂性突變和多態(tài)性(sijmons等人,《病毒學雜志(j.virol.)》,2015,89(15):7673-7695)。為了排除由于連續(xù)傳代所致的斷裂性突變，研究作者僅使用傳代1至2次的病毒株且直接自臨床樣品驗證大部分所觀察到的突變。對于基因ul40和ul111a，分別于9.9％和5.5％的所研究病毒株中發(fā)現引起功能性剔除的突變(sijmons等人,2015,同上)。ul111a為可抑制正常免疫反應的功能性白介素10同源物(mocarski,2002,同上；engel和angulo,《實驗醫(yī)學與生物學進展(adv?exp?med?biol.)》,2012,738:256-76)。ul40的信號肽促進hla-e在感染細胞表面上表達，該hla-e為自然殺傷細胞抑制受體的配體(wilkinson等人,《臨床病毒學期刊(j?clin?virol.)》,2008；41(3):206-12)。

11、其他同樣高度可變的cmv基因為其中已鑒別出14種不同基因型的趨化因子同源物ul146(dolan等人,《普通病毒學期刊(j?gen?virol.)》,2004,85(pt?5):1301-12)和趨化因子清道夫受體(scavenging?receptor)(kledal等人,《歐洲生化學會聯合會快報(febslett.)》,1998；441(2):209-14)以及其中已報導了大量n-末端多態(tài)性的g蛋白偶聯受體us28(goffard等人,《病毒基因(virus?genes)》,2006；33(2):175-81；arav-boger等人,《傳染病學雜志(j?infect?dis.)》,2002；186(8):1057-64)。

12、berg等人,2019(同上)報導對于其他人皰疹病毒未觀測到此遺傳多樣性程度(sijmons等人,2015,同上)且引起以下問題：cmv為何在重要的免疫調節(jié)基因中施加此類變化及其如何影響病毒-宿主相互作用。

13、據認為，大部分hcmv發(fā)病機制與病毒潛伏期相關，該病毒潛伏期與病毒經由多種機制避開體液免疫反應和細胞宿主免疫反應的能力密切相關(manandhar等人,《國際分子科學雜志(int?j?mol?sci)》,2019.20(15))。此類機制中最重要的一點包括hcmv的這種高度的、不斷變化的遺傳多樣性。hcmv基因組在不同個體之間且甚至在相同宿主內變化(gorzer等人,《病毒學雜志》,2010,84(14):7195-7203；renzette等人,《plos病原體(plospathog)》,2011,7(5):e1001344；renzette等人,《病毒學新觀點》,2014.8:109-15；renzette等人,《美國國家科學院院刊(proc?natl?acad?sci?usa)》,2015,112(30):e4120-8；renzette等人,《病毒學雜志》,2017,91(5))。新的宿主感染產生對各經感染個體獨特的病毒株，且產生選擇事件，在所述選擇事件中，由于免疫反應的選擇性壓力，新基因型變得顯性(renzette等人,2011,同上)。有可能病毒和宿主因素均會有助于在hcmv感染期間促進病毒遺傳漂移(vabret等人,《免疫趨勢(trends?immunol)》,2017,38(1):53-65；christensen和paludan,《細胞與分子免疫學(cell?mol?immunol)》,2017,14(1):4-13)。另外，各患者很可能感染有如文獻中先前充分報導的多個cmv病毒株(renzette等人,2015,同上)。相同個體中存在多個病毒株使得能夠自不同hcmv病毒株重組。重組被視為代表hcmv遺傳多樣性的主要驅動因素(suarez等人,《傳染病學雜志》,2019,220(5):781-791；sijmons等人,2015,同上；lassalle等人,《病毒進化(virus?evol)》,2016,2(1):vew017；cudini等人,《美國國家科學院院刊》,2019,116(12):5693-5698)。對高度多樣性區(qū)再分類將產生新組合以確保有效的免疫逃避，這也可影響病毒的病原性。一致地，混合hcmv感染已與數項研究中免疫功能不全個體的較差臨床結果相關(coaquette等人,《臨床傳染病(clin?infectdis)》,2004,39(2):155-161；lisboa等人,《移植感染性疾病(transpl?infect?dis)》,2012,14(2):132-140；houldcroft等人,《微生物學前沿(front?microbiol)》,2016,7:1317)。

14、此外，hcmv多樣性通過遺傳多態(tài)性驅動，所述遺傳多態(tài)性在整個基因組中不均勻分布(sijmons等人,2015，同上)。在暴露于病毒粒子表面上的蛋白質區(qū)中和對于在胞外結構域中的宿主細胞膜處表達的病毒蛋白，選擇較強(mozzi等人,《plos病原體》,2020,16(5):e1008476)。宿主免疫系統(tǒng)施加的選擇性壓力很可能在流行hcmv病毒株當中的基因多樣性的形成中發(fā)揮主要作用。因此，通過正向選擇靶向的數個位點位于人抗體識別的表位內或直接與參與免疫反應的宿主分子相互作用的蛋白質區(qū)中(sijmons等人,2015,同上；mozzi等人,2020,同上)。這些特征與hcmv與人免疫系統(tǒng)之間的持續(xù)捉迷藏式相互作用(hide?and?seek?interplay)一致。

15、病毒株變化性和不斷突變的病毒使得對病毒診斷學與hcmv疫苗和藥物開發(fā)兩者要求苛刻且為當前抗病毒藥治療設定了限制。多年來，hcmv疫苗開發(fā)一直為醫(yī)學界的高度優(yōu)先事項，但迄今為止尚未有有效的hcmv疫苗獲得批準。

16、hcmv的致癌特性

17、hcmv編碼的蛋白質顯示不同致癌功能(geisler等人,2019，同上)。在進入宿主細胞后，如pul48的hcmv病毒粒子的間層蛋白經釋放，從而使細胞固有免疫反應和先天性免疫反應失能，且促進宿主細胞的增強的代謝活動(kumari等人,《細胞死亡和分化(cell?deathdis.)》,2017,8:e3078)。這些hcmv編碼的蛋白質可使得細胞能夠越過g1期以促進快速細胞分裂(kumari等人,2017，同上)。經由上調抗凋亡基因和下調促凋亡基因，細胞進入增強的存活狀態(tài)。

18、在病毒dna進入細胞核之后，細胞rna聚合酶i和ii(pol?i和ii)用于通過結合至主要即刻早期啟動子(miep)來轉錄病毒基因(kostopoulou等人,《腫瘤標靶(oncotarget)》,2017,8:96536-96552)。表達的最初基因為即刻早期(ie)基因。衍生自所述基因的ie蛋白充當控制早期和晚期病毒基因表達和直接宿主基因表達的轉錄因子。所述蛋白質必須建立裂解感染且對于潛伏期的病毒再活化至關重要(kumari等人,2017,同上；tamrakar等人,《病毒學雜志》,2005,79:15477-15493)。裂解hcmv感染導致細胞周期失調，且ie基因產物干擾關鍵細胞因子，包括視網膜母細胞瘤蛋白家族(rb)、細胞周期蛋白、p53、wnt、磷脂酰肌醇3-激酶/akt、人端粒酶逆轉錄酶(htert)和nf-κb，以增加感染細胞的永生特性(moussawi等人,《科學報告(sci.rep.)》,2018,8:12574)。這些途徑通常在癌細胞中活化。由如fos和myc的原致癌基因遞送的促細胞分裂信號的活化可通過hcmv感染細胞中的ie蛋白誘導(hagemeier等人,《病毒學雜志》,1992,66:4452-4456)。此外，在hcmv感染細胞中誘導myb基因，類似于在hpv相關癌瘤中增強myb基因表達(moussawi等人,2018,同上)。除促細胞分裂信號以外，hcmv感染經由dna修復途徑的惡化而引起染色體畸變，引起感染細胞中的遺傳不穩(wěn)定性(straat等人,《國立癌癥研究所雜志(j.natl.cancer?inst.)》,2009,101:488-497；siew等人,《生醫(yī)科學雜志(j.biomed.sci.)》,2009,16:107)。此推動了基因突變的發(fā)展。

19、據報導，包括us27、us28、ul33和ul78的各種hcmv編碼g蛋白偶聯受體(gpcr)樣蛋白顯示重要致癌功能(heukers等人,《致癌基因(oncogene)》,2018,37:4110-4121)。g蛋白活化代謝和致癌關鍵信號傳導途徑，如camp和pi3k信號傳導途徑，其中后者對于出現上皮細胞的錨定非依賴性生長和致癌性轉化至關重要(moussawi等人,2018,同上；boroughs等人,《自然細胞生物學(nat.cell?biol.)》,2015,17:351-359)。hcmv-2.7早期基因轉錄物為長的非編碼(lnc)rna，其直接與線粒體中的呼吸鏈的復合物i相互作用，通過抑制fas-配體相互作用和通過與凋亡蛋白酶8結合抑制顆粒酶b、改善感染細胞中的氧化能力和維持能量產生來防止線粒體誘導的細胞死亡(reeves等人,《科學》,2007,316:1345-1348)。

20、hcmv還產生了數種方式來操控先天性和適應性免疫反應，以減少對其免疫監(jiān)視且提高其在其免疫活性宿主中的存活率，這可能很好地解釋了hcmv感染癌細胞中的重要的免疫逃避機制。hcmv編碼調節(jié)感染細胞的nk細胞識別的多種蛋白質(fielding等人,《plos病原體》,2014,10:e1004058)，且增加cd8+t細胞對病毒蛋白的耐受性。hcmv編碼的蛋白質可刺激dc的未成熟表型的發(fā)展，這減少cd4+t細胞反應的活化(wagner等人,《白細胞生物學雜志(j.leukoc?biol.)》,2008,83:56-63)，且另外減少cd8+細胞毒性t細胞對感染細胞的消除。

21、hcmv治療靶點：

22、當前，針對hcmv可用的唯一抗病毒療法依賴于核苷類似物，如更昔洛韋(ganciclovir，gcv)和纈更昔洛韋(valganciclovir，val-gcv)(rawlinson等人,《柳葉刀感染病學(lancet?infect?dis)》,2017,17(6):e177-e188；james和kimberlin,《兒科新觀點(curr?opin?pediatr)》,2016,28(1):81-85)，所述核苷類似物具有數個缺點，如較差生物可用性、毒副作用和產生抗藥性的風險。當前結果指示，dna聚合酶(ul54)和病毒磷酸轉移酶(ul97)這兩種高度多態(tài)hcmv基因在針對gcv的抗藥性中發(fā)揮重要作用(komatsu等人,《抗病毒研究(antiviral?res)》,2014,101:12-25)。

23、另外，重要地，現有抗病毒劑僅可用于治療裂解hcmv感染，但不可清除潛伏病毒。根除或減少潛伏池(latent?reservoir)將有利于減少數個患者群組中hcmv相關疾病的負擔。

24、先前研發(fā)的抗hcmv藥，如更昔洛韋(gcv)、膦甲酸(foscarnet，fos)和西多福韋(cidofovir，cdv)，均靶向ul54病毒dna聚合酶。然而，在移植環(huán)境中，抗病毒毒性和hcmv抗病毒抗藥性構成越來越大的治療挑戰(zhàn)，且因此急需具有新穎病毒靶點的新型抗hcmv藥(burrel等人,2014,“人巨細胞病毒(hcmv)對當前抗病毒藥敏感，缺乏對hcmv編碼的us28趨化因子受體多態(tài)性的影響(lack?of?influence?of?human?cytomegalovirus(hcmv)susceptibility?to?current?antiviral?drugs?on?hcmv-encoded?us28chemokinereceptor?polymorphism)”,巴塞羅那eccmid?2014的海報展示)。

25、burrel等人,2014(同上)教導，由于hcmv編碼的us28在病毒散播和持久性以及在平滑肌細胞遷移和腫瘤形成方面的潛在作用，該蛋白質構成新穎抗病毒療法的潛在靶點。

26、hcmv?us28為一種七次跨膜蛋白，屬于g蛋白偶聯的受體(gcpr)一類。gcpr構成由經批準藥物靶向的蛋白質的最大家族(sriram和insel,《分子藥理學(mol?pharmacol)》,2018.93(4):251-258)，且共有共同架構，各自由以下組成：具有胞外n-末端、胞內c-末端和由三個胞外環(huán)連接(ecl1-3)的七個疏水性跨膜結構域(tm1-tm7)的單一多肽(alexander等人,《英國藥理學雜志(br?j?pharmacol)》,2019,176期增刊1:s21-s141)。

27、如由hcmv病毒株db(寄存編號kt959235)編碼的us28的全序列在本技術中提供為seq?id?no:5，其中：

28、-n-末端胞外結構域(在本文中也稱為ecd1，因其為第一胞外結構域)在本文中提供為seq?id?no:1且對應于seq?id?no:5的位置1-37，

29、-第一胞外環(huán)(ecl1；盡管在本文中也稱為ecd2，因其為第二胞外結構域)在本文中提供為seq?id?no:2且對應于seq?id?no:5的位置91-101，

30、-第二胞外環(huán)(ecl2；盡管在本文中也稱為ecd3，因其為第三胞外結構域)在本文中提供為seq?id?no:3且對應于seq?id?no:5的位置167-183；并且

31、-第三胞外環(huán)(ecl3；盡管在本文中也稱為ecd4，因其為第四胞外結構域)在本文中提供為seq?id?no:4且對應于seq?id?no:5的位置250-273。

32、burrel等人(同上)評定us28蛋白在hcmv臨床病毒株當中的多態(tài)性水平，且得出結論，us28在臨床病毒株當中的多態(tài)性水平高于先前報導的其他hcmv編碼的蛋白質(如ul97磷酸轉移酶和ul44持續(xù)合成因子(processivity?factor))的多態(tài)性水平，盡管此多態(tài)性并不根據hcmv易感性或對當前審批通過的抗病毒藥(即gcv、fos和cdv)的抗性而顯著變化，因此支持以下觀點：hcmv編碼的us28趨化因子受體可構成用于抗hcmv藥的有前景的病毒靶點，尤其在hcmv抗性的情況下。

33、wo?2019/151865作者采取us28聚焦方法，如還在等同期刊文章de?groof等人,2019,《分子藥物學(mol.pharmaceutics)》,16:3145-3156中報導。作者報導其已生成單一重鏈可變結構域抗體(vhh)，由特定vhh示例，稱為vun100(本技術的seq?id?no:60)，據稱該抗體特異性檢測膠質母細胞瘤(gbm)組織中的us28且抑制配體依賴性和組成性us28活性，且作者報導該抗體因而在原位異種移植模型中體外和體內削弱us28依賴性gbm生長。

34、顯示vun100與不連續(xù)表位結合，所述表位包含us28的n-末端胞外區(qū)(完整的n-末端胞外區(qū)，在本文中也稱為ecd1，對應于位置1-37)中的多個結合位置，且進一步受us28的第三胞外環(huán)(ecl3，位置250-273，在本文中也稱為ecd4)的存在的影響，如wo?2019/151865的實施例3(第36頁,第11-32列)和de?groof等人,2019(同上)的圖例2中所論述。de?groof(2019,同上)鑒別了n-末端氨基酸位置1-22的去除導致不結合，且進一步鑒別了vun100與氨基酸位置11-15不結合，但是氨基酸位置16是必需的。此外，wo?2019/151865的圖8d中與vun100和不同hcmv病毒株的結合相關的結果展示hcmv的vhl/e、merlin和tb40/e病毒株之間的結合差異，其中在病毒株tb40/e(b1型)中的結合尤其減少，僅為針對merlin病毒株所觀察到的結合水平的約一半。由tb40/e病毒株編碼的us28與由merlin和vhl/e病毒株編碼的us28在n-末端內的位置8、18和19處不同(參見本技術的表3)，表明這些位置中的一個或多個位置(以及1-10區(qū)和16-22區(qū)中可能的其他氨基酸)也形成了由vun100結合的表位的一部分。因此，vun100最有可能結合在n-末端的氨基酸位置1-10與16-22之間。此外，用ccr5的對應區(qū)替換ecd4區(qū)阻止了vun100的結合，這意味著其結合需要n-末端的位置1-22(包括至少位置16，以及位置8、18和/或19中的一個或多個)與ecd4內的氨基酸之間的不連續(xù)表位。

35、如上所述，臨床病毒株中us28的多態(tài)性水平高于先前報導的其他hcmv編碼的蛋白質的多態(tài)性水平(burrel等人,同上)，并且已經報導了us28的許多n-末端多態(tài)性(goffard等人,2006,同上；arav-boger等人,2002,同上)。如申請人所測定的，并且如本技術的表3所示，由vun100結合的us28的n-末端的區(qū)對病毒株間多態(tài)性特別敏感。

36、因此，本發(fā)明人考慮了這樣一種可能性，即在由vun100結合的us28的n-末端區(qū)和第三細胞外環(huán)(“ecd4”)的特定部分中存在高水平的多態(tài)性，可能使vun100?vhh分子不能維持與由不同hcmv病毒株編碼的us28的形式一致的抗us28結合特征。當在該上下文中考慮時，如上所述，vun100和不同hcmv病毒株的結合(wo?2019/151865的圖8d)展示hcmv的vhl/e、merlin和tb40/e病毒株之間的結合差異，其中在病毒株tb40/e(b1型)中的結合尤其減少，僅為針對merlin病毒株所觀察到的結合水平的約一半。此外，在可在線獲得的de?groof等人,2020(doi:https://doi.org/10.1101/2020.05.12.071860)的預印文章中報導了vun100的進一步表征，其中補充數據的圖2提供由vun100結合的cd14+單核細胞的細胞核中誘導的ie表達％的結果。測試的所有細胞均來自hcmv血清反應呈陽性的受試者，且確認為潛伏感染hcmv，但感染各供體的hcmv病毒株待定。由與來自四名不同患者中的每一名的這些hcmv陽性cd14+細胞結合的vun100誘導的ie表達水平實質上不同，其中對于來自供體1-4的細胞報導的數字分別為57％、33％、22％和4％(差值范圍大于14倍)。vun100與所確認的hcmv陽性細胞結合后的此高水平反應變化似乎最可能歸因于不同hcmv病毒株感染供體中的每一個，且因此有力指示vun100的結合能力在不同hcmv病毒株之間將顯著變化。同一圖還展示在二價形式的vun100(de?groof等人,2020(同上)稱為vun100b，由本技術的seq?idno:63表示)與相同組的來自供體1-4的hcmv陽性細胞結合之后的高水平的反應變化(差值水平超過7倍)，再次提供指示病毒株特異性結合敏感性的結果。de?groof等人,2021,《藥理學評論(pharmacol?rev)》73:828–846也描述了hcmv的連續(xù)傳代如何導致具有截短的us28的抗性突變體的發(fā)展，所述突變體在胞外環(huán)3中具有過早終止密碼子，導致us28的表面表達減少。此類抗性可能對vun100產生不利影響，因為其依賴于第三胞外環(huán)中的部分表位。

37、此外，應注意，關于比較vun100?ab與us28表達hek293t膜相比于與經模擬轉染的hek293t膜的結合的分析展示，20％經模擬轉染的細胞由vun100結合，且us28表達hek293t膜僅達成4的相對特異性分數(de?groof等人,2019(同上)，在其支持信息、其圖s1.a和本技術的表2中)。區(qū)分us28表達細胞與us28陰性細胞的明顯能力(其中特異性分數僅約4，特別是與和模擬細胞的如此高的脫靶結合相結合)可能為次佳的，且引發(fā)關于vun100向hcmv感染細胞提供特異性靶向作用同時避免健康細胞中不可接受的含量的脫靶副作用的能力的擔憂。其還引起關于vun100在分析(包括診斷分析，如用于免疫組織化學(ihc))中可靠地鑒別us28表達細胞(特別是hcmv感染細胞)的情況下適用的能力的擔憂。此外，在另一公開中，已確認us28靶向納米抗體的效能需要在病毒和潛在體內環(huán)境中驗證(de?groof等人,2021,同上)。

38、特別需要提供在體內和/或在分析(包括ihc)中使用時特異性結合至us28表達細胞(特別是hcmv感染細胞)和/或使與不表達us28的細胞(特別是未感染hcmv的細胞)的脫靶結合降至最低的能力實質上大于vun100的結合分子。

39、為了利用us28作為治療靶點，重要的是解決上述一個或多個最重要的問題，包括已報導的針對本領域已知的vun100分子的相對較高水平的非特異性結合活性、觀察到的vun100的相對較高的脫靶結合活性，和/或提供us28結合分子解決病毒株多樣性、病毒突變、突變漂移和病毒在病毒潛伏期間自免疫系統(tǒng)隱藏的能力的問題。

40、因此，本發(fā)明的目標為提供可與表達us28和/或對于hcmv感染呈陽性的生物材料高度特異性地結合(相較于健康人細胞應低得多)和/或使與健康人細胞的脫靶結合的絕對水平降至最低的結合分子。舉例而言，提供結合分子對抗hcmv感染和與其相關的病癥受到廣泛關注，所述結合分子向結合分子所結合的細胞提供或引導細胞毒性作用，且本發(fā)明的一個目標為提供可使健康人細胞中脫靶細胞毒性作用的不可接受(例如治療不可接受)水平降至最低或避免所述水平的方式靶向這些作用。特別是，本發(fā)明的目標之一為提供在針對與表達us28和/或對于hcmv感染呈陽性的生物材料(例如細胞)相比于不表達us28且對于hcmv感染不呈陽性的生物材料(例如等同細胞)結合的特異性評估時，針對us28和/或hcmv感染細胞具有比wo?2019/151865和de?groof等人,2019(同上)的vun100?ab和/或比degroof等人,2020(同上)的vun100b二價分子高的特異性水平的結合分子。

41、本發(fā)明的另一目標為提供針對us28的結合分子，其對表達us28和/或對于經hcmv感染的us28表達細胞呈陽性的生物材料相比于不表達us28的對應生物材料(如健康人細胞)的結合具有特異性，和/或其顯示比如上所述的vun100?ab分子明顯低的與健康人細胞的脫靶結合的絕對水平。

42、本發(fā)明的另一目標為提供病毒株不可知的且因此理想情況下能夠靶向所有或實質上所有hcmv感染(無論存在hcmv的病毒株或病毒株的組合)和/或能夠在hcmv感染的治療過程期間提供持續(xù)的作用的結合分子，而不管在所治療的受試者內感染病毒株增加一個或多個hcmv突變的可能性。特別是，與vun100?ab相比，具有展示出較大程度的病毒株不可知的結合的結合特征的針對us28的結合分子備受關注。

技術實現思路

1、本發(fā)明提供具有一種或多種(優(yōu)選全部)與人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的高度特異性結合、極低水平的與健康(未感染)細胞的非特異性結合和/或病毒株不可知的結合能力的結合分子以及編碼所述結合分子的核酸分子。

2、本發(fā)明的結合分子經設計以結合人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的n-末端(本文也稱為胞外結構域1(ecd1))內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位，并展示對所述第一表位的結合特異性。申請人已經令人驚訝地鑒別，與hcmv的us28蛋白的n-末端區(qū)(ecd1)的許多區(qū)域不同，tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列在所有已知的hcmv病毒株之間是高度保守的，并且此外具有適合的免疫原性，并且適合用作用于產生抗us28抗體的抗原，所述抗體具有以下中的一種或多種(如全部)：改善的病毒株不可知的結合特性、改善的(即相對較高的)結合特異性和/或改善的(即相對較低的)脫靶結合活性，例如與上文所論述的現有技術的單價和二價vun100抗體相比。

3、申請人還令人驚訝地鑒別了hcmv的us28蛋白的ecd3在全部已知的hcmv病毒株之間是高度保守的(僅具有單一位置多態(tài)性，如下文所論述)，并且此外具有適合的免疫原性，并且適合用作用于產生抗us28抗體的抗原，所述抗體具有以下中的一種或多種(如全部)：改善的病毒株不可知的結合特性、改善的(即相對較高的)結合特異性和/或改善的(即相對較低的)脫靶結合活性，例如與上文所論述的現有技術的單價和二價vun100抗體相比。因此，任選地，本發(fā)明的結合分子也經設計以結合hcmv的us28蛋白得胞外結構域3(ecd3)內的第二表位，并展示對所述第二表位的結合特異性。對所述第一表位和所述第二表位兩者均具有結合特異性的所述結合分子可呈多特異性形式。

4、在另一選擇中，本發(fā)明的對hcmv的us28蛋白的ecd1內的由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的結合分子為與對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的第二結合分子配制的第一結合分子，其中所述第二表位優(yōu)選如本文進一步所述。

5、已證實本發(fā)明的結合分子具有優(yōu)異的結合特性，包括上文所描述且如本文進一步描述的那些結合特性。舉例而言，出人意料地，還已證實本發(fā)明的結合分子提供針對侵襲性和/或轉移性hcmv感染癌癥(包括乳腺癌)尤其有利的結合特異性。

6、在某些優(yōu)選的實施方案中，結合分子選自抗體(包括例如bite抗體)和嵌合抗原受體(car)或其功能變體、片段、融合蛋白和/或綴合物，以及編碼其的核酸分子。所述結合分子可例如包括或結合至細胞毒性組分或其他效應組分，能夠對結合分子所結合的任何細胞施加影響(如抑制或殺傷)。所述結合分子可例如包括或結合至可募集其他試劑(例如其他蛋白質、藥物、細胞或任何其他所選物質)的組分，以此方式使得所募集的試劑具有特異性靶向的能力以對結合分子所結合的細胞施加影響(如抑制或殺傷)；因此，非限制性實例為bite分子，其具有募集t細胞以作用于所述bite所結合的細胞上的能力。還提供表達所述結合分子的細胞，包括其中結合分子為car的實例，且所述細胞可為car表達細胞，包括car-t細胞、car-nk細胞和car-m細胞。

7、本發(fā)明的這些和另外的公開通過以下描述和隨附權利要求和附圖更詳細地描述。

8、因此，本發(fā)明的第一方面提供了一種結合分子，其包含一條或多條多肽鏈，所述結合分子對人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的至少第一表位具有結合特異性。

9、任選地，本發(fā)明的第一方面的結合分子還對hcmv的us28蛋白的胞外結構域3(ecd3)內的第二表位具有結合特異性(和/或其中所述結合分子為與對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的第二結合分子配制的第一結合分子)。例如，本發(fā)明的第一方面的結合分子可為多特異性(例如，雙特異性或三特異性)結合分子，所述多特異性結合分子包含對ecd1內的由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的一個或多個區(qū)，且進一步包含分別對ecd3內的由hcmv編碼的us28蛋白的第二表位具有結合特異性的一個或多個區(qū)。

10、根據本發(fā)明，us28蛋白的ecd1、seq?id?no:177和ecd3各自包含存在于由hcmv病毒株編碼的位于如下位置處的us28蛋白中的氨基酸序列、基本上由其組成或由其組成，所述位置分別對應于由如seq?id?no:5中所闡述的人巨細胞病毒(hcmv)db病毒株編碼的us28蛋白的位置1至37、26至37和167至183。

11、例如(但不限于)，本發(fā)明的第一方面的結合分子可選自抗體或嵌合抗原受體(car)。

12、本發(fā)明的第一方面的結合分子可例如對完全存在于seq?id?no:177的氨基酸序列內的第一表位具有結合特異性，和/或任選地，所述第二表位完全存在于hcmv的us28蛋白的ecd3內。

13、本發(fā)明的第一方面的結合分子可例如對seq?id?no:177的氨基酸序列內的第一線性表位和/或任選地對us28蛋白的ecd3內的第二線性表位具有結合特異性。

14、本發(fā)明的第一方面的結合分子可例如對hcmv的us28蛋白的ecd1和/或ecd3中的seq?id?no:177的氨基酸序列內的表位具有病毒株不可知的結合特異性。舉例而言，結合分子可：

15、-對hcmv的us28蛋白的ecd1的seq?id?no:177的氨基酸序列內的第一表位具有結合特異性，其中所述結合特異性對于兩種或更多種(例如全部)hcmv病毒株為不可知的，例如對于在n-末端內具有不同序列的兩種或更多種變體病毒株為不可知的，如展示在ecd1的位置1至25的區(qū)中的一個或多個位置中的病毒株間序列變異(如位置8、15、18、19、24、25中的任何一個或多個，包括但不限于本技術的表3中列出的序列變異)的多種hcmv病毒株，例如，其中所述多種病毒株為選自由以下組成的群組的兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種或十種不同的病毒株：db、toledo、towne、vr1814、tb40/e、merlin、ad169、vhl/e、davis和bl；和/或

16、-結合分子可對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，其中所述結合特異性對兩種或更多種(如全部)hcmv病毒株為不可知的，例如對4d變異株和4n變異株為不可知的(各自如本文中進一步描述)；以及

17、-在任一種情況下，對任選兩種或更多種(如全部)選自由以下組成的群組的hcmv病毒株為不可知的：db、towne、af1、vhl/e、ad169、bl、davis、jp、merlin、ph、tb40/e、toledo、tr和vr1814(fix)。

18、因此，本發(fā)明的第一方面的結合分子可例如對hcmv的us28蛋白的ecd1的seq?idno:177的氨基酸序列內的第一表位具有結合特異性，無論us28蛋白的ecd1是否包含已知變體的突變，條件是第一表位包含如在us28的ecd1中發(fā)現的由以下hcmv病毒株編碼的tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的序列：db、towne、af1、vhl/e、ad169、bl、davis、jp、merlin、ph、tb40/e、toledo、tr和vr1814(fix)。tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的序列在所有列出的臨床病毒株中是完全保守的，并且據申請人所知，在所有已知的hcmv病毒株中也是保守的。

19、任選地，本發(fā)明的第一方面的結合分子可例如對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，無論us28蛋白的ecd3是否包含4d變體或4n變體的序列：

20、-其中所述4d變體包含如us28的ecd3中發(fā)現的由如以下的第一組hcmv病毒株編碼的tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)的序列：towne、vr1814、tb40/e、merlin、jp、ad169、af1、vhl/e、bl和davis；并且

21、-4n變體包含如us28的ecd3中發(fā)現的由如以下的第二組hcmv病毒株編碼的tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)的序列：toledo、tr和db病毒株。

22、通過利用本文所描述的方案，申請人已經一致地且反復地生成具有上述一個或多個有益結合特性的對hcmv的us28蛋白的ecd1的seq?id?no:177的氨基酸序列內的第一表位具有結合特異性的大量抗體，和對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的大量抗體，包括在本文中通過以下名稱所提及的抗體(其序列還提供于下文)：

23、針對seq?id?no:177的示例性抗體：us28-4-4h3c3、us28-4-7b1f3、us28-4-2f5b11、us28-4-4a11a11、us28-4-2g2b3、us28-4-5d6h11、us28-4-9g3b9、us28-4-5e8f7、us28-4-6g3d6和us28-4-5e1e4；以及

24、針對ecd3的示例性抗體：us28-13-5g6-1d3、us28-13-1c10-1c10、us28-13-1h3-1a10、us28-14-2c2-1g4、us28-13-1c10-1g9和us28-14-4e4-1e8。

25、在一個實施方案中，本發(fā)明的第一方面的結合分子包含對應于分別如seq?id?no:196、197、198、199、200和201所定義的抗體us28-4-4h3c3(本文中通?？s寫為“4h3c3”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，和/或抗體4h3c3的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

26、任選地，根據此實施方案的結合分子可包含：

27、(a)抗體4h3c3的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:196、197和198所定義；和/或

28、(b)抗體4h3c3的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:199、200和201所定義。

29、另外或替代地，在另一選項中，根據此實施方案的結合分子可包含：

30、(a)至少一個可變重鏈(vh)多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vh多肽包含分別具有seq?id?no:196、197和198的序列的cdr?1、2和3序列，并且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽包含seq?id?no:187的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或

31、(b)至少一個可變輕鏈(vl)多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vl多肽包含分別具有seq?id?no:199、200和201的序列的cdr?1、2和3序列，并且任選其中可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:189的序列、基本上由其組成或由其組成。

32、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的4h3c3抗體的以下序列：

33、

34、

35、在一些實施方案中，4h3c3結合分子為人源化的(本文稱為“4h3c3人源化變體”)，并且任選地，結合分子可包含：

36、(a)如seq?id?no:196所描述的vh-cdr1；

37、(b)如seq?id?no:197、293和294中的任一個所描述的vh-cdr2；

38、(c)如seq?id?no:198所描述的vh-cdr3；

39、(d)如seq?id?no:199或295所描述的vl-cdr1；

40、(e)如seq?id?no:200或222所描述的vl-cdr2；和/或

41、(f)如seq?id?no:201所描述的vl-cdr3。

42、在一些實施方案中，4h3c3結合分子為人源化的，并且任選地，包含：

43、(a)選自由seq?id?no:256-259組成的群組的可變重鏈；和/或

44、(b)選自由seq?id?no:260-263組成的群組的可變輕鏈。

45、在另一個實施方案中，本發(fā)明的第一方面的結合分子包含對應于分別如seq?idno:219、220、221、199、222和223所定義的抗體us28-4-7b1f3(本文中通?？s寫為“7b1f3”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體7b1f3的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

46、任選地，根據此實施方案的結合分子可包含：

47、(a)抗體7b1f3的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seqid?no:219、220和221所定義；和/或

48、(b)抗體7b1f3的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seqid?no:199、222和223所定義。

49、另外或替代地，在另一選項中，根據此實施方案的結合分子可包含：

50、(a)至少一個vh多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vh多肽包含分別具有seq?id?no:219、220和221的序列的cdr1、2和3序列，并且任選其中所述至少一個vh多肽包含seq?id?no:211的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或

51、(b)至少一個vl多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vl多肽包含分別具有seq?id?no:199、222和223的序列的cdr1、2和3序列，并且任選其中vl多肽包含seq?id?no:213的序列、基本上由其組成或由其組成。

52、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的7b1f3抗體的以下序列：

53、

54、在一些實施方案中，7b1f3結合分子為人源化的(本文稱為“7b1f3人源化變體”)，并且任選地，結合分子可包含：

55、(a)如seq?id?no:219所描述的vh-cdr1；

56、(b)如seq?id?no:220、296和297中的任一個所描述的vh-cdr2；

57、(c)如seq?id?no:221或298所描述的vh-cdr3；

58、(d)如seq?id?no:199或295所描述的vl-cdr1；

59、(e)如seq?id?no:222所描述的vl-cdr2；和/或

60、(f)如seq?id?no:223所描述的vl-cdr3。

61、在一些實施方案中，7b1f3結合分子為人源化的，并且任選地，包含：

62、(a)選自由seq?id?no:264-267、270或271組成的群組的可變重鏈；和/或

63、(b)選自由seq?id?no:268、261、269和263組成的群組的可變輕鏈。

64、在一些優(yōu)選的實施方案中，7b1f3結合分子的可變重鏈已經被突變以去除vh-cdr3結構域中的糖基化位點。優(yōu)選地，vh-cdr3選自seq?id?no:270或271。

65、在另一個實施方案中，本發(fā)明的第一方面的結合分子包含對應于分別如seq?idno:242、243、244、199、245和246所定義的抗體us28-4-2f5b11(本文中通?？s寫為“2f5b11”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體2f5b11的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

66、任選地，根據此實施方案的結合分子可包含：

67、(a)抗體2f5b11的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:242、243和244所定義；和/或

68、(b)抗體2f5b11的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:199、245和246所定義。

69、另外或替代地，在另一選項中，根據此實施方案的結合分子可包含：

70、(a)至少一個vh多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vh多肽包含分別具有seq?id?no:242、243和244的序列的cdr1、2和3序列，并且任選其中所述至少一個vh多肽包含seq?id?no:233的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或

71、(b)至少一個vl多肽，其對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，其中所述vl多肽包含分別具有seq?id?no:199、245和246的序列的cdr1、2和3序列，并且任選其中vl多肽包含seq?id?no:235的序列、基本上由其組成或由其組成。

72、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的2f5b11抗體的以下序列：

73、

74、

75、在另一實施方案中，本發(fā)明的第一方面的結合分子包含對應于以下共同cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr(其中特定位置的置換氨基酸在括號中指示，且*指示該位置處不存在氨基酸)：

76、(a)vh-cdr1對應于(s/n)yw(m/i)h(seq?id?no:247)；

77、(b)vh-cdr2對應于y(i/v)np(s/r/n)t(g/a)y(a/t)e(y/f)nqkf(k/m)d(seq?idno:248)或y(i/v)np(s/r/n)t(g/a)y(a/t)e(y/f)nq(k/q)(f/l)(k/m/q)(d/g)(seq?id?no:299)；

78、(c)vh-cdr3對應于(l/i)(r/l)(f/n/s)(g/d)(s/*/r)(s/t)gfay(seq?id?no:249)或(l/i)(r/l)(f/n/s/q)(g/d)(s/*/r)(s/t)gfay(seq?id?no:300)；

79、(d)vl-cdr1對應于kssqsllyssnqknyla(seq?id?no:199)或(k/r)ssqsllyssnqknyla(seq?id?no:301)；

80、(e)vl-cdr2對應于wast(w/r)e(s/y)(seq?id?no:250)；和/或

81、(f)vl-cdr3對應于qqyysfplt(seq?id?no:201)。

82、如上文針對抗體4h3c3、7b1f3和/或2f5b11中的任何一個所定義的對由seq?idno:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性的vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3、vl-cdr1、vl-cdr2和/或vl-cdr3序列中的任何一個或多個的功能變體可任選包含具有如上文針對vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3、vl-cdr1、vl-cdr2和/或vl-cdr3分別由seq?id?no:247、248或299、249或300、199或301、250和201所述的對應共有序列的序列。

83、任選地，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于分別如seq?id?no:8、9、10、14、15和16所定義的抗體13-5g6-1d3(本文中通常縮寫為“1d3”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，和/或抗體1d3的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

84、例如，根據本發(fā)明的第一方面的該選項的結合分子可進一步包含(a)分別如seqid?no:8、9和10所定義的抗體1d3的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列；和/或(b)分別如seq?id?no:14、15和16所定義的抗體1d3的可變輕鏈(vl)的cdr1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列。

85、另外或替代地，在該選項中，結合分子可進一步包含：(a)至少一個可變重鏈(vh)多肽，其包含分別具有seq?id?no:8、9和10的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個可變重鏈(vh)多肽包含seq?id?no:12的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(b)至少一個可變輕鏈(vl)多肽，其包含分別具有seq?id?no:14、15和16的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:18的序列、基本上由其組成或由其組成。

86、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的us28-13-5g6-1d3抗體的以下序列：

87、

88、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于分別如seq?idno:112、113、114、117、83和118所定義的抗體13-1c10-1c10(本文中通常縮寫為“1c10”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體1c10的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

89、例如，根據本發(fā)明的第一方面的該選項的結合分子可進一步包含(a)分別如seqid?no:112、113和114所定義的抗體13-1c10-1c10的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列；和/或(b)分別如seq?id?no:117、83和118所定義的抗體13-1c10-1c10的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列。

90、另外或替代地，在該選項中，根據此實施方案的結合分子可進一步包含：(a)至少一個vh多肽，其包含分別具有seq?id?no:112、113和114的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個vh多肽包含seq?id?no:104的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(b)至少一個vl多肽，其包含分別具有seq?id?no:117、83和118的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中vl多肽包含seq?id?no:108的序列、基本上由其組成或由其組成。

91、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的us28-13-1c10-1c10抗體的以下序列：

92、

93、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于分別如seq?idno:112、113、114、117、83和118所定義的抗體13-1h3-1a10(本文中通?？s寫為“1a10”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體1a10的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

94、例如，根據本發(fā)明的第一方面的該選項的結合分子可進一步包含(a)分別如seqid?no:112、113和114所定義的抗體13-1h3-1a10的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列；和/或(b)分別如seq?id?no:117、83和118所定義的抗體13-1h3-1a10的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列。

95、另外或替代地，在該選項中，根據此實施方案的結合分子可進一步包含：(a)至少一個vh多肽，其包含分別具有seq?id?no:112、113和114的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個vh多肽包含seq?id?no:122的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(b)至少一個vl多肽，其包含分別具有seq?id?no:117、83和118的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中vl多肽包含seq?id?no:126的序列、基本上由其組成或由其組成。

96、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的us28-13-1h3-1a10抗體的以下序列：

97、

98、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于分別如seq?idno:76、77、78、82、83和84所定義的抗體13-1c10-1g9(本文中通?？s寫為“1g9”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體1g9的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

99、例如，根據本發(fā)明的第一方面的該選項的結合分子可進一步包含(a)分別如seqid?no:76、77和78所定義的抗體13-1c10-1g9的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列；和/或(b)分別如seq?id?no:82、83和84所定義的抗體13-1c10-1g9的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列。

100、另外或替代地，在該選項中，根據此實施方案的結合分子可進一步包含：(a)至少一個vh多肽，其包含分別具有seq?id?no:76、77和78的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個vh多肽包含seq?id?no:68的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(b)至少一個vl多肽，其包含分別具有seq?id?no:82、83和84的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中vl多肽包含seq?id?no:72的序列、基本上由其組成或由其組成。

101、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的us28-13-1c10-1g9抗體的以下序列：

102、

103、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于分別如seq?idno:76、95、96、82、99和100所定義的抗體14-4e4-1e8(本文中通?？s寫為“1e8”)的cdr序列中任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr，和/或抗體1e8的所述cdr序列中的任何一個或多個的功能變體，并且任選其中結合分子選自抗體和car。

104、例如，根據本發(fā)明的第一方面的該選項的結合分子可進一步包含(a)分別如seqid?no:76、95和96所定義的抗體14-4e4-1e8的vh的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列；和/或(b)分別如seq?id?no:82、99和100所定義的抗體14-4e4-1e8的vl的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列。

105、另外或替代地，在該選項中，根據此實施方案的結合分子可進一步包含：(a)至少一個vh多肽，其包含分別具有seq?id?no:76、95和96的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個vh多肽包含seq?id?no:88的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(b)至少一個vl多肽，其包含分別具有seq?id?no:82、99和100的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中vl多肽包含seq?id?no:92的序列、基本上由其組成或由其組成。

106、參考下文所描述的序列鑒別編號(seq?id?no)，鑒別本文中的us28-14-4e4-1e8抗體的以下序列：

107、

108、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于以下共同cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr(其中特定位置的置換氨基酸在括號中指示，且*指示該位置處不存在氨基酸)：

109、(a)vh-cdr1對應于s(y/h)a(m/l)s(seq?id?no:167)；

110、(b)vh-cdr2對應于siss(g/r)g(s/r)tyypdsvkg(seq?id?no:168)；

111、(c)vh-cdr3對應于gg(s/t)(t/r/h)(m/h/y)(i/s)(t/y)(t/g)(g/n)(l/*)gf(a/d)(y/f)(seq?id?no:169)；

112、(d)vl-cdr1對應于s(a/v)sssvsymh(seq?id?no:170)；

113、(e)vl-cdr2對應于d(t/s)sklas(seq?id?no:171)；和/或

114、(f)vl-cdr3對應于qqw(s/t/*)sn(*/n)pp(i/l)t(seq?id?no:172)。

115、在另一選項中，本發(fā)明的第一方面的結合分子進一步包含對應于以下共同cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的一個、兩個、三個、四個、五個或六個cdr(其中特定位置的置換氨基酸在括號中指示，且*指示該位置處不存在氨基酸)：

116、(a)vh-cdr1對應于s(y/h)a(m/l)s(seq?id?no:167)；

117、(b)vh-cdr2對應于siss(g/r)grtyypdsvkg(seq?id?no:174)；

118、(c)vh-cdr3對應于gg(s/t)(t/r/h)(m/h/y)(i/s)(t/y)(t/g)(g/n)gf(a/d)(y/f)(seq?id?no:175)；

119、(d)vl-cdr1對應于s(a/v)sssvsymh(seq?id?no:170)；

120、(e)vl-cdr2對應于d(t/s)sklas(seq?id?no:171)；和/或

121、(f)vl-cdr3對應于qqw(t/*)sn(*/n)ppit(seq?id?no:176)。

122、如上文針對抗體us28-13-5g6-1d3、13-1c10-1c10、13-1h3-1a10、13-1c10-1g9、14-4e4-1e8中的任何一個所定義的對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性的vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3、vl-cdr1、vl-cdr2和/或vl-cdr3序列中的任何一個或多個的功能變體可任選包含具有如上文在前述兩個段落中分別針對vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3、vl-cdr1、vl-cdr2和/或vl-cdr3所述的對應共有序列的序列。

123、對應于上述seq?id?no的序列在本技術的標題為“序列”的部分中給出，該部分在本技術的實施例之后。

124、在某些實施方案中，根據本發(fā)明的第一方面的結合分子可選自由以下組成的群組：

125、(a)二價抗體，如igg-scfv抗體(例如，其中第一結合結構域為完整igg，且第二結合結構域為scfv，所述scfv在所述igg的輕鏈的n-末端和/或在輕鏈的c-末端和/或在重鏈的n-末端和/或在重鏈的c-末端處附接至所述第一結合結構域，或反之亦然)，包括但不限于對由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的所述第一表位具有結合特異性并且對hcmv的us28蛋白的胞外結構域3(ecd3)內的第二表位具有結合特異性的二價抗體，例如其中所述第一表位和/或所述第二表位如本技術進一步定義；

126、(b)單價抗體，如或“臼包杵(knob-in-hole)”雙特異性抗體(例如scfv-kih、scfv-kihr、bite-kih或bite-kihr)；

127、(c)scfv2-fc抗體；

128、(d)雙特異性抗體，如雙特異性t細胞接合子(bite)抗體；

129、(e)雙重可變結構域(dvd)-ig抗體；

130、(f)基于雙親和力再靶向(dart)的抗體(例如，dart2-fc或dart)；

131、(g)三特異性抗體，如dnl-fab3抗體或三特異性抗體，其對由tdvlnqskpvtl(seqid?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且對hcmv的us28蛋白的胞外結構域3(ecd3)內的第二表位具有結合特異性，例如其中第一和/或第二表位如本技術所定義，并且對第三表位(如由免疫細胞呈遞的表位)具有結合特異性，任選其中所述三特異性抗體是三特異性免疫細胞接合子抗體，例如三特異性t細胞接合子(tite)，且任選地其中所述tite抗體包含cd3結合結構域；

132、(h)scfv-hsa-scfv抗體；

133、(i)單結構域抗體；

134、(j)僅重鏈igg(hcigg)，如駱駝igg(例如vhh抗體)和鯊魚免疫球蛋白新抗原受體(ignar)，及其單鏈抗體；和

135、(k)嵌合抗原受體(car)，其包含構成根據本發(fā)明的第一方面的結合分子、基本上由其組成或由其組成的胞外結構域，例如包含此列表的選項(a)至(h)中的任何一個或其組合的胞外結構域。

136、另外或替代地，根據本發(fā)明的第一方面的結合分子可選自由以下組成的群組：

137、(i)雙特異性免疫細胞接合子抗體，例如雙特異性t細胞接合子(bite)，且任選其中所述bite抗體包含cd3結合結構域；或

138、(ii)單克隆抗體，任選重組單克隆抗體，例如由cho細胞重組產生的單克隆抗體。本發(fā)明的第一方面還提供如上文所定義的結合分子的功能片段，其中該功能片段：

139、(a)包含根據前述權利要求中任一項所述的結合分子的抗原結合片段或其變體、融合體或衍生物或由其組成，所述抗原結合片段或其變體、融合體或衍生物選自由以下組成的群組：fv片段(如單鏈fv片段(scfv)或二硫鍵結合fv片段)、fab樣片段(如fab片段、fab'片段或f(ab)2片段)和單結構域抗體(dab，包括單一形式和雙重形式，如dab-接頭-dab和納米抗體)；

140、(b)提供如本文所定義的本發(fā)明的第一方面的結合分子的結合特征中的一種或多種；

141、(c)包含如本文所定義的本發(fā)明的第一方面的結合分子的cdr序列；和/或

142、(d)包含如本文所定義的本發(fā)明的第一方面的結合分子的vh和/或vl序列。

143、本發(fā)明的第一方面的結合分子的融合還提供于本文中。舉例而言，提供如上文所定義的結合分子或如上文所定義的該結合分子的功能片段，其中該結合分子或其功能片段包含融合多肽序列，所述融合多肽序列包含融合至第二氨基酸序列的第一氨基酸序列，其中該第一氨基酸序列包含該結合分子或其功能片段的多肽鏈中的至少一個或由其組成，且該第二氨基酸序列為融合伴侶。

144、在某些實施方案中，本發(fā)明的第一方面的結合分子為嵌合抗原受體(car)或包含于該嵌合抗原受體內。因此，本發(fā)明的第一方面還提供car，其包含：

145、(i)胞外結構域，其中該胞外結構域包含以下或由以下組成：如本文所定義的本發(fā)明的第一方面的結合分子或如本文所定義的該結合分子的功能片段；

146、(ii)跨膜結構域；和

147、(iii)胞內結構域；

148、其中所述car的所述胞外結構域對人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，且任選地還對ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且

149、其中所述us28蛋白的ecd1、seq?id?no:177和ecd3各自包含存在于所述us28蛋白中的氨基酸序列，其位置分別對應于由如seq?id?no:5中所闡述的人巨細胞病毒(hcmv)編碼的所述us28蛋白的位置1至37、26和37和167至183。

150、任選地，在所述car中：

151、(a)所述car的所述胞外結構域對完全存在于hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，和/或對完全存在于ecd3內的第二表位具有結合特異性；

152、(b)所述car的所述胞外結構域對us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?idno:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一線性表位具有結合特異性，和/或對ecd3內的第二線性表位具有結合特異性；

153、(c)car的胞外結構域對hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有hcmv病毒株不可知的結合特異性，例如，對hcmv的us28蛋白的ecd1內的表位具有選自由以下組成的群組的兩種或更多種(如全部)hcmv病毒株不可知的結合特異性：db、towne、ad169、davis、bl、jp、merlin、ph、tb40/e、toledo、tr、vhl/e和vr1814(fix)，和/或對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有hcmv病毒株不可知的結合特異性，例如對hcmv的us28蛋白的ecd3內的表位具有選自由以下組成的群組的兩種或更多種(如全部)hcmv病毒株不可知的結合特異性：db、towne、ad169、davis、bl、jp、merlin、ph、tb40/e、toledo、tr、vhl/e和vr1814(fix)；

154、(d)car的胞外結構域對hcmv的多個病毒株的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有特異性，無論多種hcmv病毒株是否展示在ecd1的位置1至25的區(qū)中的一個或多個位置中的病毒株間序列變異(如位置8、15、18、19、24、25中的任何一個或多個，包括但不限于本技術的表3中列出的序列變異)，例如，其中所述多種病毒株為選自由以下組成的群組的兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種或十種不同的病毒株：db、toledo、towne、vr1814、tb40/e、merlin、ad169、vhl/e、davis和bl；和/或

155、(e)car的胞外結構域對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有特異性，無論us28蛋白的ecd3是否包含以下序列：

156、-如在由大部分hcmv病毒株編碼的us28的ecd3中發(fā)現的tkkdnqcmtdydylevs(seqid?no:7)，或

157、-如在由少數hcmv病毒株編碼的us28的ecd3中發(fā)現的tkknnqcmtdydylevs(seq?idno:6)。

158、在某些實施方案中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

159、(a)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seq?id?no:196、197、198、199、200和201所定義的抗體4h3c3的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體4h3c3的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體(如4h3c3人源化變體)；

160、(b)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

161、(i)抗體4h3c3的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:196、197和198所定義或如其4h3c3人源化變體所定義；和/或

162、(ii)抗體4h3c3的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:199、200和201所定義或如其4h3c3人源化變體所定義；和/或

163、(c)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

164、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:196、197和198(或其4h3c3人源化變體)的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?id?no:187(或其4h3c3人源化變體)的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

165、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:199、200和201(或其4h3c3人源化變體)的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:189(或其4h3c3人源化變體)的序列、或基本上由其組成或由其組成。

166、在另一實施方案中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

167、(a)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seq?id?no:219、220、221、199、222和223所定義的抗體7b1f3的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體7b1f3的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體(如7b1f3人源化變體)；

168、(b)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

169、(i)抗體7b1f3的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:219、220和221所定義或如其7b1f3人源化變體所定義；和/或

170、(ii)抗體7b1f3的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:199、222和223所定義或如其7b1f3人源化變體所定義；和/或

171、(c)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

172、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:219、220和221(或其7b1f3人源化變體)的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?id?no:211(或其7b1f3人源化變體)的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

173、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:199、222和223(或其7b1f3人源化變體)的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:213(或其7b1f3人源化變體)的序列、或基本上由其組成或由其組成。

174、在另一實施方案中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

175、(a)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seq?id?no:242、243、244、199、245和246所定義的抗體2f5b11的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體2f5b11的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

176、(b)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

177、(i)抗體2f5b11的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:242、243和244所定義；和/或

178、(ii)抗體2f5b11的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:199、245和246所定義；和/或

179、(c)car的胞外結構域對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性，并且包含：

180、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:242、243和244的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?idno:233的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

181、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:199、245和246的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:235的序列、或基本上由其組成或由其組成。

182、在某些選項中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

183、(a)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seqid?no:8、9、10、14、15和16所定義的抗體1d3的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體1d3的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

184、(b)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

185、(i)抗體1d3的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:8、9和10所定義；和/或

186、(ii)抗體1d3的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:14、15和16所定義；和/或

187、(c)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:8、9和10的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?id?no:12的序列、基本上由其組成或由其組成；和/或(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:14、15和16的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中可變輕鏈vl多肽包含seq?id?no:18的序列、基本上由其組成或由其組成。

188、在某些其他選項中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

189、(a)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seqid?no:112、113、114、117、83和118所定義的抗體1c10的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體1c10的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

190、(b)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

191、(i)抗體1c10的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:112、113和114所定義；和/或

192、(ii)抗體1c10的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:117、83和118所定義；和/或

193、(c)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

194、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:112、113和114的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?idno:104的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

195、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:117、83和118的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:108的序列、或基本上由其組成或由其組成。

196、在某些其他選項中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

197、(a)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seqid?no:112、113、114、117、83和118所定義的抗體1a10的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體1a10的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

198、(b)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

199、(i)抗體1a10的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:112、113和114所定義；和/或

200、(ii)抗體1a10的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:117、83和118所定義；和/或

201、(c)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

202、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:112、113和114的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?idno:122的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

203、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:117、83和118的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:126的序列、或基本上由其組成或由其組成。

204、在某些其他選項中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

205、(a)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seqid?no:76、77、78、82、83和84所定義的抗體1g9的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體1g9的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

206、(b)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

207、(i)抗體1g9的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:76、77和78所定義；和/或

208、(ii)抗體1g9的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:82、83和84所定義；和/或

209、(c)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

210、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:76、77和78的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?id?no:68的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

211、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:82、83和84的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:72的序列、或基本上由其組成或由其組成。

212、在某些其他選項中，在根據本發(fā)明的第一方面的car中：

213、(a)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(qū)(cdr)，其分別對應于如seqid?no:76、95、96、82、99和100所定義的抗體1e8的cdr序列中的任何一個、兩個、三個、四個、五個或全部六個、和/或抗體1e8的所述cdr序列中的任何一個或多個序列的功能變體；

214、(b)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

215、(i)抗體1e8的可變重鏈(vh)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:76、95和96所定義；和/或

216、(ii)抗體1e8的可變輕鏈(vl)的cdr?1、2和3序列中的一個、兩個或全部三個序列，分別如seq?id?no:82、99和100所定義；和/或

217、(c)car的胞外結構域進一步對hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位具有結合特異性，并且包含：

218、(i)至少一個可變重鏈(vh)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:76、95和96的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述至少一個可變重鏈(vh)多肽序列包含seq?id?no:88的序列、或基本上由其組成或由其組成；和/或

219、(ii)至少一個可變輕鏈(vl)多肽序列，其包含分別具有seq?id?no:82、99和100的序列的cdr?1、2和3序列，且任選其中所述可變輕鏈(vl)多肽包含seq?id?no:92的序列、或基本上由其組成或由其組成。

220、任選地，在該car中，胞外結構域為抗體，例如單鏈可變片段(scfv)。

221、根據本發(fā)明的第一方面的car的跨膜結構域可例如包含蛋白質跨膜結構域，例如跨膜受體蛋白的跨膜結構域，且任選其中跨膜結構域包含選自以下的蛋白質的跨膜結構域：t細胞受體的α、β或ζ鏈、cd28、cd3ε、cd8、cd45和cd4。

222、根據本發(fā)明的第一方面的car的胞外結構域可例如通過鉸鏈區(qū)連接至跨膜結構域。

223、根據本發(fā)明的第一方面的car的胞內結構域可例如包含胞內信號傳導結構域，例如其中：(a)胞內信號傳導結構域包含一種或多種基于免疫受體酪氨酸的活化基序(itam)；和/或(b)胞內信號傳導結構域包含cd3ζ、fc受體γ、fc受體β、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b和cd66d的信號傳導結構域。

224、根據本發(fā)明的第一方面的car的胞內結構域可例如包含一個或多個共刺激結構域，例如：(a)其中一個或多個共刺激結構域包括一個或多個自選自cd28、41bb、ox40、icos、cd27和dap10的蛋白質獲得的功能性信號傳導結構域；(b)其中胞內結構域摻入接近胞內信號傳導結構域的共刺激結構域，(c)其中胞內結構域包含兩個或更多個共刺激結構域，例如兩個串聯共刺激結構域，和/或(d)其中胞內結構域摻入單獨細胞因子信號。

225、根據本發(fā)明的第一方面的car可例如另外包含前導序列。

226、本發(fā)明的第二方面提供核酸分子或多個不同核酸分子的組合，其中核酸分子包含，或多個不同核酸分子的組合共同包含一個或多個核酸序列，該一個或多個核酸序列單獨地或以組合形式編碼本發(fā)明的第一方面的結合分子，例如根據本發(fā)明的第一方面的抗體或car。

227、本發(fā)明的第三方面提供一種載體，該載體包含(或多個不同載體的組合共同包含)根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或根據本發(fā)明的第二方面的多個不同核酸分子的組合。本發(fā)明的第三方面的載體或各載體可例如選自：逆轉錄病毒載體、質粒、慢病毒載體和腺病毒載體。

228、任選地，根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第三方面的載體包含一個或多個額外序列，其中該額外序列或各額外序列編碼一個或多個可選標記。

229、本發(fā)明的第四方面提供一種細胞或細胞群(任選均質或異質細胞群)，其包含根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第三方面的載體，任選其中細胞表達根據本發(fā)明的第一方面的一個或多個結合分子(如一個或多個抗體和/或一個或多個car)，該一個或多個結合分子和/或car由根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合或根據本發(fā)明的第三方面的載體編碼。所述細胞可任選選自經分離的細胞、離體細胞和體外細胞。

230、根據本發(fā)明的第四方面的細胞可例如包含：(a)根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，其中所編碼的結合分子為根據本發(fā)明的第一方面的抗體、該抗體的功能片段或具有包含融合多肽序列的該結合分子的功能片段的抗體；和/或(b)根據本發(fā)明的第三方面的載體，其中該載體包含如由此段落的選項(a)所定義的核酸分子或多個不同核酸分子的組合。

231、根據本發(fā)明的第四方面的細胞可例如包含：(a)根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，其中所編碼的結合分子為根據本發(fā)明的第一方面的car；和/或(b)根據本發(fā)明的第三方面的載體，其中該載體包含如由此段落的部分(a)所定義的核酸分子或多個不同核酸分子的組合。非限制性地，該細胞可例如選自：t細胞、自然殺傷(nk)細胞和巨噬細胞。因此，細胞可任選為car-t細胞、car-nk細胞或car巨噬細胞，且任選地，當細胞為car-t細胞時，則例如t細胞可選自：cd8+t細胞、cd4+t細胞、效應t細胞、輔助t細胞、記憶t細胞、細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、ebv特異性t細胞受體(tcr)或γδ-t細胞亞型。

232、本發(fā)明的第四方面還提供一種細胞，其包含根據本發(fā)明的第一方面的結合分子和/或編碼該結合分子的核酸，任選其中該核酸為分別如由本發(fā)明的第二或第三方面所定義的核酸或載體。舉例而言，結合分子可為根據本發(fā)明的第一方面的抗體、根據本發(fā)明的第一方面的該抗體的功能片段或具有包含根據本發(fā)明的第一方面的融合多肽序列的該結合分子的功能片段的抗體，且任選其中該抗體為單克隆抗體，且進一步例如其中該細胞為重組表達單克隆抗體的哺乳動物細胞，如cho細胞。

233、本發(fā)明的第四方面還提供一種細胞，其包含根據本發(fā)明的第一方面的car和/或編碼該car的核酸，任選其中該核酸為分別如由本發(fā)明的第二或第三方面所定義的核酸或載體。非限制性地，該細胞可例如選自：t細胞、自然殺傷(nk)細胞和巨噬細胞。因此，細胞可任選為car-t細胞、car-nk細胞或car巨噬細胞，且任選地，當細胞為car-t細胞時，則例如t細胞可選自：cd8+t細胞、cd4+t細胞、效應t細胞、輔助t細胞、記憶t細胞、細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、ebv特異性t細胞受體(tcr)或γδ-t細胞亞型。

234、本發(fā)明的第五方面提供一種產生細胞，更特別是重組細胞或此類細胞的群體(任選均質或異質細胞群)的方法，該方法包含將根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第三方面的載體引入至細胞中。

235、該方法任選進一步包含選擇根據本發(fā)明的第五方面的細胞的步驟；例如自異質細胞群中選擇所述細胞，由此產生富集和/或均質細胞群。該選擇步驟可包括選擇根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合中存在的一個或多個可選標記和/或根據本發(fā)明的第三方面的載體的存在。

236、本發(fā)明的第六方面提供一種產生根據本發(fā)明的第一方面的結合分子，例如根據本發(fā)明的第一方面的抗體或car的方法，該方法包含：在細胞，更特別是，重組細胞或此類細胞的群體(任選地，均質或異質細胞群)中表達根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，和/或根據本發(fā)明的第三方面的載體。任選地，本發(fā)明的第六方面的方法還可包含以下步驟：自細胞分離如此產生的結合分子；舉例而言，其中結合分子為根據本發(fā)明的第一方面的抗體、該抗體的功能片段或具有包含根據本發(fā)明的第一方面的融合多肽序列的該結合分子的功能片段的抗體。所述細胞可任選選自經分離的細胞、離體細胞和體外細胞。

237、本發(fā)明的第七方面提供通過本發(fā)明的第六方面的方法獲得或可通過其獲得的經分離的結合分子，任選其中該經分離的結合分子經進一步配制以用于向受試者施用。

238、本發(fā)明的第八方面提供一種綴合物，該綴合物包含與如本發(fā)明的第一方面所定義的結合分子結合的部分，或與該結合分子的功能片段結合的部分。非限制性地，該部分可例如為治療性、預防性、診斷性、預后性或治療診斷性部分。在一些實施方案中，部分為藥物(例如其中綴合物為抗體-藥物綴合物(“adc”))和/或放射性部分(例如其中綴合物適用于放射免疫療法(“rit”))。

239、本發(fā)明的第九方面提供一種產生根據本發(fā)明第八方面的綴合物的方法，該方法包含以下步驟：

240、(a)提供如本發(fā)明的第一方面所定義的結合分子或該結合分子的功能片段；和

241、(b)使部分與該結合分子或與該結合分子的功能片段結合。

242、本發(fā)明的第九方面的方法可另外包含分離如此產生的綴合物的步驟。經分離的綴合物可因此以分離形式，例如以如下組合物形式展現，其中至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％或實質上100％(以摩爾比)的結合分子或該結合分子的功能片段以綴合物形式存在。另外或替代地，綴合物的經分離的形式可為如下組合物，其中至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％或實質上100％(以摩爾比)的部分以綴合物形式存在。本發(fā)明的第九方面進一步提供經分離的綴合物或包含該經分離的綴合物的組合物。

243、在本發(fā)明的第八方面的綴合物或本發(fā)明的第九方面的方法的某些優(yōu)選實施方案中，結合分子為根據本發(fā)明的第一方面的抗體、該抗體的功能片段或具有包含根據本發(fā)明的第一方面的融合多肽序列的該結合分子的功能片段的抗體。

244、本發(fā)明的第十方面提供一種通過本發(fā)明的第九方面的方法獲得或可通過其獲得的經分離的綴合物，任選其中該經分離的綴合物經進一步配制以用于向受試者施用。

245、本發(fā)明的第十一方面提供一種對抗hcmv或與hcmv相關的疾病或病癥的方法，該方法包括向受試者或離體細胞物質或體外細胞物質施用選自以下的任何一種或多種試劑：

246、i.根據本發(fā)明的第一方面的結合分子，

247、ii.根據本發(fā)明的第一方面的該結合分子的功能片段，

248、iii.根據本發(fā)明的第七方面的經分離的結合分子，

249、iv.根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，

250、v.根據本發(fā)明的第三方面的載體，

251、vi.根據本發(fā)明的第四方面的細胞，

252、vii.根據本發(fā)明的第八方面的綴合物，和

253、viii.根據本發(fā)明的第十方面的經分離的綴合物。

254、換言之，本發(fā)明的第十一方面提供所述試劑中的一種或多種用于對抗受試者或離體或體外細胞物質中與hcmv相關的疾病或病癥。

255、此外，本發(fā)明的第十一方面提供所述試劑中的一種或多種在制造藥物中的用途，所述藥物用于對抗受試者或離體或體外細胞物質中與hcmv相關的疾病或病癥。

256、根據本發(fā)明的第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為hcmv感染或與hcmv感染相關。在一個實施方案中，hcmv感染可為單株感染。任選地，在一個替代實施方案中，hcmv感染包含多株hcmv感染，其中多株hcmv感染包含用一種以上不同hcmv病毒株，例如編碼不同us28蛋白序列的兩個或更多個hcmv病毒株進行感染。所述兩個或更多個病毒株可編碼us28蛋白，所述蛋白質在一種或多種胞外區(qū)上不同，如n-末端(ecd1)區(qū)、第一胞外環(huán)(ecd2)區(qū)、第二胞外環(huán)(ecd3)區(qū)和/或第三胞外環(huán)(ecd4)區(qū)。

257、在一個感興趣的實施方案中，多株hcmv感染中的兩個或更多個hcmv病毒株各自編碼至少在n-末端(ecd1)區(qū)的一個或多個位置上彼此不同的us28蛋白；例如其在n-末端(ecd1)區(qū)中的1、2、3、4、5、6、8、9、10或更多個氨基酸位置處可不同。舉例而言，多株hcmv感染中的兩種或更多種hcmv病毒株可展示在ecd1的位置1至25的區(qū)中的一個或多個位置中的病毒株間序列變異(如位置8、15、18、19、24、25中的任何一個或多個，包括但不限于本技術的表3中列出的序列變異)，例如，其中所述多種病毒株包含選自由以下組成的群組的至少兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種或十種不同的病毒株：db、toledo、towne、vr1814、tb40/e、merlin、ad169、vhl/e、davis和bl。

258、另外或替代地，在另一個感興趣的實施方案中，多株hcmv感染中的兩個或更多個hcmv病毒株各自編碼在第二胞外(ecd3)區(qū)的一個或多個位置處彼此不同的us28蛋白，例如，hcmv病毒株中的一種或多種在多株hcmv感染中可編碼如下us28蛋白，該蛋白質編碼ecd3的4n變體，且其他hcmv病毒株中的一種或多種在多株hcmv感染中可編碼如下us28蛋白，該蛋白質編碼ecd3的4d變體。

259、根據本發(fā)明的第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為潛伏hcmv感染(例如，單株或多株潛伏hcmv感染)或與潛伏hcmv感染(任選地，多株潛伏hcmv感染)相關。

260、根據本發(fā)明的第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為裂解hcmv感染(任選為多株裂解hcmv感染)或與裂解hcmv感染(任選為多株裂解hcmv感染)相關。

261、根據本發(fā)明第十一方面的待對抗的與hcmv相關聯的疾病或病癥可為先天性hcmv感染(例如，單株或多株感染)，如潛伏先天性單株或多株hcmv感染或裂解先天性單株或多株hcmv感染；

262、根據本發(fā)明的第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為癌癥，例如hcmv感染癌癥(任選單株或多株hcmv感染癌癥)，如潛伏hcmv感染癌癥(任選單株或多株潛伏hcmv感染癌癥)。

263、根據本發(fā)明的第十一方面的待對抗的與hcmv相關聯的疾病或病癥可為上皮癌；任選其中該上皮癌為乳腺癌；例如，其中該乳腺癌為三陰性乳腺癌(tnbc)或her2-陽性乳腺癌。her2陽性乳腺癌可例如為her2+hr-(其中hr-是指激素受體-陰性，且是指雌激素受體陰性(er-)和孕酮受體陰性(pr-)狀態(tài))；或her2+er+pr-；或her2+er-pr+；或作為her2+er+pr+的三陽性形式的乳腺癌“tpbc”。應注意her2+hr-為特定侵襲形式的乳腺癌且對于根據本發(fā)明的診斷治療而言受到高度關注。該形式的上皮癌可任選為單株或多株形式的hcmv感染上皮癌，例如潛伏hcmv感染形式的上皮癌(任選單株或多株潛伏hcmv感染癌癥)。

264、根據本發(fā)明第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為轉移和/或侵襲形式的癌癥。所述形式的轉移和/或侵襲癌癥可任選為單株或多株形式的hcmv感染的轉移和/或侵襲癌癥，例如潛伏hcmv感染形式的轉移和/或侵襲癌癥(任選單株或多株潛伏hcmv感染癌癥)。

265、在一些實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待對抗的與hcmv相關的疾病或病癥可為膠質母細胞瘤。在本文所述的其他實施方案中，該疾病或病癥不為膠質母細胞瘤和/或該待處理的受試者不具有和/或尚未被診斷為患有膠質母細胞瘤。

266、在一些實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待處理的受試者(或離體或體外細胞物質)可能具有和/或已被診斷有或具有hcmv感染癌細胞，如潛伏hcmv感染癌細胞。

267、在一些實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待處理的受試者可為或旨在為細胞物質(如細胞產物捐獻)的受體。所述細胞產物可例如包含離體活細胞物質、基本上由其組成或由其組成，該離體活細胞物質選自：一種或多種類型的離體細胞；一種或多種類型的離體細胞培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體組織；一種或多種類型的離體組織培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體器官；和/或一種或多種類型的離體器官培養(yǎng)物。任選地，細胞產物可直接或間接來源于活的供體。

268、在一些實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待處理的受試者可為或旨在為細胞物質的供體，如細胞產物的供體。該細胞產物可包含來自該供體的細胞、組織或器官中的任何一種或多種、基本上由其組成或由其組成。

269、在一些實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待處理的離體或體外細胞物質可為離體細胞產物。所述離體細胞產物可例如包含離體活細胞物質、基本上由其組成或由其組成，該離體活細胞物質選自：一種或多種類型的離體細胞；一種或多種類型的離體細胞培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體組織；一種或多種類型的離體組織培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體器官；和/或一種或多種類型的離體器官培養(yǎng)物。任選地，細胞產物可直接或間接來源于活的供體。

270、在一個實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待使用的一種或多種試劑可例如選自(或包括選自以下的一種或多種試劑)：

271、i.如由本發(fā)明的第一方面所定義的治療性抗體，

272、ii.如由本發(fā)明的第一方面所定義的該治療性抗體的功能片段，

273、iii.包含如由本發(fā)明的第一方面所定義的融合多肽序列的治療性抗體；和

274、iv.包含如由本發(fā)明的第一方面所定義的融合多肽序列的該治療性抗體的功能片段。

275、舉例而言，根據本發(fā)明第十一方面使用的一種或多種試劑可為(或包括選自以下的一種或多種試劑)如由本發(fā)明的第一方面所定義的雙特異性抗體。非限制性地，此可以為雙特異性免疫細胞接合子抗體。其示例性實施方案為雙特異性t細胞接合子(bite)抗體，任選其中除了包含對us28蛋白的ecd1區(qū)具有結合特異性的本發(fā)明的第一方面的結合分子的區(qū)以外，bite抗體進一步包含t細胞銜接結構域，如cd3結合結構域。

276、在另一實施方案中，根據本發(fā)明的第十一方面使用的一種或多種試劑可為(或包括選自以下的一種或多種試劑)如本發(fā)明的第一方面所定義的三特異性抗體。其示例性實施方案是三特異性抗體，其中除了包含本發(fā)明的第一方面的結合分子的區(qū)(其對us28蛋白的ecd1區(qū)內的由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性)之外，該抗體進一步包含t細胞接合結構域(如cd3結合結構域)和ecd3接合結構域，如本文所描述的ecd3結合分子。

277、在另一實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待使用的一種或多種試劑可例如為(或包括)根據本發(fā)明第八方面和/或本發(fā)明第十方面的綴合物，如作為抗體-藥物綴合物(“adc”)的綴合物，或包含放射性部分的綴合物，如適用于放射免疫療法(“rit”)的綴合物。

278、在一些實施方案中，adc包含抗有絲分裂有效負載(例如，微管蛋白抑制劑，如美登素等)。在一些實施方案中，adc包含作為dna破壞劑(例如，拓撲異構酶抑制劑，如sn38等)的有效負載。在一些實施方案中，adc包含作為轉錄抑制劑(例如，rna?pol?ii抑制劑，如鵝膏蕈堿等)的有效負載。在一些實施方案中，adc包含選自由以下組成的群組的有效負載：美登素類化合物(如美登素、dm1、dm3和dm4)；澳瑞他汀有效負載(如多拉司他汀10、mmae、mmaf和pf-06380101)；微管溶素(如微管溶素a、微管溶素b、微管溶素c、微管溶素g和微管溶素i)；艾瑞布林；紫杉醇衍生物(如多西他賽和紫杉醇)；dna損傷劑(如刺孢霉素；基于蒽霉素的二聚體，包括吡咯并苯并二氮雜(pbd)二聚體、吲哚并苯并二氮雜二聚體(ign)和吡咯并苯并二氮雜(pdd)；基于多卡霉素的有效負載；蒽環(huán)類抗生素多柔比星、拉地柔比星和pnu-159682；以及基于喜樹堿的分子，包括喜樹堿、依沙替康和sn-38(7-乙基-10-羥基喜樹堿))。

279、在另一實施方案中，根據本發(fā)明第十一方面的待使用的一種或多種試劑可例如為(或包括)細胞(或細胞群，例如均質細胞群)，其中該細胞或各細胞包含根據本發(fā)明第四方面的car。該細胞或細胞群通常經分離和/或配制以用于向受試者施用。該細胞或各細胞可例如包含根據本發(fā)明的第一方面的car和/或編碼該car的核酸，任選其中該核酸為分別如由本發(fā)明的第二或第三方面所定義的核酸或載體。該細胞或各細胞可例如為根據本發(fā)明的第四方面的細胞。非限制性地，該一種或多種細胞可例如選自：t細胞、自然殺傷(nk)細胞和巨噬細胞。因此，細胞可任選為car-t細胞、car-nk細胞或car巨噬細胞，且任選地，當細胞為car-t細胞時，則例如t細胞可選自：cd8+t細胞、cd4+t細胞、效應t細胞、輔助t細胞、記憶t細胞、細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、ebv特異性t細胞受體(tcr)或γδ-t細胞亞型。

280、任選地，根據本發(fā)明的第十一方面，可向受試者施用另一物質，如另一治療性、預防性、診斷性、預后性或治療診斷性物質(如本文所描述的ecd3結合分子)，且任選其中該另一物質可分別、依次或與一種或多種試劑中的每一者同時施用。

281、因此，本發(fā)明的第十一方面還提供一種治療有需要的受試者的方法，其為通過向受試者施用治療性、預防性、診斷性、預后性或治療診斷性物質執(zhí)行，其中還分別、依次(例如之前或之后)或同時用一種或多種試劑中的任一種治療受試者。

282、在同時治療的實施方案中，接著根據本發(fā)明第十一方面使用的一種或多種試劑可與治療性、預防性、診斷性、預后性或治療診斷性物質組合配制和/或施用；或可分開配制但作為兩種單獨配制物同時施用。

283、舉例而言，在一個實施方案中，待治療的疾病或病癥可為一種形式的癌癥(如一種或多種形式如上文所公開的癌癥)，且可使其他治療性、預防性、診斷性、預后或治療診斷物質靶向癌癥。

284、本發(fā)明的第十二方面提供一種用于藥物的試劑，其中該試劑選自：

285、i.根據本發(fā)明的第一方面的結合分子，

286、ii.如本發(fā)明的第一方面所定義的該結合分子的功能片段，

287、iii.根據本發(fā)明的第七方面的經分離的結合分子，

288、iv.根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，

289、v.根據本發(fā)明的第三方面的載體，

290、vi.根據本發(fā)明的第四方面的細胞，

291、vii.根據本發(fā)明的第八方面的綴合物，和

292、viii.根據本發(fā)明的第十方面的經分離的綴合物。

293、就本發(fā)明的第十一方面而言，該試劑可例如為如上文所定義的試劑。

294、本發(fā)明的第十三方面提供一種肽或多肽，其包含序列tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)、基本上由其組成或由其組成，或包含seq?id?no:177的免疫原性片段的序列。所述肽或多肽并非us28蛋白。優(yōu)選地，所述肽或多肽中僅有us28衍生的序列為seq?id?no:177的序列或seq?id?no:177的免疫原性片段的序列，和/或所述肽或多肽不含3、4、5、6、7、8、9、10或多于10個連續(xù)氨基酸的任何序列，該序列與在us28蛋白中除了包含seq?id?no:177的序列的區(qū)之外的位置處發(fā)現的相同長度的序列連續(xù)氨基酸序列相同。

295、本發(fā)明的第十四方面提供一種肽或多肽，其包含序列tkknnqcmtdydylevs(seq?idno:6)和/或tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)、基本上由其組成或由其組成，或包含seqid?no:6和/或7的免疫原性片段的序列。所述肽或多肽并非us28蛋白。任選地，所述肽或多肽還包含seq?id?no:177的序列或seq?id?no:177的免疫原性片段的序列。優(yōu)選地，所述肽或多肽中僅us28衍生的序列是seq?id?no:6和/或7的序列或seq?id?no:6和/或7的免疫原性片段的序列，以及任選地也是seq?id?no:177的序列或seq?id?no:177的免疫原性片段的序列。

296、根據本發(fā)明的第十三或第十四方面，包含參考序列seq?id?no:177的免疫原性片段、基本由其組成或由其組成的肽或多肽包含少于參考序列的全序列，并且優(yōu)選地包含seqid?no:177的參考序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10或11個連續(xù)氨基酸。

297、根據本發(fā)明的第十四方面，參考序列seq?id?no:6和/或7的免疫原性片段，分別包含少于參考序列的全序列，并且優(yōu)選地包含參考序列的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個連續(xù)氨基酸。

298、在一個實施方案中，本發(fā)明的第十三和/或第十四方面的肽或多肽的免疫原性片段包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：與seq?id?no:6和seq?id?no:7共有的且存在于所述序列內的序列。

299、本發(fā)明的第十三和第十四方面還提供肽或多肽，其包含以下、由以下組成或基本上由以下組成：

300、(i)參考序列tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的免疫原性片段或變體，該免疫原性片段或變體包含與如本文所描述的抗體4h3c3、7b1f3和/或2f5b11中的任一種所結合的seqid?no:177內的表位的序列(其中還包括scfv，其包含具有分別如seq?idno:187、211和233所定義的4h3c3、7b1f3和/或2f5b11的vh序列的vh多肽序列，以及具有分別如seq?id?no:189、213和235所定義的4h3c3、7b1f3和/或2f5b11的vl序列的vl多肽序列)；優(yōu)選地，所述肽或多肽由4h3c3、7b1f3和/或2f5b11特異性結合。

301、(ii)分別選自tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)和/或tkkdnqcmtdyd?ylevs(seqid?no:7)的參考序列的免疫原性片段或變體，其中該免疫原性片段或變體包含與如本文所描述的抗體1d3、1c10、1a10、1g9和/或1e8中的任一種所結合的us28的ecd3內的表位的序列(其中還包括scfv，其包含具有分別如seq?id?no:12、104、122、68和88所定義的1d3、1c10、1a10、1g9和/或1e8的vh序列的vh多肽序列，以及如包含具有分別如seq?id?no:18、108、126、72和92所定義的1d3、1c10、1a10、1g9和/或1e8的vl序列的vl多肽序列)。優(yōu)選地，所述肽或多肽由1d3、1c10、1a10、1g9和/或1e8特異性結合。

302、本發(fā)明的第十五方面提供至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合，其包含第一肽或多肽和第二肽或多肽(以及任選地至少一個第三肽或多肽)，其中：

303、(a)第一肽或多肽包含包含序列tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)或其免疫原性片段(如本發(fā)明的第十三方面所定義的免疫原性片段)、基本上由其組成或由其組成；并且

304、(b)第二肽或多肽包含包含序列tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)或其免疫原性片段(如由本發(fā)明的第十四方面所定義的免疫原性片段)、基本上由其組成或由其組成，條件為所述免疫原性片段至少包含seq?id?no:6的4n氨基酸；或

305、(c)第二肽或多肽包含包含序列tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)或其免疫原性片段(如由本發(fā)明的第十四方面所定義的免疫原性片段)、基本上由其組成或由其組成，條件為所述免疫原性片段至少包含seq?id?no:7的4d氨基酸；并且

306、任選其中所述組合包含第三多肽，并且如果第二肽或多肽如選項(b)所定義，則第三肽或多肽對應于選項(c)，或者其中如果第二肽或多肽如選項(c)所定義，則第三肽或多肽對應于選項(b)。

307、本發(fā)明的第十六方面提供一種融合蛋白，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：直接或經由一個或多個接頭氨基酸序列融合至第二氨基酸序列的第一氨基酸序列，其中第一氨基酸序列為如由本發(fā)明的第十三或第十四方面所定義的肽或多肽的序列；且第二氨基酸序列為融合伴侶。

308、任選地，融合伴侶為載體蛋白質，如經選擇以提供適合于針對第一氨基酸序列進行免疫接種和產生抗體的融合蛋白的載體蛋白質。舉例而言，載體蛋白質可選自：鑰孔血藍蛋白(klh)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、卵白蛋白(ova)、破傷風類毒素(tt)、白喉類毒素(dt)、經遺傳修飾的白喉類毒素的交叉反應材料(crm)、腦膜炎球菌外膜蛋白復合物(ompc)和流感嗜血桿菌蛋白質d(hid)。

309、本發(fā)明的第十七方面提供至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合，所述融合蛋白包含第一融合蛋白和第二融合蛋白(以及任選地，至少第三不同融合蛋白)，其中：

310、(a)根據本發(fā)明的第十六方面的第一融合蛋白包含作為第一融合蛋白的第一氨基酸序列的序列，該序列包含包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：序列tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)或其免疫原性片段或變體；并且

311、(b)根據本發(fā)明的第十六方面的第二融合蛋白包含作為第一融合蛋白的第一氨基酸序列的序列，該序列包含包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：序列tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)或其免疫原性片段或變體，條件為所述免疫原性片段或變體包括seq?id?no:6的4n氨基酸；或

312、(c)根據本發(fā)明的第十六方面的第二融合蛋白包含作為第二融合蛋白的第一氨基酸序列的序列，該序列包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：序列tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)或其免疫原性片段或變體，條件為所述免疫原性片段或變體包括seq?id?no:7的4d氨基酸；并且

313、任選其中所述組合包含第三不同融合蛋白，并且如果第二融合蛋白如選項(b)所定義，則第三融合蛋白對應于選項(c)，或者其中如果第二融合蛋白如選項(c)所定義，則第三融合蛋白對應于選項(b)。

314、本發(fā)明的第十八方面提供一種綴合物，其包含與如由本發(fā)明的第十三和第十四方面中的任一者或兩者所定義的肽或多肽結合的部分，或與如由本發(fā)明的第十六方面所定義的融合蛋白結合的部分。

315、該綴合物的部分可直接結合至如本發(fā)明的第十三和第十四方面中的任一者或兩者所定義的肽或多肽，或結合至如本發(fā)明的第十六方面所定義的融合蛋白。替代地，該綴合物的部分可如經由接頭而與如由本發(fā)明的第十三和第十四方面中的任一者或兩者所定義的肽或多肽或與如由本發(fā)明的第十六方面所定義的融合蛋白間接結合。

316、任選地，該部分可為載體，例如載體蛋白，如選自以下的載體：鑰孔血藍蛋白(klh)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、卵白蛋白(ova)、破傷風類毒素(tt)、白喉類毒素(dt)、經遺傳修飾的白喉類毒素的交叉反應材料(crm)、腦膜炎球菌外膜蛋白復合物(ompc)和流感嗜血桿菌蛋白質d(hid)。

317、本發(fā)明的第十九方面提供至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合，其中該組合包含：

318、(a)根據本發(fā)明的第十八方面的第一綴合物，其中該第一綴合物包含與肽或多肽綴合的部分、基本上由其組成或由其組成，其中該肽或多肽包含序列tdvlnqskpvtl(seq?idno:177)或其免疫原性片段或變體、基本上由其組成或由其組成；以及

319、(b)根據本發(fā)明的第十八方面的第二綴合物，其中該第二綴合物包含與肽或多肽綴合的部分、基本上由其組成或由其組成，其中該肽或多肽包含序列tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)或其免疫原性片段或變體、基本上由其組成或由其組成，條件為所述免疫原性片段或變體包括seq?id?no:6的4n氨基酸；或

320、(c)根據本發(fā)明的第十八方面的第二綴合物，其中該第二綴合物包含與肽或多肽綴合的部分、基本上由其組成或由其組成，其中該肽或多肽包含序列tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)或其免疫原性片段或變體、基本上由其組成或由其組成，條件為所述免疫原性片段或變體包括seq?id?no:7的4d氨基酸；并且

321、任選其中所述組合包含第三不同綴合物，并且如果第二綴合物如選項(b)所定義，則第三綴合物對應于選項(c)，或者其中如果第二綴合物如選項(c)所定義，則第三綴合物對應于選項(b)。

322、本發(fā)明的第二十方面提供一種產生根據本發(fā)明的第十九方面的綴合物的方法，該方法包含以下步驟：

323、(a)提供如本發(fā)明的第十三和/或第十四方面中的任一者或兩者所定義的肽或多肽、如本發(fā)明的第十五方面所定義的其組合或如本發(fā)明的第十六方面所定義的融合蛋白；和

324、(b)將部分與其結合。

325、本發(fā)明的第二十一方面提供一種產生如由本發(fā)明的第十九方面所定義的至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合的方法。

326、在一個實施方案中，該方法包括以下步驟：(a)通過根據本發(fā)明的第二十方面的方法提供或產生如由本發(fā)明的第十八方面所定義的第一綴合物；(b)通過根據本發(fā)明的第二十方面的方法提供或產生如由本發(fā)明的第十八方面所定義的第二綴合物(其中第一綴合物與第二綴合物不同)；(c)通過根據本發(fā)明的第二十方面的方法，任選地提供或產生如本發(fā)明得第十八方面所定義的第三綴合物(其中第一綴合物、第二綴合物和第三綴合物不同)和(d)組合第一綴合物和第二綴合物以及任選地第三綴合物，由此形成根據本發(fā)明的第十九方面的組合。

327、在另一個實施方案中，該方法包括以下步驟：(a)提供根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合，或根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合；和(b)使部分與根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合綴合，或與根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合綴合，由此形成根據本發(fā)明的第十九方面的組合。

328、本發(fā)明的第二十或第二十一方面的方法任選包含分離如此產生的綴合物或綴合物的組合的步驟。

329、本發(fā)明的第二十二方面提供通過本發(fā)明的第二十或第二十一方面中的任一者的方法獲得或可通過其獲得的經分離的綴合物或綴合物的組合，任選其中該經分離的綴合物經進一步配制以用于向受試者施用。

330、本發(fā)明的第二十三方面提供核酸分子或多個不同核酸分子的組合，其中核酸分子包含，或多個不同核酸分子的組合共同地包含一個或多個核酸序列，該一個或多個核酸序列單獨地或以組合形式編碼根據本發(fā)明的第十三方面和/或第十四方面中的任一者或兩者的一種或多種肽和/或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白和/或根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合。

331、根據本發(fā)明的第二十三方面的核酸分子或各核酸分子可例如各自獨立地選自dna或rna分子。根據本發(fā)明的第二十三方面的核酸分子或各核酸分子可例如各自獨立地選自單鏈或雙鏈核酸分子。

332、本發(fā)明的第二十四方面提供一種載體，其包含根據本發(fā)明的第二十三方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合?？墒褂萌魏屋d體，盡管(但不限于)該載體可任選選自：逆轉錄病毒載體、質體、慢病毒載體和腺病毒載體。

333、本發(fā)明的第二十五方面提供一種細胞，其包含根據本發(fā)明的第二十三方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合或根據本發(fā)明的第二十四方面的載體。任選地，該細胞表達選自本發(fā)明的第十三方面和/或第十四方面中的任一者或兩者的一種或多種肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白和/或根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合。

334、本發(fā)明的第二十六方面提供一種細胞，其暴露于和/或包含一個或多個選自本發(fā)明的第十三和/或第十四方面中的任一者或兩者的肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白和/或根據本發(fā)明第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合、根據本發(fā)明的第十八方面的綴合物、根據本發(fā)明的第十九方面的至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合、根據本發(fā)明的第二十三方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第二十四方面的載體。

335、本發(fā)明的第二十七方面提供一種分離和/或富集包含t細胞受體(tcr)的細胞的方法，該t細胞受體對us28的ecd1中的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位(和任選地ecd3中的第二表位)具有特異性(例如天然存在的t細胞，或表達根據本發(fā)明的第一方面的car的重組細胞，例如car?t細胞、car?nk細胞和/或car巨噬細胞)，其中該方法包含使用一種或多種試劑分離和/或富集對seq?id?no:177或其免疫原性片段的序列具有結合特異性并且任選地還對seq?id?no:6和/或7或其免疫原性片段的序列中的一個或兩個具有結合特異性的細胞的步驟，

336、其中一種或多種試劑為或選自由以下組成的群組：根據本發(fā)明的第十三方面和/或第十四方面中任一者或兩者的肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白和/或根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合、根據本發(fā)明的第十八方面的綴合物和/或根據本發(fā)明的第十九方面的至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合。

337、在本發(fā)明的第二十七方面的方法的一個實施方案中，可將序列配制為mhc四聚體，例如用于抗原特異性cd8+t細胞檢測的i類mhc四聚體、用于抗原特異性cd4+t細胞檢測的ii類mhc四聚體或用于流式細胞術或熒光顯微術的熒光團標記四聚體。任選地，t細胞可選自：cd8+t細胞、cd4+t細胞、效應t細胞、輔助t細胞、記憶t細胞、細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、ebv特異性t細胞受體(tcr)或γδ-t細胞亞型。

338、本發(fā)明的第二十八方面提供一種mhc四聚體，其包含根據本發(fā)明的第十三方面和/或第十四方面中的任一者或兩者的肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合，任選其中該肽或每種肽包含或對應于seq?id?no:177、seqid?no:6和/或seq?id?no:7，或任一者或兩者的免疫原性片段，例如其中該mhc四聚體為用于抗原特異性cd8+t細胞檢測的i類mhc四聚體、用于抗原特異性cd4+t細胞檢測的ii類mhc四聚體、用于流式細胞術或熒光顯微術的熒光團標記四聚體。mhc四聚體可進一步用于分離和/或富集包含對us28的ecd1和/或ecd3中的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有特異性的t細胞受體(tcr)的細胞，例如選自由以下組成的群組的t細胞：cd8+t細胞、cd4+t細胞、效應t細胞、輔助t細胞、記憶t細胞、細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、ebv特異性t細胞受體(tcr)或γδ-t細胞亞型和/或表達根據本發(fā)明的第一方面的car的重組細胞，例如car?t細胞、car?nk細胞和/或car巨噬細胞。

339、本發(fā)明的第二十九方面提供一種疫苗組合物，其適用于針對與人巨細胞病毒(hcmv)相關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低所述疾病或病癥的風險、預防所述疾病或病癥或對抗所述疾病或病癥。疫苗可為主動或被動疫苗。根據本發(fā)明的第二十九方面的主動疫苗可觸發(fā)針對存在于hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位的免疫反應。任選地，主動疫苗還觸發(fā)和/或提供針對存在于hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位的免疫反應。根據本發(fā)明的第二十九方面的被動疫苗可為提供針對第一表位的免疫反應的組合物，該第一表位存在于hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內。任選地，被動疫苗還提供針對存在于hcmv的us28蛋白的ecd3內的第二表位的免疫反應。如上文在本發(fā)明的其他方面的上下文中所討論的，us28蛋白的ecd1、seq?id?no:177和ecd3包含存在于由hcmv病毒株編碼的位于如下位置處的us28蛋白中的氨基酸序列、基本上由其組成或由其組成，所述位置分別對應于由如seq?id?no:5中所闡述的人巨細胞病毒(hcmv)db病毒株編碼的us28蛋白的位置1至37、26至37和167至183。

340、在一些實施方案中，本發(fā)明的第二十九方面的疫苗組合物針對以下觸發(fā)和/或提供免疫反應：

341、(a)完全存在于hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的一個或多個表位，和/或完全存在于hcmv的us28蛋白的ecd3內的一個或多個表位；

342、(b)hcmv的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的一個或多個線性表位，和/或存在于hcmv的us28蛋白的ecd3內的一個或多個線性表位；

343、(c)hcmv的us28蛋白的ecd3內的一個或多個表位，其為以相同形式存在于hcmv的所述4d變異株和所述4n變異株兩者中的一個表位或多個表位，其中hcmv的該4d變異株編碼包含具有tkkdnqcmtdydylevs(seq?id?no:7)的序列的ecd3的us28蛋白，且其中hcmv的該4n變異株編碼包含具有tkknnqcmtdydylevs(seq?id?no:6)的序列的ecd3的us28蛋白；

344、(d)其中由疫苗觸發(fā)或提供的免疫反應對于展示在ecd1的位置1至25的區(qū)中的一個或多個位置中的病毒株間序列變異(如位置8、15、18、19、24、25中的任何一個或多個，包括但不限于本技術的表3中列出的序列變異)的多個hcmv病毒株不可知，例如，其中所述多種病毒株為選自由以下組成的群組的至少兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種或十種不同的病毒株：db、toledo、towne、vr1814、tb40/e、merlin、ad169、vhl/e、davis和bl；和/或

345、(e)其中由疫苗觸發(fā)或提供的免疫反應為對于hcmv的4d變異株和4n變異株是不可知的hcmv病毒株，且觸發(fā)和/或提供針對選自towne、vr1814、tb40/e、merlin、jp、ad169、vhl/e、bl、af1和davis的所述4d變異hcmv病毒株中的一種或多種且還針對選自toledo,tr和db的所述4n變異hcmv病毒株中的一種或多種的免疫反應。

346、該疫苗組合物可為被動疫苗，和/或任選包含：(a)根據本發(fā)明的第一方面的一個或多個結合分子，(b)如由本發(fā)明的第一方面所定義的該一個或多個結合分子的功能片段，(c)根據本發(fā)明的第七方面的一個或多個經分離的結合分子，(d)根據本發(fā)明的第二方面的一個或多個核酸分子或多個不同核酸分子的組合，(e)根據本發(fā)明的第三方面的一種或多種載體，(f)根據本發(fā)明的第四方面的一種或多種細胞，(g)根據本發(fā)明的第八方面的一種或多種綴合物，和/或(h)根據本發(fā)明的第十方面的一種或多種經分離的綴合物。

347、替代地，該疫苗組合物可為主動疫苗，和/或任選包含：

348、(a)根據本發(fā)明的第十三方面和/或第十四方面中任一者或兩者的一種或多種肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白、根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合、根據本發(fā)明的第十八方面的綴合物和/或根據本發(fā)明的第十九方面的至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合；

349、(b)根據本發(fā)明的第二十三方面的一個或多個核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第二十四方面的載體；和/或

350、(c)細胞，如抗原呈遞細胞(例如樹突狀細胞)，或所述細胞的均質或異質群體，其中所述細胞或所述細胞中的每一種負載有以下中的一種或多種：根據本發(fā)明的第十三和/或第十四方面中的任一者或兩者的肽或多肽、根據本發(fā)明的第十五方面的至少兩種(例如，三種)不同肽和/或多肽的組合、根據本發(fā)明的第十六方面的融合蛋白、根據本發(fā)明的第十七方面的至少兩種(例如，三種)不同融合蛋白的組合、根據本發(fā)明的第十八方面的綴合物、根據本發(fā)明的第十九方面的至少兩種(例如，三種)不同綴合物的組合、根據本發(fā)明的第二十三方面的一個或多個核酸分子或多個不同核酸分子的組合和/或根據本發(fā)明的第二十四方面的載體。

351、本發(fā)明的第三十方面提供一種針對與hcmv有關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低該疾病或病癥的風險、預防該疾病或病癥和/或對抗該疾病或病癥的方法，該方法包含向受試者施用根據本發(fā)明的第二十九方面的疫苗。

352、本發(fā)明的第三十方面提供根據本發(fā)明的第二十九方面的疫苗，其用于針對受試者的與hcmv有關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低該疾病或病癥的風險、預防該疾病或病癥和/或對抗該疾病或病癥。

353、本發(fā)明的第三十方面提供根據本發(fā)明的第二十九方面的疫苗的用途，其用于制造供針對與hcmv有關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低該疾病或病癥的風險、預防該疾病或病癥和/或對抗該疾病或病癥用的藥物。

354、與hcmv相關的該疾病或病癥可例如為如上文在本發(fā)明第十一方面的情況下所公開的與hcmv相關的疾病或病癥。任選地，疾病或病癥為潛伏hcmv感染，或為與潛伏hcmv感染相關的疾病或病癥。

355、在一些實施方案中，針對與hcmv有關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低該疾病或病癥的風險、預防該疾病或病癥和/或對抗該疾病或病癥的方法可包含僅向受試者施用疫苗一次。

356、在其他實施方案中，針對與hcmv有關的疾病或病癥進行疫苗接種、降低該疾病或病癥的風險、預防該疾病或病癥和/或對抗該疾病或病癥的方法可包含向受試者施用疫苗兩次或多次。舉例而言，在其中疫苗為主動疫苗的實施方案中，可適于向受試者分別施用初始劑量和后續(xù)加強劑量。

357、本發(fā)明的第三十一方面提供一種評定受試者和/或離體生物材料的一種或多種生物條件和/或生物特征的方法，其中該方法包含：(a)使受試者和/或離體生物材料與例如如由本發(fā)明的第一方面所定義的結合分子或例如如由本發(fā)明的第八方面或第十方面所定義的綴合物接觸；和(b)基于結合分子或綴合物與受試者和/或離體生物材料的結合的直接和/或間接測量來評定受試者和/或離體生物材料。

358、在一些實施方案中，評定(其可包括診斷)受試者和/或離體生物材料的一個或多個生物條件和/或生物特征的方法為通過原位雜交(ish)特異性檢測由hcmv編碼的一個或多個核酸序列來進行，最優(yōu)選其中該ish不檢測由健康(即不經hcmv感染)受試者和/或健康離體生物材料編碼的核酸序列。借助于非限制性實例，ish可使用如本技術的實施例中所論述的核酸序列。在一些實施方案中，該生物病癥為癌癥和/或所述生物特征為關于癌癥。在一些實施方案中，該癌癥選自本文所指定的癌癥中的一種或多種，任選其中該癌癥不為膠質母細胞瘤。在一些實施方案中，癌癥選自：乳腺癌(例如her2+乳腺癌或三陰性乳腺癌)、星形細胞瘤、膠質母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腎癌、心臟肉瘤、肝癌和血管平滑肌癌；任選其中該癌癥不為膠質母細胞瘤。

359、在一些實施方案中，評定(其可包括診斷)受試者和/或離體生物材料的一種或多種生物病癥和/或生物特征的方法為通過免疫組織化學(ihc)特異性檢測由hcmv編碼的一個或多個蛋白質序列來進行，最優(yōu)選其中該ihc不檢測由健康(即不感染hcmv)受試者和/或健康離體生物材料編碼的蛋白質序列。在一些實施方案中，ihc使用結合分子，其允許特異性檢測僅由潛伏hcmv感染表達或僅由其表面表達的一種或多種蛋白質序列。在一些實施方案中，ihc使用結合分子，其允許特異性檢測一個或多個僅由裂解hcmv感染表達或僅由其表面表達的蛋白質序列。在一些實施方案中，ihc使用結合分子，其允許特異性檢測由裂解和潛伏hcmv感染兩者表達，例如由其表面表達的一個或多個蛋白質序列。在一些實施方案中，可以執(zhí)行ihc(例如使用尚未透性化細胞的生物組織)以僅允許檢測細胞表面表達的蛋白質。在其他實施方案中，可以執(zhí)行ihc(例如使用已透性化細胞的生物組織)以允許檢測細胞內蛋白質。作為非限制性實例，ihc可以使用基于抗體的分子特異性檢測如本技術的實施例中所論述的由hcmv編碼的一個或多個蛋白質序列，和/或使用本發(fā)明的結合分子中的一種或多種。在一些實施方案中，該生物病癥為癌癥和/或所述生物特征與癌癥相關。在一些實施方案中，該癌癥選自本文所指定的癌癥中的一種或多種，任選其中該癌癥不為膠質母細胞瘤。在一些實施方案中，癌癥選自：乳腺癌(例如her2+乳腺癌或三陰性乳腺癌)、星形細胞瘤、膠質母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腎癌、心臟肉瘤、肝癌和血管平滑肌癌；任選其中該癌癥不為膠質母細胞瘤。

360、其中已由本發(fā)明的第三十二方面確診hcmv感染為陽性的受試者和/或活的離體生物材料可為可根據如本文所描述的本發(fā)明的其他方面處理的示例性受試者和/或材料。

361、本發(fā)明的第三十二方面提供一種對抗活的離體生物材料的hcmv感染(如潛伏hcmv感染和/或裂解hcmv感染和/或多株hcmv感染)的方法，該方法包括使活的離體生物材料與選自以下的任一種或多種試劑接觸：

362、i.根據本發(fā)明的第一方面的結合分子，

363、ii.如本發(fā)明的第一方面所定義的該結合分子的功能片段，

364、iii.根據本發(fā)明的第七方面的經分離的結合分子，

365、iv.根據本發(fā)明的第二方面的核酸分子或多個不同核酸分子的組合，

366、v.根據本發(fā)明的第三方面的載體，

367、vi.根據本發(fā)明的第五方面的細胞，

368、vii.根據本發(fā)明的第八方面的綴合物，和

369、viii.根據本發(fā)明的第十方面的經分離的綴合物。

370、本發(fā)明的第三十二方面還提供通過此方面的方法獲得或可通過其獲得的活的離體生物材料。

371、在本發(fā)明的第三十二方面的方法和/或由此獲得或可由此獲得的活的離體生物材料的一個實施方案中，該離體活生物材料包含選自以下的活的離體生物材料、基本上由其組成或由其組成：一種或多種類型的離體細胞；一種或多種類型的離體細胞培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體組織；一種或多種類型的離體組織培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體類器官；一種或多種類型的離體類器官培養(yǎng)物；一種或多種類型的離體器官；和/或一種或多種類型的離體器官培養(yǎng)物。

372、本發(fā)明的第三十三方面提供一種治療有需要的受試者的方法，其包含向受試者施用如本發(fā)明的第三十二方面所定義的離體活生物材料。

373、舉例而言，該方法可為移植離體活生物材料，如器官移植或組織移植的方法。該方法可用于預防移植受體的hcmv傳播和感染或與hcmv感染相關的疾病或病癥，或降低其風險。

374、本發(fā)明的第三十四方面提供一種篩選結合分子的方法，所述結合分子對人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性和/或結合親和力，該方法包括：

375、(a)提供一種或多種肽或多肽，所述一種或多種肽或多肽包含序列tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)或其免疫原性片段、或基本上由其組成或由其組成，

376、優(yōu)選其中存在于所述一種或多種肽或多肽中的僅us28衍生的序列為seq?id?no:177或其免疫原性片段(如與抗體4h3c3、7b1f3和/或2f5b11所結合的片段)的序列；

377、(b)提供一種或多種候選結合分子；

378、(c)測定一種或多種候選結合分子對所述一種或多種肽的結合特異性和/或結合親和力，由此選擇對由seq?id?no:177的氨基酸序列組成的多肽內的所述第一表位具有結合特異性的一種或多種結合分子；并且

379、任選其中所述方法進一步包括通過另外的方法步驟(其可在步驟(a)-(c)之前或之后進行)篩選所述結合分子對人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的胞外結構域3(ecd3)內的表位的結合特異性，所述另外的方法步驟包括：

380、(i)提供對應于us28蛋白的ecd3中存在的氨基酸序列的一種或多種肽或多肽，

381、優(yōu)選其中存在于所述一種或多種肽中的僅us28衍生的序列為seq?id?no:6和/或7或其免疫原性片段(如與抗體1d3,1c10、1a10、1g9和/或1e8所結合的片段)的序列；

382、(ii)提供一種或多種候選結合分子，任選其中步驟(a)-(c)在步驟(i)-(iii)之前進行，并且其中用于步驟(ii)的所述候選結合分子是步驟(c)的產物；

383、(iii)測定一種或多種候選結合分子與和存在于us28蛋白的ecd3中的氨基酸序列相對應的一種或多種肽或多肽的結合特異性和/或結合親和力，任選其中步驟(a)-(c)在步驟(i)-(iii)之后進行，并且其中步驟(b)的所述候選結合分子為本權利要求的步驟(iii)的產物。

384、本發(fā)明的第三十五方面提供一種產生包含結合分子的多個復本的組合物的方法，該方法包含使得所選候選結合分子復制，該候選結合分子已根據本發(fā)明的第三十四方面的方法經選擇。

385、本發(fā)明的第三十六方面提供一種評定所選候選結合分子的方法，該結合分子已根據本發(fā)明的第三十四方面的方法經選擇和/或根據本發(fā)明的第三十五方面的方法產生，所述方法包括鑒別所選候選結合分子內的結構，該結構提供該候選結合分子結合特征(特別是，與人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位的結合特異性和/或結合親和力，以及任選地與ecd3內的第二表位的結合特異性和/或結合親和力)，例如通過鑒別作為抗體或car的所選候選結合分子中的該cdr序列或每個cdr序列。

386、本發(fā)明的第三十七方面提供一種產生組合物的方法，該組合物包含對人巨細胞病毒(hcmv)的us28蛋白的ecd1內的由tdvlnqskpvtl(seq?id?no:177)的氨基酸序列組成的多肽內的第一表位具有結合特異性和/或結合親和力(和任選地對ecd3內的第二表位具有結合特異性和/或結合親和力)的結合分子的多個復本，其中根據本發(fā)明的第三十六方面的方法，該結合分子包含已在所選候選結合分子內經鑒別為提供其結合特征的結構(例如cdr序列)或此(類)結構中的每一種，該方法包括使結合分子復制。

387、本發(fā)明的第三十七方面進一步提供通過相同方面獲得的結合分子的組合物。