發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及化學(xué)、制藥和醫(yī)療工業(yè)，并且涉及適用于經(jīng)陰道遞送并且用于預(yù)防和治療女性生殖系統(tǒng)的疾病的藥物產(chǎn)品的新的藥物劑型和醫(yī)療裝置的制備，這些疾病包括與由微生物群失衡引起的細(xì)菌、真菌和病毒感染以及月經(jīng)周期障礙、生殖器官的良性和惡性腫瘤、子宮頸中的增生性和營(yíng)養(yǎng)不良性變化、性功能障礙、生殖功能障礙、月經(jīng)功能障礙相關(guān)的那些。本發(fā)明還涉及用于各種活性成分的經(jīng)陰道遞送的方法。更具體地，本發(fā)明涉及制備用于經(jīng)陰道遞送活性成分的冷凍結(jié)構(gòu)化(cryostructured)藥物劑型。

背景技術(shù)：

0、現(xiàn)有技術(shù)

1、女性生殖系統(tǒng)的感染性疾病(包括細(xì)菌性陰道病、念珠菌病、病毒感染以及陰道失調(diào)(dysbioses))是每個(gè)女性在其一生期間在某個(gè)時(shí)間點(diǎn)面臨的最常見(jiàn)病癥之一。全身抗微生物劑和局部藥劑(包括陰道片劑、膠囊劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑和溶液劑)兩者均用于治療。此外，局部抗生素療法相比于口服施用是優(yōu)選的，因?yàn)槠浣档土瞬涣际录透弊饔玫娘L(fēng)險(xiǎn)并且增加了抗微生物劑的局部濃度。然而，從現(xiàn)有技術(shù)已知的局部劑型，諸如栓劑、軟膏劑、凝膠劑、溶液劑等，其特征在于與其使用不方便、粘膜刺激、瘙癢、灼熱等相關(guān)的缺點(diǎn)，導(dǎo)致對(duì)治療方案的不依從性，這限制了其使用并且通常決定了有利于全身施用的選擇。

2、陰道解剖學(xué)的特征(開(kāi)放式細(xì)長(zhǎng)腔，類似于大約10-12cm長(zhǎng)和直徑為3-4cm的管)[nara?gevorkovna?zatikyan?anatomy?of?the?vagina?https://vmc.clinic/news/30/62/anatomiya-vlagalischa/d,article/]、粘膜的組織學(xué)結(jié)構(gòu)(確保陰道腔內(nèi)容物的連續(xù)排出，所謂的“自清潔”作用)、陰道分泌物的生物學(xué)性質(zhì)(高粘度和低體積)[andersonb.l.,cu-uvin?s.,raker?c.a.等人subtle?perturbations?of?genital?microfloraalter?mucosal?immunity?among?low-risk?pregnant?women//actaobstet.gynecol.scand.2011.第90卷,第5期.第510頁(yè).]，顯著限制了用于基于傳統(tǒng)劑型(片劑、膠囊劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑和溶液劑)的經(jīng)陰道施用的藥物的有效性。

3、固體形式的限制與陰道中的次優(yōu)溶出曲線和治療劑的表面分布有關(guān)。由于陰道中流體的小體積(最高達(dá)1.5ml)，固體形式無(wú)法在陰道粘膜的整個(gè)表面上均勻地提供所需濃度的所給予的活性物質(zhì)或細(xì)菌。在片劑或膠囊劑的施用部位處存在過(guò)量的物質(zhì)，然而，其不進(jìn)一步分布在整個(gè)粘膜上，僅留在施用部位處。因此，在治療期間，患者可能經(jīng)歷陰道干燥和片劑崩解或膠囊劑溶解、或膠囊劑的溶解和其中含有的活性物質(zhì)的溶解所需的內(nèi)部液體的缺乏。有時(shí)，具有活性成分的膠囊劑或片劑可能從陰道中掉落而不崩解，這不利地影響治療的有效性。關(guān)于未溶解的膠囊劑的信息通?？梢栽诋a(chǎn)品網(wǎng)站或相應(yīng)藥物的在線分銷(xiāo)商上的消費(fèi)者評(píng)論中找到(例如，在florafemme陰道內(nèi)膠囊劑[https://www.amazon.com/florafemme-probiotic-suppository-an?tibiotics-prevention/dp/b007hwmi6s]、lactogynal[https://03online.com/news/ne_rastvorilas_kapsula_laktozhinal/2018-1-1-373606https://irecommend.ru/content/bespoleznaya-trata-deneg-131]、lactonorm[https://03online.com/news/ne_rastvoryaetsya_laktonorm/2021-3-23-963866]、fluomizin陰道片劑[https://health.mail.ru/consultation/2674492/https://www.babyblog.ru/com?munity/living/post/3182205]的評(píng)論中)。

4、半固體劑型，例如，栓劑，在治療劑(包括益生菌和抗微生物劑)在整個(gè)陰道黏膜中的均勻分布方面更優(yōu)；然而，在體溫下融化的栓劑團(tuán)塊或軟膏劑基質(zhì)通常從陰道泄漏。含有抗微生物劑的凝膠劑和溶液劑的使用確保在整個(gè)陰道粘膜上的更均勻分布；然而，這些形式也容易泄漏，要求在施用前后保持水平位置，這降低了對(duì)治療的依從性，并且，因此，降低了療法的有效性。此外，半固體劑型的脂肪或基質(zhì)在引入廣泛范圍的親水性物質(zhì)或細(xì)菌方面具有局限性，并且水性基質(zhì)在引入其組合物中的活性物質(zhì)的穩(wěn)定性方面具有局限性并且要求同時(shí)引入防腐劑，這不利地影響陰道的生理學(xué)。

5、因此，用于藥物物質(zhì)和益生菌微生物的陰道內(nèi)施用的常規(guī)固體和半固體劑型的使用與不利地影響療法的有效性、易用性和患者對(duì)療法的長(zhǎng)療程的依從性的許多問(wèn)題相關(guān)。許多患者未完成啟動(dòng)的治療。

6、考慮到陰道的生理學(xué)和形態(tài)學(xué)特征和同時(shí)具有固體劑型的優(yōu)點(diǎn)(在儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性、對(duì)于各種治療劑的通用性、施用的容易性和方便性、定量施用的準(zhǔn)確性)和半固體劑型的優(yōu)點(diǎn)(治療劑在整個(gè)陰道粘膜上的最佳和均勻分布、舒適感)，相關(guān)的是開(kāi)發(fā)用于活性成分的陰道內(nèi)施用的專用劑型。這樣的劑型應(yīng)當(dāng)在施用之后在陰道環(huán)境中創(chuàng)建在生理學(xué)上有利的條件(例如，ph、同滲重量摩爾濃度)以減少在注射部位處的不良反應(yīng)，諸如灼熱、瘙癢、刺激和腫脹。還優(yōu)選的是在抗微生物療法期間和之后維持健康的陰道微生物組，例如，通過(guò)使用為陰道乳桿菌提供營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境并且不是機(jī)會(huì)性微生物群落的生長(zhǎng)底物的選擇性益生元。

7、用于創(chuàng)建這樣的劑型的方向之一是開(kāi)發(fā)呈片劑和插入物的形式的冷凍結(jié)構(gòu)化凍干陰道劑型。與所要求保護(hù)的發(fā)明的組最接近的解決方案是以下陰道內(nèi)劑型。

8、陰道劑型提供于文章(b.vitali等人vitali等人association?of?lactobacilluscrispatus?with?fructo-oligosaccharides?and?ascorbic?acid?in?hydroxypropylmethylcellulose?vaginal?insert/carbohydrate?polymers?136(2016)1161-1169)中，其描述了呈陰道插入物(insert)的形式的益生菌劑，其是羥丙基甲基纖維素(hpmc)基質(zhì)，作為含有脫脂奶粉、低聚果糖、抗壞血酸和卷曲乳桿菌(l.crispatus)乳桿菌的結(jié)構(gòu)和粘膜粘附劑聚合物。所提供的益生菌裝置通過(guò)將成分溶解在水中、冷凍和冷凍干燥來(lái)制備。呈干燥形式時(shí)，裝置是具有8.0-8.7mm的直徑和22-24mm長(zhǎng)的多孔圓柱體。當(dāng)置于水性溶液中時(shí)，陰道插入物吸收水，體積增加五倍。溶脹的裝置能夠逐漸釋放包封的乳桿菌。該陰道插入物的缺點(diǎn)是，由于使用hpmc作為結(jié)構(gòu)聚合物，基質(zhì)對(duì)水的吸收緩慢(最長(zhǎng)達(dá)3-4小時(shí))，與所要求保護(hù)的裝置相比，其可以導(dǎo)致治療效果的更緩慢起效，特別是在陰道中流體的小體積的條件下，并且不能根本上解決插入物在陰道插入后的緩慢崩解的問(wèn)題。

9、abruzzo,a.,bigucci,f.,cerchiara,t.,saladini,b.,gallucci,m.c.,cruciani,f.,等人(2013).的文章chitosan/alginate?complexes?for?vaginal?deliveryof?chlorhexidine?gluconate.carbohydrate?polymers,91(2),651-658描述了作為結(jié)構(gòu)基質(zhì)的基于殼聚糖和藻酸鹽的聚電解質(zhì)復(fù)合物、增強(qiáng)冷凍干產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的甘露糖醇和二葡萄糖酸氯己定的凍干陰道插入物。該解決方案的缺點(diǎn)是使用聚電解質(zhì)復(fù)合物作為結(jié)構(gòu)組分，從功能的角度來(lái)看，與中性基質(zhì)相比，由于與治療劑離子的基質(zhì)的靜電相互作用，其顯著地延遲了治療劑的釋放(在6小時(shí)內(nèi)不超過(guò)20-30％)。此外，與以上所描述的解決方案和所要求保護(hù)的解決方案相比，該解決方案的特征在于用于制備插入物的方法更復(fù)雜。

10、與所要求保護(hù)的發(fā)明的組最接近的解決方案是呈凍干片劑的形式的藥物組合物和基于其的陰道遞送裝置(wo?2018/069888)，其含有作為主要粘膜粘附劑組分的明膠(單獨(dú)地或與其他粘膜粘附劑聚合物組合)、作為結(jié)構(gòu)組分的甘露糖醇、用于為陰道環(huán)境創(chuàng)建最佳值的ph調(diào)節(jié)劑和作為治療劑的阿昔洛韋。所描述的形式的特征在于多孔結(jié)構(gòu)，在少于兩分鐘內(nèi)在水和水性溶液中快速溶脹和崩解。片劑通過(guò)將明膠和甘露糖醇溶解在水性溶液中，將治療性組分溶解或分散在所得溶液中，填充到形式中并且隨后凍干來(lái)制備。片劑的水合和崩解需要少于1ml的液體，這是經(jīng)陰道遞送的最佳量并且解決了陰道片劑的緩慢崩解的問(wèn)題。該形式具有優(yōu)于旨在用于治療劑的局部陰道遞送的已知形式(片劑)的許多優(yōu)點(diǎn)；其在陰道內(nèi)施用期間提供治療劑的更可預(yù)測(cè)的吸收劑量，但由于相對(duì)小的尺寸，與半固體劑型(凝膠劑、軟膏劑、栓劑)相比，對(duì)于治療劑在整個(gè)陰道粘膜的表面上的局部遞送和均勻分布不太有效。此外，與其他形式相比，干燥片劑的施用不太方便和符合生理學(xué)，并且使片劑濕潤(rùn)以促進(jìn)施用的可能性受到與水性溶液接觸后其快速崩解的限制。含明膠的陰道內(nèi)劑型的重要缺點(diǎn)是該蛋白質(zhì)物質(zhì)，即明膠可以充當(dāng)致病微生物群落(如果存在的話)的可利用的底物，而陰道內(nèi)乳桿菌不消耗明膠。因此，將這樣的片劑施用到陰道中將促進(jìn)不期望的微生物的生長(zhǎng)。

11、由所要求保護(hù)的本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是開(kāi)發(fā)新的基質(zhì)形式(無(wú)治療劑的裝置)和劑型(含有具有治療劑的基質(zhì)的裝置)，旨在用于在預(yù)防和治療與由微生物群的失衡引起的細(xì)菌、真菌和病毒感染相關(guān)的女性生殖系統(tǒng)的疾病中的陰道施用，并且確保有效遞送、陰道中的快速崩解、治療劑在陰道腔中的最大和均勻分布、從陰道腔的不顯著的泄漏、增加療法的有效性的足夠的暴露時(shí)間，同時(shí)確保裝置的生理性和方便使用，這增加對(duì)療法的依從性。

12、發(fā)明概述

13、發(fā)明的組的技術(shù)結(jié)果是基于使用可生物降解的多糖作為結(jié)構(gòu)組分制備用于經(jīng)陰道施用的固體劑型(裝置)，其具有以下一組性質(zhì)和特征，這些性質(zhì)和特征在確保裝置易于使用的同時(shí)增加療法的有效性：

14、1)在初始狀態(tài)下(在將裝置插入陰道中之前在與水或水性溶液接觸之前)，裝置具有穩(wěn)定的固體形式，例如，類似于衛(wèi)生棉條，便于插入陰道中；

15、2)與水或水性溶液相互作用后，裝置被有效地潤(rùn)濕，形成三維水凝膠結(jié)構(gòu)，同時(shí)保持其原始形狀持續(xù)最長(zhǎng)達(dá)5分鐘，確保裝置手動(dòng)地或使用合適的施用器(applicator)裝置衛(wèi)生地插入陰道腔中；

16、3)在隨后的陰道內(nèi)機(jī)械作用(由于陰道壁的生理學(xué)彈性而壓縮)下，水凝膠崩解形成確保治療劑在陰道腔中的均勻分布的凝膠狀團(tuán)塊；

17、4)裝置的特征在于對(duì)陰道上皮壁的必要粘附，向治療劑在陰道腔中提供足夠的暴露時(shí)間；

18、5)裝置的特征在于處于初始狀態(tài)(在與水或水性溶液接觸之前)下的結(jié)構(gòu)強(qiáng)度，并且為裝置插入之后陰道微生物群落的乳桿菌提供營(yíng)養(yǎng)支持；

19、6)當(dāng)使裝置在水中潤(rùn)濕時(shí)，確保ph水平在ph?4.5±0.6內(nèi)。

20、表1中更詳細(xì)地提供了所要求保護(hù)的用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置的參數(shù)。

21、表1.

22、

23、

24、技術(shù)結(jié)果通過(guò)使用用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置(或醫(yī)療裝置)來(lái)實(shí)現(xiàn)，該裝置是基于生物聚合物基質(zhì)的新的藥物劑型。實(shí)施方案之一中的裝置可以不含有活性成分，即可以是未填充的生物聚合物基質(zhì)，其也可以被用作成品治療活性醫(yī)療裝置。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，裝置是含有一種或多種活性成分的生物聚合物基質(zhì)，其中活性成分可以在制備裝置的初始階段被引入基質(zhì)中：當(dāng)在冷凍和冷凍干燥之前將基質(zhì)組分與活性成分混合時(shí)，以及在制備的后續(xù)階段或使用成品產(chǎn)品時(shí)。

25、用于制備用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置的組合物，以及所述裝置，其是無(wú)活性成分的生物聚合物基質(zhì)，包含至少一種選自由在陰道腔中可生物降解的多糖組成的組的結(jié)構(gòu)多糖、至少一種粘膜粘附劑組分和至少一種ph調(diào)節(jié)劑(其是有機(jī)酸)。組合物和裝置還可以包含選擇性微生物底物。

26、用于制備用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置的組合物和所述裝置可以包含至少一種治療有效量的活性成分?；钚猿煞挚梢赃x自由以下組成的組：抗細(xì)菌劑(包括巨噬細(xì)胞)、和/或防腐劑、和/或抗真菌劑、和/或抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑，以及激素、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑、旨在用于陰道內(nèi)施用的疫苗。此外，益生菌微生物，包括乳桿菌，用于陰道內(nèi)施用的益生菌微生物的群落(consortia)可以用作活性成分，其中微生物的選擇性底物可以另外地包含在組合物和裝置中。

27、用于制備所要求保護(hù)的裝置的初始組合物的制劑和所得裝置的組成的可能的選項(xiàng)提供于表2中。

28、表2.

29、

30、

31、結(jié)構(gòu)多糖選自由以下組成的組：在陰道腔中可生物降解的多糖、優(yōu)選地其中葡萄糖分子主要通過(guò)α-(1→4)和α-(1→6)糖苷鍵彼此連接的多糖，例如，淀粉、支鏈淀粉、糊精、聚右旋糖。

32、粘膜粘附劑組分可以選自由羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、透明質(zhì)酸、瓜爾膠或黃原膠組成的組。

33、作為有機(jī)酸，可以使用適用于陰道內(nèi)施用的酸，包括抗壞血酸、丙酮酸、蘋(píng)果酸、乳酸或琥珀酸等。

34、選擇性底物優(yōu)選地選自由以下組成的組：在陰道腔中可生物降解的寡糖，優(yōu)選地用于陰道內(nèi)乳桿菌，其鏈含有約2-20個(gè)單糖單元，例如，乳果糖、棉子糖、麥芽糖糊精、低聚果糖、低聚異麥芽糖、菊粉、糖原。

35、用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置被設(shè)計(jì)為體積大、橢圓形、固體的干燥主體，在一個(gè)實(shí)施方案中，其可以類似于女性衛(wèi)生棉條的形狀。裝置由可生物降解的多糖制備并且其特征在于表1中所提供的參數(shù)，包括能夠以填充互連(連通)大孔的內(nèi)部體積所需的量吸收液體(水性溶液)，形成水凝膠，該水凝膠保持其初始形狀持續(xù)一定時(shí)間(最長(zhǎng)達(dá)5分鐘)，并且所述裝置的特征在于足以將裝置插入陰道腔中的強(qiáng)度。

36、所要求保護(hù)的發(fā)明的組還包括：

37、制備用于經(jīng)陰道施用的治療劑的方法，其包括制備初始組合物成分的水性溶液，將其混合，使所得混合物在選自-15℃至-30℃的范圍的溫度下冷凍3-18小時(shí)，隨后冷凍干燥。

38、用于陰道內(nèi)遞送用于治療和/或預(yù)防女性生殖系統(tǒng)的疾病的活性成分的方法包括將所得裝置插入陰道中，其中裝置在被插入陰道中之前被預(yù)先保持(最長(zhǎng)達(dá)5分鐘)用水或水性溶液浸泡，直到形成水凝膠。女性生殖系統(tǒng)疾病包括細(xì)菌性陰道?。换撔匝仔约膊?外陰炎、陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、子宮附件炎、盆腔腹膜炎)、性傳播感染(淋病、滴蟲(chóng)病、衣原體病、脲原體病、念珠菌病、生殖器皰疹、乳頭瘤病毒感染、巨細(xì)胞病毒感染、hiv感染)、生殖器官的良性和惡性腫瘤、肌瘤、子宮頸增生性和營(yíng)養(yǎng)不良性變化(糜爛和假性糜爛)、性功能障礙(性交期間疼痛)、生殖功能障礙(流產(chǎn)、早產(chǎn)、不孕)、月經(jīng)功能障礙(月經(jīng)過(guò)少或月經(jīng)過(guò)多、閉經(jīng)、經(jīng)血過(guò)多、痛經(jīng)、無(wú)排卵)等。

39、聚合物組合物(基于其制備所要求保護(hù)的裝置(醫(yī)療裝置))的成分的組成和濃度通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)并且由以下因素確定。

40、選擇一類其中葡萄糖分子通過(guò)α-(1→4)和α-(1→6)糖苷鍵彼此連接的多糖，一方面由于它們的生物相容性和缺乏對(duì)粘膜的刺激，以及被陰道乳桿菌的可生物降解性。天然淀粉(例如，玉米、馬鈴薯、木薯淀粉、西米等)或可生物降解的改性淀粉的使用被設(shè)想為結(jié)構(gòu)多糖。例如，糖原(植物淀粉的最接近的結(jié)構(gòu)類似物)是陰道乳桿菌菌群的主要營(yíng)養(yǎng)底物。與陰道的病原微生物不同，乳桿菌能夠發(fā)酵淀粉，并且因此其是乳桿菌的選擇性益生元。由于基質(zhì)的不可生物降解性，使用其他類別的生物相容性多糖作為結(jié)構(gòu)組分(例如，一些基于纖維素的聚合物)不導(dǎo)致包封的治療劑的有效釋放。

41、這樣的組合物中結(jié)構(gòu)多糖的所要求保護(hù)的濃度范圍在40至100mg/ml的范圍內(nèi)。在該組分低于40mg/ml的值下，在冷凍干燥期間經(jīng)常發(fā)生樣品的不期望的裂解，并且在高于100mg/ml的濃度下，初始聚合物組合物的粘度大大增加，這在操控其時(shí)造成技術(shù)困難，尤其是在包括在聚合物基質(zhì)中的不溶性組分(例如，乳桿菌、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑)的均勻分布方面。對(duì)于所得基質(zhì)的性質(zhì)，規(guī)定的極限也是最優(yōu)的。在結(jié)構(gòu)多糖的低濃度下，形成具有低強(qiáng)度的水凝膠；在該組分的高含量下，對(duì)于陰道內(nèi)的有效降解，水凝膠的強(qiáng)度過(guò)高。

42、為了確保水凝膠顆粒在陰道腔中的長(zhǎng)時(shí)間保留，劑型組合物包括至少一種粘膜粘附劑聚合物。將粘膜粘附劑組分引入裝置的組合物中改善對(duì)陰道上皮的粘附，這在丙烯酰胺凝膠上的模型實(shí)驗(yàn)期間得到證明。多糖性質(zhì)的物質(zhì)，包括羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、透明質(zhì)酸、明膠、瓊脂糖、藻酸鈉、瓜爾膠和黃原膠，在實(shí)驗(yàn)中被用作粘膜粘附劑組分。在具有結(jié)構(gòu)多糖和選擇性底物的組合物中的最佳粘合性質(zhì)由羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、透明質(zhì)酸和瓜爾膠展現(xiàn)，前兩種聚合物不是生物可吸收的多糖并且將隨著天然分泌物從女性身體逐漸消除，透明質(zhì)酸和瓜爾膠是可被位于陰道腔中的酶生物降解的。

43、對(duì)于各種添加劑，該組分的最佳量是10-40mg/1ml初始組合物中的水或水性溶液或150-300mg/1g最終產(chǎn)品，通過(guò)實(shí)驗(yàn)選擇干燥的冷凍結(jié)構(gòu)化形式。使用更少量的該組分導(dǎo)致所提出的裝置的弱粘膜粘附劑性質(zhì)。由于制備的聚合物溶液在冷凍結(jié)構(gòu)化之前的粘度的工藝限制，使用更大量的粘膜粘附劑組分(超過(guò)所提供的范圍的規(guī)定的上限)使得難以將其引入組合物中。

44、為了達(dá)到陰道內(nèi)環(huán)境的生理學(xué)酸度，在基質(zhì)中使用有機(jī)酸，特別是抗壞血酸、丙酮酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸、乳酸等，以確保在用水使干劑型潤(rùn)濕之后的ph在ph?4.5±0.6內(nèi)所必需的量。由于在使用裝置時(shí)這些特定的酸在所要求保護(hù)的裝置中的固相狀態(tài)、在凍干期間的非揮發(fā)性、低吸濕性和在水性環(huán)境中的快速溶解性，因此選擇這些特定的酸。這些酸的濃度范圍由凍干之前組合物的酸度通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定，其必須符合在以上值內(nèi)。

45、除了被乳桿菌可生物降解的結(jié)構(gòu)形成劑之外，基于寡糖的裝置的組合物中選擇性底物的存在確保在抗生素療法期間在引入益生菌培養(yǎng)物或乳桿菌池的益生元載體之后乳桿菌的快速生長(zhǎng)。已知ф多糖的分子量影響乳桿菌的發(fā)酵速率。此外，更短的多糖和寡糖優(yōu)于更長(zhǎng)的聚合物鏈。在另一方面，將顯著量的二糖引入生物聚合物基質(zhì)中在形成具有良好機(jī)械性質(zhì)的凝膠結(jié)構(gòu)方面被證明是次優(yōu)的。因此，作為所進(jìn)行的研究的結(jié)果，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定寡糖的最佳鏈長(zhǎng)是每條鏈約2-20個(gè)單糖單元，產(chǎn)生干燥形式的更強(qiáng)的結(jié)構(gòu)，確保其制備的便利性。與無(wú)寡糖的基質(zhì)相比，該鏈長(zhǎng)的寡糖的引入確保乳桿菌的快速生長(zhǎng)。因此，與所引入的二糖(例如，麥芽糖和乳果糖)不同，裝置保持其具有指定的機(jī)械性質(zhì)的固體凝膠結(jié)構(gòu)。在所要求保護(hù)的技術(shù)方案中，選自乳果糖、棉子糖、麥芽糖糊精、低聚果糖、低聚異麥芽糖和菊粉的組的寡糖被用作陰道內(nèi)乳桿菌的選擇性底物。還有可能另外地引入糖原。在初始組合物中底物的最佳量是10-40mg/1ml水或水性溶液，在成品干冷凍結(jié)構(gòu)化形式中的最佳量是100至250mg/1g裝置，這確保乳桿菌培養(yǎng)物(例如，卷曲乳桿菌)的最佳生長(zhǎng)而不損害裝置的機(jī)械性質(zhì)。實(shí)驗(yàn)表明，在小于20mg/ml的底物含量下，相應(yīng)的乳桿菌的增殖速率下降，并且在高于40mg/ml的底物濃度下，在凍干樣品潤(rùn)濕之后觀察到水凝膠強(qiáng)度下降，這可能是由于結(jié)構(gòu)聚合物的鏈與底物之間的相互作用以及由水凝膠內(nèi)溶解的底物所產(chǎn)生的高滲透壓兩者。

46、在所要求保護(hù)的技術(shù)方案中，優(yōu)選地從陰道菌株獲得的各種乳桿菌可以作為治療劑以1×106-1×109cfu/cm3裝置的劑量使用。在用于陰道內(nèi)施用的各種益生菌制劑中，所使用的益生菌的單劑量通常是108至109cfu。因此，在這些范圍內(nèi)的強(qiáng)度可以被認(rèn)為對(duì)于實(shí)現(xiàn)臨床上顯著的效果是最佳的。在選擇初始組合物和裝置中藥物物質(zhì)的含量的范圍時(shí)，考慮了用于陰道內(nèi)施用的藥物產(chǎn)品中所使用的通常的強(qiáng)度。因此，根據(jù)裝置的尺寸和體積，所施用的藥物物質(zhì)的劑量將不超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)婦科實(shí)踐中所使用的這些物質(zhì)的劑量。

47、可取的是將裝置制備為橢圓形主體，其例如可以類似于女性衛(wèi)生棉條。由于易于在器官內(nèi)插入和定位、良好的保留性和女性的舒適性，該形式在女性衛(wèi)生裝置中已經(jīng)很好地證明了自己。因此，本發(fā)明允許制備任何形狀和尺寸的裝置而無(wú)技術(shù)上的顯著改變。

48、為了確保治療劑在聚合物基質(zhì)中的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，在整個(gè)儲(chǔ)存期間水的存在是不期望的。使用凍干來(lái)去除水，這導(dǎo)致固體、剛性、多孔結(jié)構(gòu)的形成。生物聚合物基質(zhì)的該結(jié)構(gòu)由結(jié)構(gòu)生物聚合物形成，該結(jié)構(gòu)生物聚合物隨后在水中使冷凍干燥的基質(zhì)潤(rùn)濕時(shí)不完全地溶解，但形成具有內(nèi)部結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定外部形狀的水凝膠。因此，當(dāng)溶液被冷凍隨后冷凍干燥時(shí)，生物聚合物溶液經(jīng)歷冷凍結(jié)構(gòu)化。由α-糖苷鍵連接的基于葡萄糖的結(jié)構(gòu)生物聚合物(例如，淀粉)的溶液由于冷凍處理而形成凝膠(冷凍凝膠(cryogel))，并且因此，可以被用作結(jié)構(gòu)形成劑。同時(shí)，例如，羥丙基甲基纖維素溶液不由于冷凍處理而形成凝膠。在使基質(zhì)冷凍干燥和重新潤(rùn)濕之后，羥丙基甲基纖維素溶液完全地溶解在水中，這不允許使用含有這樣的結(jié)構(gòu)形成劑的裝置用于在無(wú)注射器的情況下插入陰道中。呈干燥形式的這樣的裝置的插入極其困難，不舒適，并且還可以對(duì)陰道壁具有創(chuàng)傷性。

49、由于生物聚合物基質(zhì)的高孔隙率和海綿樣結(jié)構(gòu)，當(dāng)裝置用水潤(rùn)濕時(shí)，其迅速地吸收水，其因此變成所引入的治療劑溶解或分散在其中的液體的貯存器，確保治療劑的釋放。該性質(zhì)有利地將所要求保護(hù)的裝置的使用與其他固體劑型諸如片劑或膠囊劑區(qū)分開(kāi)，所述其他固體劑型在插入陰道中之后緩慢地溶解在有限量的陰道液中，而不確保活性成分在器官的整個(gè)內(nèi)表面上的均勻分布。因此，由于生物聚合物基質(zhì)組分的定性和定量組合物的使用，由于所要求保護(hù)的裝置在其插入陰道中之前的預(yù)先潤(rùn)濕，水凝膠形成，其保持初始固體裝置的形狀并且具有光滑的表面，這確保其舒適地插入陰道腔中。因此，所得水凝膠的機(jī)械性質(zhì)(在壓縮破碎期間的斷裂應(yīng)力極限，參見(jiàn)表1)足以方便衛(wèi)生地插入陰道中，例如，使用陰道施用器。在插入陰道腔中之后，水凝膠由于來(lái)自具有生理學(xué)彈性的陰道壁的剪切應(yīng)力作用在其上而變形，逐漸轉(zhuǎn)變成常規(guī)(軟)凝膠的稠度，均勻地覆蓋粘膜的表面，而不從陰道腔泄漏。更低的斷裂應(yīng)力值導(dǎo)致裝置在手或施用器中潤(rùn)濕后所形成的水凝膠的破壞，這使得難以或不可能插入陰道中。更高的水平不提供水凝膠在陰道中的快速變形和轉(zhuǎn)變?yōu)檐浤z的稠度，這減緩治療劑的釋放并且不確保裝置在整個(gè)粘膜上的有效分布。

50、用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置(醫(yī)療裝置)—無(wú)活性成分的生物聚合物基質(zhì)和具有活性成分的生物聚合物基質(zhì)—的所列出的性質(zhì)通過(guò)生物聚合物基質(zhì)組分的定性和定量組合物的使用以及制備裝置的方法的參數(shù)(表征初始組合物的冷凍方案用于隨后的冷凍干燥)來(lái)實(shí)施。

51、與作為原型采用的劑型相比，裝置的所得性質(zhì)(列于表1中)提供更方便且有效的用途。與原型不同，裝置作為含有大體積的液體的溶脹水凝膠施用，這確保在水凝膠在陰道腔中崩解之后，與原型相比更均勻的分布，并且與軟膏劑和栓劑相當(dāng)，并且與后者不同，水凝膠不具有流動(dòng)性并且可以在陰道腔中保留很長(zhǎng)時(shí)間。

52、與用于插入陰道中用于預(yù)防和/或治療女性生殖系統(tǒng)疾病的已知醫(yī)療裝置和工具相比，所要求保護(hù)的裝置(生物聚合物基質(zhì)和醫(yī)療裝置或基于其的裝置)具有許多優(yōu)點(diǎn)。

53、1)與固體劑型(片劑、膠囊劑)相比：

54、a.通過(guò)在施用之前立即使裝置在水中潤(rùn)濕，使治療劑(親水的)溶解或使冷凍干燥的微生物(當(dāng)引入時(shí)，例如，益生菌)預(yù)先快速?gòu)?fù)蘇，這增加其對(duì)陰道粘膜的生物利用度；

55、b.水凝膠在整個(gè)粘膜上更快且更均勻分布，這增加所施用的治療劑在粘膜上的作用面積和暴露時(shí)間；

56、c.在將裝置插入和放置在陰道腔中期間的舒適性。

57、2)與半固體和液體劑型(凝膠劑、栓劑、軟膏劑、溶液劑)相比：

58、a.其可以用于廣泛范圍的治療劑，包括活微生物；

59、b.其不具有流動(dòng)性，不從陰道泄漏；

60、c.其確保所施用的治療劑的定量施用的準(zhǔn)確性；

61、d.其在不使用防腐劑的情況下確保在長(zhǎng)期儲(chǔ)存期間的穩(wěn)定性。

62、因此，所提出的裝置的使用結(jié)合了固體和液體陰道劑型的優(yōu)點(diǎn)，消除了它們的固有缺點(diǎn)。

63、除了以上所列出的那些之外的其他治療劑，例如，維生素、組織再生刺激劑、藥用植物提取物、或基于它們的制劑等，可以添加到初始組合物和裝置中。

64、在一些情況下，在本發(fā)明的上述實(shí)施方案的每一個(gè)中，所要求保護(hù)的裝置可以另外包含包括在基質(zhì)中的一種或多種另外的物質(zhì)，其可以是潤(rùn)滑劑、填充劑、防腐劑、粘合劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、增溶劑、染料、填充劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。

65、附圖簡(jiǎn)述

66、本發(fā)明由照片示出，其中圖1從左至右呈現(xiàn)了實(shí)施例中所獲得的干燥樣品的照片：2、3、6和9；圖2從左至右顯示了實(shí)施例中所獲得的在水中保持100秒之后溶脹樣品的照片：2、3、6和9。

67、發(fā)明的實(shí)施方案

68、以下是所要求保護(hù)的本發(fā)明的詳細(xì)描述。本發(fā)明的描述是說(shuō)明性的，證明實(shí)現(xiàn)所要求保護(hù)的技術(shù)結(jié)果的可能性?？梢允贡炯夹g(shù)方案經(jīng)受本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本說(shuō)明書(shū)時(shí)可以理解的各種變化和修改。這樣的變化不限制權(quán)利要求的范圍。例如，成分的組成、其比率、其組合、重量和尺寸特征、活性成分的選擇以及用于制備裝置的技術(shù)方案(其取決于所選擇的成分的組成)可以變化。此外，所要求保護(hù)的裝置可以用于使廣泛范圍的活性組分固定。

69、根據(jù)本發(fā)明的用于活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置是包含表2中所列范圍內(nèi)的成分的固體凍干陰道劑型。

70、用于獲得所要求保護(hù)的裝置(醫(yī)療裝置)的方法包括以下操作(階段)：

71、1)由基質(zhì)形成多糖、微生物的選擇性底物和粘膜粘附劑組分的混合物制備水性溶液。

72、2)將以上有機(jī)酸之一引入所得溶液中以獲得具有所需ph值的溶液。

73、3)如果必要的話，將活性組分(治療劑)或幾種這樣的組分引入溶液中。當(dāng)益生菌微生物在裝置組合物中時(shí)，這些微生物(例如，乳桿菌)的干燥細(xì)胞被分散在所得溶液中，或?qū)⑺幬镂镔|(zhì)的溶液或懸浮液引入。

74、4)將所制備的聚合物組合物轉(zhuǎn)移到所需體積和幾何形狀的注塑模具中，然后在選自-15℃至-30℃的范圍的溫度下冷凍3-18小時(shí)并且然后冷凍干燥。

75、通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定在階段3所獲得的聚合物組合物的冷凍處理的溫度和時(shí)間方案。該范圍的上限是由于以下事實(shí)：在高于-15℃的溫度下，所要求保護(hù)的制劑的聚合物組合物通常不會(huì)由于過(guò)冷的影響而冷凍，以及由于增加的能源成本，出于經(jīng)濟(jì)原因，使用低于-30℃的溫度是不實(shí)用的。

76、所提出的醫(yī)療裝置的冷凍結(jié)構(gòu)化生物聚合物基質(zhì)是三維大孔材料，其由指定的制劑的組合物的選定聚合物的水性溶液由于其冷凍和隨后的凍干而制備。根據(jù)該方案形成的干燥大孔聚合物材料很好地保持其形狀，不展現(xiàn)出流動(dòng)性，并且具有高穩(wěn)定性，這通常是干燥材料的特征。作為用于其形成的初始聚合物，本發(fā)明涉及使用各種多糖，包括淀粉及其衍生物、糖原，而糊精、麥芽糖糊精、低聚果糖、菊粉以及其他相關(guān)生物聚合物用作陰道內(nèi)乳桿菌的選擇性底物。

77、冷凍的初始聚合物組合物的冷凍干燥產(chǎn)生海綿狀形態(tài)的固體、高度多孔材料，其具有5-100μm的平均孔隙截面和0.1-0.3g/cm3的比密度，能夠非?？焖俚?在幾秒至幾分鐘內(nèi))吸收水，所述水的量為填充互連(連通)大孔的內(nèi)部體積以形成具有初始形狀和指定的機(jī)械性質(zhì)的水凝膠所需的量。在干燥形式下，多糖基質(zhì)確保治療劑在所要求保護(hù)的醫(yī)療裝置的組合物中的穩(wěn)定性，具有良好的對(duì)抗微生物的保護(hù)性質(zhì)并且確保治療劑活力的長(zhǎng)期保留。羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、透明質(zhì)酸、瓜爾膠或黃原膠被包括在基質(zhì)內(nèi)，使得目標(biāo)醫(yī)療裝置對(duì)上皮具有高度粘膜粘附性，這確保在陰道腔中長(zhǎng)期存在。因此，冷凍結(jié)構(gòu)化基質(zhì)的生物聚合物以使得其多糖基質(zhì)充當(dāng)微生物群落細(xì)菌的底物并且在女性體內(nèi)完全降解的方式來(lái)選擇。

78、在使用之前，通常使所要求保護(hù)的治療劑在水或水性溶液中潤(rùn)濕以用液體使其飽和，其后可以使用手指或施用器將裝置插入陰道腔中。當(dāng)在插入陰道中之前置于水性溶液中時(shí)，裝置吸收液體并且溶脹，并且在溶脹狀態(tài)下其是水凝膠(水合聚合物體系)，其光滑的表面與干燥形式不同，確保舒適地插入并且停留在陰道腔中。在陰道中，在一方面，發(fā)生水凝膠的機(jī)械變形、破壞和磨碎，并且在另一方面，基質(zhì)的結(jié)構(gòu)多糖被陰道微生物生物降解。施用的方法可以由使用者根據(jù)其自身的偏好選擇。在一些情況下(例如，大量分泌物)，有可能在沒(méi)有預(yù)先潤(rùn)濕或濕潤(rùn)的情況下施用治療劑，但在該情況下，可取的是使用施用器以在施用期間使對(duì)陰道粘膜的創(chuàng)傷最小化。因此，由于陰道分泌物分泌過(guò)多，發(fā)生裝置被液體的快速飽和。

79、因此，所得裝置可以充當(dāng)成品醫(yī)療裝置，其可以使用非施用器方法或施用器方法(通過(guò)專用的管)插入陰道中。在后一種情況下，醫(yī)療裝置可以是置于相應(yīng)的施用器中的裝置，在一個(gè)實(shí)施方案中，該施用器可以由兩個(gè)元件制成：外部穿孔保持管(筒)和內(nèi)部推頂桿(活塞)。將管穿孔以當(dāng)將其內(nèi)帶有裝置的施用器浸入水或水性溶液中時(shí)促進(jìn)水進(jìn)入裝置中?？梢允寡b置在其插入這樣的醫(yī)療裝置中之前以任何方便的方式濕潤(rùn)，包括將其置于具有水或鹽水溶液的容器中、用水或溶液填充帶有內(nèi)部插入的裝置的施用器、或另一種對(duì)于使用者合適且可接受的方法。施用器可以由任何可接受的材料(聚合物或紙板)制成并且具有類似于注射器的設(shè)計(jì)。外管通常具有光滑的表面以便于裝置的施用，并且可以具有帶有翼瓣的圓形端部以在其插入之前將裝置保持在施用器中，或可以是穿孔的。穿孔在尺寸、形狀、位置和孔數(shù)目方面的性質(zhì)以確保在潤(rùn)濕期間液體自由進(jìn)入裝置的方式選擇。

80、在實(shí)施所要求保護(hù)的目的的情況下，通過(guò)表3中所提供的實(shí)施例1-26證實(shí)但不窮舉本發(fā)明的可實(shí)施性。

81、表4中提供了制備根據(jù)實(shí)施例的裝置的方法的參數(shù)和所得裝置的特征。

82、根據(jù)實(shí)施例1-24的裝置通過(guò)以下制備：制備所使用的以下組分的水性溶液：結(jié)構(gòu)多糖、選擇性底物、粘膜粘附劑組分，隨后將它們混合并且將ph調(diào)節(jié)劑引入所得混合物中。根據(jù)實(shí)施例1-21的裝置使用活性成分制備，并且在冷凍結(jié)構(gòu)化開(kāi)始之前將活性成分引入混合物中；在實(shí)施例25、26中，在冷凍結(jié)構(gòu)化之后引入活性組分。因此，將所得裝置浸入活性成分的水性溶液中并且在室溫下保持3分鐘，直到裝置被指定的治療劑飽和。

83、特別地，當(dāng)使用益生菌微生物作為活性成分(實(shí)施例1-9和16-18)時(shí)，將干燥的微生物細(xì)胞分散在結(jié)構(gòu)多糖、選擇性底物和粘膜粘附劑組分的水性溶液的混合物中。將所制備的懸浮液計(jì)量加入注射模具中，冷凍并且冷凍干燥。所得裝置的干燥形式是具有圓形端部的圓柱形棒(參見(jiàn)圖1)，具有多孔海綿狀質(zhì)地，含有封裝在多糖基質(zhì)中的乳桿菌細(xì)胞。

84、研究了用于根據(jù)實(shí)施例1至26制備的活性成分的陰道內(nèi)遞送裝置的性質(zhì)；研究的結(jié)果呈現(xiàn)于表4中。

85、溶脹能力和水合時(shí)間

86、通過(guò)將重量為0.5g的裝置的樣品置于10ml的過(guò)量水中來(lái)研究裝置的水合時(shí)間和溶脹性質(zhì)。然后，每30秒將樣品之一取出并且稱重。溶脹被確定為在達(dá)到潤(rùn)濕樣品的重量極限之后潤(rùn)濕樣品與干燥樣品的重量比。來(lái)自實(shí)施例1-21的所有樣品的溶脹性質(zhì)在4-8的范圍內(nèi)變化。在置于水性環(huán)境中之后，水合樣品的最大質(zhì)量在30秒至5分鐘的范圍內(nèi)達(dá)到。

87、從裝置釋放藥物物質(zhì)

88、為了研究藥物的釋放，將重量為0.5g的干燥樣品置于具有200ml的nacl溶液(0.9重量％)的小瓶中并且使其在37℃下在振蕩器(速度40rpm)上溫育。以一定的間隔，將樣品從小瓶取出并且通過(guò)hplc測(cè)量溶液中藥物物質(zhì)的濃度。在所有實(shí)驗(yàn)中，觀察到藥物物質(zhì)從裝置的聚合物基質(zhì)相當(dāng)快速地釋放：對(duì)于來(lái)自實(shí)施例10、11、14、15的裝置，所包含的二葡萄糖酸氯己定、米拉米斯停(miramistin)、克林霉素和替諾福韋的超過(guò)80％在5分鐘內(nèi)釋放；對(duì)于來(lái)自實(shí)施例12和13的裝置，所包含的甲硝唑和氟康唑的超過(guò)80％在60分鐘內(nèi)釋放。

89、從裝置釋放乳桿菌

90、為了研究乳桿菌的釋放，將重量為0.5g的干燥樣品置于具有20ml的模擬陰道液ph4.2的緩沖液(每1l的組成：3.51g?nacl、1.40g?koh、0.222g?ca(oh)2、0.018g牛血清白蛋白、2g乳酸、1g?ch3cooh、0.16g甘油、0.4g尿素和5g葡萄糖)的陪替氏培養(yǎng)皿中，并且使其在37℃下在振蕩器上溫育。以一定的間隔，將樣品從陪替氏培養(yǎng)皿中取出，并且通過(guò)在600nm下溶液的吸收，以比濁法(turbodimetrically)測(cè)量培養(yǎng)基中微生物的濃度。對(duì)于來(lái)自實(shí)施例1-8的產(chǎn)品，溶液濁度的增加幾乎是線性地發(fā)生的，直到達(dá)到對(duì)應(yīng)于微生物從生物聚合物基質(zhì)中完全釋放的平穩(wěn)期，并且到達(dá)平穩(wěn)期的時(shí)間范圍為4至8小時(shí)。

91、裝置中包封的細(xì)菌的存活率

92、在包封和制備裝置之后立即以及在+2-8℃和25℃下儲(chǔ)存90天期間確定活細(xì)菌的計(jì)數(shù)。為此，將重量為0.5g的裝置的樣品在強(qiáng)烈攪拌下溶解于20ml的鹽水中。由所得懸浮液制備一系列稀釋液，其后將其接種到乳桿菌瓊脂(lactobacagar)培養(yǎng)基上。然后對(duì)菌落計(jì)數(shù)。

93、將在制備過(guò)程期間細(xì)菌的存活率確定為在制備過(guò)程期間活細(xì)菌數(shù)目與所引入細(xì)菌的數(shù)目的比率。對(duì)于實(shí)施例1-8和16-18，存活率是30-70％。

94、乳桿菌在儲(chǔ)存期間的存活率確定為在一定時(shí)間段內(nèi)活微生物的數(shù)目與在緊接著制備裝置之后的活微生物的數(shù)目的比率。對(duì)于來(lái)自實(shí)施例1-8的裝置，在+2-8℃下儲(chǔ)存90天時(shí)，活細(xì)菌的計(jì)數(shù)是92-105％，并且在+25℃下儲(chǔ)存時(shí)，活細(xì)菌的計(jì)數(shù)是84-98％。

95、含有乳桿菌的裝置的抗微生物活性

96、在將樣品儲(chǔ)存90天之后，研究了對(duì)白色念珠菌(c.albicans)、大腸桿菌(e.coli)、陰道加德納菌(g.vaginalis)的抗微生物活性。將重量為0.5g的樣品溶解在10ml的添加0.05％半胱氨酸的mrs培養(yǎng)基中。將所得培養(yǎng)物在37℃下厭氧溫育24小時(shí)。為了獲得無(wú)細(xì)胞上清液(cfs)，將細(xì)胞培養(yǎng)物在5500rpm下離心10min并且收集上清液，其后將上清液通過(guò)gp濾器(0.22μm?merck?millipore?cork，愛(ài)爾蘭)過(guò)濾。

97、將cfs以2.5×105cfu/ml的濃度添加至微生物白色念珠菌、大腸桿菌、陰道加德納菌的懸浮液中并且溫育24和48小時(shí)。微生物計(jì)數(shù)在600nm下以比濁法確定。相對(duì)于不添加cfs的對(duì)照樣品確定抑制％。對(duì)大腸桿菌、陰道加德納菌的抑制％是>90％，并且對(duì)白色念珠菌的抑制％是>80％。將所得微生物的懸浮液接種到適宜的培養(yǎng)基上并且溫育48小時(shí)，其后在添加cfs之前和之后對(duì)菌落計(jì)數(shù)。來(lái)自實(shí)施例1-8的所有裝置都顯示菌落數(shù)目減少了超過(guò)3個(gè)數(shù)量級(jí)，這不僅表明了在培養(yǎng)所制備裝置的樣品之后獲得的cfs的抑菌活性，而且還表明了其殺菌活性。

98、含有藥物物質(zhì)的裝置的抗微生物活性

99、研究了產(chǎn)品對(duì)白色念珠菌、大腸桿菌、陰道加德納菌的抗微生物活性。為此，對(duì)用于確定微生物對(duì)抗生素的耐藥性的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試程序進(jìn)行了調(diào)整。為此，使用手術(shù)刀將含有抗微生物劑的裝置的圓柱形樣品切割成具有15mm的直徑和約2mm的厚度的圓片。還制備了根據(jù)實(shí)施例13的裝置(未向其添加抗微生物劑組分)，充當(dāng)安慰劑，并且也被切割成圓片。

100、將以1×106cfu/ml的濃度的微生物白色念珠菌、大腸桿菌、陰道加德納菌的懸浮液接種到在陪替氏培養(yǎng)皿中的適當(dāng)培養(yǎng)基上。將含有抗微生物劑組分的裝置的切割圓片置于每個(gè)培養(yǎng)皿的中心。也將不含有抗微生物劑組分的安慰劑樣品置于幾個(gè)培養(yǎng)皿中。另外，將培養(yǎng)皿溫育48小時(shí)，其后通過(guò)圓片周?chē)L(zhǎng)區(qū)的直徑來(lái)評(píng)估裝置的抗微生物效果。培養(yǎng)物在陪替氏培養(yǎng)皿的整個(gè)區(qū)域上均勻地生長(zhǎng)；培養(yǎng)皿的中間安慰劑圓片的存在不導(dǎo)致生長(zhǎng)模式的任何顯著變化。在具有抗微生物劑組分的裝置的情況下，在圓片周?chē)纬善渲形⑸锏纳L(zhǎng)受到抑制的區(qū)域。該區(qū)域的直徑充當(dāng)抗微生物活性的大小的量度。對(duì)陰道加德納菌的抗微生物活性以氟康唑<甲硝唑<氯己定<米拉米斯停<克林霉素的系列增加。對(duì)大腸桿菌的抗微生物活性以氟康唑<克林霉素<氯己定<米拉米斯停<甲硝唑的系列增加。對(duì)白色念珠菌的抗微生物活性以甲硝唑<克林霉素<氯己定<米拉米斯停<氟康唑的系列增加。

101、使用光學(xué)顯微鏡確定裝置孔隙率

102、為了研究裝置的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和孔隙率，將裝置的干燥樣品用剃刀切割并且在光學(xué)顯微鏡下檢查。所有提供的實(shí)施例的所有研究的裝置都具有多孔結(jié)構(gòu)，具有開(kāi)放、相互穿透的孔隙。從裝置的最接近的結(jié)構(gòu)元件之間的距離計(jì)算的孔徑的90％在5至100μm的范圍內(nèi)，并且實(shí)際上在不同裝置之間沒(méi)有差異。

103、對(duì)材料對(duì)上皮壁的粘附能力建模

104、為了研究材料對(duì)陰道上皮壁的粘附能力，使用斜板法。為此，將含有10％(重量)丙烯酰胺、0.1％亞甲基雙丙烯酰胺和0.1％過(guò)硫酸鉀和四甲基乙二胺的溶液的薄層(5mm)倒入平坦模具中并且在室溫下聚合。將裝置的樣品切割成約5mm厚的薄板并且置于鹽水溶液中用于水合。在丙烯酰胺凝膠形成之后，使凝膠用鹽水潤(rùn)濕并且將各種樣品置于其上，并且將板置于在37℃下的溫育箱中。在平衡20分鐘之后，將板以30至90度的角度傾斜并且觀察樣品的流動(dòng)或滾動(dòng)速率。將可商購(gòu)栓劑、1％淀粉溶液和在添加和不添加透明質(zhì)酸的情況下獲得的來(lái)自實(shí)施例9的裝置的樣品用作對(duì)照樣品。作為粘附能力的量度，確定在其下觀察到樣品在1分鐘內(nèi)沿表面滑動(dòng)或流動(dòng)10cm的角度。對(duì)于熔融栓劑，角度是45度，對(duì)于1％淀粉溶液，角度是30度，對(duì)于在不添加透明質(zhì)酸的情況下獲得的來(lái)自實(shí)施例9的裝置，角度是45度，對(duì)于在添加透明質(zhì)酸的情況下獲得的來(lái)自實(shí)施例9的裝置，角度是60度。

105、供選擇地，將丙烯酰胺凝膠的片材從模具中取出，用鹽水潤(rùn)濕，將栓劑的相同重量的樣品、1％淀粉凝膠、在添加或不添加透明質(zhì)酸的情況下來(lái)自實(shí)施例9的樣品置于中間，將片材卷入管中并且以豎直位置置于在37℃下的溫育箱中，模擬將樣品置于陰道中。觀察管的內(nèi)容物泄漏出管所花費(fèi)的時(shí)間。1％淀粉溶液在30分鐘內(nèi)泄漏；栓劑樣品在1小時(shí)內(nèi)泄漏。無(wú)論是否存在透明質(zhì)酸，來(lái)自實(shí)施例9的樣品在4小時(shí)內(nèi)均未發(fā)生泄漏或掉落出。

106、乳桿菌從不同劑型的釋放的比較

107、為了比較乳桿菌從不同劑型的釋放，研究了含有相同量的乳桿菌的可商購(gòu)陰道片劑、可商購(gòu)陰道明膠膠囊劑和來(lái)自實(shí)施例4的樣品。將陰道片劑、膠囊劑和樣品置于小瓶中并且添加3ml的鹽水。將來(lái)自實(shí)施例4的樣品在鹽水中預(yù)水合，模擬施用方法，并且用溫和的壓力壓碎。另外，將它們置于在20rpm和37℃下的振蕩器上。在1小時(shí)之后，取0.5ml的溶液，并且通過(guò)接種到乳酸瓊脂確定釋放的乳桿菌的濃度，準(zhǔn)確度為1個(gè)數(shù)量級(jí)。在片劑的情況下，在1小時(shí)內(nèi)觀察到片劑的溶脹和部分崩解。檢測(cè)到的細(xì)菌的計(jì)數(shù)是106cfu。在膠囊劑的情況下，在1小時(shí)內(nèi)，觀察到膠囊劑的變形和變粘及其對(duì)壁的粘附，實(shí)際上未觀察到崩解和大體積的內(nèi)容物的釋放的可見(jiàn)跡象。檢測(cè)到的細(xì)菌的計(jì)數(shù)是104cfu。來(lái)自實(shí)施例4的樣品是凝膠漿料。檢測(cè)到的細(xì)菌的計(jì)數(shù)是107cfu。

108、機(jī)械強(qiáng)度(在壓縮破碎期間的斷裂應(yīng)力極限)

109、為了研究在壓縮破碎期間斷裂應(yīng)力的極限，將裝置的干燥圓柱形樣品置于水平表面上。將玻璃陪替氏培養(yǎng)皿置于頂部上，在其上放置0.1至1.0kg的重量，并且將系統(tǒng)在室溫下保持1小時(shí)。破壞開(kāi)始的極限由清晰可見(jiàn)的裂紋的出現(xiàn)確定。

110、因此，與從現(xiàn)有技術(shù)已知的基于益生元的陰道凝膠制劑、陰道片劑和栓劑以及具有凍干乳桿菌的硬膠囊劑、用于治療女性生殖系統(tǒng)的感染性疾病的藥物以及用于恢復(fù)微生物群落的作為用于細(xì)菌性陰道病的雙組分療法的一部分的藥物相比，所要求保護(hù)的本發(fā)明：

111、1)提供用與施用環(huán)境最相容的微生物的陰道菌株(包括個(gè)體化的微生物菌株)的療法的可能性；

112、2)在制備和在室溫下儲(chǔ)存期間提供微生物的高活力；

113、3)生物聚合物基質(zhì)包括作為陰道菌群的乳桿菌的選擇性營(yíng)養(yǎng)底物但不適用于病原性菌群的發(fā)展的組分；

114、4)提供在潤(rùn)濕后裝置的快速水合以及在陰道內(nèi)施用之后治療劑的藥物物質(zhì)和活微生物的有效(隨時(shí)間的量)釋放；

115、5)提供在裝置的施用之后生理學(xué)陰道ph的快速實(shí)現(xiàn)；

116、6)裝置的冷凍結(jié)構(gòu)化多糖基質(zhì)在水合后軟化并且變形為陰道壁之間的軟凝膠，這減少插入之后的不舒適；

117、7)裝置具有患者熟悉的衛(wèi)生棉條的形狀并且易于插入。插入之后，即使患者在插入之后立即采取豎直位置，內(nèi)容物也不泄漏出，這通過(guò)模型實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)。

118、與原型相比，所要求保護(hù)的裝置在整個(gè)陰道粘膜上提供更均勻的藥物分布，并且與中性填料-甘露糖醇相比，還含有選擇性底物以為陰道乳桿菌創(chuàng)建最佳條件并且防止在治療期間其群落的減少。

119、

120、

121、

122、

123、

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路